黄威；毛莹莹；刘薇；唐华；揭飞龙；李红卫；顾为望
目的 评估geneX(R)骨水泥用于强化骨质疏松椎体的生物力学性能.方法 对30个新鲜小牛胸腰椎椎体标本(T9-L4)通过注射泵灌注稀盐酸脱钙建立骨质疏松椎体模型.随机分为3组,每组10例.制成压缩性骨折模型后,3组分别实施geneX(R)骨水泥、硫酸钙骨水泥(cSc)、聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥(PMMA)椎体成形术,记录骨水泥完本填充时的骨水泥注射量,测试标本的强度和刚度,记录各组的强度和刚度并进行比较.结果 30个小牛胸腰椎体初始骨密度为(1.425±0.072) g/cm2,脱钙后骨密度为(1.074±0.065)g/c m2,脱钙后骨密度明显低于脱钙前骨密度(P＜0 05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组注射量分别(4.3±0.8)、(4 2±0.7)和(3.8±0.4) ml,3组之间无显著性差异(P＞0.05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组强度分别(1198±529)、(1212±430)和(1672±704)N,geneX(R)组、CSC组显著低于PMMA组强度(P＜0.05),3组均明显高于椎体初始强度(P＜0.05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组刚度分别为(233±130)、(242±191)与(323±145)N/mm,3组间无显著性差异(P＞0.05),3组刚度均低于椎体初始刚度,但统计学无明显差异(P＞0.05).结论geneX(R)水泥椎体成形术用于骨质疏松压缩性骨折能满足对椎体填充材料的生物力学要求.
作者：张树芳；江建明；朱青安；黄志平 刊期： 2012年第06期
对1例病因不明的“广泛皮疹、皮肤剥脱、无尿、全身浮肿、呼吸困难”患者行持续血液净化治疗,动态观察各器官损伤情况的变化,之后在患者病变部位行组织活检.患者病理结果为多发性肌炎/皮肌炎,持续性血液净化治疗开始后心、肝、肾、肺各项指标快速好转,表现为尿量快速增加,肺部炎症逐渐减轻,血肌酐、尿素、总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶和乳酸脱氧酶水平快速回落,治疗结束后各项生化指标仍保持下降趋势,患者顺利出院.持续性血液净化在本例重症多发性肌炎/皮肌炎的治疗中疗效显著,在自身免疫性疾病,尤其是全身性炎症疾病的急性期可以作为一种治疗选择.
作者：刘占国；周健；岑仲然；唐颖；杨祥锐；常平 刊期： 2012年第06期
目的 通过对人工耳蜗植入手术相关的后鼓室及上鼓室解剖结构进行观察、测量,为人工耳蜗植入手术中顺利找到并准确定位鼓阶入口提供理论参考.方法 对20侧成人颞骨标本进行解剖,模拟人工耳蜗植入术,在手术显微镜下观察、测量与人工耳蜗植入手术相关的解剖数据.结果 砧骨短脚至圆窗龛之间的距离为(5.91±0.29) mm;镫骨头至圆窗龛之间的距离为(2.11±0.18) mm；面神经垂直段至圆窗龛之间的距离为(6.70±0.1 9)mm;锥隆起至圆窗膜前缘之间的距离为(2.22±0.21)mm；镫骨头至圆窗膜下缘之间的距离为(2.16±0.14) mm；鼓阶入口与卵圆窗近距离为(2.12±0.1 9)mm;匙状突至圆窗龛之间的距离为(3.79±0.17)mm;镫骨头至耳蜗第二回切开点之间距离为(2.25±0.13)nn；锥隆起至耳蜗第二回转切开点之间距离为(2.28±0.20) mm.结论 人工耳蜗植入手术中切开耳蜗底回的位置位于锥隆起前下方约2.22 mm处；切开耳蜗第二回的位置位于锥隆起前上方约2.28 mm处；根据病人不同情况,为术中选择不同的鼓阶切开点提供了参考.
作者：邹团明；郭梦和；张宏征；舒繁；谢南屏 刊期： 2012年第06期
目的 构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-1L- 12-GB,验证以上免疫调节因子基因在293T细胞的表达以及IL-12基因在活体内的表达.方法 将人1L-12基因克隆到早期构建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真核表达质粒的上游,将其构建成为pVAX-IL-12-GB重组质粒:利用脂质体法瞬时转染293T细胞,RT-PCR检测IL-12和GM-CSF-B7,1基因的转录,ELISA法检测细胞上清中上游IL-12基因和下游GM-CSF基因的蛋白表达,流式细胞术及免疫荧光检测下游B7.1基因的表达；利用电穿孔方法递送质粒进入小鼠股四头肌,免疫组化法检测IL-12基因在小鼠活体内的表达情况.结果 双酶切以及PCR鉴定获得的片段均与预期的片段大小一致,测序分析证实IL-12基因序列完全正确；瞬时转染293T细胞后,分别验证了人IL-12,GM-CSF和B7.1基因的mRNA转录和蛋白表达；电穿孔递送质粒后,活体肌肉组织内同样可以检测到IL-12基因的表达.结论 成功构建了可以同时表达人IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂,为下一步开展肿瘤免疫基因治疗研究奠定了坚实的基础.
作者：董金凯；高江平；阎瑾琦；张亮；肖毅；王伟；王晓雄；于继云 刊期： 2012年第06期
目的 观察野百合碱诱导小型猪肺动脉高压模型不同时期心肺组织的病理变化.方法 12头雄性西藏小型猪,4.0～4.5月龄,体质量15.0～18.0 kg.测定12头小型猪平均肺动脉压作为基础值；然后选择10头小型猪腹腔注射野百合碱(MCT)10.0 mg/kg;给药4周和8周后再分别测定小型猪平均肺动脉压.分别于4、8周处死两头小型猪,采样观察小型猪心肺组织病理改变情况.结果 给药4周和8周后,西藏小型猪的肺动脉压力与人体相近,正常平均肺动脉压约为(15.19±0.70) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa);给药4周后平均肺动脉压升至(19.69±2.47) mmHg;给药8周后升至(25.62±4.88) mmHg,与基础压相比均有显著差异(P＜0.01).组织病理学分析显示,给药4周后即可形成有意义的病理改变,右心室肥厚；8周后有明显的病理学改变,如右心室纤维化和肺动脉中层增厚.结论 MCT给药8周后,造成肺动脉压力升高和肺血管重构,可以诱导西藏小型猪形成慢性肺动脉高压模型.
作者：赵瑾；刘蓉；李洪涛；张新凤；刘宝骅；吴清洪；钱元新；顾为望 刊期： 2012年第06期
目的 观察重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1cα(HIF-1α)对人微血管内皮细胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白表达的影响.方法 三突变型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空载腺病毒载体(Ad-Null)分别在HEK293A细胞大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,终点稀释法测定病毒滴度；双荧光素酶报告系统检测三突变型HIF-1α与野生型HIF-1α的转录活性；各重组腺病毒载体以佳转染复数转染体外培养的hMVECs,Westem blotting测定HIF-1α和VEGF蛋白表达；MTS检测Ad-HIF-1α564/402/803对细胞增殖的影响.结果 三突变型HIF-1α转录活性显著高于野生型HIF-1α(P＜0.001):Ad-HIF-1α564/402/803组HIF-1α和VEGF蛋白表达量高于Ad-HIF-1αnature及其他组；VEGF蛋白表达水平与HIF-1α呈剂量依赖关系.Ad-HIF-1α564/402/803组第3、5天吸光度值均显著高于Ad-HIF-1αnature及其他组(P＜0.01).结论 三突变型HIF-1α在体外常氧条件下稳定高效表达,可诱导hMVECs VEGF蛋白表达上调,促进hMVECs增殖.
作者：裴静娴；王月刚；刘城；魏璇；李明琰；陈建威；吴平生 刊期： 2012年第06期
目的 探讨B7-H1在同种异体小鼠角膜移植术后眼球组织表达情况,及其对角膜免疫赦免的影响.方法 建立同种异体小鼠角膜移植实验模型.按Sonoda方法对角膜混浊及新生血管指数进行评分,8周后将实验小鼠分为存活组和排斥组,并取8只正常小鼠为对照组.取3组小鼠眼球组织行免疫组化检测B7-H1表达情况.结果 正常小鼠角膜及虹膜睫状体表达B7-H1,移植术后存活小鼠角膜及虹膜睫状体高度表达B7-H1,而移植术后排斥的小鼠角膜及虹膜睫状体未见明显表达B7-H1.结论 B7-H1可能参与了同种异体小鼠角膜移植术后的免疫反应,可能在免疫赦免现象中发挥重要作用.
作者：黄晓环；吴京；于健；熊柯；马明 刊期： 2012年第06期
目的 探讨食管癌切除食管胃颈部机械吻合及手工吻合两种手术方式的并发症及防治.方法 2004年9月～2008年6月,将颈段及胸中、上段食管癌并具有手术适应症的患者随机分为两组即手工吻合组(手工组)和圆形吻合器机械吻合组(机械组),比较两组吻合口瘘、狭窄等的并发症.结果 手工组125例,机械组102例,吻合瘘发生率分别为14.4％(18/125)、2.9％(3/102),狭窄需扩张分别为8.8.％(11/125),3.9％(4/102).颈部吻合时间分别为(52±12)min和(25±5)rn in,差别显著(P＜0.01).结论 食管癌切除食管胃颈部采用圆形吻合器端侧吻合吻合口瘘发生率低,手术时间缩短,操作简便,易于掌握及标准化,有利于降低吻合口的并发症.
作者：蔡瑞君；李梅；熊刚；蔡开灿；王武军 刊期： 2012年第06期
目的 通过组织病理学观察联合应用乌司他丁和胸腺肽α1治疗严重脓毒症的效果.方法 采用经典大鼠CLP脓毒症模型,全部动物随机分为对照组、联合治疗组(乌司他丁+胸腺肽α1)、乌司他丁治疗组和胸腺肽α1治疗组.制模成功后分别于6、24、48和72 h经尾静脉或皮下注射给药,记录每天死亡数.制模后24、48、72和96h处死动物,留取心、肝、脾、肺、肾、小肠标本,以光镜进行病理学检查,脾脏标本行凋亡检测.结果 联合治疗组死亡率显著降低(P=0.0325)；组织病理学显示,对照组各脏器损害严重,单药组其次,联合用药组轻；此外,对照组脾脏细胞大量凋亡,联合用药组凋亡程度显著下降[ (47.4±10.9)％vs(39.3±11.4)％,P=0.0000].结论 乌司他丁和胸腺肽α1联合用药可以显著减轻脓毒症大鼠脏器损害,抑制脾脏细胞凋亡,提高脓毒症大鼠存活率.
作者：郭剑颖；邓群；郭旭升；刘双庆；张玉红；何忠杰；林洪远 刊期： 2012年第06期
目的 探讨糖基化抑制剂衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关的分子机制.方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制的影响；集落克隆形成法检测药物对细胞集落克隆形成的影响；碘化丙啶单染流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡率的变化；caspase-3活性检测试剂盒检测药物作用后24 h caspase-3的活性变化；Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达及葡萄糖调节蛋白78的表达.结果 不同浓度衣霉素和/或顺铂对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞具有显著的增殖抑制作用,3 μmol/L衣霉素处理人鼻咽癌细胞的24、36、48 h后细胞的存活率分别为72.13％、51.97％、37.56％和85.61％、56.95％、43.66％,3 μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 24、36、48 h的存活率低于单用衣霉素、顺铂组,分别为67.97％、47.76％、34.68％和56.89％、37.05％、29.30％.0.3 μnol/L衣霉素可增强0.6 μmol/L顺铂抑制人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的集落克隆形成的作用.3 μmol/L衣霉素诱导CNE-l、CNE-2细胞48 h的凋亡率分别为8.89％、8.67％.3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂联合刺激人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 48 h的凋亡率分别为37.02％、32.25％,分别高于顺铂本身诱导的凋亡率7.25％、6.36％.促进凋亡蛋白Bax的表达联合用药组高于单独用药组,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达联合用药组低于单独用药组.衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组caspase-3的活性.结论 衣霉素增强顺铂对人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用,衣霉素增强顺铂诱导人鼻咽癌细胞的凋亡作用,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加caspase-3的活性.
作者：宋乐乐；马琳艳；张旭东；蒋志文；刘浩；蒋琛琛 刊期： 2012年第06期
目的 观察利拉鲁肽对糖耐量异常大鼠胰岛炎症因子白细胞介素-1β(IL-1p)和凋亡基因caspase3表达的影响.方法 12周龄糖耐量异常OLETF大鼠分为生理盐水组和不同剂量利拉鲁肽干预组(50、100、200μg/kg),8只LETO作为正常对照组.实验12周结束时,所有大鼠均检测糖耐量试验空腹及服糖后30 ruin胰岛素,并检测胰岛IL-1β和caspase3mRNA和蛋白水平.结果 利拉鲁肽干预的糖耐量异常大鼠和生理盐水干预组相比,胰岛IL-1p和caspase3表达显著降低,血糖、胰岛β细胞功能及早期胰岛素分泌指数明显改善.结论 利拉鲁肽可能通过抑制胰岛IL-1β炎症因子表达,从而改善胰岛功能及糖代谢,延缓或阻止糖尿病发生发展.
作者：郭南京；孙嘉；陈宏；徐艳花；高飞；张桦；张振；蔡德鸿 刊期： 2012年第06期
目的 构建适用于快速高效植物瞬时表达系统的实验室烟草无土栽培体系.方法 优化烟草的无土栽培条件,基于Geminivirus新型植物高效瞬时表达系统,观察烟草品种、侵染时机、侵染工程菌浓度、侵染后叶片采收时间对无土栽培烟草表达绿色荧光蛋白(GFP)的影响,以Western blot和ELISA分析GFP表达情况.结果 烟草无土培育的佳条件为:光照强度9000LX层,光照时间16 h/d,日/夜温度28/21℃,相对湿度80％.侵染工程菌的佳D600为0.8；叶片采收佳时间为侵染后4d;本明烟和豫烟5号佳侵染时机分别为第6周和第5周；工程菌pBYGFPDsRed.R/LBA4404侵染的本明烟和豫烟5号均能高效表达GFP;豫烟5号的平均生物量高于本明烟.结论 基于人工气候箱成功构建了实验室烟草无土栽培体系,并可实现GFP在本明烟和豫烟5号的快速高效表达.
作者：莫倩珍；麦荣嘉；杨志晓；陈敏芳；杨铁钊；赖华芳；杨培梁；陈强；周晓红 刊期： 2012年第06期
目的 探讨退变椎间盘分型中转化生长因子(TGF-β1)表达的意义.方法 收集正常与退变椎间盘组织,并根据病理改变把退变椎间盘组织分为Ⅳ级,采用HE染色,Western bloting和RT-PCR方法分析TGF-β1的表达情况.结果 HE染色、Westernbloting和RT-PCR均显示:在正常组织中TGF-β1有表达；在病变组织中并随病理分型增加TGF-β1随之增加,退变与正常组比较以及IV型与I型比较具有及显著差异(P＜0.01).结论 TGF-β1是引起椎间盘退变的重要原因,并且与病理的形态学分型密切相关.
作者：杨旸；何晓峰；李彦豪；冯建宇；庞桦进；王江云；刘庆 刊期： 2012年第06期
目的 研究低分子肝素(LMWH)对子痫前期样大鼠胎盘组织的抗细胞凋亡作用.方法 将孕鼠随机分为正常孕组、子痫前期组(PE组)及LMWH治疗组,每组10只.PE组及LMWH治疗组孕鼠均于妊娠第13天开始给予左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)200 mg/(kg·d)皮下注射,共4d,建立子痫前期样孕鼠模型.PE组于妊娠第15～20天给予生理盐水0.5 ml皮下注射,LMWH治疗组于妊娠第15～20天给予LMWH 40 μl/(kg,d)皮下注射.检测各组血压、尿蛋白、鼠胎数、鼠胎质量及胎盘质量,对LMWH疗效进行评价；采用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡率,Westem blotting法检测胎盘组织中活化caspase-3、Bel-2及Bax蛋白表达.结果 PE组大鼠血压及尿蛋白均显著高于正常孕组(P＜0.05),鼠胎数及鼠胎质量显著降低(P＜0.05).LMWH治疗组血压及尿蛋白较PE组明显降低(P＜0.05),但仍显著高于正常孕组(P＜0.05),鼠胎数及鼠胎质量较PE组显著增高(P＜0.05),鼠胎质量显著低于正常孕组(P＜0 05),而鼠胎数与正常孕组无显著差异(P＞0.05).与正常孕组相比,PE组胎盘组织细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),活化caspase-3及Bax蛋白表达显著升高(P＜0.05),而Bcl-2蛋白表达则显著降低(P＜0.05);LMWH治疗组胎盘凋亡率及活化caspase-3蛋白表达较PE组显著降低(P＜0.05),Bcl-2显著升高,而Bax则显著降低(P＜0.05),与正常孕组比均无显著差异(P＞0.05).结论 LMWH可以有效改善子痫前期样症状,减少子痫前期样大鼠胎盘细胞凋亡,这一作用可能通过调节Bcl-2/Bax平衡抑制细胞凋亡.
作者：张园；钟梅；刘凤岩 刊期： 2012年第06期
目的 研究MnSOD单核苷酸多态性位点rs4880与广东鼻咽癌发生风险的关系.方法 选择105例经病理证实的鼻咽癌患者为病例组,136例同期经南方医院查体中心证实的健康体检者为对照组,应用PCR法检测MnSOD基因Ala-9Val的多态性分布,比较不同基因型与鼻咽癌的相关关系.结果 中国汉族广东人Ala携带者占19.1％.病例组和对照组3种基因型Val/Val、Val/Ala、Ala/Ala的频率分别为83.8％、14.3％、1.9％和80.9％、16.9％、2.2％,各基因型在两组间分布无显著性差异.基因型Val/Ala与鼻咽癌的淋巴结转移显著相关(OR=0.308,95％CI=0.095-0.996),进一步年龄分层,这种杂合子与肿瘤淋巴结转移的关系在年长人群(＞30岁)中同样存在(OR=0.227,95％C1=0.064-0.804),但在年青人群(≤30岁)中不存在,然而等位基因Ala的分布与淋巴结转移无显著关系(OR=1.987,95％CI=0.707-5.583).各基因型在不同T、M、临床分期和病理分型的鼻咽癌患者的等位基因表达频率均无明显差异.结论 MnSOD基因Ma-9Val多态性可能与地域、种族相关；基因型Val/Ala可能与鼻咽癌淋巴结转移有关,各基因型与广东地区鼻咽癌易感性无明显相关.
作者：叶尔佳；张应蒙；王宏梅；石玉生；陈龙华 刊期： 2012年第06期
目的 通过非介入式的生理参数的监测,评估精神疲劳.方法 根据实验对象的反应时间在反应时测试实验过程中伴随疲劳而发生的变化,记录14例实验对象疲劳过程前后的皮肤电活动、心率、心率变异性3组生理参数,并进行统计分析.结果 人体清醒和精神疲劳状态下的平均皮肤电导水平、平均心率、总功率密度、极低频功率密度占总功率密度百分比、高频功率密度占总功率密度百分比均有显著性差异.结论 通过监测皮肤电活动、心率和心率变异性等生理参数对人体精神疲劳进行评估的方法具有无创、有效和实用的特点,有较好的运用前景.
作者：夏岚；王见荣；梁妃学；李伟龙；郭劲松；邓亲恺 刊期： 2012年第06期
目的 利用细胞电融合技术制备外周血来源树突状细胞(DC)和三阴乳腺癌细胞(MDA-MB-231)全抗原肿瘤疫苗,观察其特异性抗肿瘤免疫效应.方法 从健康人外周血中分离培养DC,利用电融合技术,将DC和三阴乳腺癌细胞融合；荧光显微镜观察融合疫苗的形态；流式细胞仪进行融合疫苗的表型鉴定；ELlSA试剂盒检测IL-12、IFN-y的分泌情况；CCK-8试剂盒测定融合疫苗刺激同源异体T淋巴细胞增殖和细胞毒性效应.结果 成功分离培养DC,其表面高表达DC的分子标记CD83、CD11c、CD86、HLA-DR;融合疫苗形态不规则,其表面共同表达DC和三阴乳腺癌的标记分子；T淋巴细胞增殖实验证明融合疫苗有很强的免疫刺激活性；细胞毒性实验证明融合疫苗具有比对照组更强的杀伤肿瘤细胞作用.结论 电融合技术成功诱导DC和三阴乳腺癌细胞融合,全抗原融合疫苗体外实验可显著增强抗肿瘤免疫效应.
作者：张鹏；刘瑞磊；姜华；刘宇；张翘楚；黄勇 刊期： 2012年第06期
目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)是否通过调控转录因子NFAT1的表达参与肝内胆管癌的发展及恶性生物学行为.方法 构建表达HCV C核心蛋白的真核表达质粒pEGFP-N3-HCV C,通过瞬时转染pEGFP-N3-HCV C质粒,RT-PCR检测肝内胆管癌RBE细胞中NFATl mRNA的表达情况,Western blot检测NFAT1蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化情况.结果 转染HCV C后胆管癌细胞NFAT1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,差异具有显著性(P＜0.05)；HCV C能够促进细胞向G2/M期进展及使细胞增殖能力增加.结论 HCV C可上调胆管癌细胞中NFAT1基因的表达,促进细胞周期进展及胆管癌细胞增殖,可能与肝内胆管癌的发展有关.
作者：廖巧芳；李志花；陈汝福；郭宁；曾兵；程帝；郑礼平 刊期： 2012年第06期
目的 比较3种不同血清型腺相关病毒(AAV)介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率.方法 原代分离培养西藏小型猪胚胎成纤维细胞并进行形态学鉴定,按照感染复数(MOI)为103、104、105转染传代两次的猪胚胎成纤维细胞,流式细胞学检测不同血清型AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率,并在倒置显微镜下观察转染后绿色荧光的表达强度；同时,应用MTT方法检测不同血清型AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的毒性.结果 腺相关病毒AAV2-EGFP对PFF的转染效率随MOI值的增加而增高,MOI为103、1 04、105时,转染效率分别为(33.68±1.18)％、(50.80±2.59)％和(60.08±1.08)％,而其他两种血清型病毒感染效率均低于AAV2-EGFP.3种病毒转染PFF过程中,细胞生长正常,MTT显示各个转染组与对照组(未转染组)在D570处吸光度无显著差异.结论 AAV2血清型载体对体外培养的猪胚胎成纤维细胞的感染效率显著高于其他几种血清型,AAV8和AAV9对PFF感染能力极差,筛选AAV2作为西藏小型猪基因打靶的适病毒载体；同时,3类血清型病毒载体对猪胚胎成纤维细胞均无明显细胞毒性.
作者：黄威；毛莹莹；刘薇；唐华；揭飞龙；李红卫；顾为望 刊期： 2012年第06期
目的 建立一套简单有效的单个肿瘤干细胞分离及培养方法,提高研究的效率与质量.方法 在火焰上轻烤拉伸后的毛细管,与无菌塑料管连接建立口控毛细管单细胞分离装置.分离单个SW480细胞无血清培养筛选出克隆球,CD133、CK7荧光标记鉴定；消化克隆球吸取单个肿瘤干细胞并移至石蜡油封闭的微滴及96孔板中培养对比观察.结果 SW480细胞克隆形成率约为1.04％,其CD133表达强CK7表达弱；口控毛细管单细胞分离装置分离单个肿瘤干细胞的有效率可高达98.99％;单个肿瘤干细胞在微滴中培养与在96孔板中培养的比较:在分裂时间点上,前两次分裂时间相差无几(P＞0.05),在微滴中培养的细胞后续分裂需时较长；在持续扩增的数量上,微滴培养为11.5％(22/192)而96孔板为9.2％(17/184),两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 单个SW480细胞无血清培养可形成肿瘤干细胞球,口控单细胞分离装置能够有效分离单个肿瘤干细胞,石蜡油封闭微滴培养法和96孔板培养法均能够有效扩增单个肿瘤干细胞.但石蜡油封闭微滴培养法操作灵活、观察便捷、环境稳定,可作为培养单个肿瘤干细胞的首选.
作者：邓永键；蒋强；于莉娜；王红霞；胡纯婷；刘超；丁彦青 刊期： 2012年第06期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
