黄玲玥；柏林；赵岩；肖中举
目的 原核表达瘦素受体(OBR)近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验,观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响.方法 设计1对带有BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点特异性引物,扩增OBR胞外近跨膜区基因片段(1705～2364 bp),经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamH Ⅰ和HindⅢ两酶切位点之间,构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物.随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大鼠,观察其对SD大鼠体质量、采食量、体长、Lee's指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响.结果 SDS-PAGE电泳分析和Western blotting鉴定结果显示,在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量27 600左右的融合蛋白.对SD大鼠免疫OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白后,体质量、体长、Lee's指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异,而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小.结论 成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白,免疫SD大鼠可促进采食和抑制皮下脂肪沉积.
作者：刘闻；吴丽红；徐名衬；郭日红；顾为望；施振旦；袁进 刊期： 2013年第06期
目的 探讨结肠癌组织中白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)的表达及其临床意义.方法 选择150例结肠癌及癌旁正常组织制成微阵列芯片作为研究对象,用免疫组织化学方法检测组织芯片中SLPI蛋白表达并评分,采用x2检验比较不同SLPI表达水平和结肠癌临床病理陛特征,包括年龄、性别、组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移之间的关系.结果 SLPI在结肠癌组织中相对于正常结肠组织高表达,SLPI蛋白高表达与肿瘤分化[低分化:8(42.1％)vs 11(57.9％)；中/高分化:3(2.3％)vs 128(97.7％)、TNM分期:[Ⅲ～Ⅳ:25 (29.4％)vs 60(70.6％)]、I～Ⅱ:2(3.1％)vs 63(96.9％)、淋巴结转移[18(28.6％)vs 45(71.4％)]及远处转移[11 (84.6％)vs 2(15.4％)]相关(P＜0.05),而与患者的性别和年龄差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLPI表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有关,有可能作为判断结肠癌患者预后的指标.
作者：郭久冰；李国新；庄建民；纪程宏；刘峰；陶国全；董汉章 刊期： 2013年第06期
目的 评估CL-1肝细胞跟人肝星形细胞(HSC)的微载体微重力共培养来提高CL-1肝细胞的活力与功能的可行性.方法 实验分为两组:CL-1肝细胞微载体微重力单培养组和CL-1肝细胞、HSC微载体微重力共培养组.通过倒置显微镜观察、细胞计数、MTT染色及扫描电子显微镜比较两组肝细胞的形态、细胞活力差异,并通过、培养上清中ALT、白蛋白浓度等功能指标测定,比较两组肝细胞活力和功能差异.结果 共培养组较单培养组细胞生长迅速,细胞从24 h贴壁后开始增长,到第5天进入高峰.共培养组1～7 d的肝细胞密度明显高于单培养组的细胞密度(P＜0.05).两组肝细胞ALT、白蛋白从第1天开始不断分泌增加,第5天达到峰值,第6、7天有所下降.ALT功能比较,共培养组明显低于单培养组(P＜0.05).白蛋白功能比较,共培养组明显高于单培养组(P＜0.05).倒置显微镜、扫描电镜及MTT均提示共培养组肝细胞形态、活力优于单培养组.结论 人肝细胞、HSC微载体微重力共培养研究有利于维持及增强旋转生物反应器的肝细胞活力及功能,对人工肝的培养模式发展具有重要意义.
作者：潘康明；周焕城；张志；高毅；徐小平 刊期： 2013年第06期
目的 探讨DNA分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation,Id)Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附等生物学行为的作用.方法 Western blot方法检测4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的Id1/Id3的表达；将子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B两株细胞各分为未处理细胞组、空白病毒组、启动子病毒组和Id1/Id3双敲低组.通过qRT-PCR检测不同腺病毒载体感染细胞后MMP2、CXCR4和P21 mRNA表达量,Westem blot检测MMP2、CXCR4、P21蛋白表达情况；通过MTT增殖试验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞粘附实验检测Id1/Id3表达改变后,对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、移行和粘附能力的影响.结果 Id1/Id3在子宫内膜癌组织中较癌旁组织表达增高(P＜0.05)；双敲低Id1/Id3,子宫内膜癌细胞中MMP2、CXCR4的mRNA水平和蛋白水平明显降低(P＜0.05),P21的mRNA水平和蛋白水平则明显升高(P＜0.05),RNAi组与其他3组细胞相比均有显著性差异；Id 1/Id3双敲低组子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B株细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力和粘附能力均抑制(P＜0.05).结论 Id1/Id3在子宫内膜癌患者组织中高表达,并可通过升调MMP2、CXCR4和降调P21的表达促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附作用,靶向Id1/Id3治疗可能成为预防和治疗子宫内膜癌的新方案.
作者：孙丽丽；李学农；刘国炳 刊期： 2013年第06期
目的 检测Nusap1基因蛋白在肝癌手术切缘中的表达情况及其与肿瘤早期复发的关系.方法 选择常规病理学检查手术切缘为阴性的原发性肝癌标本61例,用免疫组化法检测手术切缘Nusap1基因蛋白表达情况.结果 肝癌手术切缘中Nusap1蛋白表达阳性有21例,其中15例术后早期复发(71.4％)；阴性40例,术后仅12例出现早期复发(30％)；阳性组术后早期复发率明显高于阴性组,差异有显著性(P＜0.05).结论 肝癌手术切缘中Nusap1蛋白表达与术后早期复发明显相关,可预测肝癌术后早期复发高危患者及指导术后辅助治疗.
作者：张猛；杨定华；刘萧；刘延；梁鉴坤；何华；钟克波；林梁；陶国贵 刊期： 2013年第06期
原发性滤泡性免疫母细胞淋巴瘤(FIBL)是种极少见的淋巴瘤,其免疫表型CD10阳性提示起源于生发中心,而CD138阳性说明伴有浆母/浆细胞分化.为了更好地诊疗此病,本文从临床病理和免疫表型的特点方面报道国内首例女性患者,行PET-CT检查明确全身淋巴结的累及情况,并分别与滤泡性淋巴瘤、反应性滤泡增生作鉴别诊断.FIBL作为滤泡性淋巴瘤的罕见变异型,表现为滤泡内的肿瘤性免疫母细胞过度增生,向弥漫性大B细胞淋巴瘤的转化率略高于滤泡性淋巴瘤,预后较差,应予重视.
作者：何选秋；杨磊；丁彦青 刊期： 2013年第06期
目的 探讨基础状态高血清黄体生成素(LH)、不同黄体生成素/卵泡刺激素比值(LH/FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.方法 回顾性分析我中心接受IVF治疗的134个PCOS助孕周期,按照基础状态LH≤10 U/L分为A1(LH≤10 U/L)、A2(LH＞10 U/L)组,按照LH/FSH＜2分为B1(LH/FSH＜2)、B2(LH/FSH≥2)组.分别比较A、B组患者一般情况、胚胎质量和临床妊娠结局.结果 A2组血清FSH、T、LH/FSH比值、获卵数均较A1组高,有统计学差异(P＜0.05)；但两组在窦卵泡计数(AFC)、降调时间、Gn天数、启动日LH、LH/FSH、胚胎质量及临床妊娠结局方面均无统计学差异.B2组的基础LH、HCG日E2、获卵数较B1组高,但Gn使用剂量较少,有统计学差异(P＜0.05)；而两组在降调节时间、Gn天数、启动日LH、LH/FSH比值、临床妊娠结局方面无统计学差异.结论PCOS患者经口服避孕药物预处理后,基础状态高LH水平(LH＞10 IU/L)及高LH/FSH比值(LH/FSH≥2)对其IVF妊娠结局无不良影响.
作者：耿旭景；欧湘红；廖旖欣；谭雯雅；王松；全松 刊期： 2013年第06期
目的 探讨塞来昔布增强口腔癌细胞化疗敏感性与其阻滞细胞周期进程及调节P-gp之间的相关性.方法 塞来昔布10、20、40、80 μmol/L和/或长春新碱0.375、0.75、1.5、3μmol/L处理KBNCR细胞后,分别采用MTT法检测KB/VCR细胞生长抑制率；流式细胞术检测细胞周期分布情况；Western blot检测周期相关蛋白Cyclin Dl、p21 wAF1/CIP1及P-gp的蛋白表达.结果 塞来昔布浓度较低时＜20 μmol/L)对KB/VCR生长增殖无明显影响,但小剂量的塞来昔布10 μmol/L可显著增强VCR对KBNCR细胞的毒性作用,并呈时间依赖性.塞来昔布与长春新碱联合作用于KB/VCR细胞24、48、72 h后,其生长抑制率分别为(37.53±2.05)％、(46.67±3.17)％及(54.02±1.53)％,显著高于塞来昔布和长春新碱单独用药组(P均＜0.01).塞来昔布与VCR联合应用能改变细胞周期分布,与VCR组相比,联合用药组G0/G1期细胞数量增加(56.08±0.46)％,S期和G2/M期细胞数目降低[S期:(22.83±0.20)％; G2/M期:(21.09±0.66)％].此外,与VCR组细胞相比,联合用药能显著降低Cyclin D1的表达,增强p21wWAF1/CIP1的表达,并且Cyclin Dl蛋白水平的降低及p21WAF1/CIP1蛋白水平的上升伴随着P-gp蛋白的下调.结论 塞来昔布下调节P-gp而增强KB/VCR细胞对化疗药物的敏感性可能与Cyclin D1和p2lWAF1/CIP1蛋白变化引起的细胞周期阻滞有关.
作者：廖汶晓；闫怡轩；黄艳青；李伟忠 刊期： 2013年第06期
目的 提出一种把膝关节软骨T2图自动分为三层及九个区域并算出各区域T2均值的方法.方法 本方法根据临床经验丰富的放射科医生在T2图上手动勾勒出的膝关节软骨边缘,计算其中轴线以及中轴线的法线,然后将医生分割区域沿法线方向等间距再分为表浅层、中间层、深层三层,再根据中轴线的长度选取两条法线将软骨区域均分为内中外三部分,后计算各个区域内的T2均值,并通过Bland-Altman分析方法进行统计学分析.结果 手工分区和自动分区方法的95％一致性界限为(-3.04 ms,3.20 ms),其一致性界限窄(小于小均值的一半),变异系数为4.04％.结论 自动分区与手工分区这两种方法具有较好的一致性,而且自动分区方法克服了手工分区方法的主观性.
作者：钟智辉；余太慧；王雷；阳维；冯美燕；卢振泰；陈武凡；冯衍秋 刊期： 2013年第06期
目的 通过观察含生长因子的无血清培养基(serum-free medium,SFM)培养的Col0205细胞,研究其对CD133与ALDH1表达的影响.方法 用含生长因子的无血清培养基对Col0205细胞进行培养,以含血清培养基(serum-supplimented medium,SSM)组作为对照,流式细胞术检测两组细胞表面标志物CD133表达的阳性率；流式分选SFM组CD133+细胞和CD133-细胞,倒置显微镜观察CD133+细胞和CD133-细胞在无血清培养基中的生长特性；利用细胞免疫荧光检测CD133+细胞和CD133-细胞CD133和ALDH1的表达；分别将CD13+细胞和CD13-细胞在NOD/SCID小鼠皮下进行成瘤实验,采用免疫组织化学方法对肿瘤组织检测ALDH1表达.结果 SFM组CD133+细胞比例明显高于SSM组(P＜0.05)；CD133+细胞在SFM中可以形成肿瘤干细胞球,而CD133-则不能形成；CD133+细胞高表达CD133和ALDH1,且两者共表达,而CD133细胞则是阴性表达；CD133+细胞和CD133-细胞成瘤后,CD133+细胞组肿瘤组织ALDH1阳性表达,而CD133-细胞组阴性表达.结论 含生长因子的无血清培养基培养CD133+Col0205大肠癌细胞能够形成肿瘤干细胞球及高表达ALDH1,ALDH1可能是大肠癌干细胞候选的标志物之一.
作者：黎丽旋；张珊珊；梁芬芬；林英豪；李润华；陈楚弟；肖冰 刊期： 2013年第06期
目的 建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生.方法 选取rtM2041(ATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性；选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率.结果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001％,可检测到低限为101拷贝.而直接测序法可检测的基因突变的低极限为104拷贝,检测灵敏度为10％.85例临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9％(73/85:YIDD:40,YVDD:23,YIDD+YVDD:10),而PCR产物直接测序法检阳性率仅为40％ (34/85:YIDD:21,YVDD:11,YIDD+YVDD:2).阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种方法的特异性均较好.结论 PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有很好的应用前景.
作者：张迎迎；何海棠；杨洁；侯金林 刊期： 2013年第06期
目的 评估p27蛋白在胞浆中表达与鼻咽癌患者临床病理学特征的关系.方法 利用免疫组化检测P27蛋白在鼻咽癌组织与鼻咽组织之间的表达.利用统计学方法分析P27蛋白在鼻咽癌与鼻咽组织胞浆中表达差异以及P27蛋白在胞浆中表达与与鼻咽癌患者临床病理参数之间的相关性.结果 免疫组化结果显示,P27蛋白是一个核浆表达蛋白.与正常鼻咽组织相比,P27蛋白在鼻咽癌组织胞浆中的表达明显下调(P=0.047),且下调表达与T分级(P=0.033)呈负相关.此外,P27蛋白在鼻咽癌组织胞浆中的表达与淋巴结转移和临床分期虽然无显著意义,但也展现了明显负相关趋势(P=0.157,P=0.090).结论 P27蛋白在细胞胞浆中过低表达可能促进鼻咽癌的发生发展,且其可作为预测鼻咽癌患者预后的不利因素之一.
作者：黄巍；孙世珺；叶亦菁；方唯意 刊期： 2013年第06期
目的 研究趋化因子CXCL14在骨肉瘤细胞和组织中的表达及其与患者预后的关系.方法 利用RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量PCR技术检测4种骨肉瘤细胞株及40对骨肉瘤及癌旁肌肉中CXCL14的表达,CCK8细胞增殖实验、克隆形成实验观察CXCL14对U2OS细胞增殖的影响,免疫组化检测CXCL14在骨肉瘤组织中的表达,并运用Kaplan-Meier法进行生存分析.结果 CXCL14在骨肉瘤细胞株中的表达均高于正常成骨细胞,而且其在骨肉瘤组织的表达也显著高于癌旁肌肉组织(P＜0.01).干扰CXCL14表达能抑制U2OS的生长(P＜0.05),经两条CXCL14干扰RNA处理后U2OS克隆形成率分别为(4.93±0.25)％和(5.03±0.0.31)％,均显著低于阴性对照组(8.03±1.16)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示,CXCL 14高表达的患者预后比低表达组差(P=0.02).结论 CXCL14在骨肉瘤中高表达,它能促进骨肉瘤细胞的增殖并与患者不良预后相关,提示其可能成为潜在的治疗靶点.
作者：卢金昌；王晋；雍碧城；宋国徽；赵志强；唐清连；邹昌业；尹军强；谢显彪 刊期： 2013年第06期
目的 用在体细胞贴附式记录的方式,比较乌拉坦和氯胺酮麻醉条件下初级听皮层听觉神经元对纯音的反应特性,探查两种麻醉剂对初级听皮层单个神经元纯音编码机制的影响.方法 选取45只体质量200～250g的Sprague-Dawley雌性健康大鼠,将其随机分为两组,分别用乌拉坦和氯胺酮作为基础麻醉剂,手术暴露初级听皮层.选取短纯音作为刺激条件,用在体细胞贴附式记录的方式获得大鼠初级听皮层的单个听觉神经元动作电位发放情况,并用Matlab软件提取动作电位的相关参数,分析两种麻醉剂对听神经元的声反应特性的影响.结果 除了特征频率和Q值(特征频率与频率带宽的比值,反应听觉神经元的频率调谐特性)以外,小阈强度、自发放水平、声反应的潜伏期、刺激时间直方图以及频率-强度调谐曲线的类型均受到麻醉剂类型的影响.在乌拉坦麻醉条件下,声反应神经元对短声刺激表现出较高的阈强度、较低的自发放水平、较长的潜伏期,且接受较强抑制性频率-强度调谐曲线出现较频繁.结论乌拉坦和氯胺酮对声音频率信息在听觉通路中的传递无明显影响.但在乌拉坦麻醉条件下,初级听皮层神经元受到更强的抑制,这可能与乌拉坦能加强中间抑制性神经元的作用或抑制听神经元本身的兴奋性有关.
作者：黄玲玥；柏林；赵岩；肖中举 刊期： 2013年第06期
目的 研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对人中性粒细胞(PMN)功能的影响.方法 采用ELISA和Dot blot检测MBL与微生物的结合；应用流式细胞术检测及荧光显微镜观察MBL对PMN吞噬功能的影响；用qPCR分析MBL对PMN表达IL-lβ、TNF-α和 CDllbmRNA的影响,以ELISA检测MBL对PMN分泌TNF-α和IL-6的影响；应用NBT还原法检测MBL对PMN呼吸爆发的影响.结果 MBL与微生物结合并呈浓度依赖关系.无人血清时,MBL对PMN吞噬C.albicans和E.coli无明显影响.存在MBL缺陷人混合血清时,MBL可促进PMN对C.albicans的吞噬且这种作用可被甘露聚糖所阻断,上调PMN IL-1β、TNF-α、IL-6及CDllb表达水平,刺激PMN呼吸爆发.结论 MBL以补体凝集素途径依赖方式增强PMN吞噬功能,并促进炎性细胞因子分泌.
作者：陈阿德；王燕；张丽芸；卢晓；左大明；陈政良 刊期： 2013年第06期
目的 应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库.方法 采集登革确诊患者恢复期外周血,分离外周血淋巴细胞并提取其总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCk)和重链可变区(VH)基因,构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库；将抗体基因库转染CHO细胞、用流式细胞仪分析抗体在CHO细胞表面的表达.结果 以1.2 μg总RNA为模板,用6套引物扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,轻链基因库容量为1.45×104,重链基因库容量为1.8×105;随机挑选的10个轻链克隆和10个重链克隆,经过测序鉴定,轻链有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,重链有7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列.流式细胞仪分析含有正确阅读框架的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达,抗体库中可表达的抗体多样性达到109.结论 以1.2 μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建可表达库容量达到109的登革病毒特异性全长人抗体基因库.
作者：温扬明；蓝开健；王俊洁；余晶仪；屈娅荣；赵卫；张复春；谭万龙；曹虹 刊期： 2013年第06期
通过Cu(I)催化的点击化学合成一种放射性碘标记化合物,建立一套新的放射性碘标记的方法,该方法温和、快速、高效.结果显示在有机相反应中,通过点击化学反应5-碘-(125/131I)-1,2,3-三唑化合物在24 h内合成,放射化学产率达到13％.但是在水相中,点击化学标记生物分子RGD的放射化学产率为0.原因是在水相中,Cu(I)催化作用使得氢离子和碘离子发生了交换反应,没有足够的放射性碘配体与RGD发生偶联.本文还提出了在反应溶剂为有机相和水相的条件下Cu(Ⅰ)催化该环加成反应的不同反应机制.
作者：王成；尹吉林；周伟；张岚；周晴 刊期： 2013年第06期
目的 观察exendin-4对大鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法 试验分组:对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组(10 ng/ml)、TNF-α(10 ng/ml) +El组(1 nmol/L exendin-4)、TNF-α(10 ng/ml)+E5组(5 nmol/L exendin-4)、TNF-α(10 ng/ml)+E10组(10nmol/L exendin-4).收集24 h细胞,提取RNA,采用实时荧光定量检测细胞内MCP-1 mRNA的表达；分别在24、48 h收集各组细胞培养上清液,采用ELISA检测培养细胞上清中MCP-1、FN的浓度.结果孵育24 h时,TNF-α组MCP-1 mRNA和细胞培养上清MCP-1、FN表达较对照组明显增加(P＜0.01)；与TNF-α组比较,TNF-α+E5组、TNF-α+E10组细胞内MCP-1 mRNA和培养上清内MCP-1、FN含量均明显降低；孵育48 h时,TNF-α细胞培养上清MCP-1、FN表达较对照组明显增加(P＜0.01)；与TNF-α组比较,TNF-α+E1组、TNF-α+E5组、TNF-α+E10组细胞培养上清内MCP-1、FN含量均明显降低；并且随着时间的延长和exendin-4浓度的增加,培养上清内MCP-1、FN含量降低更加明显.结论 Exendin-4可明显抑制TNF-α诱导的系膜细胞MCP-1 mRNA的表达,并以剂量和时间依赖的方式抑制TNF-α诱导的系膜细胞培养上清内MCP-1、FN的含量,提示exendin-4可能会对肾脏具有一定保护作用.
作者：江颖娟；薛耀明；张倩；张艳飞；袁园 刊期： 2013年第06期
目的 构建果蝇细胞周期调控的数学模型.方法 使用一组常微分方程描述细胞周期网络中核心分子的相互作用,计算分子浓度的连续周期性变化,并捕获分子交互的离散事件.结果 计算结果吻合实验观测到的分子浓度的周期变化,揭示和解释了细胞周期时程补偿的数学机制与定量特性.结论 E2F1 (E2F transcription factor l)所联结的正负反馈是调控G1/S与G2/M时程补偿的核心机制.
作者：刘文音；朱浩 刊期： 2013年第06期
目的 研究miR-590的两个臂-miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制.方法 利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证.通过脂质体将miR-590 mimic或inhibitor转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化.Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证.结果 miRNA芯片结果显示3个肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调.通过QPCR验证了10例临床HCC肿瘤标本发现80％的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p和miR-590-3p均同步显著上调.QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调.MTT和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2分别过表达miR-590-5p和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加(P＜0.05)；而HepG2、Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低(P＜0.05).Targetscan预测,PDCD4和PTEN分别作为miR-590-5p和miR-590-3p的潜在靶基因.萤光素酶报告系统以及western blot结果显示miR-590-5p和miR-590-3p可以分别直接下调靶基因PDCD4和PTEN的表达(P＜0.05).进一步我们发现miR-590-3p通过下调PTEN激活PI3K-AKT信号通路,促进AKTl-S473的磷酸化水平.结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路.由此可见miR-590在HCC发生发展过程中具有重要的意义,也可作为临床诊治潜在的新靶标.
作者：杨红飞；郑文宏；赵文淘；关春燕；安靓 刊期： 2013年第06期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
