杜华;薛耀明;朱波
目的 在SPSS软件上实现分类重复测量资料的广义估计方程(GEE)和广义线性混合效应模型(GLMMs)分析.方法 结合二分类重复测量的实例资料,按照SPSS 19.0软件的菜单操作过程,实现GEE与GLMMs模型的统计分析.结果 在SPSS19.0软件上实现二分类重复测量资料GEE和GLMMs模型分析的菜单操作不需编程、结果直观清晰.结论 SPSS 19.0软件上可实现二分类重复测量资料的GEE与GLMMs模型分析,无需复杂的编程过程,操作简便.
作者:安胜利;张燕虹;陈征 刊期: 2012年第12期
目的 探讨六味地黄丸改善2型糖尿病大鼠模型中肝细胞胰岛素抵抗的作用机制.方法 以正常LETO鼠为LETO组,OLETF鼠分为不加药的对照组以及予六味地黄丸加药的干预组,分别于8、32、40周龄随机处死,收集肝组织.制作病理切片观察各组肝脏组织形态学改变,RT-PCR检测PEPCK表达改变以及免疫印迹(Western blot)检测IRS-1、IRS-2蛋白表达.结果 与LETO组相比,对照组肝脏细胞随着时间延长出现明显的小叶结构破坏以及肝脏脂肪变性,而干预组小叶结构基本正常,仅有轻度脂肪变性.RT-PCR检测显示对照组PEPCK表达显著高于LETO组(P<0.01),而给予六味地黄丸的干预组PEPCK的表达则显著低于对照组(P<0.01).免疫印迹检测对照组p-IRS-1和p-IRS-2蛋白表达水平显著低于LETO组以及干预组(P<0.05).结论 六位地黄丸通过抑制肝脏中糖异生关键酶PEPCK的活性以及提高胰岛素信号通路中IRS-1和IRS-2的表达,改善肝细胞的胰岛素抵抗.
作者:杜华;薛耀明;朱波 刊期: 2012年第12期
目的 40岁以上法乐氏四联症(TOF)多术前合并症及术后并发症,手术风险大,本文通过总结20例40岁以上TOF外科根治手术,探讨该类患者外科治疗相关经验.方法 1985年11月~2008年7月收治41岁以上成年TOF病人20例,男性9人,女性11人,年龄41~53岁,平均年龄(46.3+3.5)岁.术前明显紫绀16人,咯血3例.心功能≥Ⅲ级12例.5例术前血尿,2例为重度血尿,4例轻中度蛋白尿.3例存在术前心律失常,6例右心室明显扩大.合并症有感染性心内膜炎、脑脓肿、脑栓塞、肾功能不全、三尖瓣关闭不全等.手术主要从解剖上或生理上矫治病变.结果 围手术期死亡2例,死因分别为心室颤动和心力衰竭,死亡率10%.19病例均经右室切口疏通右室流出道(RVOT)行TOF根治,1例行Fontan.平均体外循环时间(142.9±36.3)min,平均主动脉阻断时间(89.9±25.1)min.平均呼吸机辅助时间(72.0±17.5)h.术后重度低心排5例,感染性休克及继发性肾功能衰竭各l例.2例术后胸内出血.B超右心室流出道平均血流速度明显下降:由(4.29±1.36)m/s下降为(2.13+0.83)m/s(P<0.01);四腔心右心室长径手术前、后分别为(57.1+6.7)mm和(55.1+7.0)mm (P=0.65).结论 40岁以上成人TOF多术前合并症及术后并发症,死亡率较高,合理的手术前、后心功能衰竭及合并症的处理、充分的术中心肌保护、彻底的心内畸形的矫治是手术成功的关键.
作者:简旭华;黄劲松;庄建;吴若彬;肖学钧;郑少忆;吴敏 刊期: 2012年第12期
目的 为快速有效去除CT图像中的环形伪影,本文提出一种基于图像重建后处理的CT环形伪影去除改进方法.方法 首先对CT图像从直角坐标系转换成极坐标系,其后对极坐标系下的图像进行滤波,设计一维滤波器,计算每个像素滤波后均值以及方差,通过对计算的方差与方差阈值比较以及该像素点的像素值与像素值阈值比较双重精确确定伪影点位置,并对伪影点进行合理的修正.后将校正完毕的极坐标图像转换为直接坐标图像.结果 仿真和实际CT图像实验表明,本方法在伪影去除、图像保真和计算时间等方面均取得了很好的效果.结论 本文提出的方法能够准确识别伪影点位置并有效去除伪影信息,其处理速度能够满足临床要求.
作者:齐宏亮;洪虹;徐圆;甄鑫;卢文婷;周凌宏 刊期: 2012年第12期
目的 探讨人组织激肽释放酶10(KLK10)对舌癌Tca8113细胞增殖和侵袭力的影响.方法 运用分子生物学技术,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-KLK10,转染Tca8113细胞,分别用RT-PCR、Western blot检测KLK10 mRNA及蛋白表达水平.MTS细胞生长实验检测细胞增殖的变化;Transwell小室细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 pIRES2-EGFP-KLK10转染Tca8113细胞获得稳定细胞株,与空白对照组及空载体组比较,KLK10 mRNA及蛋白表达水平均明显增高,KLK10增强表达的舌癌细胞增殖和侵袭能力均明显减弱(P<0.05).结论 KLK10表达增强能够降低人舌癌细胞的增殖和侵袭能力.KLK10基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点.
作者:郑红;张文玲;王笑玉;赵国强 刊期: 2012年第12期
目的 评价骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)经小腿肌肉移植对大鼠糖尿病足溃疡(DFUs)的治疗效果.方法 全骨髓贴壁法体外培养雄性Wistar大鼠BM-MSCs至第3代,经4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记.36只雄性Wistar大鼠随机分成A组(BM-MSCs小腿肌肉移植组,n=12)、B组(正常足溃疡对照组,n=12)和C组(DFUs对照组,n=12).大鼠糖尿病经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导,然后在其双后足背上切取3 mm×7 mm矩形全层皮肤制成大鼠DFUs模型.于移植后第2、5、8、11天评估各组大鼠的创面愈合率,冰冻切片观察DAPI标记的BM-MSCs在创伤组织中的示踪,肉芽组织的厚度采用HE染色法检测,CD31和Ki-67的表达采用免疫组化法检测,血管内皮细胞生长因子(VEGF)在创伤组织中的表达水平采用ELISA和RT-PCR检测.结果 B组的创面愈合快(P<0.05),第8、11天A组的创面愈合率高于C组(P<0.05).冰冻切片发现A组荧光强度和区域在第5天时达到高峰.HE染色结果显示第5天A、B两组的肉芽组织厚度相同,但比C组厚.CD31和Ki-67的免疫组化发现A、B两组的平均阳性小血管数和细胞数无差异,但与C组相比有差异(P<0.05).ELISA和RT-PCR结果均显示,第11天A组的VEGF表达水平明显较对照组高(P<0.001).结论 BM-MSCs经小腿肌肉移植能明显促进大鼠DFUs的愈合,这种促愈疗效可能是通过促进创伤组织中VEGF的表达实现的.
作者:万江波;蔡黔;刘毅 刊期: 2012年第12期
目的 探讨CT定量分析对尘肺的诊断价值.方法 对尘肺观察对象组(60例)及正常对照组(40例)进行CT扫描,分别在主动脉弓顶、气管隆突、气管隆突下3 cm、气管隆突下6 cm平面进行CT定量测定,用CT密度直方图对特定的CT值区间进行测定,计算出不同CT值范围内的平均肺密度(ME)及像素指数(PI),对比观察尘肺观察对象组肺密度的改变.结果 在主动脉弓顶水平、气管隆突下6 cm层面,-832~-352 HU范围的10个CT值区间内,尘肺观察对象组像素指数均高于正常对照组;在气管隆突、气管隆突下3 cm层面,-880~-352 HU范围的11个CT值区间内,尘肺观察对象组像素指数均高于正常对照组的像素指数.其共同特征为,上述4个观察层面,在-832~-352 HU范围内的10个CT值区间内,尘肺观察对象组的像素指数均高于正常对照组.尘肺观察对象组与正常对照组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 CT定量直方图信息,能够评价尘肺观察对象肺纤维化改变,结果可靠,客观,为尘肺观察对象的诊断提供了一种新的定量诊断方法.
作者:夏露花;吕富荣;王伊;盛波;周绍全 刊期: 2012年第12期
目的 用小鼠肝炎病毒MHV-A59感染C57BL/6小鼠,建立慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性的动物模型.方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、高脂组、病毒组和高脂病毒组.实验第13周末取血清检测MHV抗体、脂质和转氨酶;小鼠肝脏冰冻切片进行油红O染色,石蜡切片进行HE染色,观察各组肝组织改变状况.结果 病毒组与高脂病毒组血清MHV抗体强阳性;与对照组相比,3个处理组的AST、ALT明显增高,TC和LDL-C均有不同程度增高;病毒组与高脂病毒组的肝组织表现出慢性病毒性肝炎的病理特征,肝细胞内脂质蓄积增多.结论 通过感染MHV-A59病毒,成功建立了慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性的动物模型,为进一步研究慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性的机制提供了基础.
作者:甘露;张哲;郭进强;谢茜;蒙子君;万为人;罗炳德 刊期: 2012年第12期
目的 观察厄洛替尼治疗老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效与毒副反应.方法 选取72例经病理学确诊的老年晚期(Ⅲ期或Ⅳ期)NSCLC患者,采用单药口服厄洛替尼150 mg,1次/d,直至出现不能耐受的不良反应或PD时中止治疗.观察厄洛替尼的临床疗效、不良反应,同时对影响厄洛替尼疗效的临床因素进行分析.结果 72例NSCLC患者中,CR 1例(1.39%),PR 20例(27.78%),SD 31例(43.06%),疾病控制率(CR+PR+SD)72.22%.中位随访时间17个月(4~32个月),全组患者中位生存期14.5个月(6.5~28.3个月),中位疾病无进展生存10.6个月(5~16.5个月).其中女性、腺癌及不吸烟的患者接受厄洛替尼治疗的疗效明显高于男性、鳞癌及吸烟患者(P<0.05).是否出现皮疹与治疗疗效之间未见显著联系(P>0.05).相关不良反应以皮疹、腹泻、转氨酶升高、恶心呕吐为主,多为轻度.结论 厄洛替尼治疗老年NSCLC具有较好的疗效,毒性可耐受.
作者:孙长江;张西志;陈勇 刊期: 2012年第12期
目的 探讨HBeAg阴性的慢性乙肝患者乙肝病毒基因变异情况和分型的关系及其临床意义.方法 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)、实时荧光PCR检测乙肝病毒基因分型、PCR-反向点杂交方法检测乙肝病毒基因变异,并对其关系进行分析.结果 在389例HBeAg阴性的慢性乙肝患者血清中HBV-DNA检出阳性214例(55.01%),阴性175例(44.99%),HBV-DNA拷贝数在1×103~水平的例数高,为102例(26.22%),其次为1×104~水平,41例(10.54%),两者比较有性差异(P<0.001);基因变异方面,HBV-DNA载量在1×105~水平发生前-C区变异比例为71.43%(15例),发生BCP区变异比例为52.38%(11例),两者比较有性差异(P<0.001),并且HBV-DNA载量越高基因变异发生比例越大;214例HBeAg阴性HBV-DNA阳性的慢性乙肝患者基因分型与基因变异结果中,基因分型A型6例(2.80%),B型84例(39.25%),C型106例(49.53),D型7例(3.27),混合型11例(5.14%),两者比较有性差异(P<0.001);而发生前-C区变异结果中A型发生比例为16.67%(1例),B型发生比例为36.90%(31例),C型发生比例为44.34%(47例);在BCP区变异结果中B型发生比例为19.05%(16例),C型发生比例为26.42%(28例),两者比较有性差异(P<0.001),A、D型与混合型均未检出变异.结论 HBeAg阴性HBV-DNA阳性的慢性乙肝患者病毒复制水平处于一个相对较低水平;HBV-DNA载量越高基因变异发生比例越大;本地区乙肝病毒基因分布以B、C型为主,其中B、C基因型HBeAg阴性的慢性乙肝患者基因变异发生率较高.
作者:苏荣;罗娜;杨延斌;庄健海;黄星华 刊期: 2012年第12期
目的 研究阿仑膦酸盐(ALN)对体外培养小鼠成骨细胞相关基因OPG、RANKL表达的影响.方法 体外培养小鼠成骨细胞,应用碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞ALP染色情况,免疫荧光化学检测成骨细胞RANKL、OPG表达.将第二代成骨细胞分为A、B、C、D、E五组.A组(对照组),用DMEM培养基培养;B、C、D、E组除加入上述培养基外,加入不同浓度ALN,分别为:B组,加入10-4 mol/L ALN;C组,加入10-5mol/L ALN;D组,加入10-6 mol/L ALN;E组,加入10-7mol/L ALN.培养48h后应用Real time PCR、Western blot检测各组成骨细胞基因RANKL、OPG表达情况.结果 成骨细胞ALP染色呈阳性,免疫荧光化学检测RANKL、OPG表达阳性.Real time PCR、Western Blot检测各组OPG、RANKL mRNA及蛋白表达水平与ALN浓度密切相关,10-4 mol/L ALN时OPG、RANKL表达低,10-7~10-5 mol/L ALN时OPG、RANKL表达依次增高,10-5mol/L ALN时表达量高.结论ALN对小鼠成骨细胞RANKL、OPG的表达产生作用:10-4 mol/L时明显抑制成骨细胞RANKL、OPG的表达;浓度10-5、10-6、10-7 mol/L ALN促进成骨细胞RANKL、OPG的表达,其中10-5 mol/L ALN促进作用强.
作者:董伟;戚孟春;邓久鹏;陈洪伟;冯晓洁;廖囡囡 刊期: 2012年第12期
目的 通过不同检测方法观察祛风通络方对肾小球系膜细胞周期调节蛋白表达的影响,进一步探讨祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖的作用机制.方法 以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用激光扫描共聚焦显微镜及免疫组化法检测各组大鼠肾小球系膜细胞周期蛋白的表达变化.结果 与正常组比较,LPS组肾小球系膜细胞周期蛋白CyclinD1、CDK2、P21表达明显增强(P<0.01),P27蛋白表达明显减弱(P<0.01);经过药物干预治疗,肾小球系膜细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK2、P21的表达均有不同程度减弱(P<0.05或P<0.01),而P27蛋白表达明显增强(P<0.01),且祛风通络方对CyclinDl、P21和P27蛋白表达的调节明显优于贝那普利(P<0.05或P<0.01).结论 祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖的作用机制可能与其下调细胞周期蛋白CyclinD1、CDK2、P21和上调P27蛋白的表达有密切关系.
作者:吴喜利;孙万森;叶冰玉;安鹏;石兴民;傅荣国;王竹;乔成林 刊期: 2012年第12期
目的 对来源于HIV-1中国流行株CRF07 BC的包膜糖蛋白gp41 NHR结构域的N51进行表达和结构及抗原性分析.方法 运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,并进行核苷酸序列测定.利用生物信息学软件、圆二色谱法、免疫印迹法对表达的N51FdFc-BC重组蛋白进行结构和抗原性分析.结果 成功构建pFUSE/N51Fd-BC表达载体,并在真核表达体系实现了目的蛋白的高效表达.免疫印迹结果显示该重组蛋白大小约为35 000,可与抗HIV-1 gp41 N/C多肽的抗体反应.生物信息学分析显示N51 FdFc-BC重组蛋白相对分子质量为34 315.1,等电点PI为7.59,且形成了无规则卷曲结构,易于与抗体反应,可作为抗原.圆二色谱的分析与生物信息学软件预测的结果一致.结论 N51FdFc-BC重组蛋白具有无规则卷曲结构,可适合作为HIV-1亚单位疫苗的免疫原.
作者:邵继平;姜世勃;刘叔文 刊期: 2012年第12期
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路异常活化在硬皮病(SD)发病机制中的作用及其与SD临床分型的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测45例SD患者[系统性硬化症(SSc)25例,局限性硬皮病(LSc)20例]皮损中Wnt2、Wnt3a及β-catenin的量与分布,以20例健康成人皮肤作为正常对照(NC).结果 Wnt2、Wnt3a分别定位于SD患者皮损真、表皮胞浆和胞核,β-catenin定位于真皮类成纤维细胞、外分泌腺上皮细胞及浸润淋巴细胞的胞核及NC、部分SD表皮细胞的胞膜;SD皮损中Wnt2胞浆着色、Wnt3a及β-catenin核着色均显著高于NC (P<0.01),而β-catenin膜着色则明显低于NC (P<0.01);Wnt2、Wnt3a分别与β-catenin核着色呈正相关(r=0.663,0.654,P<0.01),而与β-catenin膜着色呈负相关(r=-0.532,-0.529,P<0.01);SSc上述3种蛋白的着色与LSc间的差异无统计学意义(P>0.05).结论 SD皮损中存在的异常活化的Wnt/β-catenin信号在其发病机制中可能起重要作用;LSc和SSc分居于SD病谱的两端而非两种独立疾病.
作者:刘金娟;刘彤 刊期: 2012年第12期
目的 探讨睡眠呼吸暂停低通气综合征患者持续气道正压通气治疗压力与其肺功能指标的关系,并简易预测有效的治疗压力公式.方法 回顾性分析48例确诊为OSAHS患者的临床资料,并行肺功能测定和人工气道压力滴定.观察指标包括治疗压力和肺功能指标(潮气量、一秒量、中心气道阻力、外周气道阻力等).行多元线性回归分析.结果 睡眠呼吸暂停低通气综合征患者的治疗压力与肺功能各项指标无相关关系,与颈围、腹围、睡眠呼吸暂停低通气指数、平均血氧饱和度、低血氧饱和度、氧降指数有相关关系.根据多元线性逐步回归(按α=0.05检验水准),只有氧降指数(P=0.002)和平均血氧饱和度(P=0.034)两个变量进入以治疗压力为应变量的回归方程中,且有统计学意义.即治疗压力与氧降指数及平均血氧饱和度有线性回归关系,与平均血氧饱和度呈负相关.结论 睡眠呼吸暂停低通气综合征患者的治疗压力与肺功能无相关关系.预测公式为:有效治疗压力=24.262+0.044×氧降指数-0.19×平均血氧饱和度,在无人工压力滴定的条件下可以通过此公式预测治疗压力.
作者:韩建芳;李涛平;冯媛;李丹青;李晓琳;罗淼 刊期: 2012年第12期
目的 克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1~VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性.方法 抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒7 1型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性.结果 成功构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应.结论 在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1~VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性.
作者:宋远斌;何思杰;余楠;陈欣欣;王斌;车小燕;曾其毅 刊期: 2012年第12期
目的 通过观察罗格列酮对RAW264.7泡沫细胞内胆固醇含量和酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)及B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)表达的影响,探讨罗格列酮抗动脉粥样硬化的作用机制.方法 以RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,分为空白对照组、泡沫细胞组和罗格列酮组,用不同浓度的罗格列酮(5、10和20 μmol/L)对泡沫细胞进行干预.采用油红O染色观察泡沫细胞形成,胆固醇氧化酶法检测泡沫细胞内胆固醇含量的变化;Western blotting技术检测泡沫细胞表面ACAT-1及SR-B Ⅰ的表达.结果 与对照组相比,泡沫细胞组内总胆固醇及游离胆固醇含量升高(P<0.01)、ACAT-1表达增加(P<0.05)、SR-B Ⅰ表达略有增加(P>0.05);与泡沫细胞组相比,不同浓度罗格列酮干预组细胞内总胆固醇及游离胆固醇含量下降(P<0.05)、ACAT-1表达下降(P<0.05)、SR-B Ⅰ表达升高(P<0.05),呈现出一定的浓度依赖性.结论 罗格列酮可通过下调ACAT-1的表达和上调SR-B Ⅰ的表达来降低泡沫细胞内胆固醇含量,从而发挥抗动脉粥样硬化作用.
作者:徐芳;蒙颖;王志禄;李万玲;贾军正;郭文芬;谢宛霞;胡海英;胡旭堂 刊期: 2012年第12期
目的 研究CK7和CK20在Barrett食管和贲门肠化黏膜表达的差异.方法 对19例长节段Barrett食管,36例短节段Barrett食管,20例贲门肠化胃镜标本进行CK7、CK20免疫组织化学染色,分析其与临床病理资料的关系.结果 100%(19/19)长节段Barrett食管、85%(31/36)短节段Barrett食管和10%(2/20)贲门肠化表达Barrett's CK7/20模式.长节段Barrett食管Barrett's CK7/20模式表达方式及病理资料与短节段Barrett食管相似,与贲门肠化明显不同.结论 Barrett食管CK7/CK20表达模式是诊断Barrett食管的客观标志.
作者:王瑞华;谢建国;沈玉玲;任婷婷 刊期: 2012年第12期
目的 探讨心肌梗死后心力衰竭患者给予不同剂量培哚普利治疗12个月后经无创超声心动图评估的心脏结构指标及心肌能量消耗(MEE)水平变化及其意义.方法 选取心肌梗死后不同程度心力衰竭患者63例,分别给予培哚普利治疗,根据长期口服剂量水平分为常规剂量组(N,培哚普利4 mg)和靶剂量组(H,培哚普利8 mg).治疗前及治疗12个月后分别用多普勒成像技术测量心脏结构指标、左室收缩功能指标(左室短轴缩短率LVFS,左室射血分数LVEF),计算左室收缩末周向室壁应力(cESS)、MEE.入组前及治疗后分别于清晨采集外周静脉血,检测NT-proBNP及血肌酐.结果 治疗前两组间各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).治疗后两组间比较,N组心脏结构指标(主动脉内径AD、左室收缩末期内径LVIDs、左室质量指数LVMI、左房内径LA)、心肌能量消耗指标(cESS、MEE)及lgNT-proBNP大于H组,收缩功能指标(LVFS、LVEF)低于H组,差异具有统计学意义(P<0.05).与治疗前比较,H组治疗后心脏结构指标、心肌能量消耗指标及lgNT-proBNP均明显降低,收缩功能指标明显升高;N组治疗后与治疗前比较,除PWTs、LVFS外其他各指标间变化均有统计学意义(P<0.05).双变量相关分析显示,MEE与lgNT-proBNP呈正相关关系(P<0.01).结论 心肌梗死后心力衰竭患者经过12个月不同剂量培哚普利治疗,均抑制了心肌重构,改善了左室收缩功能,降低了NT-proBNP及心肌能量消耗水平;高剂量培哚普利治疗较低剂量能更明显地抑制心肌重构,改善左室收缩功能,降低NT-proBNP及心肌能量消耗水平.
作者:梁健球;白书昌;许顶立 刊期: 2012年第12期
目的 利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+ HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响.方法 利用流式分选技术筛选CD133+ HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验鉴定其“干性”;随后以CD133 mRNA编码序列为干扰靶点,采用慢病毒介导的shRNA转染CD133+细胞.应用RT-PCR和Western Blot检测CD133 mRNA及蛋白表达,克隆形成实验检测转染前后细胞增殖情况,CCK-8法和流式细胞仪检测在化疗药物顺铂作用下转染前后细胞的生长抑制率及凋亡情况.结果 分选前后CD133表达率分别为(3.36±1.80)%,(88.74±3.19)%;CD133+细胞相对于CD133-细胞有更强的体外成球和体内成瘤能力;转染CD133 shRNA后的细胞CD133 mRNA表达明显受到抑制(P<0.05),蛋白表达水平降低,增殖能力显著下降(P<0.01).顺铂对转染CD133 shRNA后细胞生长抑制作用明显提高(P<0.01),且其在顺铂作用下的凋亡率也显著增加(P<0.05).结论 慢病毒介导的shRNA能显著下调CD133+肝癌干细胞CD133基因的表达,抑制其增殖并提高其对顺铂的敏感性.
作者:兰曦;王勇;曹姝;邹冬玲;李芳;李少林 刊期: 2012年第12期