学术投稿

快速高效植物瞬时表达的实验室烟草无土栽培体系的构建

莫倩珍;麦荣嘉;杨志晓;陈敏芳;杨铁钊;赖华芳;杨培梁;陈强;周晓红

关键词:烟草, 瞬时表达, 无土栽培, 绿色荧光蛋白
摘要:目的 构建适用于快速高效植物瞬时表达系统的实验室烟草无土栽培体系.方法 优化烟草的无土栽培条件,基于Geminivirus新型植物高效瞬时表达系统,观察烟草品种、侵染时机、侵染工程菌浓度、侵染后叶片采收时间对无土栽培烟草表达绿色荧光蛋白(GFP)的影响,以Western blot和ELISA分析GFP表达情况.结果 烟草无土培育的佳条件为:光照强度9000LX层,光照时间16 h/d,日/夜温度28/21℃,相对湿度80%.侵染工程菌的佳D600为0.8;叶片采收佳时间为侵染后4d;本明烟和豫烟5号佳侵染时机分别为第6周和第5周;工程菌pBYGFPDsRed.R/LBA4404侵染的本明烟和豫烟5号均能高效表达GFP;豫烟5号的平均生物量高于本明烟.结论 基于人工气候箱成功构建了实验室烟草无土栽培体系,并可实现GFP在本明烟和豫烟5号的快速高效表达.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 利拉鲁肽对糖耐量异常OLETF大鼠胰岛白细胞介素-1β表达的影响

    目的 观察利拉鲁肽对糖耐量异常大鼠胰岛炎症因子白细胞介素-1β(IL-1p)和凋亡基因caspase3表达的影响.方法 12周龄糖耐量异常OLETF大鼠分为生理盐水组和不同剂量利拉鲁肽干预组(50、100、200μg/kg),8只LETO作为正常对照组.实验12周结束时,所有大鼠均检测糖耐量试验空腹及服糖后30 ruin胰岛素,并检测胰岛IL-1β和caspase3mRNA和蛋白水平.结果 利拉鲁肽干预的糖耐量异常大鼠和生理盐水干预组相比,胰岛IL-1p和caspase3表达显著降低,血糖、胰岛β细胞功能及早期胰岛素分泌指数明显改善.结论 利拉鲁肽可能通过抑制胰岛IL-1β炎症因子表达,从而改善胰岛功能及糖代谢,延缓或阻止糖尿病发生发展.

    作者:郭南京;孙嘉;陈宏;徐艳花;高飞;张桦;张振;蔡德鸿 刊期: 2012年第06期

  • RhoA在缺氧诱导的乳腺癌细胞VEGF分泌和血管内皮细胞增殖、迁移及管腔形成中的作用

    目的 观察RhoA在缺氧诱导下对乳腺癌细胞MCF-7分泌VEGF水平的影响,以及对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖、迁移和管腔形成的作用.方法 ELISA检测缺氧条件下MCF-7细胞中RhoA的活化与失活对VEGF分泌水平的影响;建立MCF-7/HUVEC共培养模型,观察在缺氧刺激下MCF-7细胞中RhoA活性的变化对HUVEC增殖、迁移和管腔形成的影响.结果 缺氧条件下,活性RhoA可以促进MCF-7细胞VEGF分泌,沉默RhoA可以抑制VEGF分泌;在共培养模型中,当MCF-7细胞中RhoA活化时,可以促进HUVEC增殖、迁移和管腔形成,而MCF-7细胞中RhoA沉默时,则HUVEC的上述生物学行为受到抑制.结论 在缺氧刺激下,RhoA可能通过调控肿瘤细胞VEGF的表达水平,间接影响HUVEC的增殖、迁移和管腔形成能力,从而参与肿瘤新生血管的形成过程.

    作者:马骥;赵庆丽;任晖;刘文超;薛妍 刊期: 2012年第06期

  • PCR-STR在肝移植后移植物抗宿主病中的诊断意义

    目的 为了准确地识别肝脏移植物的植入状态,探讨多聚酶链反应-短串联重复序列(PCR-STR)技术在肝移植后移植物抗宿主病中的预测和诊断意义.方法 建立荧光标记PCR-STR等位基因分析技术,采用单克隆磁珠提取DNA,四色荧光标记,于移植前和移植后1周内,采集供、受血液DNA作PCR-STR分析.结果 23例患者中,5例患者供受者HLA完全嵌合表达,其中2例发生移植物抗宿主病(GVHD),均治疗无效死亡,另外3例未发生GVHD,顺利恢复出院,GVHD发生率40%.18例患者术后未发生嵌合表达,其中1例发生GVHD,家属放弃治疗出院,GVHD发生率5.6%,两组有显著差别.结论 基于分子水平的多位点PCR-STR可以提供肝脏移植后供体植入信息,在肝移植后移植物抗宿主病的诊断中具有一定的预测意义.

    作者:陈小平;骆利敏;罗敏;肖露露 刊期: 2012年第06期

  • 甲状腺激素转运体MCT8在2VO大鼠脑组织中的表达

    目的 探讨2VO大鼠脑组织中甲状腺激素转运体MCT8在不同缺血时间点基因水平的变化规律.方法 25只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、2VO 3 d组、2VO 2周组和2VO 5周组.采用免疫荧光法观察MCT8在正常大鼠侧脑室中的表达;采用双侧颈总动脉永久性结扎术制备脑缺血模型,术后各组大鼠于实验终点采用荧光定量PCR法测定脑组织中甲状腺激素转运体MCT8 mRNA的表达水平.结果 免疫荧光法观察到MCT8在正常大鼠侧脑室的血管内皮细胞膜上表达丰富;中枢甲状腺激素转运体MCT8 mRNA水平在2VO 3 d组及2VO 2周组与正常组相比较差异无统计学意义(P=-0.909,P=0.694);MCT8 mRNA水平在2VO 5周组较正常组及2VO 3 d组明显增高(P=0.029,P=0.023),与2VO 2周组相比较差异无统计学意义(P=0.065).结论 中枢甲状腺激素转运体MCT8基因水平在脑缺血后呈逐渐代偿性增高趋势.

    作者:崔丹;管玉青;蒋海山;汪槿;席蕾;王群 刊期: 2012年第06期

  • 阿西替尼联合5-FU对移植人肠癌细胞的裸鼠的治疗作用

    目的 探讨阿西替尼联合5-FU对肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其毒性作用.方法 肠癌LoVo细胞移植瘤裸鼠随机分为5组:空白对照组、溶剂对照组、阿西替尼组、5 -FU组和联合用药组,分别给予处理.观察各组裸鼠肿瘤大体形态,并测定裸鼠体质量、肿瘤大小及计算瘤质量、完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、T2(治疗后肿瘤增长至治疗前瘤体积2倍所需的时间)和肿瘤生长延迟时间(TGD),记录动物死亡率.结果 联合用药组疗效优于阿西替尼及5-FU单药组.治疗后第30天联合用药组瘤质量小于对照组及阿西替尼和5-FU单药组(P<0.01).联合用药组T2(29.05 d)长于阿西替尼(19.31 d)和5-FU组(21.22 d).联合用药组的TGD达16.73 d,较阿西替尼单药组和5-FU单药组的8.53 d和9.72 d,明显延长.除了空白对照组没有裸鼠死亡之外,其余4组均有1只死亡,死亡率未超过20%.此外,各组裸鼠的体质量下降也均未超过20%.阿西替尼组及联合组中各有1例获得部分缓解(PR).阿西替尼组及联合用药组的瘤组织ABCG2蛋白水平较对照组表达显著下降(P<0.05),而5-FU组的ABCG2表达水平则较对照组无显著差异(P>0.05).结论 在人肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤模型中,阿西替尼和5-FU单药均能抑制肿瘤生长,两者联合使用显示出更强的抗肿瘤作用.两药剂量范围内的联合具有较佳的耐受性和安全性.

    作者:赵佳;招婷;谢锋伟;何本夫 刊期: 2012年第06期

  • MnSOD基因单核苷酸多态性位点rs4880与广东鼻咽癌的相关性

    目的 研究MnSOD单核苷酸多态性位点rs4880与广东鼻咽癌发生风险的关系.方法 选择105例经病理证实的鼻咽癌患者为病例组,136例同期经南方医院查体中心证实的健康体检者为对照组,应用PCR法检测MnSOD基因Ala-9Val的多态性分布,比较不同基因型与鼻咽癌的相关关系.结果 中国汉族广东人Ala携带者占19.1%.病例组和对照组3种基因型Val/Val、Val/Ala、Ala/Ala的频率分别为83.8%、14.3%、1.9%和80.9%、16.9%、2.2%,各基因型在两组间分布无显著性差异.基因型Val/Ala与鼻咽癌的淋巴结转移显著相关(OR=0.308,95%CI=0.095-0.996),进一步年龄分层,这种杂合子与肿瘤淋巴结转移的关系在年长人群(>30岁)中同样存在(OR=0.227,95%C1=0.064-0.804),但在年青人群(≤30岁)中不存在,然而等位基因Ala的分布与淋巴结转移无显著关系(OR=1.987,95%CI=0.707-5.583).各基因型在不同T、M、临床分期和病理分型的鼻咽癌患者的等位基因表达频率均无明显差异.结论 MnSOD基因Ma-9Val多态性可能与地域、种族相关;基因型Val/Ala可能与鼻咽癌淋巴结转移有关,各基因型与广东地区鼻咽癌易感性无明显相关.

    作者:叶尔佳;张应蒙;王宏梅;石玉生;陈龙华 刊期: 2012年第06期

  • 基于三维技术的保护性肝切除治疗肝胆管结石

    目的 评价基于三维技术的保护性肝切除治疗肝胆管结石的临床应用价值.方法 采用MI-3DVS软件对21例肝胆管结石患者上腹部64排多层螺旋CT薄层图像进行三维重建及可视化仿真手术,制定手术规划,指导临床施行保护性肝切除术.观察实际肝切除方式与仿真手术符合情况,平均手术时间及住院日,术中出血量,结石取尽情况及术中术后并发症发生情况等.结果 21例患者实际肝切除方式与仿真手术一致,与常规的规则性肝切除术相比,均不同程度的保留功能正常的肝脏组织,平均手术时间(215.2±51.3)min,住院时间(10.7±4.3)d,术中出血量(301.4±60.7)ml,结石取尽率为95.2%(20/21),手术并发症发生率为19.0%(4/21).结论 基于三维技术的保护性肝切除治疗肝胆管结石,在实现取尽结石、祛除病灶、解除狭窄、通畅引流的同时,能大程度保留残肝体积,并降低肝切除相关并发症的发生.

    作者:方驰华;陈建新;范应方;杨剑;项楠;游锦华 刊期: 2012年第06期

  • 三阴乳腺癌细胞-树突状细胞融合疫苗的抗肿瘤免疫效应

    目的 利用细胞电融合技术制备外周血来源树突状细胞(DC)和三阴乳腺癌细胞(MDA-MB-231)全抗原肿瘤疫苗,观察其特异性抗肿瘤免疫效应.方法 从健康人外周血中分离培养DC,利用电融合技术,将DC和三阴乳腺癌细胞融合;荧光显微镜观察融合疫苗的形态;流式细胞仪进行融合疫苗的表型鉴定;ELlSA试剂盒检测IL-12、IFN-y的分泌情况;CCK-8试剂盒测定融合疫苗刺激同源异体T淋巴细胞增殖和细胞毒性效应.结果 成功分离培养DC,其表面高表达DC的分子标记CD83、CD11c、CD86、HLA-DR;融合疫苗形态不规则,其表面共同表达DC和三阴乳腺癌的标记分子;T淋巴细胞增殖实验证明融合疫苗有很强的免疫刺激活性;细胞毒性实验证明融合疫苗具有比对照组更强的杀伤肿瘤细胞作用.结论 电融合技术成功诱导DC和三阴乳腺癌细胞融合,全抗原融合疫苗体外实验可显著增强抗肿瘤免疫效应.

    作者:张鹏;刘瑞磊;姜华;刘宇;张翘楚;黄勇 刊期: 2012年第06期

  • 丙型肝炎病毒核心蛋白对胆管癌细胞NFAT1基因表达的影响

    目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)是否通过调控转录因子NFAT1的表达参与肝内胆管癌的发展及恶性生物学行为.方法 构建表达HCV C核心蛋白的真核表达质粒pEGFP-N3-HCV C,通过瞬时转染pEGFP-N3-HCV C质粒,RT-PCR检测肝内胆管癌RBE细胞中NFATl mRNA的表达情况,Western blot检测NFAT1蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化情况.结果 转染HCV C后胆管癌细胞NFAT1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,差异具有显著性(P<0.05);HCV C能够促进细胞向G2/M期进展及使细胞增殖能力增加.结论 HCV C可上调胆管癌细胞中NFAT1基因的表达,促进细胞周期进展及胆管癌细胞增殖,可能与肝内胆管癌的发展有关.

    作者:廖巧芳;李志花;陈汝福;郭宁;曾兵;程帝;郑礼平 刊期: 2012年第06期

  • 低分子肝素抑制子痫前期样大鼠胎盘细胞凋亡

    目的 研究低分子肝素(LMWH)对子痫前期样大鼠胎盘组织的抗细胞凋亡作用.方法 将孕鼠随机分为正常孕组、子痫前期组(PE组)及LMWH治疗组,每组10只.PE组及LMWH治疗组孕鼠均于妊娠第13天开始给予左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)200 mg/(kg·d)皮下注射,共4d,建立子痫前期样孕鼠模型.PE组于妊娠第15~20天给予生理盐水0.5 ml皮下注射,LMWH治疗组于妊娠第15~20天给予LMWH 40 μl/(kg,d)皮下注射.检测各组血压、尿蛋白、鼠胎数、鼠胎质量及胎盘质量,对LMWH疗效进行评价;采用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡率,Westem blotting法检测胎盘组织中活化caspase-3、Bel-2及Bax蛋白表达.结果 PE组大鼠血压及尿蛋白均显著高于正常孕组(P<0.05),鼠胎数及鼠胎质量显著降低(P<0.05).LMWH治疗组血压及尿蛋白较PE组明显降低(P<0.05),但仍显著高于正常孕组(P<0.05),鼠胎数及鼠胎质量较PE组显著增高(P<0.05),鼠胎质量显著低于正常孕组(P<0 05),而鼠胎数与正常孕组无显著差异(P>0.05).与正常孕组相比,PE组胎盘组织细胞凋亡率显著升高(P<0.05),活化caspase-3及Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达则显著降低(P<0.05);LMWH治疗组胎盘凋亡率及活化caspase-3蛋白表达较PE组显著降低(P<0.05),Bcl-2显著升高,而Bax则显著降低(P<0.05),与正常孕组比均无显著差异(P>0.05).结论 LMWH可以有效改善子痫前期样症状,减少子痫前期样大鼠胎盘细胞凋亡,这一作用可能通过调节Bcl-2/Bax平衡抑制细胞凋亡.

    作者:张园;钟梅;刘凤岩 刊期: 2012年第06期

  • 一种新的人血管内皮生长因子基因的剪切体

    目的 探索人胚胎肺组织中是否存在一种新的血管内皮生长因子(VEGF)基因可变剪切形式.方法 对1例4月龄引产胎儿肺组织的总RNA进行逆转录聚合酶链反应、克隆并测定扩增片段的序列.结果 用一对引物(引物5’端-21~7 bp,3’端554~576 bp)可扩增出3条片段,一条为长度正常的VEGF165(619 bp)全长序列,另一条为长度正常的VEGF121(487bp)全长序列,第三条为新的VEGF mRNA异常剪切片段.测序检测显示,此扩增片段长度为639 bp,同样为VEGF165全长核苷酸序列,但在VEGF165的第3和第4外显子之间插入了长度为20bp的碱基片段.序列分析显示此插入序列为滞留的第Ⅲ内含子终末序列,含内含子剪切信号.上述移码突变导致VEGF基因阅读框架发生改变,在第4外显子中游出现终止密码,故仅含-VEGF165外显子l~3及4部分序列,在蛋白水平上可能编码含97个氨基酸的新肽链.结论 在一引产胎儿的肺组织中发现了新的VEGF mRNA可变剪切形式,其生物学意义有待进一步研究.

    作者:周忠江;叶海燕;崔凯;陈向辉;刘伊丽 刊期: 2012年第06期

  • B7-H1对同种异体小鼠角膜移植免疫反应的影响

    目的 探讨B7-H1在同种异体小鼠角膜移植术后眼球组织表达情况,及其对角膜免疫赦免的影响.方法 建立同种异体小鼠角膜移植实验模型.按Sonoda方法对角膜混浊及新生血管指数进行评分,8周后将实验小鼠分为存活组和排斥组,并取8只正常小鼠为对照组.取3组小鼠眼球组织行免疫组化检测B7-H1表达情况.结果 正常小鼠角膜及虹膜睫状体表达B7-H1,移植术后存活小鼠角膜及虹膜睫状体高度表达B7-H1,而移植术后排斥的小鼠角膜及虹膜睫状体未见明显表达B7-H1.结论 B7-H1可能参与了同种异体小鼠角膜移植术后的免疫反应,可能在免疫赦免现象中发挥重要作用.

    作者:黄晓环;吴京;于健;熊柯;马明 刊期: 2012年第06期

  • 体外冲击波碎石单次治疗单发肾结石成功率的预测模型

    目的 探讨体外冲击波碎石(ESWL)治疗肾结石疗效的影响因素,并建立预测模型.方法 2008年1月~2010年2月接受 ESWL治疗的肾结石患者325例,长随访3个月,用x2检验或t检验进行单因素分析患者年龄、性别、体重指数、病程时间、治疗前肾绞痛、血尿、尿路刺激症状、结石位置、惠侧、结石长径、宽径等因素与疗效的关系,筛选出有统计学意义的因素后,再利用Logistic逐步回归多因素分析并建立预测模型.结果 ESWL治疗肾结石成功率76.9%(250/325).单因素分析发现年龄、结石患侧、结石位置、病程时间、治疗前血尿、结石长、宽径对疗效均有影响.Logistic回归分析则显示病程时间、治疗前血尿、结石长、宽径决定治疗的成功率.预测模型拟合优度好(x2=18.144,df=8,P=0.168),总体准确率为87.4%.结论 病程时间、治疗前血尿、结石长、短径是ESWL单次治疗单发肾结石成功率的独立影响因素.

    作者:张鹏;吴芃;杜跃军;张辉见;魏强;侯祺;古迪;郑少斌;刘成山 刊期: 2012年第06期

  • 持续性血液净化在重症多发性肌炎和皮肌炎中的器官保护作用:1例报告

    对1例病因不明的“广泛皮疹、皮肤剥脱、无尿、全身浮肿、呼吸困难”患者行持续血液净化治疗,动态观察各器官损伤情况的变化,之后在患者病变部位行组织活检.患者病理结果为多发性肌炎/皮肌炎,持续性血液净化治疗开始后心、肝、肾、肺各项指标快速好转,表现为尿量快速增加,肺部炎症逐渐减轻,血肌酐、尿素、总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶和乳酸脱氧酶水平快速回落,治疗结束后各项生化指标仍保持下降趋势,患者顺利出院.持续性血液净化在本例重症多发性肌炎/皮肌炎的治疗中疗效显著,在自身免疫性疾病,尤其是全身性炎症疾病的急性期可以作为一种治疗选择.

    作者:刘占国;周健;岑仲然;唐颖;杨祥锐;常平 刊期: 2012年第06期

  • 机械吻合和手工吻合两种食管癌切除术的比较

    目的 探讨食管癌切除食管胃颈部机械吻合及手工吻合两种手术方式的并发症及防治.方法 2004年9月~2008年6月,将颈段及胸中、上段食管癌并具有手术适应症的患者随机分为两组即手工吻合组(手工组)和圆形吻合器机械吻合组(机械组),比较两组吻合口瘘、狭窄等的并发症.结果 手工组125例,机械组102例,吻合瘘发生率分别为14.4%(18/125)、2.9%(3/102),狭窄需扩张分别为8.8.%(11/125),3.9%(4/102).颈部吻合时间分别为(52±12)min和(25±5)rn in,差别显著(P<0.01).结论 食管癌切除食管胃颈部采用圆形吻合器端侧吻合吻合口瘘发生率低,手术时间缩短,操作简便,易于掌握及标准化,有利于降低吻合口的并发症.

    作者:蔡瑞君;李梅;熊刚;蔡开灿;王武军 刊期: 2012年第06期

  • 钬激光前列腺剜除术和开放前列腺切除术治疗大体积良性前列腺增生的Meta分析

    目的 比较钬激光前列腺剜除术(HoLEP)和开放前列腺切除术(OP)治疗大体积良性前列腺增生(BPH)的疗效和安全性.方法 检索Medline、Embase中HoLEP和OP治疗大体积BPH的随机对照试验文献.Revman5.0进行Meta分析.结果 纳入文献3篇.术后HoLEP组和OP组患者国际前列腺症状评分(IPSS)、大尿流率(Qmax)较术前明显改善,但两组间IPSS、Qmax比较无统计学差异(P>0.05).两组手术时间、前列腺切除重量、术后停留尿管时间和住院时间、术中输血率比较,差异有统计学意义(P<0.05).两组间尿道狭窄、尿失禁及二次手术发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 HoLEP和OP对大体积BPH有相同的近期疗效.HoLEP组手术时间长、切除前列腺组织少,但是术中出血量少,术后留置尿管时间、住院时间短.

    作者:陈晖;汤平;欧汝彪;邓向荣;谢克基 刊期: 2012年第06期

  • 三突变型低氧诱导因子-1α对人微血管内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响

    目的 观察重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1cα(HIF-1α)对人微血管内皮细胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白表达的影响.方法 三突变型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空载腺病毒载体(Ad-Null)分别在HEK293A细胞大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,终点稀释法测定病毒滴度;双荧光素酶报告系统检测三突变型HIF-1α与野生型HIF-1α的转录活性;各重组腺病毒载体以佳转染复数转染体外培养的hMVECs,Westem blotting测定HIF-1α和VEGF蛋白表达;MTS检测Ad-HIF-1α564/402/803对细胞增殖的影响.结果 三突变型HIF-1α转录活性显著高于野生型HIF-1α(P<0.001):Ad-HIF-1α564/402/803组HIF-1α和VEGF蛋白表达量高于Ad-HIF-1αnature及其他组;VEGF蛋白表达水平与HIF-1α呈剂量依赖关系.Ad-HIF-1α564/402/803组第3、5天吸光度值均显著高于Ad-HIF-1αnature及其他组(P<0.01).结论 三突变型HIF-1α在体外常氧条件下稳定高效表达,可诱导hMVECs VEGF蛋白表达上调,促进hMVECs增殖.

    作者:裴静娴;王月刚;刘城;魏璇;李明琰;陈建威;吴平生 刊期: 2012年第06期

  • 胸腰椎压缩性骨折模型中geneX(R)骨水泥椎体成形术的生物力学评价

    目的 评估geneX(R)骨水泥用于强化骨质疏松椎体的生物力学性能.方法 对30个新鲜小牛胸腰椎椎体标本(T9-L4)通过注射泵灌注稀盐酸脱钙建立骨质疏松椎体模型.随机分为3组,每组10例.制成压缩性骨折模型后,3组分别实施geneX(R)骨水泥、硫酸钙骨水泥(cSc)、聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥(PMMA)椎体成形术,记录骨水泥完本填充时的骨水泥注射量,测试标本的强度和刚度,记录各组的强度和刚度并进行比较.结果 30个小牛胸腰椎体初始骨密度为(1.425±0.072) g/cm2,脱钙后骨密度为(1.074±0.065)g/c m2,脱钙后骨密度明显低于脱钙前骨密度(P<0 05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组注射量分别(4.3±0.8)、(4 2±0.7)和(3.8±0.4) ml,3组之间无显著性差异(P>0.05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组强度分别(1198±529)、(1212±430)和(1672±704)N,geneX(R)组、CSC组显著低于PMMA组强度(P<0.05),3组均明显高于椎体初始强度(P<0.05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组刚度分别为(233±130)、(242±191)与(323±145)N/mm,3组间无显著性差异(P>0.05),3组刚度均低于椎体初始刚度,但统计学无明显差异(P>0.05).结论geneX(R)水泥椎体成形术用于骨质疏松压缩性骨折能满足对椎体填充材料的生物力学要求.

    作者:张树芳;江建明;朱青安;黄志平 刊期: 2012年第06期

  • 抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-IL-12-GB的构建及体内外表达验证

    目的 构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-1L- 12-GB,验证以上免疫调节因子基因在293T细胞的表达以及IL-12基因在活体内的表达.方法 将人1L-12基因克隆到早期构建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真核表达质粒的上游,将其构建成为pVAX-IL-12-GB重组质粒:利用脂质体法瞬时转染293T细胞,RT-PCR检测IL-12和GM-CSF-B7,1基因的转录,ELISA法检测细胞上清中上游IL-12基因和下游GM-CSF基因的蛋白表达,流式细胞术及免疫荧光检测下游B7.1基因的表达;利用电穿孔方法递送质粒进入小鼠股四头肌,免疫组化法检测IL-12基因在小鼠活体内的表达情况.结果 双酶切以及PCR鉴定获得的片段均与预期的片段大小一致,测序分析证实IL-12基因序列完全正确;瞬时转染293T细胞后,分别验证了人IL-12,GM-CSF和B7.1基因的mRNA转录和蛋白表达;电穿孔递送质粒后,活体肌肉组织内同样可以检测到IL-12基因的表达.结论 成功构建了可以同时表达人IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂,为下一步开展肿瘤免疫基因治疗研究奠定了坚实的基础.

    作者:董金凯;高江平;阎瑾琦;张亮;肖毅;王伟;王晓雄;于继云 刊期: 2012年第06期

  • 荧光定量PCR和环介导等温扩增方法检测隐球菌CAP1O基因的比较研究

    目的 建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点.方法 针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAMP两种方法检测定量的质粒,分析其敏感性和特异性,并检测临床标本.结果 荧光定量PCR检测CAP10质粒的敏感性为6.8×101拷贝,LAMP方法的敏感性为6.8×103拷贝,PCR检测阳性率比LAMP方法高.两种方法特异性好,对脑膜炎奈瑟菌、白色念珠菌、热带念珠菌、黄曲霉、黑曲霉和大肠埃希菌的检测结果均为阴性.结论 成功建立了检测CAP10基因的荧光定量PCR方法敏感性和特异性高,但是需要特殊仪器;LAMP方法敏感性较低,但其操作简单,无需特殊仪器和设备,加入核酸染料即能观察结果.两者均适用于新型隐球菌感染的检测.

    作者:韩慧;胡子有;吴炳义 刊期: 2012年第06期

南方医科大学学报杂志

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