学术投稿

三维培养成骨细胞系统在骨康方含药血清体外干预实验中的应用研究

赵可伟;唐菊英;肖林;潘旭枫

关键词:成骨细胞, 二维细胞培养, 三维细胞培养
摘要:目的:观察骨康方含药血清对三维培养成骨细胞系统生长繁殖、矿化能力和ER-β mRNA表达的变化,探讨成骨细胞三维培养体系在体外中药干预研究中的应用.方法:体外分离成骨细胞,进行二维培养和三维培养,分别用不同浓度阴性血清培养基和药物血清培养基进行培养,使用MTT法检测成骨细胞的生长情况,茜素红染色法观察成骨细胞矿化能力,RT-PCR法检测ER-β mRNA表达的变化.结果:与二维培养体系比较,骨康含药血清对三维体系下培养的成骨细胞的促增殖作用更加明显;细胞ER-beta的mRNA转录水平显著提高;矿化能力更强.结论:三维培养系统比二维培养系统更有利于细胞功能的保持和发挥,更适合于体外中药干预研究中的作用.
中药材杂志相关文献
  • 龙葵对人结肠癌RKO细胞粘附、移动和侵袭的影响

    目的:研究龙葵对人结肠癌RKO细胞粘附、移动及侵袭的影响.方法:不同浓度龙葵作用RKO细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测龙葵对RKO细胞增殖作用,CytoSelectTM 48-Well Cell Adhesion Assay检测RKO细胞与基质粘附能力,划痕实验检测RKO细胞移动能力,CytoSelectTM 24-Well Cell Invasion Assay检测RKO侵袭能力.结果:终浓度400~1 600 μg/mL龙葵可以显著抑制RKO细胞增殖,终浓度100~400 μg/mL龙葵可以抑制RKO细胞粘附、移动及侵袭能力.结论:龙葵可以抑制RKO细胞增殖,降低RKO细胞粘附、移动及侵袭能力.

    作者:胡兵;安红梅;沈克平;史秀峰;邓珊;魏蒙蒙 刊期: 2013年第06期

  • 不同规格三七挥发性成分研究

    目的:分析比较不同规格三七挥发性成分的化学组成.方法:采用顶空固相微萃取-气质联用技术研究不同规格三七挥发性成分.结果:三七虽然规格不同,但萜烯类化合物所占比重较大,且以α-愈创木烯含量为高,不同规格三七所含的化合物因种类、含量和数量而异.结论:萜烯类化合物是三七挥发油中起主要药效作用的物质,其中成分值得进一步深入研究.

    作者:李丽明;任斌;郭洁文;邓志军;刘若轩 刊期: 2013年第06期

  • 毛细管电泳法测定清肺抑火丸中黄芩苷、栀子苷、芒果苷的含量

    目的:建立测定清肺抑火丸中黄芩苷、栀子苷、芒果苷含量的毛细管电泳法.方法:以对硝基苯甲酸为内标;采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱67 cm×75 μm ID,有效长度60 cm;以5 mmol/L硼砂溶液+30%乙醇(pH9.28)为运行缓冲液;分离电压26 kV;重力进样10s(高度15 cm);检测波长238 nm.结果:黄芩苷、栀子苷、芒果苷分别31.3 ~ 100.3μg/mL、18.2 ~ 118.3 μg/mL、10.2~38.3 μg/mL浓度范围内线性关系良好,加样回收率分别为99.8%、99.2%、98.8%,RSD均小于1.33%.结论:该方法专属性强,结果准确可靠,重现性好,可用于清肺抑火丸的质量控制.

    作者:林青;谭晓梅;李媛;王晓可;杨威 刊期: 2013年第06期

  • 分枝虫草菌丝体生物学特性研究

    目的:对分枝虫草菌丝体生长的生物学特性进行研究.方法:考察不同温度、pH值、碳源、氮源和碳氮比下分枝虫草菌丝体的生长情况.结果:分枝虫草菌丝体生长的佳温度为25℃,初始pH为5.0 ~7.0,佳碳源为可溶性淀粉,佳氮源为酵母浸膏,佳碳氮比是24∶1.结论:通过本研究,得到分枝虫草菌丝体生长的佳条件,为分枝虫草人工栽培提供参考.

    作者:林敏;林群英;宋斌;黄浩;李泰辉;沈亚恒 刊期: 2013年第06期

  • 川乌总生物碱含量测定

    目的:研究川乌中总生物碱的提取方法与含量测定.方法:采用紫外分光光度法测定川乌总生物碱的含量,对总生物碱的提取方法进行考察,优选出佳的提取方法,并采用该方法测定不同产地川乌总生物碱的含量.结果:不同提取方法总生物碱的提取率由大到小分别为:缓冲盐提取法>酸水提取法>乙酸乙酯-异丙醇提取法>乙醚-三氯甲烷提取法,不同产地川乌总生物碱的含量在6.4331 ~9.5 013 mg/g之间.结论:川乌总生物碱含量差异较大,具有一定地域性,缓冲盐提取法提取其总生物碱效果佳.

    作者:区炳雄;邓广海;罗锐 刊期: 2013年第06期

  • HPLC测定血脂灵片中8种蒽醌类成分的含量

    目的:建立高效液相色谱测定血脂灵片中橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄酸、黄决明素、决明素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的方法.方法:采用Agilent TC-C18(4.6 mm × 250 mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长:284 nm.结果:橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄酸、黄决明素、决明素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚在相应的浓度范围内与色谱峰面积呈良好线性关系;平均回收率在99.1% ~ 101.2%之间,RSD均小于2.2%.结论:该方法可更好的对血脂灵片进行质量控制.

    作者:郑艳超;李先宽;米宝丽;蔡珊珊;张振秋 刊期: 2013年第06期

  • 汉防己甲素对食管癌细胞凋亡相关基因Survivin、Caspase-3表达的影响

    目的:探讨汉防己甲素对食管癌细胞株Eca-109凋亡的作用及其机制.方法:培养食管癌细胞株Eca-109,设立汉防己甲素给药组和空白对照组,给药组设10、20、30、40、50、60 μmol/L汉防己甲素6个浓度,用MTT法检测各组细胞活力,Western blot法测定Survivin蛋白、Caspase-3蛋白的表达.结果:汉防己甲素能诱导食管癌细胞株Eca-109的凋亡,且其诱导效应具有浓度依赖性.Western blot结果显示:随汉防己甲素浓度的增加,Survivin蛋白的表达逐渐下调(P<0.01),而Caspase-3的表达随其浓度的增加逐渐上调(P<0.05或P<0.01).结论:汉防己甲素能抑制食管癌Eca-109细胞生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Survivin蛋白表达,上调Caspase-3蛋白有关.

    作者:伍义文;童健;张福伟;廖国平 刊期: 2013年第06期

  • 三维培养成骨细胞系统在骨康方含药血清体外干预实验中的应用研究

    目的:观察骨康方含药血清对三维培养成骨细胞系统生长繁殖、矿化能力和ER-β mRNA表达的变化,探讨成骨细胞三维培养体系在体外中药干预研究中的应用.方法:体外分离成骨细胞,进行二维培养和三维培养,分别用不同浓度阴性血清培养基和药物血清培养基进行培养,使用MTT法检测成骨细胞的生长情况,茜素红染色法观察成骨细胞矿化能力,RT-PCR法检测ER-β mRNA表达的变化.结果:与二维培养体系比较,骨康含药血清对三维体系下培养的成骨细胞的促增殖作用更加明显;细胞ER-beta的mRNA转录水平显著提高;矿化能力更强.结论:三维培养系统比二维培养系统更有利于细胞功能的保持和发挥,更适合于体外中药干预研究中的作用.

    作者:赵可伟;唐菊英;肖林;潘旭枫 刊期: 2013年第06期

  • 补肺益肾方及其拆方含药血清对烟雾和脂多糖刺激细胞分泌细胞因子的影响

    目的:研究补肺益肾方药治疗COPD分子机理和组方规律.方法:肺泡上皮细胞A549、气道上皮细胞H292、单核巨噬细胞THP-1等细胞均分为正常对照组(20%空白大鼠血清)、模型组(20%空白大鼠血清,75 pg/mL及5% CSE刺激)及全方、拆方组[益气组(1)、益肺肾组(2)、活血组(3)、化痰组(4)、益气+益肺肾组(5)、益气+活血组(6)、益气+化痰组(7)、益气+益肺肾+活血组(8)、益气+益肺肾+化痰组(9)、益气+活血+化痰组(10)、全方组(11)];20%大鼠含药血清.ELISA法检测细胞因子,应用网络工具分析细胞因子的转录因子.结果:与正常对照组比较,模型组THP-1细胞分泌MMP-9和GM-CSF、TGF-β增多,分泌TNF-α、PPAP2B、IL-3、SOD减少.A549细胞分泌TIMP-1增多,分泌MMP-9和TNF-α、TGF-β、IL-3减少.H292细胞分泌TNF-α、MMP-9和GM-CSF、CD36、TIMP-1增多,IL-8分泌减少.与模型组比较,THP-1细胞3、6、10、11方组THP-1分泌GM-CSF减少;10和11方组分泌TGF-β减少;9和5方组分泌MMP-9减少,1、2、3、4、7、8、10、11方组分泌增加;1、2、3、4、6、8、9方组分泌TNF-α增加,11方组分泌TNF-α减少;除2方组外,其他各用药组分泌IL-3显著增加;2、4、5、8、9、11方组分泌SOD增加;1、2、3、4、5、6、7方组分泌PPAP2B增加,11方分泌减少.A549细胞1、2、3、4、5方组分泌TIMP-1增加,11方组分泌TIMP-1减少;除1、4方组外其他用药分泌MMP-9升高;除11方减少外,其他药物组分泌TGF-β升高;除8方组外,其他用药组分泌TNF-α增加;1、2、4、5、11和3方组分泌IL-3增加.H292细胞5、6、7和2方组H292细胞分泌GM-CSF减少;1、2、4、6、7、8、9、10方组分泌TNF-α减少;4、8、7、9方组分泌MMP-9减少;所有用药组分泌TIMP-1无明显改变.结论:补肺益肾方及其拆方对CSE和LPS诱导的细胞因子分泌都有一定的调节作用,因不同靶细胞和靶因子有所不同.其中活血方侧重于调节炎症因子,益肺肾方侧重于脂质代谢和氧化调节,全方调节蛋白酶相关因子分泌作用为广泛,化痰、活血、益肺肾方次之.

    作者:吴耀松;陈玉龙;李建生;刘学芳;郝丽丽;田燕歌;李亚 刊期: 2013年第06期

  • 养胃散对消炎痛致大鼠胃黏膜损伤的保护作用

    目的:研究养胃散对消炎痛引起的大鼠胃黏膜损伤的预防和保护作用.方法:Wistar大鼠按体质量随机分为5组:养胃散治疗组、替普瑞酮组、模型组、养胃散预防组、正常对照组.用消炎痛损伤胃黏膜,再给予养胃散治疗消炎痛伤所致的黏膜损伤,用替普瑞酮为阳性对照.光镜下观察大鼠胃黏膜组织学改变,放射免疫法测定血清IL-1β,TNF-α和IL-10的含量.结果:肉眼观察:各组胃黏膜均没有形成溃疡,但有数量不等的针尖样黏膜糜烂;治疗组、替普瑞酮组、预防组间糜烂灶数量没有显著性差异,但治疗组、替普瑞酮组、预防组与模型组比较,差异显著(P<0.01).病理切片观察:治疗组、替普瑞酮组、预防组不论在胃黏膜层的炎性反应方面,还是在表层细胞的完整性方面均显著优于模型组,正常对照组胃黏膜上皮未见异常表现.结论:养胃散能有效减轻消炎痛引发的胃黏膜损伤和炎症反应.

    作者:周兰;谢子英;赵亚刚;黄定鹏;马艳春 刊期: 2013年第06期

  • 红背叶根体外抑制HCV亚基因复制子RNA表达活性部位筛选研究

    目的:筛选红背叶根体外抑制丙型肝炎病毒(HCV)复制的活性部位.方法:以HCV亚基因复制子体外培养体系CBRH7919(Jneo3-5 B)为HCV复制模型,选用干扰素α联合利巴韦林为阳性对照药物,观察不同浓度红背叶根总提取物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位的抗HCV作用.采用荧光定量PCR检测HCV亚基因复制子RNA拷贝数,通过Western blot检测HCV功能蛋白NS3的表达,采用CCK-8法观察药物对细胞生长的影响.结果:红背叶根4种提取物中,乙酸乙酯部位对HCV RNA复制的抑制活性强,对NS3蛋白表达有明显干预作用,对HCV RNA表达表现出剂量依赖的抑制作用(P<0.05).其比活较初始总提取物提高5.71倍,对HCV RNA半数抑制浓度为14.60 mg/L,对CBRH7919 (Jneo3-5B)细胞半数细胞毒性浓度为40.30 mg/L,治疗指数为2.76.结论:红背叶根乙酸乙酯部位可抑制HCV的复制,为抗HCV RNA表达的活性部位,在抗HCV方面有着潜在的用途.

    作者:王启瑞;陶华明;邬刚;范钦;黄少慧;宏峰;吕志平 刊期: 2013年第06期

  • 双柏膏防治粉碎性Colles骨折手法整复术后早期手部肿胀的疗效研究

    目的:观察双柏膏外敷防治粉碎性Colles骨折手法复位夹板固定后早期手部肿胀的临床疗效.方法:64例Colles粉碎性骨折患者经手法复位夹板外固定术后随机分为治疗组和对照组.治疗组患者每天应用双柏膏外敷患肢手部8小时,持续7天.肿胀疗效评定:分别于骨折复位固定后的前7天按局部肿胀分级标准进行评级.结果:复位后第1、2天两组患手肿胀无差异,第3天至第7天治疗组比对照组的手部肿胀程度有显著改善.治疗组未见有皮肤过敏者.结论:双柏膏有助于防治粉碎性Colles骨折后早期患手肿胀,不影响骨折固定效果,有利于手指关节的功能早期锻炼.

    作者:陈民;高彦平;王寰;李腾辉;李嘉;刘向前;黄广平 刊期: 2013年第06期

  • HPLC测定舒肝宁注射液中绿原酸的含量

    建立HPLC测定舒肝宁注射液中绿原酸含量的方法.方法:色谱条件:WELCHROM C18柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相:乙腈-0.2%磷酸(10∶90),流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长:327 nm.结果:绿原酸在0.01035~0.1035 mg/mL(r =0.9999)浓度范围内线性关系良好;平均加样回收率为100.73%,RSD为1.27%(n=9);舒肝宁注射液中绿原酸的含量范围为0.031~0.061 mg/mL.结论:该含量测定方法稳定性、重现性好,可为进一步探究其不良反应产生的原因奠定一定的实验基础;不同批号舒肝宁注射液中绿原酸的含量有差异.

    作者:曲彩红;孟小斌;罗宇燕 刊期: 2013年第06期

  • 甘肃栽培当归性状个体差异与质量的相关性研究

    目的:分析甘肃栽培当归外观性状差异,探讨与其质量的相关性.方法:测量22组不同产地当归药材的性状指标,采用中国药典方法测定阿魏酸、挥发油和浸出物含量,用SPSS 15.0软件统计分析.结果:产地与性状指标,以及性状指标间均呈正相关,其中有9组性状指标间达到极显著相关,产地与除当归头长度外的其他指标达到极显著相关;浸出物、阿魏酸与产地、性状指标呈正相关,其中浸出物与性状指标均达到显著相关,阿魏酸仅与当归头长度显著相关,而挥发油仅与产地显著相关,与性状指标无明显的相关性;根重、侧根数在产地间差异较大,变异系数分别为44.1%和28.6%.结论:当归药材存在显著的个体差异,化学成分与性状指标有一定的相关性,当归种植需要考虑产地的选择.

    作者:刘香南;张明童;赵建邦;宋平顺;丁永辉 刊期: 2013年第06期

  • 何首乌不同种质生境调查及在贵州地域的生物学特性研究

    目的:为选育优良何首乌种源及规范何首乌种植技术提供依据.方法:实地调查生境,田间定期观察和定株取样分析.结果:何首乌生长适应性强,在光照充足、雨量充沛、热量丰富、土壤肥沃的区域生长旺盛;随纬度降低,何首乌营养生长期延长,生殖生长期延迟,地下部分持续获得营养的时间延长,低纬度地区种质的根冠比持续增加的时间较高纬度地区的长.结论:何首乌不同种质生物学特性因地域及生境的不同而表现较大差异,这种差异可为各地因地制宜选育何首乌优良种源提供依据.

    作者:刘红昌;罗春丽;李金玲;王华磊;赵致 刊期: 2013年第06期

  • 产地与种源对白术药材质量的影响

    目的:探讨产地环境和种源对白术药材品质的影响,为白术药材生产的质量控制提供依据.方法:采用指标成分(白术内酯Ⅰ)含量比较和HPLC指纹图谱法结合相似度分析(夹角余弦值、Pearson相关系数)与主成分分析(PCA),以苍术为对照,分析了不同产地栽培的白术药材和同地栽培的不同种源的白术药材.结果:浙江磐安产白术的白术内酯Ⅰ含量显著高于安徽毫州产,不同产地种源的白术药材中白术内酯Ⅰ含量也存在显著差异.相似度分析和PCA结果一致,全部样品聚成3类:浙江磐安栽培的所有种源的白术、安徽毫州栽培的白术、浙江磐安栽培的苍术;前二者的相似性更接近,而苍术与前二者的差异较大;引种到磐安栽培的外地种源白术与磐安本地白术没有明显差异.结论:白术药材质量主要受产地环境的影响,种内遗传变异对整体化学相似性没有明显作用,但对白术内酯Ⅰ的含量仍有显著影响.在白术药材生产中要更加重视产地对白术药材品质的影响,尤其要避免白术与苍术的种源混淆.

    作者:杨舒婷;龚华栋;赵云鹏;陈斌龙;傅承新 刊期: 2013年第06期

  • 四逆汤佳煎煮工艺研究

    目的:优化四逆汤佳煎煮工艺,提高四逆汤中有效成分的煎出率.方法:通过单因素试验,采用RPHPLC法以苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸和6-姜酚的含量及浸膏重量为指标,分别考察浸泡时间、煎煮时间、加水倍量、煎煮次数对汤剂质量的影响,并在此基础上设计L9(34)正交试验,研究四逆汤临床煎煮的佳工艺.结果:四逆汤佳煎煮工艺为:浸泡时间为60 min,煎煮时间为60 min,加水倍量为10倍,煎煮2次.结论:采用正交设计法对四逆汤佳煎煮工艺的优化合理可行,为提高汤剂质量与临床疗效提供了实验基础.

    作者:刘晓;范林乾;蔡皓;周其冈;蔡宝昌 刊期: 2013年第06期

  • 脑心清对自发性高血压大鼠血压、血小板聚集及颈动脉重构的影响

    目的:观察脑心清对自发性高血压大鼠(SHR)血压、血小板聚集和颈动脉重构的影响.方法:60只SHR随机分成模型组、卡托普利阳性对照组、阿司匹林阳性对照组及脑心清高、中、低剂量组,10只Wistar大鼠为正常对照组.分别给予相应剂量的脑心清浸膏液、卡托普利片、阿司匹林(实验结束前7d给药)、蒸馏水.每2 w测量1次鼠尾动脉收缩压;3个月后,观察每组凝血时间、血小板聚集率、血浆肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及左颈总动脉内-中膜厚度(IMT)、腔径、IMT/腔径.结果:给药3个月后,与模型组比较,脑心清高、中剂量能显著降低SHR血压水平,显著延长凝血时间,并能抑制SHR左颈总动脉形态学改变及大鼠血小板聚集作用,不同程度所降低PRA和AngⅡ水平.结论:脑心清能够改善SHR动脉重构,减轻高血压靶器官损害的同时兼有抗血小板聚集及抗凝作用.

    作者:吴玉玲;王严春;张锐;黄美兰 刊期: 2013年第06期

  • 一种新的人工结香沉香挥发油成分GC-MS分析

    目的:针对“白木香通体造香技术”所结沉香中挥发油的化学成分进行研究.方法:采用挥发油提取法提取不同批次沉香药材中的挥发性成分,并采用GC-MS联用技术进行成分分析.结果:从沉香样品中共检测出56个化学成分,其中有36个化学成分是前人没有报道的;三批沉香样品化学成分构成略有差异,但都以倍半萜、芳香族类成分为主,且都含有沉香特征性有效成分沉香螺旋醇、苄基丙酮,并随着结香时间的延长其含量有增加趋势.结论:通过对沉香挥发油化学成分的分析,说明新方法所结沉香化学成分与天然沉香相似,且在较短时间内即可产生相对含量较高的沉香特征性有效成分.

    作者:赵艳艳;房志坚 刊期: 2013年第06期

  • 海绵Phakellia fusca的次级代谢产物研究

    目的:研究海绵Phakellia fusca的次级代谢产物.方法:采用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备薄层、重结晶等方法进行分离和纯化,并根据其理化性质及波谱数据鉴定结构.结果:从中分离得到10个化合物,分别鉴定为:对羟基苯甲酸(1)、棕榈酸(2)、α-十八碳烷醇甘油醚(3)、α-十六碳烷醇甘油醚(4)、(E)-N-2(1,3-二羟基-4-十八烯基)-十六酰胺(5)、胸腺嘧啶(6)、环(L-酪-L-脯)二肽(7)、苯乙酰胺(8)、尿嘧啶(9)、对羟基苯甲酰胺(10).结论:其中,化合物5、7、10为首次从该种海绵中分离得到.

    作者:邓舟;唐丽丹;廖小建;徐石海 刊期: 2013年第06期

中药材杂志

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