学术投稿

基于RAM-HPLC在线富集技术检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米

张晓惠;王荣;谢华;尹强;李文斌;贾正平;张娟红

关键词:限进性填料, 高效液相色谱, 呋塞米, 在线直接进样, 血浆, 尿液
摘要:目的 通过柱切换技术建立限进性填料柱-高效液相色谱法,实现在线直接进样并检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米.方法 以自制限进填料柱为预处理柱,LunaC18柱为分析柱,预处理流动相为水-甲醇(95:5,V/V),含体积百分数为0.1%的甲酸,流速为1 ml/min;分析流动相为血浆:甲醇-水(65:35,V/V),尿液:甲醇-水(55:45,V/V),均含体积百分数为0.1%的甲酸,流速均为1 ml/min,柱温为25℃;检测波长为274nm.结果 呋塞米血浆样品在进样100 μ1时,富集效果良好,在0.1~3.2 μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.9995),尿液进样20 μl,呋塞米浓度在0.5~32 μg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.9991),血样及尿样的三个加标水平下的平均回收率分别为101.82%~113.36%,98.75%~112.27%,日内日间精密度均小于5%.结论 药代动力学参数AUC0→24为6.265 μg/(ml·h),t1/2为2.447h,Cmax为1.414μg/ml;24 h内呋塞米的累积排泄率为32.50%~39.08%.本方法简单快速,适用于血浆及尿液中呋塞米的直接进样检测.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • Exendin-4通过PI3K/Akt信号通路促进脂肪干细胞旁分泌细胞因子

    目的 探讨Exendin-4促进脂肪来源干细胞(ADSCs)旁分泌细胞因子的机制.方法 混合酶消化法提取和培养SD大鼠腹股沟处的脂肪干细胞,使用流式细胞学检测有或无Exendin-4处理后的第4代ADSCs表面标记物,MTT法绘制0、1、5、10、20 nm/L不同浓度Exendin-4下的ADSCs生长曲线;qPCR法检测不同浓度Exendin-4处理12h后bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的表达变化.Western blotting和qPCR检测Exendin-4对于Akt通路的作用.同时添加通路阻断剂LY-294002,使用ELISA检测Akt通路阻断后Exendin-4对于旁分泌蛋白的影响.结果 分离培养的ADSCs高表达CD29、CD90、CD105,低表达CD34、CD45,并且能够多向分化为脂肪细胞、骨细胞,符合间充质干细胞的表型特点.Exendin-4处理后,不仅不会改变ADSCs的表型,还能以浓度依赖方式促进ADSCs在体外增殖(P<0.05).不同浓度Exendin-4处理ADSCs 12 h后,旁分泌蛋白bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的表达量逐渐提高,其中10 nm/LEx-4处理12 h可能为佳处理浓度(P<0.05).Western blotting和qPCR提示Exendin-4能够显著提高胞内Akt的磷酸化水平,而给予LY-294002后,磷酸化Akt表达减弱,同时ADSCs培养液上清中bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明显降低(P<0.05).结论 短暂Exendin-4处理不会改变ADSCs表型,但能加强细胞的增殖能力,且以剂量依赖方式促进干细胞旁分泌细胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1.10 nm/L可能为Exendin-4适促旁分泌浓度,其扩大干细胞旁分泌的机制部分是通过激活PI3K/Akt信号通路来介导.

    作者:周浩;杨俊杰;王晶;胡舜英;陈光辉;陈韵岱 刊期: 2014年第10期

  • 血β-羟丁酸诊断2型糖尿病酮症酸中毒阈值的建立

    目的 探索建立血β-羟丁酸(βOHB)诊断2型糖尿病酮症酸中毒(DKA)的阈值及βOHB水平与DKA严重程度的关系.方法 对急症科收治的2型糖尿病患者的血βOHB与[HCO3-]进行相关分析,同时利用回归方程计算出[HCO3-]为18.0、15.0、10.0 mmol/L时的βOHB值,并以与[HCO3-]为18.0 mmol/L对应的βOHB值作为DKA诊断的阈值,并结合临床评估其诊断性能.结果 血βOHB水平与[HCO3*]浓度具有良好的相关性,R2=0.7023,P<0.001.[HCO3-]为18.0、15.0和10.0 mmol/L时的βOHB值分别为3.0、4.70和7.5 mmol/L,并与DKA病情严重程度相符;结合血糖浓度≥13.9 mmol/L,当血βOHB≥3.0 mmol/L时,诊断DKA的灵敏度为99.0%,特异性为86.0%,总有效性为92.81%.结论 血βOHB≥3.0 mmol/L可作为DKA诊断的阈值,并且βOHB可作为DKA病情严重程度的判断指标.

    作者:柯培锋;周海涛;万泽民;吴晓宾;林海标;黄宪章 刊期: 2014年第10期

  • 色霉素A2诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

    目的 研究色霉素A2对人肝癌细胞HepG2的凋亡诱导作用,以期为肝癌的治疗提供新的治疗药物.方法 MTT法检测色霉素A2作用HepG2、MCF-7、A549、7901细胞后对细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜观察HepG2细胞在色霉素A2(0、60 nmol/L)的作用下,细胞染色质的变化;色霉素A2(0、20、40、60 nmol/L)作用HepG2细胞24 h,显微镜观察细胞形态变化,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,活性氧水平及膜电位水平的变化.结果 色霉素A2对人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制效果,且呈时间,剂量依赖关系;药物作用细胞后,细胞染色质凝聚,染色加深;细胞形态方面发生细胞皱缩,并且细胞数目变少;流式细胞仪测定结果显示,细胞凋亡率随药物浓度升高而增大,并且细胞内活性氧水平上升,线粒体膜电位水平降低.结论 色霉素A2诱导人肝癌HepG2细胞产生凋亡,其诱导HepG2细胞凋亡的机制可能与活性氧的升高及线粒体膜损伤有关.

    作者:王琰;陆园园;鲍维维;谢美娟;杜振宁 刊期: 2014年第10期

  • 蛛网膜下腔出血模型大鼠基底动脉蛋白酶激活受体-1的表达

    目的 探讨蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠基底动脉PAR1表达与脑血管痉挛(CVS)之间的关系.方法 7周龄清洁级SD大鼠24只,随机数字表法分为正常组、SAH3d组、SAH5d组、SAH 7d组,采取二次枕大池注血法建立大鼠SAH模型,观察动物行为学改变,SAH模型大鼠按照分组于术后3、5、7d分别灌杀动物,显微镜下观察基底动脉组织学形态,并以Image-ProPlus6.0图像分析软件测量基底动脉管腔横截面积,免疫组化检测基底动脉标本PAR1表达.结果 SAH制模术后参照Endo4分制方法行神经功能评分SAH3d组中2分2只(33.3%),3分4只(66.7%);SAH5d组中1分3只(50%),2分3只(50%);SAH7d组中1分4只(66.7%),2分2只(33.3%);正常组均为1分.CVS观察:正常组无痉挛,SAH3d组出现基底动脉痉挛,SAH5d组基底动脉稍舒张,SAH7d组痉挛程度较3d组加重,统计分析显示四组之间的差异有统计学意义(P<0.05),组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05).PAR1免疫组织化学结果分析:正常组未见明显表达,SAH模型制作后后3、5、7d组基底动脉PAR1有阳性表达.统计分析显示四组间PAR1平均光密度差异有统计学意义(P<0.01),组间两两比较显示正常组与SAH3d组、正常组与SAH 5 d组、正常组与SAH 7 d组、SAH3d组与SAH5 d组、SAH3d组与SAH7d组差异具有统计学意义(P<0.01),SAH5d组与SAH 7 d组相比差异具无统计学意义(P>0.05).Pearson相关分析显示PAR1平均光密度与SAH后基底动脉横截面积之间存在负相关(r为-0.779,P<0.01).结论 本实验中SAH大鼠模型基底动脉PAR1表达上调,并与CVS严重程度呈负相关关系,凝血酶受体PAR1在CVS发生发展过程中表达上调,提示凝血酶参与了SAH后CVS的病理过程.

    作者:李钢;王青松;林婷婷 刊期: 2014年第10期

  • 鳖甲煎丸对肝癌细胞中Wnt信号分子β-catenin、GSK-3β及靶基因CD44v6、VEGF的影响

    目的 通过研究鳖甲煎丸对肝癌细胞HepG2中Wnt信号通路的信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移侵袭的分子机制.方法 使用含鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞HepG2,48 h后采用Western blotting技术检测Wnt/β-catenin通路信号分子β-catenin、GSK-3β和磷酸化GSK-3β表达水平,免疫组化技术检测靶基因CD44v6、VEGF的表达情况.结果 含鳖甲煎丸药物血清可以降低肝癌细胞HepG2中β-catenin表达水平,下调磷酸化GSK-3β表达水平,明显抑制CD44v6、VEGF的表达.结论 鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移侵袭的药理作用可能与其下调肝癌细胞HepG2中Wnt/β-catenin信号通路的信号分子β-catenin及磷酸化GSK-3β的表达水平并有效降低靶基因CD44v6、VEGF的表达水平具有相关性,这可能是鳖甲煎丸抑制肝癌细胞HepG2的生长、黏附及转移的重要分子机制之一.

    作者:孙海涛;贺松其;文彬;贾文燕;樊尔艳;郑艳 刊期: 2014年第10期

  • 急性肺损伤患者诱导性多能干细胞系的建立

    目的 利用急性肺损伤患者皮肤成纤维细胞构建诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)系.方法 采用慢病毒介导逆转录的方法,将含有Oct4、Sox2、Klf4和Nanog四个因子的混合慢病毒转染人皮肤成纤维细胞,诱导出胚胎干细胞样克隆,根据人胚胎干细胞的特性,利用AP染色、实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术、免疫荧光、畸胎瘤形成实验对获得的iPS细胞进行鉴定.结果 获得的iPS细胞镜下观察呈典型的ES样克隆状生长,圆形或椭圆形,与饲养层细胞分界清楚;AP染色阳性,RT-PCR及免疫荧光检测iPS细胞高表达人胚胎干细胞标志性基因及蛋白,移植到免疫缺陷鼠体内能够形成向三胚层分化的畸胎瘤.结论 成功建立了急性肺损伤患者iPS细胞系,可为急性肺损伤的发病机制研究和临床药物筛选提供良好的细胞模型.

    作者:丁桃;李阳;唐睿珠;张旋;云雨;李健;王殿华 刊期: 2014年第10期

  • 慢病毒介导RNA干扰沉默Fas基因在脐带间充质干细胞中的表达

    目的 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)株,为下一步使用低表达Fas基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础.方法 以人Fas基因mRNA序列作为干扰靶点,设计4组靶向Fas的shRNA序列,合成寡核苷酸,与经过BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接获得重组慢病毒,通过感染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.体外培养人UC-MSCs,使用包装好的慢病毒感染UC-MSCs,应用Real time-PCR和Western blotting检测感染后细胞中Fas mRNA及蛋白的表达情况.结果 经酶切以及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,病毒悬液滴度为3×l08 TU/ml.Real time-PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas表达水平较对照组显著降低.结论 慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达.

    作者:王露;翟玮玮;杨向荣;王芳;李见;张强;李玉云 刊期: 2014年第10期

  • miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3促进肝癌细胞增殖

    目的 检测MicroRNA-128a(miR-128a)在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制.方法 收集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用miR-128amimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3'UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;Western blot检测细胞周期蛋白变化.结果 在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织(P<0.05);miR-128a促进肝癌细胞增殖(P<0.05);在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3'URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达(P<0.05);抑制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1和CDK4表达下调.结论 miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3促进肝癌细胞增殖.

    作者:郭学军;曹传辉;孙景苑;张冬艳;刘莉;吴德华 刊期: 2014年第10期

  • 表皮葡萄球菌mscL基因突变株的构建及其生物学功能

    目的 初步探讨表皮葡萄球菌mscL基因的生物学功能.方法 构建含有壮观霉素抗性基因(spc)的同源重组质粒pMAD-△mscL,电转入表皮葡萄球菌1457,在42℃条件下振荡培养,利用蓝白斑和抗生素抗性筛选表皮葡萄球菌mscL基因敲除突变株(SE1457-△mscL).通过检测低渗胁迫前后突变株和野生株D600值及CFU的变化观察mscL基因对渗透压的调节作用.采用微量板半定量方法检测不同条件下mscL敲除突变对细菌生物膜形成的影响.结果 成功构建同源重组质粒pMAD-△mscL,经PCR扩增和测序验证获得了表皮葡萄球菌mscL基因敲除突变株,并通过RT-PCR在转录水平上得到进一步验证.处于对数生长期的mscL突变株在低渗胁迫下的生存能力显著降低,但其生物膜形成能力与野生株相比无显著差异.结论 表皮葡萄球菌mscL基因可在对数生长期参与渗透压的调节,但对生物膜的形成无影响.

    作者:朱涛;赵艳丰;李朝品 刊期: 2014年第10期

  • 脂联素受体2基因+33371Gln/Arg、细胞色素P4502E1基因RsaⅠ 位点多态性和吸烟与非酒精性脂肪性肝病的相关性

    目的 探讨脂联素受体2(AdipoR2)基因+33371Gln/Arg、细胞色素P4502E1 (CYP2E1)基因Rsa Ⅰ位点多态性和吸烟与非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病之间的关系.方法 采用病例-鹏研院的方法,以750例NAFLD患者及750例健康对照者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术分析了+33371Gln/Arg和CYP2E 1-RsaⅠ基因多态性.结果 +33371Gln/Arg(A/A)基因型和CYP2E1-Rsa Ⅰ (c2/c2)基因型频率分布分别为39.20%、71.73%(病例组)和21.07%、43.07%(对照组).+33371Gln/Arg(A/A)患NAFLD的风险显著增加(OR=2.4156,95%CI=1.8164~4.0725).CYP2E1-saⅠ (c2/c2)基因型者患NAFLD的风险也显著增加(OR=3.3547,95%CI=1.9182~4.5057).+33371Gln/Arg(A/A)/CYP2E1-RsaⅠ(c2/c2)基因型者在NAFLD组和对照组中的分布频率分别为32.67%和6.40%.+33371Gln/Arg(A/A)/CYP2E1-Rsa Ⅰ (c2/c2)基因型者患NAFLD的风险显著增加(OR=9.9264,95%CI=4.2928~12.4241).病例组的吸烟率显著高于对照组的吸烟率(OR=2.5919,95%CI=1.4194~4.9528),+33371Gln/Arg(A/A)/CYP2E1-RsaⅠ (c2/c2)基因型与吸烟有协同作用(OR=34.6764,95%CI=18.9076~61.5825).结论 +33371Gln/Arg(A/A)/CYP2E1-Rsa Ⅰ (c2/c2)基因型和吸烟是NAFLD的易患因素,三者的联合在NAFLD的发生中起着协同的作用.

    作者:张超贤;郭李柯 刊期: 2014年第10期

  • 中国人群乙型肝炎病毒基因型间重组的鉴定

    目的 分析中国乙肝病毒(HBv)的基因型间重组情况,寻找新的重组体.方法 下载GenBank中所有来自中国的人HBV全基因组序列,运用片段分型法分析筛选HBV疑似重组序列,并利用生物信息学软件Simplot鉴定重组事件及重组断点.结果 1642条人全长HBV序列中发现755条重组序列,共31种重组体.其中B/C重组体22种676条重组序列;C/D重组体5种75条重组序列;A/C重组体3种3条重组序列;C/I重组体1种1条重组序列.排除已有文献报道的重组类型,总共发现4种共4条重组序列.结论 在GenBank所有的来自中国地区的HBV全基因组序列中发现31种重组体,其中4种重组体为首次发现,并且C基因型参与中国地区所有的基因型间重组.

    作者:潘登;周彬;杨洁;侯金林 刊期: 2014年第10期

  • 基于RAM-HPLC在线富集技术检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米

    目的 通过柱切换技术建立限进性填料柱-高效液相色谱法,实现在线直接进样并检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米.方法 以自制限进填料柱为预处理柱,LunaC18柱为分析柱,预处理流动相为水-甲醇(95:5,V/V),含体积百分数为0.1%的甲酸,流速为1 ml/min;分析流动相为血浆:甲醇-水(65:35,V/V),尿液:甲醇-水(55:45,V/V),均含体积百分数为0.1%的甲酸,流速均为1 ml/min,柱温为25℃;检测波长为274nm.结果 呋塞米血浆样品在进样100 μ1时,富集效果良好,在0.1~3.2 μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.9995),尿液进样20 μl,呋塞米浓度在0.5~32 μg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.9991),血样及尿样的三个加标水平下的平均回收率分别为101.82%~113.36%,98.75%~112.27%,日内日间精密度均小于5%.结论 药代动力学参数AUC0→24为6.265 μg/(ml·h),t1/2为2.447h,Cmax为1.414μg/ml;24 h内呋塞米的累积排泄率为32.50%~39.08%.本方法简单快速,适用于血浆及尿液中呋塞米的直接进样检测.

    作者:张晓惠;王荣;谢华;尹强;李文斌;贾正平;张娟红 刊期: 2014年第10期

  • miR-126/miR-126*在肝细胞癌中的表达及其与临床预后的相关性

    目的 研究miR-126/miR-126*在肝细胞癌中的表达,探讨其表达与相关临床病理参数的关系.方法 用RT-QPCR方法检测74例肝细胞癌手术切除的癌组织与相应的非癌组织中miR-126/miR-126*的表达,分析其表达与相关临床病理参数的关系.结果 miR-126/miR-126*在癌组织中表达水平显著低于相对应的非癌组织;miR-126/miR-126*在肝癌中的表达呈正相关关系;复发组癌组织中miR-126/miR-126*的表达显著低于未复发组癌组织;miR-126/miR-126*高表达组无瘤生存时间显著优于低表达组.结论 miR-126/miR-126*的的低表达可能是影响肝细胞癌转移并导致患者不良预后的一个重要因素.

    作者:何华;黄毓;杨定华;梁博;林梁;李佳璐;廖晖;郭柏棠 刊期: 2014年第10期

  • 选择性部位起搏对左室收缩同步性的影响

    目的 应用二维斑点追踪成像超声技术,通过计算起搏后左室各节段收缩时间的差异,比较右室心尖(RVA)起搏与右室流出道(RVOT)间隔起搏时对左室收缩同步性的影响.方法 入选符合起搏器植入适应证的患者60例,随机分为RVA组30例,RVOT组30例.RVA组患者右室电极植于右室心尖部,RVOT组患者右室电极植于右室流出道间隔部.所有患者术后程控心室电极100%起搏,应用二维斑点追踪成像技术,测量左室径向应变达峰时间的差异.结果 RVA组起搏后,左室6节段径向应变达峰时间的大差、标准差分别为105.27士19.74 ms、42.71±17.63 ms;RVOT组起搏后6节段径向应变达峰时间的大差、标准差分别为41.65±-12.17 ms、17.63±5.62 ms,两组比较各指标均有差异(P<0.01).结论 RVOT间隔部起搏后的左室收缩同步性优于RVA起搏.

    作者:陈东骊;汤娇娇;陈泗林;林纯莹;刘烈;张黔桓;梁远红;彭湖;陈燕 刊期: 2014年第10期

  • 埃博拉病毒的防治进展

    2014年2月,埃博拉病毒在西非爆发,短短几个月内蔓延至多国,引起世界卫生组织的高度关注.目前还没有有效的针对埃博拉病毒感染的防治疫苗及药物.本文综述了埃博拉病毒的流行情况,生物学特性,可能的药物靶点以及研究中的疫苗和药物,期望对埃博拉病毒的防治研究进展有一个较全面的认识.

    作者:武文姣;刘叔文 刊期: 2014年第10期

  • 引导超声聚焦热消融的超高场磁共振射频电磁场匀场技术及人体组织比吸收率安全分析

    目的 探究在超高场磁共振引导下的高强度聚焦超声手术中射频电磁场B1场匀场技术及人体组织比吸收率(SAR)安全性.方法 建立包含温度梯度的女性盆腔模型,分别仿真计算在正常模型匀场系数激励以及在温度梯度模型的匀场系数激励下的射频电磁场B1场的均匀性和局部比吸收率.结果 对包含温度梯度的女性盆腔模型采用正常模型的匀场系数激励,组织局部SAR大值达到10.24 W/kg,超出了国际电工委员会(IEC)对局部SAR值规定的10 W/kg的安全阈值;对包含温度梯度的女性盆腔模型采用温度梯度模型的匀场系数激励,组织局部SAR大值为9.65 W/kg在IEC的安全阈值内.结论 在进行超高场磁共振引导下的高强度聚焦超声手术时,需要考虑超声能量在人体形成的温度分布,在温度梯度的基础上重新进行匀场优化能将组织局部SAR值降低到安全阈值内.

    作者:辜石勇;辛学刚 刊期: 2014年第10期

  • CRISP2基因及蛋白在弱精子症患者中的表达及其临床意义

    目的 弱精子症作为男性不育的重要因素之一,影响着全球15%的育龄夫妇,但其发病机制尚待阐明.课题组前期研究通过基因芯片技术发现CRISP2在弱精子症患者精子中表达明显下调,但其临床意义仍有待进一步阐明.方法 收集2013年1月至2013年6月的弱精子症患者及健康男性精液标本各24例,检测这些精液样本中CRISP2基因及蛋白表达水平,探讨其与精子形态、运动能力及生育预后的相关性.结果 弱精子症患者精液标本中CRISP2蛋白表达水平明显低于正常对照组,而CRISP2基因mRNA表达水平并无明显统计学差异.相关性分析显示CRISP2蛋白表达水平与形态正常精子率(r=0.6182,P=0.0037)及前向运动能力(r=0.6309,P=0.0029)呈明显正相关.经过密切随访,CRISP2蛋白高表达患者配偶受孕率明显高于CRISP2蛋白低表达患者(80.0%vs20.0%,P=0.0230).结论 CRISP2蛋白表达水平与弱精子症患者的精子形态、前向运动能力呈正相关,且CRISP2蛋白低表达的弱精子症患者生育预后不良,提示CRISP2作为弱精子症患者治疗新靶点的潜在价值.

    作者:周俊豪;薛康颐;陈明坤;周其赵;杨建昆;卞军;李欣;郭文彬;夏慧 刊期: 2014年第10期

  • 白纹伊蚊嗅觉受体OR7的基因克隆、鉴定和功能分析

    目的 克隆鉴定白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7,并对其表达谱和功能进行分析.方法 提取成蚊总RNA,采用RT-PCR技术扩增白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,并检测OR7在不同虫期和不同组织器官中的表达谱;将OR7基因克隆于真核表达载体pME18s中,转染HEK293细胞,利用钙成像技术初步分析其对气味分子刺激的钙调功能.结果 成功克隆出白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,经测序得知其编码区序列长度为1395bp;表达谱分析显示,其在蚊幼虫、蛹、成蚊中都有表达,且在雌蚊嗅器中表达显著.钙成像结果显示OR7对气味分子刺激后的钙离子通道有一定的调节功能.结论 克隆出白纹伊蚊的嗅觉受体基因OR7,初步分析显示其在雌蚊中显著表达,并具有对气味分子的识别功能.

    作者:周宁;王晓明;邓裕华;刘宏美;刘通;陈晓光 刊期: 2014年第10期

  • 胆汁酸影响兔肺泡灌洗液的表面张力

    目的 通过观察高胆汁酸血症状态下家兔支气管肺泡灌洗液表面张力的变化以及胆汁稀释液和5种不同游离胆汁酸在体外对家兔支气管肺泡灌洗液表面张力的影响,为认识胆汁酸调节呼吸功能提供实验依据.方法30只新西兰雄性大白兔,使用0.9%生理盐水做支气管肺泡灌洗,肺泡灌洗液进行表面张力测定.实验一组测定高胆汁酸血症家兔动物模型肺泡灌洗液表面张力的变化;实验二组比较了生理盐水与不同稀释度胆汁液表面张力及对肺泡灌洗液表面张力的影响;实验三组比较了5种不同游离胆汁酸水溶液表面张力及对支气管肺泡灌洗液表面张力的影响.结果 (1)高胆汁酸血症状态下家兔动物模型肺泡灌洗液表面张力与对照组相比明显升高(P<0.05);(2)支气管肺泡灌洗液中加入不同稀释度(1∶15、1∶10、1:5)的胆汁稀释液,肺泡灌洗液表面张力就增加了21.15%、26.09%、19.64%(P<0.001);(3)5种游离胆汁酸水溶液中UDCA对支气管肺泡灌洗液表面张力没有明显影响(P>0.05),其他4种游离胆汁酸都可以升高支气管肺泡灌洗液表面张力(P<0.001),CDCA增加了16.10%,CA增加了21.66%,LCA增加了14.21%,DCA增加了13.05%.结论 体内实验发现高胆汁酸血症状态下,肺泡灌洗液表面张力明显升高.体外实验进一步证明胆汁稀释液可以增加支气管肺泡灌洗液的表面张力;5种游离胆汁酸水溶液中除UDCA外其他4种游离胆汁酸都可以升高支气管肺泡灌洗液表面张力,说明这四种游离胆汁酸可能可以通过乳化肺泡表面活性物质,增加了肺泡表面张力,影响呼吸功能.

    作者:王斐;赵丛;田映红;尹艳茹 刊期: 2014年第10期

  • 甲磺酸卡莫司他降低急性应激大鼠内脏敏感性和脊髓c-fos表达

    目的 观察蛋白酶抑制剂(甲磺酸卡莫司他)对急性应激大鼠内脏敏感性的影响,探索肠道蛋白酶活性在急性应激引起内脏高敏感性中的作用.方法 采用急性束缚应激动物模型,在束缚应激前30 min口服甲磺酸卡莫司他或者生理盐水,观察大鼠内脏敏感性变化、直肠粘膜和粪便中蛋白酶活性情况以及脊髓c-fos表达情况.结果 口服不同剂量的甲磺酸卡莫司他后,大鼠内脏敏感性均有降低,随着剂量的增加,内脏敏感性下降更明显,但是甲磺酸卡莫司他不能将急性应激大鼠组的内脏敏感性降到应激前的水平.c-fos蛋白主要表达于脊髓背角浅层,口服不同剂量的甲磺酸卡莫司他后表达c-fos蛋白的阳性细胞数均减少(P<0.05).在30 mg/kg组,粪便和直肠粘膜中的蛋白酶活性较应激对照组下降,有统计学差异(P<0.05).随着蛋白酶抑制剂浓度的增加,蛋白酶活性下降更为明显,在100 mg/kg和300 mg/kg组,粪便和直肠粘膜中的蛋白酶活性较单纯应激组明显下降(P<0.01).结论 肠道蛋白酶参与了急性应激大鼠内脏高敏感性,给予蛋白酶抑制剂后大鼠内脏敏感性和脊髓c-fos表达降低.

    作者:赵菊辉;王宗艳;邹百仓;宋亚华;董蕾 刊期: 2014年第10期

南方医科大学学报杂志

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