李严严；徐晓燕；张家君；方永奇；田华；焦鹏；桑慧；秦树存；姚树桐
目的：观察蛇床子素对磷酸三钙（ tricalcium phosphate ，TCP）颗粒诱导小鼠颅骨溶解的影响。方法：采用TCP颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型，于术后第2天颅顶局部注射蛇床子素（osthole）20 mg／kg，每周3次，持续干预2周。干预结束后处死动物取材，应用HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶（ tartrate resistant acid phosphatase ， TRACP）染色观察假体周围破骨细胞生成和骨溶解程度；ELISA法检测血清和骨组织中骨转换标志物骨钙素（ os－teocalcin）水平、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和TRACP活性以及骨膜中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor－α，TNF－α）、白细胞介素6（ interleukin－6，IL－6）和白细胞介素1β（ interleukin－1β，IL－1β）水平。 Western blot法检测颅骨组织葡萄糖调节蛋白78（glucose－regulated protein 78，GRP78）和CAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CAAT／enhancer binding protein homologous protein ，CHOP）的表达变化。结果：蛇床子素可明显抑制TCP颗粒诱导的破骨细胞生成，减少骨溶解面积，显著增加ALP和osteoclacin水平，降低TRAP活性并阻断炎症因子TNF－α、IL－6和IL－1β释放。此外，蛇床子素干预能明显减弱TCP颗粒激活的内质网应激反应。结论：蛇床子素可抑制TCP颗粒诱导的小鼠颅骨溶解，其机制可能与抑制TCP颗粒诱导的内质网应激反应有关。
作者：王青；张云；毛红娇；王金萍；贾如如；金丽芳；戴智睿 刊期： 2015年第12期
目的：探讨1－磷酸鞘氨醇受体2（ S1P2R）对脂多糖（ LPS）诱导的急性肺损伤（ ALI）中的作用及机制。方法：野生小鼠和S1pr2－／－小鼠经气管滴注LPS，建立急性肺损伤动物模型。 LPS注射24 h时观察肺组织的病理改变，测定支气管肺泡灌洗液（ BALF）中的蛋白浓度、总细胞数、中性粒细胞的比值及TNF－α、IL－6细胞因子的表达。为了观察S1P2R在肺损伤中的作用机制，LPS注射10 min前野生小鼠和S1pr2－／－小鼠经尾静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L－NAME，LPS注射12 h时，再观察肺的病理组织学变化以及BALF中的蛋白浓度，总细胞数及TNF－α、IL－6细胞因子表达的变化。结果：与野生小鼠比较，S1pr2－／－小鼠恶化LPS诱导的急性肺损伤，BALF中的蛋白浓度、总细胞数，中性粒细胞比值及炎症细胞因子表达显著增加。而L－NAME的预处理显著抑制在S1pr2－／－小鼠LPS诱导加重的急性肺损伤。结论：S1 P2 R通过抑制NO合成，维持血管屏障，从而抑制急性肺损伤。
作者：李秀国；延光海；张永吉；多久和阳；崔弘 刊期： 2015年第12期
目的：探讨盐酸法舒地尔（fasudil）能否通过活化Akt并抑制PTEN减轻顺铂（CP）导致的肾小管上皮细胞凋亡。方法：健康雄性SD大鼠随机分为3组（每组12只），包括正常对照（control）组、CP组及CP＋fasudil组。生理盐水或顺铂腹腔注射96 h后处死SD大鼠，留取血液和肾脏组织，检测血尿素氮（ BUN）、血清肌酐（ sCr）水平。 PAS染色光镜观察肾脏形态结构的变化；TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡；分别采用Western blotting法和／或免疫组化技术检测Rho蛋白激酶1（ROCK1）、PTEN、Akt 蛋白表达变化及磷酸化Akt（p－Akt）水平。结果：与control组比较，CP组与CP＋fasudil组大鼠的BUN及sCr水平、凋亡细胞阳性率、ROCK1及PTEN蛋白表达均显著升高（P＜0．05），而p－Akt表达则显著减少（P＜0．05）；PAS染色光镜示CP组肾脏组织结构出现明显损伤性变化；与CP组比较，CP＋fasudil组的sCr水平、凋亡细胞阳性率、ROCK1及PTEN蛋白表达均显著下调（P＜0．05），而p－Akt水平则显著增高（ P＜0．05）；此外，肾脏病理损伤减轻。结论：盐酸法舒地尔可以减轻顺铂引起肾小管上皮细胞凋亡，其机制可能与活化Akt及抑制PTEN蛋白表达相关。
作者：孔德阳；郝建兵；叶向梅；唐杰；包娜娜；侯冬华 刊期： 2015年第12期
目的：观察肺炎支原体（ Mycoplasma pneunoniae，Mp）促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素－1β（ IL－1β）的表达是否与活性氧簇（ ROS）有关。方法：预先用5 mmol／L ROS清除剂N－乙酰半胱氨酸（ NAC）预处理RAW264．7细胞30 min，用10 MOI Mp分别感染RAW264．7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平；real－time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase－1 mRNA的表达；Western blot 法检测NL－RP3、ASC和caspase－1 p20的蛋白水平；ELISA法检测细胞上清液IL－1β的分泌水平。结果：与正常组比较，感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加（ P＜0．01）；感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase－1 mRNA的表达显著增加（P＜0．01），感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase－1 p20的蛋白水平上调（P＜0．01），感染后24 h 细胞上清液IL－1β含量显著增加（P＜0．01）；与模型组比较，NAC组在上述相应时点ROS生成降低，NLRP3、ASC和caspase－1 mRNA的表达下调，蛋白水平下降，细胞上清液IL－1β的含量减少。结论： Mp可能通过刺激RAW264．7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。
作者：张涵；马晶；张云凌；张树明；许庆瑞；王伟明 刊期： 2015年第12期
目的：研究小白菊内酯（PN）对球囊损伤（balloon injury，BI）后新生内膜的影响及机制。方法：将30只雄性新西兰兔2．0～2．3 kg在高脂适应性喂养1周后随机分为6组：假手术＋生理盐水（ sham＋NS）组；假手术＋二甲基亚砜（ sham＋DMSO）组；球囊损伤＋生理盐水（ BI＋NS）组；球囊损伤＋DMSO（ BI＋DMSO）组；球囊损伤＋PN低剂量（ BI＋PN low）组；球囊损伤＋PN高剂量（ BI＋PN high）组。 PN溶解于DMSO，术后立即按分组腹腔注射同体积药物治疗，每日1次。继续高脂喂养4周后取血清及髂总动脉，分析比较血管内－中膜厚度、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶（caspase）－1、白细胞介素（IL）－1β和IL－8的表达量以及血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）的含量。结果： BI＋DMSO组较sham＋DMSO组内膜厚度、caspase－1、IL－1β和IL－8的表达量增加（P＜0．05）；与BI＋DMSO组比较，上述指标在PN高、低剂量组有不同程度降低，但仅PN高剂量组与其差异有统计学意义（ P＜0．05）；各组血脂指标差异不明显。结论： PN能抑制球囊损伤后的内膜增殖，其机制可能与抗炎作用有关。
作者：毛霞；高丽华；邓昌明 刊期： 2015年第12期
目的：探讨参麦注射液改善3 T3－L1脂肪前体细胞胰岛素抵抗模型的效果及其作用机制。方法：使用地塞米松等将3 T3－L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞，使用油红O染色法检测脂肪细胞分化情况；用胰岛素诱导3 T3－L1脂肪细胞以建立胰岛素抵抗模型，并使用葡萄糖氧化酶法检测细胞上清液中葡萄糖浓度，以评价模型建立情况。将建立胰岛素抵抗的细胞分为空白对照组、10μmol／L罗格列酮阳性对照组、25 g／L参麦组和50 g／L参麦组。 MTT检测各组药物作用8、16、24和36 h后的细胞活力。药物作用8、16和24 h后测定细胞上清液葡萄糖浓度。免疫印迹检测葡萄糖转运蛋白4（ GLUT4）、磷脂酰肌醇3－激酶（ PI3K）、AKT和磷酸化AKT（ p－AKT）在各组中的蛋白水平。结果：成功建立3 T3－L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型，葡萄糖浓度数据显示参麦注射液（25、50 g／L）可以改善胰岛素抵抗并可以明显增加3T3－L1细胞GLUT4、PI3K及p－AKT的蛋白水平。结论：参麦注射液可以改善3T3－L1胰岛素抵抗细胞的葡萄糖利用，并且与增加GLUT4、PI3K及p－AKT的蛋白水平有关。
作者：毛玉山；陈轶尘；赵亚荣；车晓航；陶金；叶小磊 刊期： 2015年第12期
目的：探讨ClC－3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点，重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对ClC－3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法：采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞（ CNE－2Z） IK1基因的表达；real－time PCR技术检测ClC－3 mRNA的表达；Western blot检测ClC－3的蛋白表达；细胞免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测ClC－3和IK1蛋白在细胞内分布；全细胞膜片钳记录细胞氯电流。结果：IK1 siRNA可以成功转染CNE－2Z细胞，有效抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达；用IK1 siRNA抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达后， ClC－3的mRNA表达上调而ClC－3蛋白却表达减少：在低分化鼻咽癌上皮细胞，低渗刺激可激活氯通道，产生一个较大的氯电流，在成功转染IK1 siRNA的细胞，此氯电流明显减弱。结论：敲低IK1钾离子通道可抑制ClC－3氯离子通道的表达和功能。
作者：邹丽莉；叶东；吕瑞玲；汪源；孙晓雪；朱林燕；陈丽新；王立伟 刊期： 2015年第12期
目的：探讨黄岑苷对宫颈癌细胞株HeLa的放射增敏作用及机制。方法：MTT法检测不同浓度黄岑苷对HeLa细胞的活力抑制能力，并计算IC50筛选实验药物浓度；克隆形成实验检测放射组与联合组在不同照射剂量下细胞的放射增敏作用；流式细胞术检测单药组、放射组与联合组的细胞周期变化；Western blot检测不同组细胞中Akt、p－Akt、Bad和p－Bad的蛋白水平。结果：黄岑苷呈浓度依赖性抑制HeLa细胞的活力，IC50为43．65 mg／L，采用20％IC50浓度8 mg／L进行放射增敏实验。克隆形成实验结果显示8 mg／L黄岑苷联合放射治疗可使生存曲线左移，D0、Dq值显著小于放射组（P＜0．05）。流式细胞仪检测结果显示黄岑苷阻滞HeLa细胞于G2／M期。联合组细胞中p－Akt和p－Bad的蛋白水平均显著高于其它各组（ P＜0．05）。结论：黄岑苷对HeLa细胞具有放射增敏作用，其机制可能与其阻滞细胞于G2／M期和活化PI3K／Akt信号通路有关。
作者：惠双 刊期： 2015年第12期
目的：探讨小鼠异基因造血干细胞移植（ allo－HSCT）后使用粒细胞集落刺激因子（ G－CSF）对急性移植物抗宿主病（ aGVHD ）的影响及其可能的机制。方法：以雄性C57 BL／6小鼠（ H－2 b ）为异基因供鼠，雄性BALB／c小鼠（H－2d）为同基因供鼠；以接受8 Gy[60Co]γ射线全身照射（TBI）预处理雌性BALB／c小鼠为受鼠，并随机分为7组：单纯TBI组、同基因骨髓＋脾细胞移植（Syn－BMST）组、异基因骨髓移植（allo－BMT）组、异基因骨髓＋脾细胞移植（ allo－BMST）组、Syn－BMST后G－CSF给药（ Syn－BMST＋G－CSF）组、allo－BMT后G－CSF给药（ allo－BMT＋G－CSF）组和allo－BMST后G－CSF给药（allo－BMST＋G－CSF）组，各G－CSF给药组从移植后第1天（＋1 d）开始皮下注射G－CSF 2μg／d，观察至＋60 d。比较各组生存时间、aGVHD发生情况和病理改变，流式细胞术检测骨髓H2－Kb＋细胞百分率（异基因嵌合率），比较allo－BMST和allo－BMST＋G－CSF组＋10 d时血清细胞因子（ IL－2、IL－4、IFN－γ和TNF－α）水平、脾总有核细胞数（ SpTNC）和脾细胞免疫表型的差异。结果：单纯TBI组小鼠于照射后9～15 d死于造血衰竭，其余各组＋10 d时均100％获得造血重建，随机抽取2只异基因骨髓移植受鼠，＋30 d供者细胞嵌合率分别为99．8％和99．4％，表明清髓性allo－HSCT模型建立成功。 Syn－BMST、Syn－BMST＋G－CSF、allo－BMT和allo－BMT＋G－CSF组小鼠观察至＋60 d均未发生aGVHD。与allo－BMST组相比，allo－BMST＋G－CSF组受鼠出现aGVHD时间早、程度重、病理改变严重、存活时间明显缩短（P＜0．05）、＋10 d SpTNC明显增加（P＜0．05）、脾脏NK细胞显著扩增（P＜0．01）、DC1／DC2比值减低（P＜0．05），而2组血清IL－2、IL－4、IFN－γ和TNF－α水平差异无统计学意义。结论：移植后使用G－CSF对小鼠异基因单纯骨髓移植后aGVHD无明显影响，但能显著加重allo－BMST后aGVHD的严重程度并缩短受鼠生存时间，该效应可能与G－CSF诱导供鼠NK细胞扩增有关，提示临床allo－HSCT后早期使用G－CSF可能触发或加重aGVHD的风险。
作者：王亮；朱康儿；张涛；陈洁 刊期： 2015年第12期
作者： 刊期： 2015年第12期
目的：研究CXC趋化因子受体7（CXC chemokine receptor 7，CXCR7）在动脉粥样硬化模型载脂蛋白E基因敲除（ ApoE－／－）小鼠中的表达并探究阿托伐他汀的干预作用。方法：8周龄ApoE－／－雄性小鼠，随机分为正常对照组、高脂组与高脂＋阿托伐他汀组，实验干预12周建立动脉粥样硬化模型；油红O及HE染色观察动脉粥样硬化病变，Western blot及免疫组化法检测动脉CXCR7的表达，Western blot 检测动脉eNOS和Akt的表达。结果：（1）动脉油红O及HE染色示高脂组可见有明显粥样核心及纤维帽的显著斑块，高脂＋阿托伐他汀组也可见斑块，但斑块负荷较模型组减轻，正常对照组未见明显斑块形成；（2）免疫组化示高脂组动脉细胞着色浅，CXCR7表达量少，高脂＋阿托伐他汀组与高脂组比较，细胞着色增加，CXCR7表达量增加，正常对照组颗粒呈深棕黄色，示CXCR7大量表达；（3）Western blot结果示高脂组CXCR7、eNOS和Akt的表达较正常对照组降低，给予阿托伐他汀干预后CXCR7、eNOS和Akt的表达较高脂组增加，较正常对照组相比CXCR7、eNOS和Akt的表达下降，但磷酸化eNOS的水平未见差异。结论：高脂血症可损伤血管内皮，促进动脉粥样硬化的发展，下调动脉CXCR7、eNOS和Akt的表达；阿托伐他汀可改善动脉粥样硬化，缓解ApoE－／－小鼠动脉CXCR7、eNOS和Akt蛋白表达的下调。
作者：涂小丽；陈琦；张洪洲；鄢瑞娟；吴延庆 刊期： 2015年第12期
目的：研究RNA干扰（ RNAi）介导的胰岛素样生长因子1受体（ IGF1R）基因沉默对肝癌细胞生长、迁移与侵袭的影响。方法：设计并筛选抑制IGF1R mRNA表达效率高的siRNA序列，构建该序列的慢病毒表达载体，转染293T细胞进行病毒包装。将包装好的慢病毒感染Huh7和Hep3B肝癌细胞，筛选沉默IGF1R基因表达的稳定细胞株。将上述稳定细胞株扩大培养，检测细胞IGF1 R mRNA表达变化，细胞生长、迁移与侵袭能力变化，以及Ki－67、p－AKT、p－ERK1、Gli1、β－catenin、cyclin D1、p21、BCL－XL的蛋白表达水平变化。结果：与空白及阴性对照组比较，感染携带IGF1R干扰序列慢病毒的Huh7和Hep3B肝癌细胞IGF1R mRNA表达水平显著下调，细胞增殖活性明显降低，细胞凋亡显著增加，细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制，细胞中IGF1R、Ki－67、p－AKT、p－ERK1、Gli1、β－catenin、cyclin D1、p21及BCL－XL蛋白表达水平均显著降低。结论：RNAi介导的IGF1R基因沉默可明显抑制Huh7和Hep3B肝癌细胞生长及恶性生物学特征，这可能与IGF1R表达水平显著下调而引起上述调控细胞增殖、抗凋亡基因以及相关信号通路基因的蛋白表达水平显著降低有关。
作者：别彩群；黄秋燕；颜英；石珩；汤绍辉 刊期： 2015年第12期
目的：运用蛋白质组学研究方法探讨吡那地尔后处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法：建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型，随机分为吡那地尔后处理组（ Pina组）和缺血再灌注损伤组（I／R组），每组9只。提取心肌线粒体蛋白质行双向凝胶电泳，应用质谱鉴定差异大于2倍的蛋白质点。结果：Pina组与I／R组比较，共发现7个差异蛋白质：Pina 组NADH 脱氢酶1α亚复合体10亚基（ NDUFA10）﹑NADH脱氢酶铁硫蛋白2（NDUFS2）和NADH脱氢酶黄素蛋白2（NDUFV2）表达低于I／R组；Pina组异柠檬酸脱氢酶α亚基（IDHA）和Δ3，5－Δ2，4－二烯酰辅酶A异构酶（ECH1）表达高于I／R组；另有2个蛋白质点均被鉴定为ATP合酶δ亚基，一个蛋白质点表达升高，而另一个表达降低。结论：吡那地尔后处理可能抑制了复合体Ⅰ的亚基（NDUFA10﹑NDUFS2和NDUFV2）代偿性增加，但促进了IDHA和ECH1表达并引发了ATP合酶δ亚基发生磷酸化，这些改变可能均与吡那地尔后处理保护心肌的作用有关。
作者：魏义勇；李科；刘云；刘兴奎；王海英；喻田 刊期： 2015年第12期
目的：采用定量磁共振（ MR）灌注成像测定直肠癌的各灌注参数，以探究MR灌注成像在评价肿瘤局部微血管灌注量及渗透性方面的应用价值。方法：回顾性分析行直肠动态对比增强磁共振（ DCE－MRI）扫描的直肠癌患者38例。计算肿瘤和正常肠壁感兴趣区（ROI）灌注参数[对比剂容积转换常数（Ktrans）、血浆与血管外细胞外间隙（EES）间的速率常数（Kep）、单位体积组织的EES 容量（Ve）及初始强化曲线下面积（iAUC）]的平均值，并对肿瘤与正常肠壁、黏液腺癌与非黏液腺癌、不同分化程度及是否伴淋巴结转移的患者各灌注参数值进行比较分析。结果：直肠癌的各灌注参数均较正常肠壁高，差异具有统计学意义（P＜0．01）。直肠黏液腺癌较非黏液腺癌的Ktrans值低（P＜0．05）。不同分化程度、伴有或不伴有淋巴结转移直肠癌患者的Ktrans、Kep及Ve 差异无统计学意义，伴有淋巴结转移的直肠癌iAUC较不伴者低。结论：定量MR灌注成像验证了直肠癌较正常肠壁局部微血管灌注及渗透性的改变，并可用于鉴别黏液腺癌与非黏液腺癌的组织学分型，具有一定的诊断应用价值。但是仅根据肿瘤的灌注值来判断肿瘤的分化程度及淋巴结转移尚不可靠。
作者：肖晓娟；卢宝兰；杨心悦；王影；刘旭斌；翟凤仪；余深平 刊期： 2015年第12期
目的：探讨肢体缺血预适应对氧化应激损伤的血管内皮是否具有保护作用。方法：人脐静脉内皮细胞分为5组：对照组不加任何处理；模型组给予过氧化氢损伤2h；早期肢体缺血预适应组、晚期肢体缺血预适应组和假肢体缺血预适组这3组分别用5％大鼠早期肢体缺血预适应血清、晚期肢体缺血预适应血清和假肢体缺血预适应血清孵育12 h，再用过氧化氢损伤2 h。检测细胞凋亡情况，培养液中乳酸脱氢酶的活性，内皮细胞表面黏附分子的mRNA水平，血红素氧合酶1的mRNA和蛋白表达情况。结果：大鼠早期肢体缺血预适应和晚期缺血预适应血清可以减轻人脐静脉内皮细胞氧化应激所导致的细胞死亡，减少乳酸脱氢酶的释放，减少内皮细胞表面黏附分子的表达，并能增加血红素氧合酶1的mRNA和蛋白的表达。结论：肢体缺血预适应可以减轻血管内皮细胞的氧化应激损伤。
作者：陈敏；张明升；张轩萍；梁月琴 刊期： 2015年第12期
目的：观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链（ botulinum neurotoxin serotype A heavy chain ，BoNT／A HC）对Neuro－2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法：采用体外细胞培养技术，在培养液中加入不同浓度的BoNT／A HC（0．01 nmol／L、0．1 nmol／L、1 nmol／L和10 nmol／L）进行干预，于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色，再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比；在此基础上，选择有效的BoNT／A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液，于BoNT／A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白，采用Western blot检测p－ERK1／2及p－Akt的蛋白水平。结果：当BoNT／A HC浓度为0．1 nmol／L、1 nmol／L和10 nmol／L时，细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加，差异显著（ P＜0．05），其中1 nmol／L效果显著。在细胞培养液内加入1 nmol／L BoNT／A HC 后，p－ERK1／2的蛋白水平呈增加趋势，其中BoNT／A HC作用60 min后，p－ERK1／2的增加与对照组相比差异显著（P＜0．05）；与p－ERK1／2变化趋势类似，细胞培养液内加入1 nmol／L的BoNT／A HC后， p－Akt的蛋白水平也呈增加趋势，其中BoNT／A HC作用15 min和60 min 时，p－Akt增加显著（P＜0．05）。结论：一定剂量的BoNT／A HC可以促进神经细胞突起再生和生长； BoNT／A HC对Neuro－2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1／2和Akt的磷酸化而实现。
作者：高美玲；王红；张彩云；兰婧；李夏青 刊期： 2015年第12期
线粒体钙离子平衡对维持线粒体特性，介导多种细胞生理功能和病理过程具有重要的作用。虽然大家都知道线粒体钙离子的摄取，但直到近年来才部分揭示此过程中转运体的分子结构。本文就线粒体钙离子单向转运体（ mitochondrial calcium unipor－ter，MCU）及其相互作用蛋白的研究进展进行综述。
作者：徐斌；李泱 刊期： 2015年第12期
目的：明确18α－甘草次酸（18α－glycyrrhetinic acid，18α－GA）对晚期骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells ，BMSCs）衰老标志物和增殖能力的影响。方法：晚期BMSCs （≥14代）应用2．0 mg／L的18α－GA持续作用30 d，比较18α－GA组与DMSO组蛋白酶体活性；衰老相关β－半乳糖苷酶（ senescence－associatedβ－galactosidase，SA－β－Gal）染色和Western blot检测衰老相关蛋白p53、p21和p16的表达变化；CCK－8、BrdU掺入试验、流式细胞术和Western blot分别检测细胞增殖能力、细胞周期分布及细胞周期相关分子表达变化。结果：应用18α－GA后BMSCs蛋白酶体活性较DMSO组增高约0．2倍（P＜0．01）。18α－GA组SA－β－Gal阳性衰老细胞较DMSO组减少，且细胞着色浅淡；衰老相关蛋白p53和p21表达水平分别较对照组降低（P＜0．05）。 CCK－8实验及流式细胞术结果显示18α－GA组细胞增殖能力较DMSO组增高，S期细胞显著增多（P＜0．05），18α－GA组BrdU染色阳性细胞率较DMSO对照组增高（P＜0．05）。18α－GA组细胞周期相关蛋白cyclin D1及CDK4表达水平分别较DMSO组增高（P＜0．05）。结论：18α－GA可激活晚期BMSCs蛋白酶体活性延缓细胞衰老，并且可能通过上调细胞周期相关蛋白表达水平促进晚期BMSCs增殖。
作者：杨佳超；赵云鹤；蒋蓉；陆利 刊期： 2015年第12期
目的：观察氧化应激是否可诱导骨髓间充质干细胞（ MSCs）自噬，探索在氧化应激微环境中自噬对MSCs增殖和凋亡的影响及可能机制，以期提高移植MSCs治疗糖尿病勃起功能障碍（ DMED）的效果。方法：以过氧化氢（ H2 O2）模拟氧化应激微环境。台盼兰染色细胞计数法及MTT分析检测不同浓度（0、50、100、200、400μmol／L） H2 O2对MSCs增殖的影响。联合MTT、流式细胞术、Western blot及透射电镜等方法研究H2 O2对MSCs凋亡及自噬的影响。结果：H2 O2呈浓度依耐性抑制MSCs增殖，IC50＝（384．5751±16．8895）μmol／L；Western blot 分析及透射电镜提示H2 O2在诱导MSCs凋亡的同时，诱导MSCs产生自噬；MTT分析及流式细胞术提示H2 O2组细胞增殖受抑、凋亡率上升，阻断自噬后细胞增殖进一步减弱，凋亡率进一步上升；Western blot 结果提示H2 O2诱导cleaved caspase－3增多及多聚ADP－核糖聚合酶1（ PARP1）裂解增强；阻断凋亡后，cleaved caspase－3降低及PARP1裂解减弱；阻断自噬后，cleaved caspase－3进一步增多及PARP1裂解进一步增强。结论：氧化应激对MSCs存活具有双重作用，在诱导MSCs凋亡的同时还诱导保护性自噬，阻断MSCs自噬可以增加MSCs的凋亡，因此进一步增强细胞保护性自噬将有望提高移植MSCs在糖尿病高氧化应激微环境中的存活率，从而改善移植MSCs对糖尿病勃起功能障碍的疗效。
作者：刘关羽；何卫阳；朱鑫；杨帆；黄小龙；印胡滨；苟欣 刊期： 2015年第12期
目的：探讨p21活化激酶4（PAK4）对非小细胞肺癌（NSCLC）侵袭和迁移能力的影响及相关机制。方法：PAK4－siRNA或阴性对照转染A549和NCI－H520细胞株，实时荧光定量PCR和Western blot 分别检测细胞PAK4 mRNA和蛋白表达水平，Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响；Western blot检测其LIMK1、cofilin及其磷酸化水平；免疫共沉淀检测PAK4和LIMK1蛋白是否直接绑定；体外激酶分析实验检测LIMK1是否是PAK4的激酶底物；Western blot检测10例非小细胞肺癌组织中PAK4和磷酸化LIMK1的相关性；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后观察细胞迁移和侵袭能力变化。结果：沉默PAK4后A549和NCI－H520细胞迁移和侵袭能力明显减弱（P＜0．05）；LIMK1和cofilin蛋白水平无显著变化，而磷酸化LIMK1和磷酸化cofilin水平显著下调；免疫共沉淀结果示PAK4与LIMK1相互绑定；激酶分析实验结果显示，激酶缺陷型PAK4（K350M）使LIMK1磷酸化的作用显著低于野生型PAK4或活化型PAK4（S445N）（P＜0．05）。 Western blot检测结果示非小细胞肺癌组织中PAK4表达上调的程度与磷酸化LIMK1含量呈正相关（P＜0．05）；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后，迁移和侵袭细胞数均高于PAK4－siRNA转染组（ P＜0．05）。结论： PAK4通过直接磷酸化LIMK1而促进非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。
作者：李冬霞；王永玲；蔡松旺 刊期： 2015年第12期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
