于立新；夏仁飞；周敏捷
目的 应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库.方法 采集登革确诊患者恢复期外周血,分离外周血淋巴细胞并提取其总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCk)和重链可变区(VH)基因,构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库；将抗体基因库转染CHO细胞、用流式细胞仪分析抗体在CHO细胞表面的表达.结果 以1.2 μg总RNA为模板,用6套引物扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,轻链基因库容量为1.45×104,重链基因库容量为1.8×105;随机挑选的10个轻链克隆和10个重链克隆,经过测序鉴定,轻链有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,重链有7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列.流式细胞仪分析含有正确阅读框架的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达,抗体库中可表达的抗体多样性达到109.结论 以1.2 μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建可表达库容量达到109的登革病毒特异性全长人抗体基因库.
作者：温扬明；蓝开健；王俊洁；余晶仪；屈娅荣；赵卫；张复春；谭万龙；曹虹 刊期： 2013年第06期
目的 探讨靶向抑制EZH2表达对子宫内膜癌细胞生长及侵袭的影响及其分子机制.方法 实时荧光定量PCR检测EZH2在子宫内膜癌与癌旁子宫内膜组织中的表达差异.利用化学合成siRNA转染子宫内膜细胞,靶向抑制EZH2表达.MTT、流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期改变.Boyden小室检测细胞侵袭情况的变化.Western blotting检测细胞周期因子及基质金属蛋白酶2(MMP2)表达改变.结果 相比于癌旁子宫内膜组织,EZH2基因在子宫内膜癌中表达相对增高.SiRNA在子宫内膜癌细胞中抑制EZH2表达后,细胞增殖能力明显降低,且细胞周期也阻滞在G1期.Boyden小室分析显示,在抑制EZH2表达后,细胞的侵袭能力也明显降低.机制分析显示,在抑制EZH2表达后,细胞周期因子E2F1及MMP2表达明显降低,而抑癌基因p21表达明显升高.结论 EZH2在子宫内膜癌中表达明显升高.SiRNA靶向抑制EZH2之后通过下调E2F1、MMP2及上调p21表达后,能明显减慢子宫内膜癌细胞增殖和侵袭速度.
作者：冷灵芝；黄启涛；董玉楠；俞泓；田焱；彭国庆 刊期： 2013年第06期
目的 原核表达瘦素受体(OBR)近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验,观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响.方法 设计1对带有BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点特异性引物,扩增OBR胞外近跨膜区基因片段(1705～2364 bp),经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamH Ⅰ和HindⅢ两酶切位点之间,构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物.随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大鼠,观察其对SD大鼠体质量、采食量、体长、Lee's指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响.结果 SDS-PAGE电泳分析和Western blotting鉴定结果显示,在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量27 600左右的融合蛋白.对SD大鼠免疫OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白后,体质量、体长、Lee's指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异,而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小.结论 成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白,免疫SD大鼠可促进采食和抑制皮下脂肪沉积.
作者：刘闻；吴丽红；徐名衬；郭日红；顾为望；施振旦；袁进 刊期： 2013年第06期
通过Cu(I)催化的点击化学合成一种放射性碘标记化合物,建立一套新的放射性碘标记的方法,该方法温和、快速、高效.结果显示在有机相反应中,通过点击化学反应5-碘-(125/131I)-1,2,3-三唑化合物在24 h内合成,放射化学产率达到13％.但是在水相中,点击化学标记生物分子RGD的放射化学产率为0.原因是在水相中,Cu(I)催化作用使得氢离子和碘离子发生了交换反应,没有足够的放射性碘配体与RGD发生偶联.本文还提出了在反应溶剂为有机相和水相的条件下Cu(Ⅰ)催化该环加成反应的不同反应机制.
作者：王成；尹吉林；周伟；张岚；周晴 刊期： 2013年第06期
目的 构建果蝇细胞周期调控的数学模型.方法 使用一组常微分方程描述细胞周期网络中核心分子的相互作用,计算分子浓度的连续周期性变化,并捕获分子交互的离散事件.结果 计算结果吻合实验观测到的分子浓度的周期变化,揭示和解释了细胞周期时程补偿的数学机制与定量特性.结论 E2F1 (E2F transcription factor l)所联结的正负反馈是调控G1/S与G2/M时程补偿的核心机制.
作者：刘文音；朱浩 刊期： 2013年第06期
目的 探讨基础状态高血清黄体生成素(LH)、不同黄体生成素/卵泡刺激素比值(LH/FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.方法 回顾性分析我中心接受IVF治疗的134个PCOS助孕周期,按照基础状态LH≤10 U/L分为A1(LH≤10 U/L)、A2(LH＞10 U/L)组,按照LH/FSH＜2分为B1(LH/FSH＜2)、B2(LH/FSH≥2)组.分别比较A、B组患者一般情况、胚胎质量和临床妊娠结局.结果 A2组血清FSH、T、LH/FSH比值、获卵数均较A1组高,有统计学差异(P＜0.05)；但两组在窦卵泡计数(AFC)、降调时间、Gn天数、启动日LH、LH/FSH、胚胎质量及临床妊娠结局方面均无统计学差异.B2组的基础LH、HCG日E2、获卵数较B1组高,但Gn使用剂量较少,有统计学差异(P＜0.05)；而两组在降调节时间、Gn天数、启动日LH、LH/FSH比值、临床妊娠结局方面无统计学差异.结论PCOS患者经口服避孕药物预处理后,基础状态高LH水平(LH＞10 IU/L)及高LH/FSH比值(LH/FSH≥2)对其IVF妊娠结局无不良影响.
作者：耿旭景；欧湘红；廖旖欣；谭雯雅；王松；全松 刊期： 2013年第06期
目的 通过观察含生长因子的无血清培养基(serum-free medium,SFM)培养的Col0205细胞,研究其对CD133与ALDH1表达的影响.方法 用含生长因子的无血清培养基对Col0205细胞进行培养,以含血清培养基(serum-supplimented medium,SSM)组作为对照,流式细胞术检测两组细胞表面标志物CD133表达的阳性率；流式分选SFM组CD133+细胞和CD133-细胞,倒置显微镜观察CD133+细胞和CD133-细胞在无血清培养基中的生长特性；利用细胞免疫荧光检测CD133+细胞和CD133-细胞CD133和ALDH1的表达；分别将CD13+细胞和CD13-细胞在NOD/SCID小鼠皮下进行成瘤实验,采用免疫组织化学方法对肿瘤组织检测ALDH1表达.结果 SFM组CD133+细胞比例明显高于SSM组(P＜0.05)；CD133+细胞在SFM中可以形成肿瘤干细胞球,而CD133-则不能形成；CD133+细胞高表达CD133和ALDH1,且两者共表达,而CD133细胞则是阴性表达；CD133+细胞和CD133-细胞成瘤后,CD133+细胞组肿瘤组织ALDH1阳性表达,而CD133-细胞组阴性表达.结论 含生长因子的无血清培养基培养CD133+Col0205大肠癌细胞能够形成肿瘤干细胞球及高表达ALDH1,ALDH1可能是大肠癌干细胞候选的标志物之一.
作者：黎丽旋；张珊珊；梁芬芬；林英豪；李润华；陈楚弟；肖冰 刊期： 2013年第06期
目的 探讨结肠癌组织中白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)的表达及其临床意义.方法 选择150例结肠癌及癌旁正常组织制成微阵列芯片作为研究对象,用免疫组织化学方法检测组织芯片中SLPI蛋白表达并评分,采用x2检验比较不同SLPI表达水平和结肠癌临床病理陛特征,包括年龄、性别、组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移之间的关系.结果 SLPI在结肠癌组织中相对于正常结肠组织高表达,SLPI蛋白高表达与肿瘤分化[低分化:8(42.1％)vs 11(57.9％)；中/高分化:3(2.3％)vs 128(97.7％)、TNM分期:[Ⅲ～Ⅳ:25 (29.4％)vs 60(70.6％)]、I～Ⅱ:2(3.1％)vs 63(96.9％)、淋巴结转移[18(28.6％)vs 45(71.4％)]及远处转移[11 (84.6％)vs 2(15.4％)]相关(P＜0.05),而与患者的性别和年龄差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLPI表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有关,有可能作为判断结肠癌患者预后的指标.
作者：郭久冰；李国新；庄建民；纪程宏；刘峰；陶国全；董汉章 刊期： 2013年第06期
目的 系统评价狄诺塞麦对低骨量妇女腰椎骨密度的影响及其安全性.方法 检索Medline数据库、Embase数据库、Cochrane临床对照实验中心数据库、万方数据库、中国知网全文数据库、中国生物医学文献数据库有关狄诺塞麦治疗低骨量妇女的临床研究,按照纳入及排除标准筛选出随机对照试验,用jadad量表对纳入的研究进行质量评价.提取有效数据,采用RevMan 5.0.24软件进行meta分析.结果 共纳入双盲、随机对照试验5项,采用固定效应模型进行meta分析,结果示狄诺塞麦治疗12月后,腰椎骨密度升高幅度比安慰剂对照试验高5.45％ (95％ CI,5.05％～5.84％),P＜0.00001.对随访期间发生的严重不良事件、严重感染事件及腰背痛事件,采用固定效应模型进行meta分析,两组间并无显著差异.结论 狄诺塞麦组相对安慰剂对照组可显著提高腰椎骨密度,两者的安全性近似.
作者：朱晓文；陈建庭 刊期： 2013年第06期
目的 建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生.方法 选取rtM2041(ATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性；选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率.结果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001％,可检测到低限为101拷贝.而直接测序法可检测的基因突变的低极限为104拷贝,检测灵敏度为10％.85例临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9％(73/85:YIDD:40,YVDD:23,YIDD+YVDD:10),而PCR产物直接测序法检阳性率仅为40％ (34/85:YIDD:21,YVDD:11,YIDD+YVDD:2).阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种方法的特异性均较好.结论 PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有很好的应用前景.
作者：张迎迎；何海棠；杨洁；侯金林 刊期： 2013年第06期
目的 研究趋化因子CXCL14在骨肉瘤细胞和组织中的表达及其与患者预后的关系.方法 利用RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量PCR技术检测4种骨肉瘤细胞株及40对骨肉瘤及癌旁肌肉中CXCL14的表达,CCK8细胞增殖实验、克隆形成实验观察CXCL14对U2OS细胞增殖的影响,免疫组化检测CXCL14在骨肉瘤组织中的表达,并运用Kaplan-Meier法进行生存分析.结果 CXCL14在骨肉瘤细胞株中的表达均高于正常成骨细胞,而且其在骨肉瘤组织的表达也显著高于癌旁肌肉组织(P＜0.01).干扰CXCL14表达能抑制U2OS的生长(P＜0.05),经两条CXCL14干扰RNA处理后U2OS克隆形成率分别为(4.93±0.25)％和(5.03±0.0.31)％,均显著低于阴性对照组(8.03±1.16)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示,CXCL 14高表达的患者预后比低表达组差(P=0.02).结论 CXCL14在骨肉瘤中高表达,它能促进骨肉瘤细胞的增殖并与患者不良预后相关,提示其可能成为潜在的治疗靶点.
作者：卢金昌；王晋；雍碧城；宋国徽；赵志强；唐清连；邹昌业；尹军强；谢显彪 刊期： 2013年第06期
目的 基于中和抗体VRC01与HIV-1 gpl20的结合模式,利用计算机虚拟筛选,从IBS天然产物数据库中筛选靶向HIV-1gpl20的小分子HIV-l进入抑制剂,并对其抗病毒活性和机制进行研究.方法 运用MM-PBSA方法计算候选化合物与HIV-1gpl20结合后自由能的变化；利用HIV-1假病毒、活病毒技术及细胞融合实验,检测化合物抑制HIV-1感染的活性；XTT比色法检测化合物对细胞的毒性；采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)研究化合物体外抗病毒活性的机理.结果 利用计算机从40 000个化合物中虚拟筛选出19个与gpl20结合后自由能降低较大的小分子化合物,其中NC-2具有抑制HIV-1感染和细胞融合的活性,其抑制HIV-1实验株ⅢB的IC50是1.95±0.44 μmol/L,抑制HIV-1JRFL假病毒的IC50是10.58±0.13 μrmol/L.酶联免疫吸附法结果表明NC-2体外能抑制HIV-1 gpl20与CD4的结合,但不抑制HIV-1 gp41六螺旋的形成.结论该计算机虚拟筛选的方法可为开发作用于HIV-1 gpl20的小分子进入抑制剂提供参考.同时,通过计算机辅助设计加病毒活性筛选的方法,得到一个新颖结构的HIV进入抑制剂NC-2.
作者：段恒；王玉芹；宋德寿；陈之朋；裘佳寅；陆路；姜世勃；刘叔文；谭穗懿 刊期： 2013年第06期
白塞病合并淋巴瘤病例罕见,目前国内外文献报道仅23例.本文报道国内第1例(世界上第2例)白塞病合并结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)的病例,患者为26岁青年男性,确诊白塞病后予泼尼松龙、环磷酰胺、沙利度胺、生物制剂等药物治疗,自然病程2年后因急腹症手术,术后病理诊断“(回肠末端)结外NK/T细胞淋巴瘤,鼻型”.白塞病合并淋巴瘤的机制尚不清楚,本文通过文献复习,总结国内外报道的病例特点,在免疫机制、EB病毒感染、药物应用等方面对相关机制进行探讨.
作者：黄琴；赖伟男；杨敏 刊期： 2013年第06期
目的 探讨塞来昔布增强口腔癌细胞化疗敏感性与其阻滞细胞周期进程及调节P-gp之间的相关性.方法 塞来昔布10、20、40、80 μmol/L和/或长春新碱0.375、0.75、1.5、3μmol/L处理KBNCR细胞后,分别采用MTT法检测KB/VCR细胞生长抑制率；流式细胞术检测细胞周期分布情况；Western blot检测周期相关蛋白Cyclin Dl、p21 wAF1/CIP1及P-gp的蛋白表达.结果 塞来昔布浓度较低时＜20 μmol/L)对KB/VCR生长增殖无明显影响,但小剂量的塞来昔布10 μmol/L可显著增强VCR对KBNCR细胞的毒性作用,并呈时间依赖性.塞来昔布与长春新碱联合作用于KB/VCR细胞24、48、72 h后,其生长抑制率分别为(37.53±2.05)％、(46.67±3.17)％及(54.02±1.53)％,显著高于塞来昔布和长春新碱单独用药组(P均＜0.01).塞来昔布与VCR联合应用能改变细胞周期分布,与VCR组相比,联合用药组G0/G1期细胞数量增加(56.08±0.46)％,S期和G2/M期细胞数目降低[S期:(22.83±0.20)％; G2/M期:(21.09±0.66)％].此外,与VCR组细胞相比,联合用药能显著降低Cyclin D1的表达,增强p21wWAF1/CIP1的表达,并且Cyclin Dl蛋白水平的降低及p21WAF1/CIP1蛋白水平的上升伴随着P-gp蛋白的下调.结论 塞来昔布下调节P-gp而增强KB/VCR细胞对化疗药物的敏感性可能与Cyclin D1和p2lWAF1/CIP1蛋白变化引起的细胞周期阻滞有关.
作者：廖汶晓；闫怡轩；黄艳青；李伟忠 刊期： 2013年第06期
目的 评估CL-1肝细胞跟人肝星形细胞(HSC)的微载体微重力共培养来提高CL-1肝细胞的活力与功能的可行性.方法 实验分为两组:CL-1肝细胞微载体微重力单培养组和CL-1肝细胞、HSC微载体微重力共培养组.通过倒置显微镜观察、细胞计数、MTT染色及扫描电子显微镜比较两组肝细胞的形态、细胞活力差异,并通过、培养上清中ALT、白蛋白浓度等功能指标测定,比较两组肝细胞活力和功能差异.结果 共培养组较单培养组细胞生长迅速,细胞从24 h贴壁后开始增长,到第5天进入高峰.共培养组1～7 d的肝细胞密度明显高于单培养组的细胞密度(P＜0.05).两组肝细胞ALT、白蛋白从第1天开始不断分泌增加,第5天达到峰值,第6、7天有所下降.ALT功能比较,共培养组明显低于单培养组(P＜0.05).白蛋白功能比较,共培养组明显高于单培养组(P＜0.05).倒置显微镜、扫描电镜及MTT均提示共培养组肝细胞形态、活力优于单培养组.结论 人肝细胞、HSC微载体微重力共培养研究有利于维持及增强旋转生物反应器的肝细胞活力及功能,对人工肝的培养模式发展具有重要意义.
作者：潘康明；周焕城；张志；高毅；徐小平 刊期： 2013年第06期
目的 检测Nusap1基因蛋白在肝癌手术切缘中的表达情况及其与肿瘤早期复发的关系.方法 选择常规病理学检查手术切缘为阴性的原发性肝癌标本61例,用免疫组化法检测手术切缘Nusap1基因蛋白表达情况.结果 肝癌手术切缘中Nusap1蛋白表达阳性有21例,其中15例术后早期复发(71.4％)；阴性40例,术后仅12例出现早期复发(30％)；阳性组术后早期复发率明显高于阴性组,差异有显著性(P＜0.05).结论 肝癌手术切缘中Nusap1蛋白表达与术后早期复发明显相关,可预测肝癌术后早期复发高危患者及指导术后辅助治疗.
作者：张猛；杨定华；刘萧；刘延；梁鉴坤；何华；钟克波；林梁；陶国贵 刊期： 2013年第06期
目的 探讨假性成分为主的“葫芦状”动脉瘤的影像学特点、诊断与治疗策略.方法 回顾性分析6例颅内真性动脉瘤-假性动脉瘤复合体患者的临床资料.结果 本组6例CT提示蛛网膜下腔出血,伴有脑实质内血肿.数字减影血管成像(digital subtraction angiography,DSA)或者磁共振血管成像检查提示颅内动脉瘤,5例前交通动脉瘤,1例左侧大脑中动脉瘤；3D-DSA 重建提示动脉瘤由大、小两部分构成,均为小母囊上发出较大的子囊.本组5例前交通动脉瘤均行弹簧圈栓塞术,2例术后出现严重脑组织肿胀,1例急诊行去骨瓣减压及动脉瘤夹闭术后逐渐恢复,1例死亡；大脑中动脉瘤行开颅夹闭术.2例开颅手术患者术后病理均提示假性动脉瘤成分.5例出院患者预后良好,均随访3个月,临床症状稳定.结论葫芦状动脉瘤是一种以假性动脉瘤成分为主的特殊形态的动脉瘤复合体,有其独特的病理生理过程和影像学特点,治疗上强调根据个体情况及动脉瘤形态学特点选择佳治疗方法尽早修复动脉瘤.
作者：冯文峰；王刚；张国忠；李伟光；李明洲；何小艳；张龙；漆松涛 刊期： 2013年第06期
目的 评估p27蛋白在胞浆中表达与鼻咽癌患者临床病理学特征的关系.方法 利用免疫组化检测P27蛋白在鼻咽癌组织与鼻咽组织之间的表达.利用统计学方法分析P27蛋白在鼻咽癌与鼻咽组织胞浆中表达差异以及P27蛋白在胞浆中表达与与鼻咽癌患者临床病理参数之间的相关性.结果 免疫组化结果显示,P27蛋白是一个核浆表达蛋白.与正常鼻咽组织相比,P27蛋白在鼻咽癌组织胞浆中的表达明显下调(P=0.047),且下调表达与T分级(P=0.033)呈负相关.此外,P27蛋白在鼻咽癌组织胞浆中的表达与淋巴结转移和临床分期虽然无显著意义,但也展现了明显负相关趋势(P=0.157,P=0.090).结论 P27蛋白在细胞胞浆中过低表达可能促进鼻咽癌的发生发展,且其可作为预测鼻咽癌患者预后的不利因素之一.
作者：黄巍；孙世珺；叶亦菁；方唯意 刊期： 2013年第06期
目的 提出一种把膝关节软骨T2图自动分为三层及九个区域并算出各区域T2均值的方法.方法 本方法根据临床经验丰富的放射科医生在T2图上手动勾勒出的膝关节软骨边缘,计算其中轴线以及中轴线的法线,然后将医生分割区域沿法线方向等间距再分为表浅层、中间层、深层三层,再根据中轴线的长度选取两条法线将软骨区域均分为内中外三部分,后计算各个区域内的T2均值,并通过Bland-Altman分析方法进行统计学分析.结果 手工分区和自动分区方法的95％一致性界限为(-3.04 ms,3.20 ms),其一致性界限窄(小于小均值的一半),变异系数为4.04％.结论 自动分区与手工分区这两种方法具有较好的一致性,而且自动分区方法克服了手工分区方法的主观性.
作者：钟智辉；余太慧；王雷；阳维；冯美燕；卢振泰；陈武凡；冯衍秋 刊期： 2013年第06期
目的 通过检测和比较子宫内膜异位症(EMS)孕妇有无补充叶酸其女性胎儿脐血EMS易感基因HOXA10启动区CpG岛甲基化状态,探讨叶酸优化宫内环境的作用.方法 收集标本2010年1月～2012年12月21例患有EMS孕妇服用和15例未服用叶酸的女性胎儿脐血标本,利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)及亚硫酸氢盐修饰后测序(BSP)检测和比较各组HOXA10的甲基化率.结果 补充叶酸组女性胎儿EMS易感基因HOXA10甲基化率显著降低,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 提示叶酸在预防胎源性EMS易感基因HOXA10异常甲基化中可能起一定作用.
作者：刘木彪；黄雪梅；许苏容；李蕾 刊期： 2013年第06期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
