学术投稿

兔玻璃体腔注射PBS后视网膜差异蛋白的表达

汪家名;雷博

关键词:玻璃体腔注射, 视网膜, 蛋白质组, 串联质谱标签
摘要:目的:研究家兔玻璃体腔内注射PBS后的视网膜功能变化及差异蛋白的表达情况以探索玻璃体腔注射的安全性。方法将20只青紫蓝兔随机分为4组,A组不作任何处理,B至D组在兔右眼玻璃体腔内注射50μL PBS。分别于注射后第0、4、7、14天进行眼底照相和视网膜电图(ERG)检查,之后摘取眼球并分离视网膜。利用串联质谱标签(TMT)联合液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)法检测注射组相对于空白对照组的视网膜蛋白变化情况。通过KOBAS及基于KEGG数据库分析明显变化的蛋白富集通路,利用STRING得出明显变化蛋白间相互作用的功能网络图。结果注射组眼底照相结果与空白组相比无明显变化,ERG结果显示视网膜功未受到影响。TMT蛋白质谱共检测出了6042种兔视网膜蛋白,其中49种蛋白(0.81%)在玻璃体腔注射后表达上调超过5倍或下调超过80%。变化比较显著的蛋白主要与细胞骨架有关。显著变化蛋白富集的通路包括黏着斑通路、紧密连接通路、核黄素新陈代谢通路、细胞外基质受体相互作用通路及肌动蛋白细胞骨架调节通路。功能网络图分析显示ACTC1及ISG15在蛋白相互作用关系中起着比较中心的作用。结论玻璃体腔内注射PBS主要引起与细胞黏连、形态、迁移、分化、信号传导及核黄素代谢通路相关的视网膜蛋白变化。
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 蛋白4.1家族在小鼠黑色素瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

    目的:筛选小鼠黑色素瘤细胞中蛋白4.1家族的表达,探讨蛋白4.1对小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响。方法以MEF、B16、B16-F10细胞基因组RNA和总蛋白为模板,经PCR法和Western blot筛选蛋白4.1在小鼠黑色素瘤细胞中的表达;通过分子克隆构建真核表达载体pEGFP-N1-EPB41L3并转染黑色素瘤细胞;检测表达蛋白4.1B后B16、B16-F10细胞增殖的变化。结果蛋白4.1B在黑色素瘤细胞中表达缺失;通过转染成功构建的真核表达载体pEGFP-N1-EPB41L3发现,表达蛋白4.1B的黑色素瘤细胞的增殖作用被显著性抑制。结论通过真核表达载体pEGFP-N1-EPB41L3转染表达蛋白4.1B可显著抑制B16和B16-F10黑色素瘤细胞的增殖。

    作者:门颖丽;康巧珍;丁聪;刘诗梦;江慧;王晓东;汲振余;刘鑫;王婷 刊期: 2016年第05期

  • Nanog通过升高PKC?的表达促进乳腺癌细胞的侵袭

    目的:研究Nanog促进乳腺癌细胞侵袭与ezrinT567磷酸化的关系及Nanog调节ezrinT567磷酸化的可能机制。方法转染靶向Nanog的siRNA敲低乳腺癌细胞Nanog;用transwell法检测乳腺癌细胞侵袭;用免疫印迹检测乳腺癌细胞Nanog、PKCε表达水平和ezrinT567磷酸化水平;用免疫共沉淀和免疫印迹检测PKCε和ezrin蛋白的相互作用。结果敲低乳腺癌细胞的Nanog,PKC?蛋白表达下降、ezrinT567磷酸化水平下降、乳腺癌细胞的侵袭能力下降;敲低PKCε降低ezrinT567磷酸化水平;PKC?与ezrin可免疫共沉淀。结论 Nanog可上调PKC?的表达,后者可使ezrinT567磷酸化,这可能是Nanog促进肿瘤转移的一个新机制。

    作者:邵文凤;李福喜;唐芮;于晓然;温桥生;余焱林;熊静波 刊期: 2016年第05期

  • 粒径、形貌对羟基磷灰石及其牙膏吸附Zn2+的影响

    目的:研究羟基磷灰石的粒径、形貌对HA及其牙膏吸附水溶液中Zn2+的影响。方法取不同粒径、形貌的四种HA及其牙膏和空白对照牙膏分别配成9组系列浓度的悬液,分别加入初始浓度为10 mg/L的锌离子溶液,静置反应24 h后取上清液用电感耦合等离子发射光谱仪测定残余锌离子浓度,计算吸附率和吸附能力。结果 HA及掺HA牙膏对锌离子有一定的吸附能力,掺HA牙膏较纯HA的吸附率提高了3%~10%。12μm球形HA对锌离子的吸附能力强,其次为30 nm短棒状的HA。掺HA牙膏对锌离子的吸附符合Langmuir和Freundlish等温模型,纯HA的吸附仅符合Langmuir等温模型。结论在牙膏中加入HA可获得良好的锌离子吸附效果。HA的粒径、形貌对其吸附Zn2+的能力均有一定的影响,其中以12μm球形HA对锌离子的吸附效果优。

    作者:杨剑珍;申晓青;刘成霞;徐平平 刊期: 2016年第05期

  • 利用数据库分析胃食管反流病的发病因素与临床特点

    目的:利用完整的前瞻性功能性胃肠病数据库探讨非糜烂性胃食管反流病(NERD)的相关发病因素与临床特点。方法按照病例报告表(CRF)收集完整的个人信息和临床资料,将各项信息与资料录入到网络在线功能性胃肠病数据管理系统,部分病例完成高分辨率食管测压和多通道腔内阻抗-pH监测,导出检索数据进行统计分析。结果在数据库中录入了504例NERD临床资料及152例对照组资料,NERD患者中,女性266例(52.8%)、男性238例(47.2%);商人(23.1%)、公务员(19.6%)、无业(19.2%)、工人(17.1%),城市病源(67.3%)、农村病源(32.7%);平均病程(27.88±16.33)月;不良生活事件(P=0.045,OR=1.954)、长期频繁饮酒(P=0.040,OR=3.957)、打鼾(P=0.002,OR=2.334)、进食夜宵(P=0.002,OR=2.752)、合并焦虑抑郁(P=0.003,OR=2.723)等是NERD的独立危险因素;60.81%NERD患者存在不同程度的食管体部无效收缩,其中存在食管裂孔疝(HH)与无HH的NERD患者两组之间在总液体反流事件方面存在明显差异(P<0.05)。结论不良生活与饮食习惯、焦虑抑郁与不良事件、打鼾、食管运动功能差、HH等与NERD的发病具有重要相关性,30~50岁为高发人群,并与职业和生活区域有一定相关。

    作者:陈丽萍;黄载伟;肖冰 刊期: 2016年第05期

  • 生物节律基因NPAS2在结直肠癌组织中的表达及意义

    目的:检测生物节律基因NPAS2在结直肠癌组织及相应癌旁组织中的表达情况;明确NPAS2的表达与患者临床病理学参数之间的相关性,分析NPAS2表达与结直肠癌患者5年生存率之间的相关性,明确其在判断结直肠癌患者预后中的作用。方法采用RT-qPCR检测NPAS2 mRNA在40例结直肠癌及癌旁新鲜组织中的表达;采用免疫组织化学SABC法检测NPAS2蛋白在120例肿瘤及癌旁石蜡标本中的表达;利用其中78例随访患者资料,K-M生存法分析NPAS2蛋白表达水平与患者生存率之间的相关性。结果 RT-qPCR结果提示,结直肠癌中NPAS2 mRNA表达显著低于相对应的癌旁组织(P<0.01);免疫组织化学结果提示,NPAS2蛋白表达在结直肠癌组织中的阳性率为19.2%,显著低于癌旁中的62.5%(P<0.05)。NPAS2的低表达与结直肠癌的肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、分化、浸润深度及远处转移无显著相关性(P>0.05)。K-M生存分析结果表明,NPAS2高表达组患者5年生存率显著高于低表达组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论NPAS2在结直肠癌组织中低表达,且与肿瘤部分恶性生物学行为及患者5年生存率密切相关,提示检测NPAS2的表达对预测结直肠癌患者预后具有重要意义。

    作者:杨少芬;许鸣;杨海云;李佩琴;池秀芳 刊期: 2016年第05期

  • 兔玻璃体腔注射PBS后视网膜差异蛋白的表达

    目的:研究家兔玻璃体腔内注射PBS后的视网膜功能变化及差异蛋白的表达情况以探索玻璃体腔注射的安全性。方法将20只青紫蓝兔随机分为4组,A组不作任何处理,B至D组在兔右眼玻璃体腔内注射50μL PBS。分别于注射后第0、4、7、14天进行眼底照相和视网膜电图(ERG)检查,之后摘取眼球并分离视网膜。利用串联质谱标签(TMT)联合液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)法检测注射组相对于空白对照组的视网膜蛋白变化情况。通过KOBAS及基于KEGG数据库分析明显变化的蛋白富集通路,利用STRING得出明显变化蛋白间相互作用的功能网络图。结果注射组眼底照相结果与空白组相比无明显变化,ERG结果显示视网膜功未受到影响。TMT蛋白质谱共检测出了6042种兔视网膜蛋白,其中49种蛋白(0.81%)在玻璃体腔注射后表达上调超过5倍或下调超过80%。变化比较显著的蛋白主要与细胞骨架有关。显著变化蛋白富集的通路包括黏着斑通路、紧密连接通路、核黄素新陈代谢通路、细胞外基质受体相互作用通路及肌动蛋白细胞骨架调节通路。功能网络图分析显示ACTC1及ISG15在蛋白相互作用关系中起着比较中心的作用。结论玻璃体腔内注射PBS主要引起与细胞黏连、形态、迁移、分化、信号传导及核黄素代谢通路相关的视网膜蛋白变化。

    作者:汪家名;雷博 刊期: 2016年第05期

  • SPLUNC1基因在人体组织中的表达分布特征

    目的:探讨人SPLUNC1基因在人体组织中的表达分布特征。方法采用原位杂交方法检测人体37种组织中SPLUNC1基因的细胞学定位。结果原位杂交结果显示:SPLUNC1在上腭、表皮、食管及食管-贲门部的鳞状上皮,鼻咽部、气管、宫颈部化生的鳞状上皮及食管和肺的鳞状细胞癌中均不表达;在胃粘膜、胆囊、空肠、结肠、子宫内膜及腺体和宫颈部的单层柱状上皮细胞中也不表达;主要表达在鼻咽、气管和支气管的假复层纤毛柱状上皮中,且沿呼吸道从上至下,该基因表达逐渐减弱,在肺组织中检测不到其表达。在腮腺、下颌下腺的导管和浆液腺细胞、鼻咽和肺等部位的粘膜下浆液腺细胞、胃粘膜固有层壁细胞及乳腺小叶和导管上皮中表达SPLUNC1,但粘液性腺上皮细胞中不表达。此外,在肺、胃、结肠、乳腺、子宫内膜和宫颈等部位的腺癌组织中, SPLUNC1基因均呈强阳性表达。结论 SPLUNC1基因的表达具有明显的细胞特异性,其表达分布特征可能与细胞功能有关。

    作者:王爽;李文路;吕丽春;姚开泰 刊期: 2016年第05期

  • 前列腺周围神经阻滞麻醉对缓解经直肠超声引导下前列腺穿刺活检术疼痛的效果

    目的:评估前列腺周围神经阻滞麻醉(PPNB)对缓解经直肠超声引导下前列腺穿刺活检术时疼痛的效果。方法回顾性分析我院2013年11月~2015年1月经直肠超声引导下前列腺12针系统穿刺患者111例,根据是否采用PPNB,将患者分成PPNB组(52例)和非PPNB组(59例)。PPNB组在经直肠超声引导下注射1%利多卡因阻滞麻醉前列腺周围神经,然后行穿刺活检;非PPNB组未采用任何麻醉方法。穿刺结束后采用视觉模拟评分法对直肠指检(DRE)、经直肠超声检查、穿刺过程进行疼痛评分;穿刺结束后7天随访患者穿刺并发症。结果两组患者的年龄、前列腺体积、总前列腺特异性抗原(TPSA)、游离前列腺特异性抗原(FPSA)、DRE异常比例差异无统计学意义。两组患者DRE疼痛评分(1.40∶1.39,P=0.997)、经直肠超声检查疼痛评分(2.10∶2.07,P=0.834)差异无统计学意义;然而,PPNB组穿刺疼痛评分更低(2.54∶3.07,P=0.033)。两组患者穿刺并发症差异无统计学意义。结论相对于无麻醉,采用前列腺周围神经阻滞麻醉可减轻经直肠超声引导下前列腺穿刺活检术时疼痛不适。

    作者:谢毅;周芳坚;李永红;蒋丽娟;吴志明;秦自科;韩辉;刘卓炜 刊期: 2016年第05期

  • 超声造影评价右美托咪定对兔肾缺血/再灌注损伤时微循环灌注的影响

    目的:应用超声造影定量分析技术评价右美托咪定(DEX)对兔肾缺血/再灌注(I/R)损伤时微循环灌注的影响。方法新西兰家兔24只随机分成3组(每组8只):对照组、肾缺血/再灌注损伤组(I/R组)和右美托咪定组(DEX组)。I/R组和DEX组切除右肾建立左肾缺血再灌注损伤模型。DEX组在肾缺血前30 min腹腔注射10μg/kg右美托咪定。再灌注24 h后,测定肾脏大小和肾血流阻力(RI),超声造影观察肾皮质灌注,时间-强度曲线定量分析达峰时间(TTP)、峰值强度(PSI)、曲线上升斜率(Grad)和曲线下面积(AUC)。取肾脏观察病理改变。结果与对照组比较,I/R组和DEX组肾大小和病理改变明显,RI增高, TTP延长,PSI和Grad降低,AUC显著增加(P<0.05);与I/R组比较,DEX组肾大小和病理改变明显改善,RI降低,TTP缩短, PSI和Grad增高,AUC减少(P<0.05)。结论超声造影结合时间-强度曲线参数能动态定量分析右美托咪定改善兔肾缺血/再灌注损伤时的微循环灌注。

    作者:斯妍娜;韩流;张媛;陈利海;徐亚杰;孙凡;潘笑笑;曾令清;鲍红光 刊期: 2016年第05期

  • miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

    目的:探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b和FOXO1的表达;运用RT-PCR的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 mRNA的变化,Western blotting检测在FOXO1蛋白的变化。结果 miR-135b在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高(P<0.05), FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低(P<0.05)。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖(P<0.05)。上调miR-135b能够降低FOXO1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),下调miR-135b能够提高FOXO1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 miR-135b在子宫内膜癌的发生发展中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。

    作者:乐珍;沈君菁;黄启涛;秦逸飞;李学农;刘国炳 刊期: 2016年第05期

  • 棕榈酸通过肝细胞氧化应激反应激活炎症小体

    目的:观察棕榈酸(PA)对肝细胞氧化应激反应及炎症小体产生的影响。方法(1)将正常小鼠肝细胞AML12分别用不同浓度的棕榈酸(0、0.15、0.25、0.4 mmol/L)处理;(2)将AML12细胞分为空白对照组(control组)、棕榈酸组(PA组)及棕榈酸+N-乙酰半胱氨酸组(PA+NAC组)并予以相应药物处理。24 h后检测细胞中脂肪沉积情况、细胞总ROS、线粒体来源ROS、NOX4蛋白表达、NOX4的定位以及炎症小体和IL-1β的表达。结果与control组相比,PA组细胞质中脂滴增加,细胞总ROS(12463.09±2.72 vs 6691.23±2.45,P=0.00)及线粒体来源ROS含量(64.98±0.94 vs 45.04±0.92,P=0.00)上升,NOX4、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达增加,IL-1β表达增加(1603.52±1.32 vs 2629.33±2.57,P=0.00),且发现线粒体和NOX4在细胞质中存在共定位,而抗氧化剂NAC除了能使PA诱导的ROS产生减少(7782.15±2.87 vs 5445.6±1.17,P=0.00),还可使NLRP3、ASC及caspase-1蛋白表达下降。结论棕榈酸刺激肝细胞后,可以导致脂滴在肝细胞质中大量沉积,亦可以通过线粒体和NOX4途径导致肝细胞氧化应激反应,并因此促进细胞炎症小体的激活和IL-1β的分泌。

    作者:许雯;郭予斌;李旭;何美蓉;刘思德 刊期: 2016年第05期

  • 广州市某医院周边鼠形动物肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌的耐药性调查

    目的:了解鼠形动物粪便标本中携带肺炎克雷伯菌与铜绿假单胞菌的耐药情况。方法2015年3月~10月,利用笼捕法于广州市某医院及其周边居民区捕获鼠形动物,分离其粪便中肺炎克雷伯菌与铜绿假单胞菌菌株,按照2014年CLSI标准进行药敏试验,利用SPSS 20.0软件分析数据。结果共捕获鼠形动物329只(包括205只臭鼩鼱、111只褐家鼠、5只黄胸鼠和8只小家鼠)。肺炎克雷伯菌与铜绿假单胞菌在鼠形动物体内检出率分别为78.4%和34.7%。臭鼩鼱携带的肺炎克雷伯菌对氨苄西林、头孢唑林、呋喃妥因、哌拉西林和头孢噻肟耐药性高(耐药率分别为100%、51.2%、44.2%、37.2%和23.3%);家鼠携带肺炎克雷伯菌耐药情况与鼩鼱相似。肺炎克雷伯菌的多重耐药率为40.9%,产ESBLs菌株检出率为10.7%。鼩鼱与家鼠携带的铜绿假单胞菌均对氨曲南耐药情况严重(耐药率为12.4%和16.0%),其次为广谱青霉素类和喹诺酮类抗生素,对头孢菌素、氨基糖苷类和碳青霉烯类抗生素耐药率低(耐药率均<5%)。结论鼠形动物携带的肺炎克雷伯菌与铜绿假单胞菌的耐药谱与目前临床分离株的耐药谱相似,提示这两种细菌可能在鼠形动物与人之间有传播作用,值得进一步研究。

    作者:钟雪珊;葛婧;陈少威;熊益权;郑雪燕;邱旻;霍舒婷;陈清 刊期: 2016年第05期

  • 茶多酚改善大鼠缺血/再灌注心脏功能和能量代谢并抑制体外培养心肌细胞的钙内流

    目的:探讨茶多酚对缺血/再灌注心脏损伤的保护作用,并研究心脏能量代谢和心肌细胞钙内流是否参与了心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。方法在大鼠Langendorff离体心脏上实施缺血/再灌注各30 min,用一导管经压力换能器连接放大器记录心功能指标;用31P NMR技术测定心脏的能量代谢,全细胞膜片钳技术记录心肌细胞钙内流。结果与对照组比较,茶多酚(2.5 mg/L)能使缺血/再灌注心脏的心室发展压、左心室压大收缩速率(+dp/dtmax)、左心室压大舒张速率(-dp/dtmax)和冠脉流量显著增加(P<0.05),并显著改善缺血/再灌注心脏的能量代谢,增加心肌ATP和PCr含量(P<0.05)。浓度为2.5和5.0 mg/L的茶多酚均能显著抑制培养心肌细胞的钙内流(P<0.01)。结论茶多酚对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用可能与其改善心肌能量代谢、抑制心肌细胞钙内流的作用有关。

    作者:董华进;李捷;詹皓;李泱;苏瑞斌 刊期: 2016年第05期

  • 2,3-丁二酮单肟改善大鼠离体心脏钙反常损伤的作用及机制

    目的:探讨挛缩抑制剂2,3-丁二酮单肟(2,3-butanedione monoxime, BDM)改善大鼠离体心脏钙反常损伤的作用及其机制。方法32只SD雄性大鼠随机分为4组:正常对照组、BDM对照组、钙反常组和BDM干预组。大鼠离体心脏行Langendorff灌流,记录左室内压(left ventricular pressure, LVP)、左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP),并计算左室发展压(left ventricular developed pressure, LVDP)评价心功能;测定复灌期冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量反映心肌损伤;2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价心肌梗死面积的变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数;Western blot法检测cleaved caspase-3和细胞色素c(cytochrome c)蛋白的表达。结果与正常对照组相比,BDM(20 mmol/L)对照组大鼠心脏左室功能、心肌梗死面积和凋亡指数及cleaved caspase-3和细胞色素c蛋白的表达,无显著性变化(P>0.05);钙反常组LVEDP显著抬升,LVDP为0,冠脉流出液中LDH含量明显增多(P<0.01),cleaved caspase-3和细胞色素c蛋白的表达以及凋亡指数明显增加(P<0.01),心脏组织几乎全部死亡(P<0.01);BDM(20 mmol/L)干预钙反常组大鼠心脏心梗面积显著减小(P<0.01),LVEDP降低、LVDP部分恢复(P<0.01),LDH释放减少(P<0.01),cleaved caspase-3和细胞色素c蛋白表达量以及凋亡指数明显降低(P<0.01)。结论 BDM明显抑制急性钙超载引起的挛缩和细胞凋亡,改善心功能,减轻大鼠离体心脏钙超载损伤,是一种潜在的缺血再灌注心肌保护药物。

    作者:孔令恒;顾晓明;苏兴利;孙娜;魏明;朱娟霞;常盼;周京军 刊期: 2016年第05期

  • 龙葵素通过诱导细胞周期G1/S阻滞抑制裸鼠前列腺癌细胞Du145移植瘤生长

    目的:探讨龙葵素对前列腺癌细胞Du145裸鼠移植瘤生长的影响及分子机制。方法采用高度恶性的转移前列腺癌细胞株Du145作为动物体内实验的模型,裸鼠皮下接种Du145细胞建立裸鼠皮下瘤模型。1周后将接种的裸鼠随机分为2组:龙葵素实验组和生理盐水空白对照组,每3 d分别向实体瘤中间部位注射0.2 mL龙葵素(50μg/mL)和生理盐水,观察裸鼠体内肿瘤生长,3周后颈椎脱臼处死裸鼠,剥离肿瘤组织,测量肿瘤的重量并根据肿瘤重量计算抑瘤率。实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测各组裸鼠瘤体细胞周期相关基因mRNA和蛋白表达。Tunel原位检测各组裸鼠瘤体组织凋亡情况。结果龙葵素治疗组裸鼠肿瘤成瘤率明显下降,裸鼠瘤体生长速度明显低于对照组(P<0.01)。龙葵素能抑制瘤体细胞CyclinD1、CyclinE1、CDK2、CDK4和CDK6基因mRNA和蛋白的表达,显著升高p21基因mRNA和蛋白的表达,龙葵素干预后裸鼠瘤体组织凋亡显著增加(P<0.01)。结论龙葵素可通过调控细胞周期G1/S关卡促进组织细胞凋亡抑制前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长。

    作者:钟伟枫;刘思平;潘斌;唐兆烽;钟锦光;周芳坚 刊期: 2016年第05期

  • Fluoro-Jade B染色与蛋白免疫荧光多标的染色方法

    目的:寻找一种Fluoro-Jade B(FJB)染色结合目的蛋白免疫荧光多标的合适方法。方法通过电凝法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),诱导皮层缺血半暗带神经元变性。实验分为FJB染色结合蛋白免疫荧光组以及目的蛋白免疫荧光结合FJB染色组。大鼠MCAO后5 d断头取脑,脑组织冰冻切片后,按上述两种染色顺序染色,观察两组实验双标的效果。结果 FJB染色结合目的蛋白免疫荧光组中,FJB和蛋白免疫荧光阳性细胞形态清楚,免疫双标效果良好;而蛋白免疫荧光结合FJB染色组,虽然FJB阳性细胞较为清晰,但与之免疫双标的蛋白免疫荧光阳性细胞不清楚,背景模糊,效果不佳。结论在两种免疫双标的方法中,先行FJB染色后再做目的蛋白免疫荧光染色,不会影响蛋白免疫荧光的染色效果,有利于后续实验的进行和观察。

    作者:左夏林;金吉子;刘丹丹;孙卫文;徐恩 刊期: 2016年第05期

  • DAPK过表达对HL-60细胞生物学功能及caspase-3表达的影响

    目的:探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)过表达对HL-60细胞生物学功能及对caspase-3表达的影响。方法采用RT-PCR技术检测白血病细胞株DAPK基因mRNA的表达。运用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体LipofectamineTM 2000介导转染HL-60细胞,研究其过表达对白血病细胞凋亡、细胞周期及分化的影响,并对caspase-3表达的影响。结果 DAPK基因在K562、Molt4、U937细胞表达阳性,而HL-60细胞则表达阴性。转染pReceiver-M29-DAPK后,应用流式细胞术和Hoechst33342染色可观察到转染后HL-60细胞出现凋亡,凋亡细胞百分率显著增高。PI单染和瑞氏染色法分析观察转染前后的HL-60细胞,各细胞周期及形态均无改变。转染后caspase-3的表达水平显著增高。结论 DAPK基因过表达的HL-60细胞凋亡增强,但对HL-60细胞周期和细胞分化无影响。Caspase-3可能参与了凋亡调控。

    作者:赵卫华;孟凡义;赖永榕;彭志刚;马劼 刊期: 2016年第05期

  • SUN5特异性抗体的制备及其应用

    目的:制备可检测全长SUN5的特异性抗体,并用该抗体检测SUN5蛋白在人类生殖细胞中的表达。方法通过生物信息学比较SUN5与新剪切体SUN5β之间的差异,在差异区域设计合成短肽,制备SUN5多克隆抗体并纯化。用新制备的SUN5抗体对Ntera-2细胞中的SUN5蛋白进行Western blotting和免疫荧光检测,验证抗体的特异性;后,用该抗体对人睾丸细胞涂片进行检测,观察SUN5蛋白在人生殖细胞中的表达。结果成功合成了SUN5短肽,而且用该短肽制备了SUN5多克隆抗体。Western blot结果显示,新制备的SUN5特异性抗体可检测到全长SUN5蛋白。免疫荧光实验结果表明,在Ntera-2细胞中SUN5蛋白定位在核膜和胞浆。通过对人睾丸细胞涂片的检测发现,SUN5在睾丸精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达。结论成功制备了SUN5特异性抗体,该特异性抗体的制备对于深入研究SUN5的功能具有重要的意义。此外,发现SUN5蛋白在精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达,提示SUN5蛋白可能在精子发生中发挥着重要的生理功能。

    作者:王静芳;黄利华;伍勇;杨林飞;任瑶;邢晓为 刊期: 2016年第05期

  • 不同糖代谢状态人群慢性肾脏病的患病率及危险因素

    目的:探讨不同糖代谢状态人群的慢性肾脏病(CKD)患病率及危险因素。方法本横断面研究纳入2015年1月~2015年10月于南方医科大学体检中心及内分泌科门诊就诊的患者共934例,其中糖尿病患者425例,糖尿病前期患者243例,血糖正常人群266例,收集其一般资料及实验室检查等数据。CKD诊断标准采用:估算的肾小球滤过率(eGFR)<60 mL/min/1.73 m2和/或尿微量白蛋白与尿肌酐比值(ACR)≥30 mg/g,建立多元Logistic回归模型探讨糖尿病前期与CKD的关系。结果血糖正常组、糖尿病前期组和糖尿病组的CKD患病率分别为10.2%,26.3%,32.5%。糖尿病前期患者的CKD患病率较血糖正常组升高(P<0.001,OR=3.17,95%CI 1.94-5.17),糖尿病患者的CKD患病率较血糖正常组升高(P<0.001,OR=4.27,95%CI 2.72-6.65),糖尿病前期患者与糖尿病患者相比,CKD患病率无明显差异(P=0.115,OR=1.35,95%CI 0.95-1.91)。Logistic回归模型分析显示,校正性别、年龄、血压、高血压病史、血尿酸等混杂因素后,糖尿病前期(OR=2.03,95%CI 1.02-4.03,P=0.044)、糖尿病(OR=2.22,95%CI 1.16-4.25,P=0.016)分别与CKD独立相关。结论糖尿病前期与CKD独立相关,因此提高糖尿病前期人群的检出率和管理水平、积极从糖尿病前期就采取干预措施防治CKD是十分有必要的。

    作者:肖倩蓉;范丽君;蒋薇;赵德福;万亨;潘道延;林旭;张彤;沈洁 刊期: 2016年第05期

  • 年轻多囊卵巢综合征患者发生子宫内膜样腺癌并透明细胞癌1例报告

    患者,26岁,未婚未育。主诉月经不调4年,阴道流血10 d,发现宫腔占位5 d。病理检查:中-低分化子宫内膜样腺癌。行腹腔镜下筋膜外全子宫及双附件切除术,术后诊断:子宫内膜样中低分化腺癌并透明细胞癌Ⅱ期,辅予以化疗,患者恢复可。年轻多囊卵巢综合症患者是发生子宫内膜癌的高危人群,而合并透明细胞癌者罕见,术前多科室综合评估、治疗方式的选择及预后分析是十分必要的,这也为今后的临床工作提供了经验。

    作者:牛静;刘楠;刘国炳 刊期: 2016年第05期

南方医科大学学报杂志

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