学术投稿

系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析

周志刚;朱美华;梁中锟;陈振瑞;贺微;李长征;谭万龙;姜世勃;刘叔文;周烨;周辰

关键词:系统性红斑狼疮, 儿童, 哺乳动物细胞表面展示, 全长人源抗体库
摘要:目的 构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库.方法 采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCk)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达.结果 以0.8 μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104.随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列.流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109.结论 以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 丹参酮联合克拉霉素治疗鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤

    目的 观察丹参酮与克拉霉素联合用药对鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤的治疗效果,以探索鼻咽癌放疗后鼻-鼻窦及咽部损伤的佳治疗方案.方法 将255例中放疗后出现鼻-鼻窦及咽部损伤的鼻咽癌患者,按发生时间顺序随机分为克拉霉素组(A组)丹参酮组(B组)以及克拉霉素+丹参酮联合用药组(C组),观察各组的治疗预后情况.结果 A、B、C3组均有治疗效果,与治疗前比较差异具有统计学意义(P<0.05);A组与B组之间疗效差异不明显(P>0.05);而C组的疗效明显好于A组和B组(P<0.05).结论 多元化治疗是鼻咽癌放疗后鼻窦及咽部损伤治疗的趋势,克拉霉素+丹参酮联合用药是治疗鼻咽癌放疗后鼻窦及咽部损伤非常有效的手段和方法.

    作者:李辉;王华东;马玉坤;赵建夫 刊期: 2012年第08期

  • 支气管肺发育不良新生鼠肺组织甲状腺转录因子及波形蛋白的表达意义

    目的 观察高氧暴露新生鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)标记[甲状腺转录因子,(TTF-1)]及成纤维细胞标记[波形蛋白,( Vimentin)]的表达规律,探讨支气管肺发育不良(BPD)发病机制.方法 新生小鼠随机分为:对照组及BPD组,高浓度氧暴露制作BPD小鼠模型,观察肺组织病理变化,于实验后3、7、14、21 d应用免疫荧光双标及荧光定量PCR技术检测TTF-1及Vimentin蛋白、mRNA的表达情况.结果 与对照组比较,BPD组高氧暴露后小鼠肺组织逐渐出现肺泡发育障碍、胶原沉积明显;AECⅡ标记TTF-1表达逐渐减弱,成纤维细胞标记Vimentin表达逐渐增强,14、21d时两者可见明显的共表达;BPD组21 d TTF-1mRNA表达较同时间对照组下调(P<0.05),而Vimentin mRNA表达较同时间对照组上凋(P<0.05).结论 高氧致AECⅡ向成纤维细胞转化可能是BPD纤维化的重要机制.

    作者:陈坤;蒋朴;邓世雄;王念 刊期: 2012年第08期

  • 硬膜外分娩镇痛对产程及分娩结局的影响

    目的 通过前瞻性的临床研究评价硬膜外分娩镇痛对产程及分娩结局的影响.方法 选取2011年12月1~31日在本院产检门诊正规产检并选择阴道试产的孕妇,临产后,无硬膜外镇痛禁忌证者,根据有无镇痛要求分别纳入镇痛组(166例),及对照组(162例).对比两组第1、2产程及总产程时间、出血量、分娩方式及新生儿结局等指标,探讨硬膜外镇痛对于产程和分娩结局的影响.结果 镇痛组第1产程(497.9±168.4)min、第2产程(54.3±43.8)min、总产程时间(522.1±178.9)min均显著高于对照组分别为(404.2-156.0)min,(31.5±19.8)min,(435.8±159.2)min(P值均<0.05);两组催产素使用率、中转剖宫产率、器械助产率、羊水胎粪污染率、新生儿窒息的发生率均无统计学差异(p值均>0.05).结论 硬膜外镇痛会使产程延长,尤其是延长第2产程,但不增加急诊剖宫产率和经阴道器械助产率,明显降低了社会因素手术率,对分娩结局无不良影响,用于分娩镇痛是安全的.

    作者:张广兰;冯艳 刊期: 2012年第08期

  • 系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析

    目的 构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库.方法 采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCk)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达.结果 以0.8 μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104.随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列.流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109.结论 以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础.

    作者:周志刚;朱美华;梁中锟;陈振瑞;贺微;李长征;谭万龙;姜世勃;刘叔文;周烨;周辰 刊期: 2012年第08期

  • 在活细胞上研究核定位信号介导核移位的方法

    目的 建立一种在活细胞上研究核定位信号(NLS)介导核移位机制的新方法.方法 利用67 mg/L 3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐(CHAPS)处理细胞后,用1g/L麦胚凝集素(WGA)与细胞孵育,来观察能否阻断干扰素γ(IFN-γ)诱导的信号转导子和转录激活子1(STAT1)移位入核.结果 CHAPS处理细胞后,对于IFN-γ本身诱导的STATI核移位没有影响,而进一步用WGA处理则阻断了IFN-γ诱导的STAT1核移位.结论 利用CHAPS在细胞膜上打孔的方法,建立了一种简单有效的、在活细胞上研究NLS介导核移位机制的新方法.

    作者:邓鹏;龚小卫;姜勇 刊期: 2012年第08期

  • BRCAl抑制黄体酮刺激乳腺癌细胞增殖和迁移

    目的 研究BRCA1是否可以调节黄体酮刺激乳腺癌细胞增殖和迁移.方法 乳腺癌细胞MCF-7和T-47D转染质粒过表达BRCA1或转染相应空质粒作对照,并以黄体酮刺激乳腺癌细胞,观察过表达BRCA1对黄体酮刺激乳腺癌细胞增殖和迁移的影响;MCF-7细胞转染siRNA敲低BRCA1或转染杂乱siRNA作为对照,并加黄体酮刺激乳腺癌细胞,观察敲低BRCA1对黄体酮刺激乳腺癌细胞增殖和迁移的影响;用MTT实验结果计算细胞增殖率,用“划痕愈合实验”结果计算细胞迁移率.结果 黄体酮刺激并转染空质粒对照组或过表达BRCA1组:细胞增殖率,MCF-7细胞分别是(114.4±6.0)%和(82.1±3.2)%,T47-D细胞分别是(111.3±4.3)%和(84.2±3.5)%,两组间细胞增殖率差异均有统计学意义(P<0.05);细胞迁移率,MCF-7细胞分别是55.9%和15.8%,T-47D分别是44.83%和10.43%.加黄体酮刺激并转染杂乱siRNA或BRCAl siRNA MCF-7:细胞增殖率分别是(114.4±3.05)%和(125.3±4.0)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05);细胞迁移率分别是39.2%和69.08%.黄体酮受体拮抗剂RU486可以拮抗敲低BRCA1增强黄体酮促进乳腺癌细胞增殖和迁移.结论 散发性乳腺癌可能因其BRCA1低表达而使黄体酮对乳腺癌细胞的增殖和迁移作用增强.

    作者:熊静波;赵嘉佳;彭黎;王宏;梁文颖 刊期: 2012年第08期

  • 多柔比星诱导的心衰大鼠心脏胆碱能神经分布及TNF-α表达的变化

    目的 观察多柔比星诱导的慢性心衰大鼠心脏胆碱能神经分布及TNF-α的表达变化,初步探讨心衰时自主神经调控的变化及其机制.方法 SD大鼠随机分为对照组和心衰模型组,模型组给予盐酸多柔比星腹腔注射2.5 mg/kg,1次/周,共6次,累计15 mg/kg.对照组给予生理盐水.确定心衰模型复制成功后,应用Karnovsky-Roots组化染色结合点计数法检测心脏各部胆碱能神经的分布,ELISA法测定心脏组织及血清中TNF-α水平.结果 对照组和心衰模型组均有胆碱能神经阳性染色产物,与对照组相比,心衰组心脏胆碱能神经点计数显著减少(P<0 01),心脏和血清中TNF-α含量明显升高(P<0.01).结论 多柔比星诱导的大鼠慢性心衰模型中胆碱能神经系统下调,胆碱能抗炎通路功能减退可能是促进心衰发展的重要病理生理机制之一.

    作者:胥晓丽;曾菊绒;于晓江;弥曼;侯进;孙蕾;李冬玲;臧伟进 刊期: 2012年第08期

  • 氯胺酮相关性泌尿系统损害的影像学表现

    目的 总结氯胺酮相关性泌尿系统损害(KAUD)患者的影像学特征,为诊断KAUD提供影像学参考依据.方法 同顾性分析45例KAUD患者的影像资料,包括超声(45例)、X线(38例)、CT(28例)、MRl( 10例)及SPECT(25例),描述各类检查的特征性改变及影像特点,并对其优缺点进行评价.结果 KAUD患者的影像学改变主要集中在泌尿系统和胆道系统.基本的影像学特征包括:①膀胱壁增厚,呈炎性改变;②膀胱挛缩,容量减小;③集合系统扩张,多数双侧同时出现,输尿管壁增厚,输尿管狭窄;④肾实质损害;⑤胆道系统扩张;⑥邻近脏器及淋巴结的炎性改变.结论 KAUD的影像学改变具备典型的特征性,对于具有严重LUTS症状的患者如果出现了相应的改变应该考虑KAUD的可能性,结合氯胺酮滥用史可明确KAUD的诊断.

    作者:吴芃;赵洁;高利生;王一;郑晖;黄泽海;古迪;黄俊;郑少斌 刊期: 2012年第08期

  • Genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响

    目的 观察genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响.方法 应用RT-PCR检测不同浓度genistein作用LiBr细胞48 h后Livin的表达变化;取适浓度的genistein作用LiBr细胞后应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用Western blot检测其对凋亡效应蛋白Ccaspase-3表达的影响及应用MTT比色法检测其对细胞增殖的作用.结果 Genistein可增加LiBr细胞早、晚期凋亡率[分别为(27.87±5.38)%和(11.87±3.86)%],诱导LiBr细胞凋亡(P<0.01);引起细胞G0/G1期阻滞[G0/G1=(72.11±5.89)%、S=(14.53±3.47)%、G2/M=(12.36±2.64)%];下调caspase-3蛋白表达及抑制细胞增殖(P<0.01).结论 Genistein可诱导LiBr细胞凋亡、使细胞增殖周期进展受阻、抑制细胞增殖.

    作者:杨一飞;王昊;汪京峡;李向花;马梅;杨文斌 刊期: 2012年第08期

  • 结直肠癌围手术期替代应用肠道微生态制剂对肠道菌群及机体免疫功能的影响

    目的 探讨结直肠癌患者围手术期应用肠道微生态制剂代替传统的术前口服肠道抗菌药对肠道菌群及机体免疫功能的影响.方法 选取需施行腹腔镜结直肠癌根治术病例60例,随机分为对照组和实验组,30例/组.对照组术前肠道准备按传统方法(术前口服肠道抗菌药),实验组于术前5d起口服肠道微生态制剂(金双歧片)2.0 9,3次/d,代替术前肠道抗菌药的使用,术后24 h起口服金双歧片2.0g,3次/d,至术后第7天.于入院时、术后第7天收集两组新鲜大便以及空腹外周静脉血,比较两组肠道菌群比例,以及血清白介素-2(IL-2)、IgA、IgG和IgM浓度、NK细胞活性、T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+比例及CD4+/CD8+比值.结果 肠道菌群:术后第7天实验组的双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌菌群数量显著高于对照组(P<0.05),大肠杆菌、葡萄球菌数量显著低于对照组(P<0.05);体液免疫功能:术后第7天实验组IL-2、IgA、IgG、IgM水平均显著高于对照组(P<0.05);细胞免疫功能:术后第7天实验组CD4水平显著高于对照组(P<0.05).结论 结直肠癌围手术期应用肠道微生态制剂代替传统的术前口服肠道抗菌药,不仅能有效地纠正肠道菌群失调,还具有改善术后患者免疫功能低下的作用.

    作者:朱达坚;陈小伍;伍锦浩;剧永乐;封静;陆光生;欧阳满照;任宝军;李泳 刊期: 2012年第08期

  • 蛋白质组学筛选抑癌基因CCDC19在鼻咽癌中的调控蛋白

    目的 本研究利用蛋白质组学筛选抑癌候选基因CCDC19在鼻咽癌中可能调控蛋白.方法 提取CCDC19稳定高表达的鼻咽癌3D8和对照鼻咽癌C6细胞蛋白,并采用双向凝胶电泳(2D-PAGE)技术进行有效分离,图像扫描后获得高分辨率的2D-PAGE图谱.选用差异蛋白质组学技术筛选差异蛋白位点,然后用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprinting,PMF)和数据库检索技术给予鉴定.荧光定量PCR和Western blot验证差异基因表达水平.结果 质谱分析显示,FASN、CTSD和PGK1在CCDC 19过表达的3D8细胞中表达下调,分别为-3.28、-1.64和-6.97倍.荧光定量PCR在mRNA水平验证了FASN、CTSD和PGK1以及Westem blot在蛋白水平验证CTSD蛋白在3D8细胞中表达下调.结论 FASN、CTSD和PGK1可能是CCDC19在鼻咽癌中调控的靶基因.

    作者:方唯意;江庆萍;刘真 刊期: 2012年第08期

  • Exendin-4降低高糖联合TNF-α诱导的血管内皮细胞损伤的机制

    目的 观察exendin-4对于高糖联合肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12损伤的影响并探讨其可能机制.方法 体外培养HUVEC-12细胞至对数生长期,根据干预措施分为正常对照组、高糖+TNF-α组(HT组)、高糖+TNF-a+exendin-4(1 nmol/L)组(HT+E1组)和高糖+TNF-a+exendin-4( 10 nmol/L)组(HT+E10组),采用硝酸还原酶法检测NO含量,实时荧光定量PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测NF-kB p65核转位,Western blotting检测p38 MAPK蛋白表达.结果 处理组细胞培养液中NO含量无明显差异;与对照组相比较,HT组核NF-kB p65荧光强度及p38 MAPK水平显著增加(P<0.01);加入Eexendin-4预处理组的ICAM-1mRNA表达显著降低;HT+E10组核NF-rB p65荧光强度及p38 MAPK蛋白表达下降,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 Exendin-4减少高糖联合TNF-α诱导的HUVEC-12细胞ICAM-1 mRNA表达,其机制可能与抑制NF-kBp65核转位及p38 MAPK蛋白有关.

    作者:柯甦捷;薛耀明;李晨钟;朱波;符彩燕 刊期: 2012年第08期

  • 剖宫产术后早期留置尿管拔除时间对产妇术后恢复的影响

    目的 探讨剖宫产术后早期留置尿管拔除时间对产妇术后恢复情况的影响,为临床早期安全拔管提供依据.方法 选择广东医学院附属医院妇产科行剖宫产术产妇138例,随机分为实验组和对照组;实验组分别于术后6h和8h拔除尿管,对照组常规术后24 h拔除.结果 与对照组相比,实验组术后尿路感染的发生率和尿道刺激征出现率明显降低(P<005),产妇术后自然排尿率和舒适度明显增加(P<0.05).结论 剖宫产术后留置尿管拔除时间由传统24 h改为6~8h有利于产妇术后恢复.

    作者:周碧;林志梅;黄宇松 刊期: 2012年第08期

  • 血清转化生长因子β1与早期鼻咽癌患者急性放射性损伤程度和生存率的关系

    目的 观察早期鼻咽癌(T1-2N0-1M0)患者放疗前、后血清转化生长因子β1(TGF-β1)水平的变化,并分析其与急性放射性损伤、无疾病进展生存的关系.方法 以32例健康志愿者的平均血清TGF-β1水平(50.2±3.2) ng/ml作为本试验患者的标准值.57例早期鼻咽癌初治患者按照放疗前血清TGF-β1含量分为两组:A组29例:血清TGF-β1值低于或等于标准值的患者;B组28例:血清TGF-β1值高于标准值的患者.检测患者放疗前、中、后的血清TGr-β1含量,评估患者急性放射性损伤程度及疗效.结果 A、B两组患者放疗前血清TGF-β1水平分别为(35.4±1.4)、(58.8±1.0)ng/ml,两组比较有统计学意义(P<0.05).B组患者急性放射性粘膜、皮肤损伤程度明显高A组(P<005).急性放射性粘膜、皮肤损伤3级的患者放疗前血清TGF-β1水平明显高于3级以下的患者[(54.0±2.2) ng/ml vs (42.0±2.3)ng/ml,( 54.3±2.4) ng/ml vs ( 43.4±2.2) ng/ml,P<0.05].A、B两组患者的局部复发及远处转移率(3.4% vs 7.1%,3.4% vs 10.8%)、无疾病进展生存率(DFS)比较无统计学意义(P>0.05).结论 放疗能降低早期鼻咽癌患者的血清TGF-β1水平,早期鼻咽癌患者放疗前的血清TGF-β1水平能预测患者急性放射性粘膜及皮肤损伤的程度,但与DFS无关.

    作者:邹国荣;林晓晖;吴洁红;胡家柱;张超;李济时;黎益华;曹小龙 刊期: 2012年第08期

  • 过氧化氢诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

    目的 研究过氧化氢(H2O2)对正常人支气管上皮细胞(HBE)HMGB1表达、移位和释放的影响.方法 四唑盐(MTT)法检测不同浓度H2O2对支气管上皮细胞活力的影响;蛋白免疫印迹方法分别检测H2O2刺激HBE胞核,胞浆以及细胞培养上清中HMGB1浓度.免疫荧光观察HBE的HMGB1的定位和H2O2刺激后对HBE HMGB1的移位的影响.结果 125 μmmol/L刺激对HBE活力无影响,而250 μmmol/L会导致细胞活力下降(与对照组组比较,P<0.05),但是不引起细胞死亡,400 μmnol/L(与对照组比较,P=0.000)导致HBE死亡.在浓度依赖性实验,与对照组比较12.5、125、250 μmmol/LH2O2刺激HBE 24 h后培养上清HMGB1水平显著增加;在时间依赖性实验中与对照组比较,125μmmol/LH2O2刺激HBE 12、24 h后细胞上清中的HMGB1显著升高( P<0.05);12.5 μmmol/LH2O2刺激HBE 24h后,HBE胞浆蛋白明显增加,胞核蛋白减少.而免疫荧光检测示HMGB1高丰度分布正常HBE的细胞核内,少量分布于细胞浆,125μmmol/L H2O2刺激HBE 12 h,HMGB1明显从HBE胞核向胞浆转位;125 μmmol/LH2O2刺激HBE 24 h后观察到HMGB1移位分布到胞膜上.结论 H2O2可以显著诱导支气管上皮细胞HMGB1的表达、转位和释放,提示HMGB1可能参与了哮喘,COPD等慢性炎症疾病气道的氧化应激过程.

    作者:侯长春;赵海金;李文军;蔡绍曦 刊期: 2012年第08期

  • 利用慢病毒载体构建稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系

    目的 建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系.方法 利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定转染β-catenin干扰质粒组(Shβ-catenin)、稳定转染空白载体组(VECTOR)和对照未感染组(WT)三组,RT-PCR检测干扰后β-catenin mRNA表达;进一步免疫荧光检测干扰后细胞β-catenin和OCT4的蛋白表达.结果 β-catenin特异性shRNA的慢病毒感染人胚胎干细胞后,获得稳定表达shβ-catenin的人胚胎干细胞系,Shβ-catenin组β-catenin mRNA表达明显降低,只有WT组mRNA表达的1%,而VECTOR组和WT组之间无明显差异;免疫荧光染色进一步验证shβ-catenin组中基本无β-catenin蛋白的表达,但表达多能性标记OCT4.结论 通过β-catenin特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系.

    作者:孙懿;曾思聪;卢光琇;林戈 刊期: 2012年第08期

  • H型高血压患者颈动脉结构和功能变化及与亚临床炎症的相关性

    目的 探讨H型高血压患者颈动脉结构与功能的变化,及其与亚临床炎症的相关性.方法 选择H型高血压患者60例(A组),非H型高血压患者49例(B组),与在南方医科大学第三附属医院体检的健康者作为正常对照组20例(C组),对3组人群均行彩色超声检查;同时进行超敏C反应蛋白( hs-CRP)、纤维蛋白原(FIB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)的水平进行测定,比较3组之间颈动脉超声参数及炎性标志物的水平,观察H型高血压患者颈动脉结构与功能的变化,及其与亚临床炎症的相关性.结果 H型高血压组与非H型高血压组比较,血压水平[收缩压(136.0±10.1)mmHg vs(131.9±7.0) mmHg,舒张压(80.9±8.9)mmHg vs (73.2±7.9) mmHg],差异无统计学意义(均P>0.05).颈动脉IMT[H型高血压组(1.52±0.08)mm vs 非H型高血压组(1.09±0.06)mm]、扩张性[H型高血压组(0.23±0.14)mmHg-1×100vs非H型高血压组(0.46±0.14)mmHg-1×100]、血清Hcy[H型高血压组(15.37±5.89) vs 非H型高血压组(8.19±4.53) μmol/L],差异有统计学意义(均P<0.05),H型高血压组血浆超敏C反应蛋白、纤维蛋白原、肿瘤坏死因子-α水平,均高于非H型高血压组,且与颈动脉结构与功能参数变化呈正相关.结论 H型高血压患者更易发生颈动脉结构与功能损害.亚临床炎症和H型高血压患者颈动脉结构与功能损害密切相关.H型高血压患者更易发生颈动脉结构与功能损害的机制,可能与亚临床炎症、高同型半胱氨酸血症对高血压的协同作用有关,应采取积极干预措施.

    作者:胡兆霆;侯庆臻;赵素玲;梁燕琼;沈安娜 刊期: 2012年第08期

  • 人microRNA-338-3p慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定

    目的 构建人microRNA-338-3p (has-miR-338-3p)慢病毒表达载体并初步筛选鉴定miR-338-3p的靶基因.方法 由miRBase数据库查找获得miR-338-3p前体序列,设计目的基因片段并人工合成;将miR-338-3p前体序列和pLV-THM载体经双酶切后连接,产生pLV-THM-miR-338-3p慢病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆;以pLV-THM-miR-338-3p、psPAX2和pMD2.G质粒共转染包装细胞293T,包装产生慢病毒并测定滴度.流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系,利用Real-time RT-PCR检测miR-338-3p表达,Western-blot检测SMO蛋白表达水平,Transwell小室穿透实验检测肿瘤细胞转移能力.结果 经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了miR-338-3p的慢病毒表达载体pLV-THM-miR-338-3p,倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T表达绿色荧光.稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系中,miR-338-3p表达水平显著高于阴性对照组和未处理组,SMO蛋白表达水平明显下降,且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的减弱.结论 成功构建了has-miR-338-3p慢病毒表达载体和稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系,初步证实miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移,此为进一步深入研究miR-338-3p在结直肠癌中生物学功能奠定了基础.

    作者:邓海军;孙凯;郭琛;李凌;李国新 刊期: 2012年第08期

  • 螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用

    目的 探讨螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用.方法 雄性Wistar大鼠24只,随机分为3组,每组8只大鼠.分组如下:假手术组(Sham组);胆总管结扎组(BDL组),予行胆总管结扎术;螺内酯治疗组(BDL+SP组),于手术后第2天给予螺内酯20 mg/kg灌胃处理,1次/d.于4周后取材.Masson三色染色检测胶原和大鼠的肝组织学改变.运用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time-qPCR)检测各组血管内皮生长因子A(VEGF-A)mRNA的表达.运用免疫组织化学技术检测各组血管性假血友病因子(vWF)的表达.结果 BDL+SP组纤维化程度较BDL组低[(2.84±0.44)vs(19.73±3.54),P=0.00],差异有统计学意义;免疫组织化学结果显示:BDL组vWF表达较Sham组增高[(3.08±o.17)vs(0.98±0.11),P=0.00],BDL+SP组较BDL组表达下降[(1.15±0.09)vs (3.08±0.17),P=0.00],差异有统计学意义;在BDL组VEGF-A mRNA的表达增加,BDL+SP组则表达下降[(0.71±0.12)vs(1.75±0.15),P=0.00],差异有统计学意义;且各分组中VEGF-A mRNA的表达与vWF表达呈现显著正相关关系(r=0.890,P=0.000).结论 螺内酯通过抑制肝脏VEGF-A mRNA的表达抑制肝窦毛细血管生成.

    作者:李旭;蔡双明;宁佐伟;李洋;张文雍;张莉莉 刊期: 2012年第08期

  • 实时三维超声节段收缩非同步指数评价慢性心功能不全患者左室非同步运动与收缩功能的关系

    目的 应用实时三维超声心动图心室节段收缩非同步指数(regional systolic dyssynchrony index,R-SDI)定量评估慢性心功能不全患者左室机械收缩非同步运动价值,并探讨R-SDI与收缩功能间的关系.方法 42例慢性心功能不全(LVEF<50%)患者,根据左室射血分数(LVEF)不同分为两亚组:心功能中-重度降低组(A组:LVEF<40%)、轻度降低组(B组:LVEF≥40%).另选择33例健康志愿者作正常对照组(C组:LVEF>50%).分别获取实时三维超声图像并描绘左室容积-时间曲线,计算出左室16节段、12节段及6节段非同步指数SDI(16R-SDI、12R-SDI、6R-SDI),探讨16R-SD1、12R-SDI、6R-SDI诊断左室收缩非同步运动的价值及其与收缩功能(LVEF)的相关性.结果 慢性心功能不全组R-SDI显著高于正常对照组(P<0.01),慢性心功能不全A组R-SDI明显大于B组(P<0.01),16R-SDI、12R-SDI、6R-SDI与LVEF呈负相关(r=-0.843,r=-0.840,r=-0.841,均P<0.01).结论 心室节段收缩非同步指数可作为定量评价左室机械收缩非同步运动的有效指标,非同步运动程度与心室收缩功能呈负相关.实时三维超声心动图可用于定量评价慢性心功能不全患者左心室非同步运动.

    作者:刘表虎;王全师;朱向明;李国杰;张霞 刊期: 2012年第08期

南方医科大学学报杂志

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