学术投稿

小鼠ZP2抗体的制备及其免疫活性研究

乜春城;姚冠颖;曹佐武

关键词:小鼠卵透明带mZP2, 抗血清, 免疫组化, 精卵结合
摘要:目的:制备抗小鼠ZP2(mZP2)抗体并研究抗血清的免疫活性。方法利用Rosetta宿主菌诱导表达mZP2重组蛋白,电泳分离重组ZP2蛋白,切胶制备免疫抗原;利用乳化抗原主动免疫新西兰雄兔制抗血清;通过ELISA测定抗体应答水平;以免疫组化测定抗血清特异性;通过精卵结合实验检测抗血清对小鼠卵子结合顶体反应后精子的影响。结果 ELISA结果说明用重组蛋白免疫新西兰雄兔诱发产生了抗血清。免疫组化实验证明抗血清与小鼠卵巢透明带发生了特异性反应,精卵结合实验显示抗ZP2抗体能抑制顶体反应后精子与卵子结合。结论重组mZP2蛋白诱发产生了抗ZP2抗体,抗体能抑制顶体反应后的精子与卵子结合。
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8表达的影响

    目的:探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8蛋白表达的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组)和硫化氢干预正常大鼠组(H2S组)。用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(40 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型;对照组每天腹腔注射生理盐水;STZ+H2S组与H2S组每天腹腔注射硫氢化钠(H2S供体)溶液(100μmol/kg),8周后处死大鼠,HE染色观察心肌纤维病理形态学变化,Western blot法检测Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠心肌组织胶原含量明显升高,心肌间质纤维化,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平显著升高(P<0.05);糖尿病大鼠经硫化氢干预后大部分心肌纤维呈平行排列,结构清晰,间质有少量疏松结缔组织,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平明显下调(P<0.05),而非糖尿病硫化氢干预组心肌纤维化程度及心肌组织Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平较对照组均无明显差异(P>0.05)。结论 H2S可改善糖尿病大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制MAPK1/3/MMP-8信号通路有关。

    作者:李芳;曾欧;罗健;吴志雄;肖婷;张晶晶;杨军 刊期: 2015年第04期

  • 成人特发性膜性肾病肾组织M型磷脂酶A2受体1抗原的检测

    目的:检测在成人特发性膜性肾病患者肾组织中M型磷脂酶A2受体1(PLA2R1)抗原的阳性率及其与特发性膜性肾病关系。方法选取经肾活检证实的108例肾小球疾病患者,其中包括41例特发性膜性肾病、2例乙型肝炎病毒相关性膜性肾病、8例V型狼疮肾炎、27例IgA肾病、19例微小病变性肾病、5例轻度系膜增生性肾小球肾炎和6例局灶节段性肾小球硬化。应用间接免疫荧光法检测患者肾组织中PLA2R1抗原。结果41例特发性膜性肾病患者中35例肾组织PLA2R1抗原阳性,阳性率为85.37%。其中PLA2R1沿着肾小球毛细血管襻呈细颗粒状沉积。在V型狼疮性肾炎、乙型肝炎病毒相关性膜性肾病及其他肾小球疾病肾组织中均未发现PLA2R1抗原沉积。特发性膜性肾病PLA2R1阳性患者与PLA2R1阴性患者相比较,年龄、血肌酐、血清白蛋白、24 h尿蛋白定量均无统计学差异(P>0.05)。结论在成人特发性膜性肾病患者肾组织中应用间接免疫荧光法证实PLA2R1抗原的阳性率为85.37%,PLA2R1阳性与阴性患者在临床表现上无统计学差异。

    作者:祝爽爽;周树录;周朝敏;李永强;邹和群 刊期: 2015年第04期

  • 硫利达嗪诱导SW480细胞凋亡的机制

    目的:研究硫利达嗪对结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响。方法应用5~30μmol/L硫利达嗪处理SW480细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期;RT-qPCR分析PDCD4、c-MYC、BCL2、CCND1、CASPASE3、PARP1、CDK4、EIF4A基因表达水平;Western blotting检测AKT、p-AKT、PDCD4蛋白表达水平。结果 MTT结果表明硫利达嗪抑制SW480细胞的增殖,硫利达嗪处理细胞后出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;流式检测表明硫利达嗪诱导G0/G1期阻滞,细胞凋亡增加。RT-PCR结果表明硫利达嗪处理细胞后PDCD4表达上调,CCND1、CDK4、c-MYC、BCL2、CASPASE3、PARP1和EIF4A表达下调。免疫印迹分析结果显示PDCD4蛋白表达上调,p-AKT蛋白表达下调。结论硫利达嗪能够抑制人结肠癌SW480细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路导致PDCD4表达水平升高有关。

    作者:刘金坤;郝亚娟;黄嘉维;李欣;蔡红兵;彭康 刊期: 2015年第04期

  • 基于全变分正则化去卷积的PET部分容积校正

    目的:提出全变分正则化去卷积方法并应用于PET图像部分容积校正。方法将全变分(toal variation, TV)引入到图像退化模型中,提出基于全变分正则化的Van Cittert(VC)和Richardson-Lucy(RL)去卷积方法。结果提出的方法分别应用于NCAT仿真数据、NEMA NU4-2008 IQ物理体模和肿瘤小鼠数据(均采用西门子小动物Inveon PET扫描得到)。相比于传统VC和RL去卷积方法,本文提出方法在仿真实验中校正图像有明显的去噪和保持边缘效果,同时在小鼠实验中肿瘤区域的活度值增加率为(10±1.8)%时,图像标准方差(standard deviation, SD)增加率分别从49.98%下降到14.26%和42.76%下降到4.70%。结论本方法能够在校正PET部分容积效应的同时有效抑制噪声增加,可望更为准确地诊断肿瘤。

    作者:胡德斌;路利军;高园园;张后金;韩彦江;辜承慰;马建华 刊期: 2015年第04期

  • 人可溶性DC-SIGN抑制未成熟树突状细胞吞噬金黄色葡萄球菌

    目的:研究可溶性DC-SIGN(sDC-SIGN)对未成熟树突状细胞(imDC)吞噬金黄色葡萄球菌(金葡菌)的影响及机制。方法采用流式细胞术分析sDC-SIGN对imDC吞噬金葡菌的影响;ELISA检测sDC-SIGN分别与金葡菌、脂磷壁酸、脂多糖的结合;观察配体甘露聚糖、脂磷壁酸以及抗人DC-SIGN抗体1C6和4H3对sDC-SIGN与金葡菌结合的影响。结果 sDC-SIGN能抑制imDC对金葡菌的吞噬。sDC-SIGN与金葡菌结合,且呈Ca2+依赖性;以浓度依赖方式与脂磷壁酸结合,但不与脂多糖结合;sDC-SIGN与金葡菌的结合可被甘露聚糖、金葡菌磷壁酸和1C6、4H3阻断。结论 sDC-SIGN通过优先与金葡菌表面的一些糖成分结合而影响imDC膜表面DC-SIGN与金葡菌的结合,从而抑制了imDC对金葡菌的吞噬。

    作者:李慧杰;许天昱;周嘉;朱玲燕;张丽芸;卢晓;陈政良 刊期: 2015年第04期

  • 单侧横突拉簧加压建立兔脊柱侧凸模型

    目的:利用单侧横突拉簧加压法建立兔脊柱侧凸模型。方法两月龄新西兰白兔10只,手术予L2、L5右侧横突挂载拉簧。术前、术后1、4及8周摄X线正侧位片,测量Cobb角及拉簧长度,术后8周摄片后,随机将10只新西兰白兔分为两组:取拉簧(Spring removal, SR)组和保留拉簧组(Spring keeping, SK)各5只,取出SR组兔子体内拉簧,于9周和12周摄X线正侧位片,测量Cobb角及后凸角。12周后取所有兔顶椎及其上线椎体行Micro-CT扫描,记录顶椎上下终板的骨体积分数(BV/TV)。用方差分析或非参数检验及Student t检验对实验结果进行统计学分析。结果至实验结束时,兔全部存活,Cobb角均大于10°。术后1、4、8周不同时间点Cobb角及后凸角都大于术前(P<0.05)。术后8周,SR组与SK组的Cobb角、后凸角以及拉簧长度均无明显差异(P>0.05),取出拉簧后至12周,SK组的Cobb角及后凸角都较SR组要大(P<0.05),期间SR组的Cobb角及后凸角都逐渐减小。Micro-CT结果示凹侧终板骨体积分数要大于凸侧。整个实验过程中,拉簧形变量(ΔL)均无统计学差异(P>0.05)。结论单侧横突拉簧加压模型是一种可重复率高、简单易操作且实验周期短的动物脊柱侧凸模型。

    作者:李伦超;刘湘;朱青安;黄志平;任海龙;郑帅;李广军;杨德鸿;王吉兴 刊期: 2015年第04期

  • 冷热循环老化对不同光固化复合树脂表面微结构的影响

    目的:比较几种树脂冷热循环老化后表面形态的改变。方法1种纳米树脂(Z350)和4种微混合填料树脂(P60、Z250、Spectrum、AP-X),以侧壁至中心分层填压固化法制备样块,研磨和抛光侧壁,经水浸泡及5/55℃冷热循环40000次后,分析抛光侧壁表面粗糙值(Ra)的变化,观察扫描电镜下的微结构变化。结果经冷热循环后,抛光面Ra值呈下降趋势。其中Spectrum由0.164±0.024μm降至0.140±0.017μm(P<0.001),Z250由0.169±0.035μm降至0.144±0.033μm(P<0.001),Ra值接近抛光性能较好的P60(0.121±0.028μm)。扫描电镜下,5种树脂划痕与凹陷变浅,但Z350样块表面出现裂纹。结论水浸泡及冷热循环可能对复合树脂产生抛光效应,但也可能导致纳米树脂表面产生裂纹。

    作者:吕达;刘开蕾;姚瑶;张伟生;廖楚宏;蒋红 刊期: 2015年第04期

  • 孕期酒精暴露对新生大鼠延髓基本节律性呼吸放电的作用

    目的:探讨孕期酒精暴露对子代新生大鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电(rhythmic respiratory discharge activity, RRDA)的作用。方法制作包含面神经后核内侧区(the medial region of the nucleus retrofacialis, mNRF)并保留舌下神经根的新生大鼠离体延髓脑片标本,给予灌流改良的Kreb's液(modified Kreb's solution, MKS),使用吸附电极记录延髓脑片腹侧面舌下神经根RRDA,分析RRDA的变化。实验分为5组:对照组、4%酒精暴露组、6%酒精暴露组、8%酒精暴露组和10%酒精暴露组,研究孕期不同浓度酒精暴露对RRDA的作用。结果对照组、4%酒精暴露组、6%酒精暴露组、8%酒精暴露组各组组内RRDA在50 min内吸气时程(TI)、呼吸频率(RF)、放电积分幅度(IA)无统计学差异,10%酒精暴露组RRDA节律不规整;与对照组相比,4%~10%酒精暴露组的RRDA随酒精浓度增加逐渐降低,TI缩短、RF下降、IA减弱。结论孕期酒精暴露抑制子代新生大鼠延髓脑片舌下神经根RRDA,这可能是孕期酒精暴露抑制子代呼吸功能的基础。

    作者:姬明丽;吴云红;千智斌 刊期: 2015年第04期

  • 预防性抗生素在导管室进行完全经皮穿刺主动脉覆膜支架植入术的应用

    目的:研究预防性抗生素的应用是否能减少主动脉腔内修复术后感染及腔内修复术后综合征发生。方法入选从2011年9月到2012年10月接受主动脉腔内修复术并且住院资料完整患者。根据术前是否使用预防性抗生素分为预防性抗生素组(PA group)和非预防性抗生素组(non-PA group)。感染的判定由两位卫生副高级职称以上医生根据2001年中国人民共和国卫生部《医院感染诊断标准》进行,腔内修复术后综合征的诊断标准主要为排除感染的术后体温大于37.5℃。结果共入组95例患者,包括35例PA组和60例non-PA组。non-PA组一例发生感染相关的死亡,PA组一例患者出现支架近端逆撕形成Stanford A型夹层并死亡(1.67%vs 2.85%,P=1.00)。两组间术后感染发生率(5%vs 2.86%,P=1.000),住院时间(9.30±7.21 vs 10.06±5.69,P=0.094),感染相关的死亡率(1.67%vs 0%,P=1.00),术后发热发生率(70.90%vs 91.43%,P=0.20)。根据重复测量的方差分析,手术后不同时间点体温差异有统计学意义(F=19.831,P<0.001),而是否预防性应用抗生素组间差异不具有统计意义(F=0.978,P=0.326)。结论目前的数据不能证明预防性应用抗生素可以减少术后感染和腔内修复术后综合征发生率。但未使用预防性性抗生素的患者发生的术后感染可能预后更差。

    作者:谢年谨;罗淞元;薛凌;李威;谷梦楠;刘媛;黄文晖;范瑞新;陈纪言;罗建方;LUO Jianfang 刊期: 2015年第04期

  • 氯高铁血红素对妊娠期高血压大鼠的治疗及机制

    目的:初步探讨血红素氧合酶诱导剂氯高铁血红素(Hemin)对妊娠期高血压(HDCP)大鼠的治疗作用及可能调控机制。方法将18只受孕SD大鼠于妊娠第12天随机分为3组(6只/组):HDCP模型组、Hemin干预组、正常妊娠组。HDCP模型组和Hemin干预组于妊娠第14天起连续7 d予亚硝基左旋精氨酸甲酯(80 mg/kg)灌胃建立HDCP模型,正常妊娠组予等量生理盐水灌胃处理,Hemin干预组于妊娠第16天起每日下午腹腔注射Hemin(30 mg/kg)。用分光光度法测定各组胎盘组织血红素氧合酶(HO)的活性和碳氧血红蛋白(COHb)水平,ELSIA测定各组胎盘组织匀浆上清液可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFIt-1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果妊娠第20天,HDCP模型组孕鼠血压和24 h尿蛋白明显高于正常妊娠组和Hemin干预组(P<0.05),而HO活性和COHb含量明显低于正常妊娠组和Hemin干预组(P<0.05),Hemin干预组血压及24 h尿蛋白高于正常组(P<0.05),而HO活性和COHb含量较正常组低(P<0.05);HDCP模型组孕鼠胎盘组织sFIt-1水平明显高于正常妊娠组和Hemin干预组(P<0.05),而胎盘组织中VEGF水平明显低于正常妊娠组和Hemin干预组(P<0.05),Hemin干预组孕鼠胎盘组织sFIt-1水平高于正常组水平(P<0.05),而VEGF水平低于正常组水平(P<0.05)。结论 Hemin能够降低妊娠期高血压孕鼠的血压及尿蛋白,其可能机制是通过上调胎盘组织中HO的活性,增加代谢产物CO,降低胎盘组织中sFIt-1,并升高VEGF水平来发挥调控作用的。

    作者:龙买连;夏爱斌;程春霞;李瑞珍 刊期: 2015年第04期

  • 大数据:基于高通量测序的抗体组学发展与应用

    抗体是获得性免疫系统的主要组分,在防御性及致病性免疫反应中起着关键作用。对抗体发生、发展和成熟过程的解析,对研究传染性疾病致病机制、疫苗设计、自免疫疾病发生及进展等有着重要意义。随着高通量测序技术的发展和成熟,抗体研究进入了组学时代。通过对艾滋病患者外周血抗体谱的高通量测序及后续大数据分析挖掘已经在HIV-1广谱抗体研究中取得了丰硕的成果。随着测序技术的进一步发展、测序长度的增加及精度的提高、实验体系的优化、分析流程标准的建立及单细胞抗体测序技术的应用,抗体组学研究前景广阔。本文就抗体组学的技术、发展、应用及问题作简要综述。

    作者:张在宝;管茜;张镇海 刊期: 2015年第04期

  • 冠心病患者血清Ⅰ型胶原羧基末端肽的表达变化及临床意义

    目的:检测冠心病患者血清中Ⅰ型胶原羧基末端肽(ICTP)的水平变化,探讨其与MMP-2、MMP-9相关性,及在冠心病中的临床意义。方法纳入2013年10月~2014年03月在我院门诊和住院的冠心病患者103例,其中稳定型心绞痛(SAP)患者39例,不稳定型心绞痛(UA)患者39例,急性心梗(AMI)患者25例,选取38名非冠心病患者为对照组(Control, C)。留取研究对象5 ml静脉血,用夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测静脉血清(基质金属蛋白-2)、MMP-9、ICTP水平,组间比较采用单因素方差分析。结果 SAP与C组比较,血清MMP-2,MMP-9,ICTP水平稍增高,P>0.05。UA组与SAP组、C组比较血清MMP-2、MMP-9、ICTP水平升高,P<0.05。AMI组与SAP组及C组比较,血清MMP-2、MMP-9、ICTP升高,P<0.05。AMI组与UA组比较,血清MMP-2、MMP-9、ICTP均无显著差异,P>0.05。ICTP与MMP-2、MMP-9都具有正相关性(P<0.05);与斑块纤维组成比例呈负相关,与脂质比例呈正相关(P<0.05)。结论冠心病患者血清ICTP水平升高可提示粥样斑块的不稳定性,与MMP-2水平相关,可作为无创性的ACS的预测指标。

    作者:邓意;陈立珩;王先宝;宋旭东;凌苑娜;陈爱华;杨平珍;郭敬宾;阙冬冬;陈贵明 刊期: 2015年第04期

  • 偏侧咀嚼干预治疗改善咬肌活动不对称性的肌电分析

    目的:运用咬肌肌电图分析偏侧咀嚼干预的效果。方法43例患者(男19人,女24人,平均年龄20.0±0.5岁)根据有无诱因和是否干预分为4组:去诱因不干预组(A0)、去诱因干预组(A1)、无诱因不干预组(B0)和无诱因干预组(B1)。用肌电图仪分别记录各组前后在下颌姿势位(MPP)、牙尖交错位(ICP)大紧咬运动和咀嚼运动时的咬肌肌电图,计算咬肌的活动不对称指数(ASMM),分析比较各组前后咬肌肌电活动的变化。结果(1)A0组在MPP、ICP大紧咬运动和咀嚼运动中ASMM去诱因前后差异均无统计学意义;(2)A1组干预后在MPP、ICP大紧咬运动和咀嚼运动中ASMM显著低于干预前;(3)B0组在咀嚼运动中实验前后差异有统计学意义;(4)B1组干预后在MPP、ICP大紧咬运动和咀嚼运动中ASMM较干预前显著降低。结论偏侧咀嚼无论有无诱因均应干预治疗,有诱因则在诱因去除后进行。

    作者:王云;滕琛;汪萌芽 刊期: 2015年第04期

  • 围手术期免疫调节治疗对直肠癌术后复发的影响

    目的:本研究旨在探讨免疫调节治疗对直肠癌患者术后复发的影响。方法本研究前瞻性纳入2010年1月~2011年1月期间,在四川大学华西医院胃肠外科中心结直肠外科专业组接受直肠癌根治术并符合本研究条件直肠癌患者共150例,终完成本项研究病例数为150例,分成3组A(塞来西布组)、B(甲强龙组)、C(对照组)。比较3组术后复发情况。结果 A、B、C 3组术后3 d CRP差异有统计学意义(P=0.022),均较术后1 d明显下降,且B组下降明显。同时,A、B、C 3组术后3 d IL-6差异有统计学意义(P=0.046),均较术后1 d明显下降,且B组下降明显。3组直肠癌中COX-2表达差异有统计学意义(P=0.017),且A组肿瘤组织COX-2表达受抑制明显。3组术后复发率差异无统计学意义(P=0.549)。结论 COX-2选择性抑制剂塞来昔布虽然在抑制直肠癌患者术后炎症反应方面弱于糖皮质激素甲强龙,但是,其在抑制直肠癌中COX-2表达方面更优于甲强龙,同时,COX-2选择性抑制剂塞来昔布并没有明显降低直肠癌术后复发率。

    作者:甘志明;汪晓东;吕东昊;刘丹;李立 刊期: 2015年第04期

  • 小鼠ZP2抗体的制备及其免疫活性研究

    目的:制备抗小鼠ZP2(mZP2)抗体并研究抗血清的免疫活性。方法利用Rosetta宿主菌诱导表达mZP2重组蛋白,电泳分离重组ZP2蛋白,切胶制备免疫抗原;利用乳化抗原主动免疫新西兰雄兔制抗血清;通过ELISA测定抗体应答水平;以免疫组化测定抗血清特异性;通过精卵结合实验检测抗血清对小鼠卵子结合顶体反应后精子的影响。结果 ELISA结果说明用重组蛋白免疫新西兰雄兔诱发产生了抗血清。免疫组化实验证明抗血清与小鼠卵巢透明带发生了特异性反应,精卵结合实验显示抗ZP2抗体能抑制顶体反应后精子与卵子结合。结论重组mZP2蛋白诱发产生了抗ZP2抗体,抗体能抑制顶体反应后的精子与卵子结合。

    作者:乜春城;姚冠颖;曹佐武 刊期: 2015年第04期

  • 儿童恶性血液病并发毛细血管渗漏综合征的危险因素分析

    目的:探讨儿童恶性血液病并发毛细血管渗漏综合征(CLS)发生的危险因素,提高对儿童恶性血液病并发毛细血管渗漏综合征的临床认识。方法采用30例儿童恶性血液病发生CLS患儿的临床资料,对CLS发生的高危因素进行多元logistic回归分析。结果在0.05检验水准下,有无低氧血症,有无败血症与应变量之间的联系有统计学意义,CLS前白细胞数目,有无严重骨髓抑制在检验水准附近。结论毛细血管渗漏综合征为儿童恶性血液病治疗过程中的少见急重症,低氧血症和败血症是儿童恶性血液病并发CLS的危险因素,儿内科医师应引起重视。

    作者:任颖;刘述;杨月明;刘洪军 刊期: 2015年第04期

  • 氧等离子处理PLLA/BG引导骨再生膜生物相容性

    目的:制备一种新型的聚乳酸-生物玻璃(Poly-L-Lactic Acid/Bioglass, PLLA/BG)亲水性纳米纤维膜,探讨其作为引导骨再生屏障膜的生物相容性。方法采用氧等离子处理PLLA/BG纳米纤维引导骨再生膜,改善其亲水性能,将人成骨样细胞(MG63)接种于膜表面,通过Hoechst荧光染色观察其在膜表面的生长,计算细胞粘附率及增殖率,检测MG63细胞碱性磷酸酶活性,后通过扫描电镜观察细胞在膜上生长形态及钙结节形成,分析该膜生物相容性及促成骨性能。结果氧等离子处理的PLLA/BG膜在1、3、6 h的细胞粘附率分别为(30.570±0.96)%、(47.27±0.78)%、(66.78±0.69)%,细胞黏附率高于两组膜(P<0.01);3组膜的细胞增殖率均随时间延长提高,在不同时间点氧等离子处理的PLLA/BG膜的细胞增殖率高于另外两组(P<0.01);Hoechst荧光染色中可观察到氧等离子处理的PLLA/BG膜表面早期有更多细胞黏附;碱性磷酸酶活性测定实验结果显示加入BG的复合膜可在早期促进成骨细胞分泌基质,差异具有统计学意义(P<0.01);扫描电镜下可观察到MG-63细胞呈梭形,黏附于膜表面,与复合膜相互交联,形成钙结节。结论经氧等离子处理的PLLA/BG复合膜在早期可促进细胞黏附、增殖及促进成骨细胞分泌基质,具有良好的生物相容性和促成骨性能。

    作者:方炜;曾曙光;高文峰 刊期: 2015年第04期

  • 甲状旁腺素非PLC依赖PKC通路激活增强成骨细胞CITED1表达

    目的:通过相关信号通路屏蔽和基因表达分析,探讨甲状旁腺素(PTH)非PLC依赖PKC信号转导途径(PTH/nonPLC/PKC)的功能,分析其对骨代谢的影响。方法取2~3 d C57BL乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,取贴壁生长的第1代细胞,随机分为4组:100 nmol/L[Gly1, Arg19]hPTH(1-28)(简称GR(1-28))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)(简称GR(1-34))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L PTH(1-34)及空白对照组加入等体积的0.1%三氟乙酸(trifluoroacetic acid, TFA),作用4 h后,提取各组总RNA,行小鼠全基因组表达谱芯片分析,筛选出可能与nonPLC/PKC信号转导通路相关的差异表达基因,并进行相关通路分析。RT-PCR筛选及验证上述差异表达基因。培养MC3T3-E1细胞,分为4组:GR(1-28)+RP-cAMP;GR(1-34)+RP-cAMP;GR(1-34)+RP-cAMP+100 nmol/L Go6983及空白对照组,RT-PCR法验证比较GR(1-28)和GR(1-34)引起的基因表达变化情况。结果倒置相差显微镜观察示,培养7 d见细胞排列紧密,为三角形或多边形,呈铺路石样;细胞培养14 d ALP染色可见胞质中出现蓝染颗粒,成骨诱导培养28 d茜素红染色可见红色矿化结节形成。基因芯片分析结果中筛选出与PTH的nonPLC/PKC信号转导通路相关性大的56个基因,进行RT-PCR验证后发现CITED1的表达量在GR(1-34)+RP-cAMP组显著高于GR(1-28)+RP-cAMP组及空白对照组,但小于PTH(1-34)组(P<0.05)。MC3T3-E1细胞RT-PCR验证的结果与其一致,在阻断cAMP/PKA信号通路后,仅CITED1基因表达量在GR(1-28)和GR(1-34)刺激时存在显著不同,且加入PKC抑制剂(Go6983)后,表达差异消失。结论 PTH的nonPLC/PKC信号转导通路的激活能够使得成骨细胞CITED1的表达量明显升高,介导PTH对成骨代谢的作用。该途径不依赖PLC和PKA信号的激活。

    作者:郝松;孟越;李威;胡少宇;杨德鸿 刊期: 2015年第04期

  • 肝硬化患者左心功能变化与终末期肝病模型评分的相关性研究

    目的:研究肝硬化患者左心结构和功能的变化与终末期肝病模型(MELD)评分的关系。方法选择2012年6月~2014年6月期间89例肝硬化患者,根据MELD评分将其分为MELD≤9分、MELD10-19分和MELD≥20分3组,选择30例健康体检者为对照组。超声心动图测量静息状态下左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左房内径(LAD)、左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、二尖瓣血流速度、E峰减速时间(DT)等指标,并评估其与MELD评分的关系。结果与对照组比较,肝硬化组LVESD、LVEDD、IVST、LAD增大,CO增加、VE/VA比值降低、DT延长,差异均具有统计学意义(P值<0.05或0.01)。随MELD评分的增加,LVESD、LVEDD、IVST、LAD逐渐增大,DT延长,差异均具有统计学意义(P值<0.05或0.01);VE/VA比值在MELD10-19分组高于MELD≤9分组,在MELD≥20分组明显下降。分别有55%和44%患者出现左房增大和VE/VA≤1,MELD评分≥20分组中左房增大和VE/VA≤1患者的比例明显高于其他两组(P值均<0.05)。LAD、LVEDD、DT与MELD评分呈正相关关系,r值分别为0.208、0.319和0.197,P值<0.05或0.01。结论肝硬化患者可合并心脏受累,主要表现为左心舒张功能障碍,而且与肝病严重程度呈正相关。

    作者:李小鹏;余珊珊;李路;韩东刚;戴社教;高亚 刊期: 2015年第04期

  • 雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾组织缺氧诱导因子-1α及内皮素-1表达的影响

    目的:研究雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及内皮素-1(ET-1)表达的影响,探讨雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及可能机制。方法采用链脲佐菌素(55 mg/kg体质量)诱导致糖尿病大鼠,动物分为正常对照组,糖尿病对照组,雷公藤多苷低、高剂量治疗组(8、16 mg/kg)及阳性对照组(厄贝沙坦50 mg/kg),灌胃给药,每日1次,8周末检测大鼠空腹血糖(BG),血肌酐(Scr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(24 h Upro);HE染色光镜观察肾组织形态学的改变;病理图像分析系统分析平均肾小球面积(MGA)及平均肾小球体积(MGV);免疫组织化学及Western blot检测肾组织HIF-1α及ET-1蛋白表达;实时荧光定量PCR检测肾组织HIF-1α及ET-1mRNA表达。结果糖尿病大鼠肾组织HIF-1α及ET-1表达增高。与糖尿病对照组比较,各治疗组大鼠Scr、BUN、24 h Upro、肾重指数(KW/BW)、MGA、MGV显著降低,肾组织病理形态学明显改善;HIF-1α、ET-1mRNA及蛋白表达显著减少;雷公藤多苷高剂量组各指标改善较显著。相关性分析显示ET-1表达与HIF-1α表达呈正显著相关,HIF-1α及ET-1mRNA及蛋白表达与肾重指数(KW/BW)、24 h Upro、MGA、MGV呈显著正相关。结论糖尿病大鼠肾组织HIF-1α及ET-1表达增加,雷公藤多苷可通过抑制HIF-1α及ET-1的表达,改善糖尿病大鼠肾脏损害,延缓糖尿病肾病的发生发展。

    作者:陈卫东;常保超;张燕;杨萍;刘磊 刊期: 2015年第04期

南方医科大学学报杂志

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