学术投稿

Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定

王斌;李娟;张磊;张琳;张璐

关键词:Rac1-GTPase, 慢病毒, 绿色荧光蛋白, 生物学活性
摘要:目的 构建携带绿色荧光蛋白的Rac1-GTPase显性负效突变体(Rac1N17)和组成型活性突变体(Rac1L61)的慢病毒.方法 构建Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒,并以酶切和测序等方法鉴定.利用ViraPower~(TM)慢病毒表达系统包装制备Rac1-GTPase突变体慢病毒上清,用其感染大鼠前皮质神经元,分别进行Rac1生物学活性检测、细胞转染效率鉴定与神经元形态学观察.结果 构建的Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒经酶切与测序鉴定正确,包装的慢病毒滴度为1×10~6TU/ml.用制备的慢病毒上清感染原代培养的前皮质神经元,Rac1生物学活性检测结果显示Rac1N17慢病毒显著抑制表皮生长因子诱导的Rac1活性的升高,而Rac1L61慢病毒感染神经元Rac1活性显著升高.感染效率鉴定显示病毒上清可感染80%以上的前皮质神经元.形态学观察显示经慢病毒感染后的神经元其胞体与树突分支清晰可见.结论成功制备了Rac1N17和Rac1L61慢病毒,并成功实现了慢病毒感染前皮质神经元.为进一步研究Rho蛋白家族信号通路提供了一个重要工具.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 肝移植术后近期毛细胆管淤胆性高胆红素血症的激素治疗

    目的 探讨激素对肝移植术后近期毛细胆管瘀胆性高胆红素血症的治疗作用.方法 选择肝移植术后2周~1月出现血清总胆红索超过171 μmol/L的13例病例,经检查排除肝脏血供、胆道并发症、急性排斥反应等因素.病理确认为肝内毛细胆管淤胆后,予静滴氢化可的松琥珀酸钠,于治疗前1日、治疗后1日、治疗后1周分别检查肝功能,比较治疗前后胆红素的变化,并于治疗前及治疗后1周分别行肝穿病理检查对照治疗前后的变化.结果 经激素治疗后总胆红素水平明显下降,治疗后1周病理提示肝内毛细胆管淤胆消失.结论激素治疗肝移植术后近期毛细胆管淤胆性高胆红素血症是有效的方法.

    作者:林建华;崔忠林;周杰 刊期: 2010年第02期

  • 原发性肝癌术中放射治疗研究

    目的 探讨原发性肝癌术中放疗的可行性和优点.方法 利用放疗计划系统对16例肝癌患者,结合靶区剂量曲线分布情况和剂量体积直方图,进行术中放疗,并与三维适形放射治疗和PBT进行比较.结果 肝癌术中放疗90%的剂量线均能包绕靶区体积,显著好于三维适形放射治疗.肝癌术中放疗治疗计划与PBT计划相似,但治疗费用明显低于PBT费用.结论肝癌术中放疗能使靶区剂量分布均匀,适形度好,同时也有效地保护了敏感器官,有望提高肿瘤靶区剂量及肿瘤局部控制率.

    作者:卢金利;杨芳;王作仁 刊期: 2010年第02期

  • 高血压患者心肌缺血与颈动脉粥样硬化的相关性研究

    目的 探讨高血压患者的心肌缺血与颈动脉粥样硬化之间的相关性.方法 收集2005年5月至2008年9月在本院经查冠脉CTA排除冠心病的高血压患者共85例,首先根据平板运动负荷试验的结果将资料分为有无心肌缺血2组,与其影响因素间行单因素及多因素分析;然后再分析其与颈总动脉IMT及斑块的Crouse评分、室间隔及左室壁的厚度之间的相关性;后建立ROC曲线评估颈总动脉的IMT及斑块的Crouse评分预测心肌有无缺血的价值.结果 颈动脉斑块形成被发现是高血压患者心肌缺血的主要危险因素(OR=4.982,P=0.004),伴有颈动脉斑块形成的高血压患者其心肌缺血的发生率明显高于颈动脉无斑块形成的高血压患者(x~2=9.317,P=0.002);高血压患者的心肌缺血与室间隔及左室壁的厚度呈正相关(r=0.362,P=0.001;r=0.298,P=0.009),颈总动脉的IMT与室间隔厚度呈正相关(r=0.231,P=0.045);以Crouse评分预测高血压患者心肌有无缺血的ROC曲线下面积AUC为0.726±0.061,P=0.001:IMT的ROC曲线下面积AUC为0.682±0.061,P=0.006.结论颈动脉斑块形成是高血压患者心肌缺血的主要危险因素,与其发病呈正相关,但斑块的Crouse评分及颈总动脉IMT均不是预测其心肌缺血的很好指标.

    作者:由天辉;陆亚琴;田作军;周玉兰;王涛 刊期: 2010年第02期

  • KIR及苴HLA配体与肾移植急性排斥反应的关系

    目的 探讨供受者对杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其人类白细胞抗原(HLA)配体所介导信号传导通路在肾移植受者术后发生急性排斥反应(AR)中可能的作用.方法 回顾性分析53对肾移植供受者对HLA和KIR基因型,受者按照术后肾功能状态分为急性排斥组(n=19)和肾功能稳定组(n=34),探讨供者HLA、受者KIR基因型以及受者KIR/供者HLA配体组合型与肾移植急性排斥反应发生的相关性.结果 供者HLA、受者KIR基因表现型频率在急排组和稳定组的分布:供者HLA基因型HLA-CI/2、HLA-A3、HLA-A11、HLA-Bw4在两组间分布无显著统计学差异(P>0.05).受者KIR2DL2/2DS2在急排组表达低于稳定组(26.3% vs 55.9%,P=0.038),受者KIR基因组合型AA类型在急排组表达低于稳定组(31.6% vs 67.6%,P=0.011).供者HLA-Cw、受者KIR基因组合型术后急性排斥反应发生率:供者HLA-C1/C1类型低于非HLA-C1/C1类型(31.6% vs 46.7%,P>0.05).受者KIR基因组合型AA类型低于非AA类型(20.7% vs 52.2%.P=0.011).受者KIR/供者HLA配体组合型匹配情况:肾功能稳定组中KIR2DL2/HLA-C1和KIR2DL2/HLA-C1信号匹配率较急性排斥组高(P=0.030,P=0.028).结论特定的KIR/HLA配体组合型(如KIR2DL2/HLA-C1、KIR2DL2/HLA-C1)可以降低肾移植术后急性排斥反应的发生率.良好的供者HLA和受者KIR配型选择有利于同种异体肾移植的预后.

    作者:于立新;肖飞;肖露露;罗敏;付绍杰;王亦斌;苗芸 刊期: 2010年第02期

  • 妊娠合并风湿性心脏病125例分析

    目的 探讨风湿性心脏病对妊娠与分娩的影响.方法 回顾性分析125例妊娠合并风湿性心脏病的病例资料,孕前行心脏手术设为A组,未行手术组设为B组,比较两组心功能、妊娠期并发症及合并症、分娩孕周、分娩方式及母婴结局.结果 心脏手术后心功能明显改善、妊娠期并发症明显减少,两组有显著性差异(P<0.05);两组足月分娩孕周有统计学差异(P<0.05);A组无孕产妇及围产儿死亡;B组围产儿死亡2例,产妇死亡2例;剖官产是两组的主要分娩方式.结论心脏手术后明显改善风湿性心脏病孕妇的心功能状态,降低不良并发症的发生,改善妊娠结局;择期剖宫产是心、脏瓣膜置换术后分娩的首选方式.

    作者:李艳秋;余艳红;周俊;夏珣 刊期: 2010年第02期

  • 133例男性原发不育患者染色体核型及Y染色体微缺失分析

    目的 探讨染色体核型异常及Y染色体微缺失与男性原发不育的关系.方法 利用染色体技术、PCR技术等对133例男性不育患者进行外周血染色体分析及Y染色体微缺失检测.结果 133例男性原发不育患者中发现异常核型25例(18.80%);发现Y染色体微缺失12例(9.02%),其中2例精索静脉曲张及2例隐睾患者;4人同时存在染色体核型异常及Y染色体微缺失.结论男性原发不育与染色体核型异常及Y染色体微缺失关系密切,对男性原发不育患者进行染色体核型及Y染色体微缺失检测非常重要.

    作者:纪妍;徐宏甲;黄健初 刊期: 2010年第02期

  • 猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

    目的 克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达.方法 利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni~+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度.采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的 蛋白进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出的片段长度为1056 bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变.转化有重组质粒的E.coliBL21(DE3)经过0.05 mmol/L IPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%.结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础.

    作者:方强;骆江坤;崔琢;齐文娟;胡元生;沈继龙 刊期: 2010年第02期

  • 生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用

    目的 探讨生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用.方法 WST法、台盼蓝拒染法、克隆形成抑制实验检测聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用.建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,检测PEI-ASODN联合5-FU对肝癌移植瘤小鼠瘤重、瘤体积的改变,对肝癌腹水瘤小鼠平均存活天数的影响.结果 不同浓度的PEI-ASODN作用于SMMC-7721细胞48 h后,0.75 μmol/L的PEI-ASODN分别作用细胞24、48、72和96 h后,均能对细胞产生明显的抑制作用:PEI-ASODN对细胞的克隆形成也有显著的抑制作用,与细胞对照组相比有显著的统计学差异(P<0.01).肝癌腋下移植瘤小鼠,各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以联合用药组(5-FU+PEI-ASODN)明显,瘤重抑瘤率高达56.91%,瘤体积抑制率高达57.83%;肝癌腹水瘤小鼠模型,联合用药组生命延长率为94.09%.与生理盐水组相比,具有显著性差异(P<0.01).结论聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)可显著抑制肝癌细胞生长,并可提高荷肝癌小鼠对5-FU的敏感性.

    作者:吴风云;黄光胜;蒋建伟;王芳;徐向东;彭单依 刊期: 2010年第02期

  • 后腹腔镜治疗输尿管中上段结石26例报告

    目的 探讨后腹腔镜输尿管中上段切开取石术的技术要点和临床疗效.方法 采用后腹腔镜治疗输尿管中上段结石26例,采用新的置管方法放置双J管,均缝合输尿管切口.结果 1例肾盂结石因结石返回肾盏内改开放手术,其余25例后腹腔镜下取石成功.手术时间30~60 min,平均45 min.术中出血5~10 ml.采用新的置管方法耗时1~3 min,平均2 min.结论后腹腔镜输尿管切开取石术是一种安全有效的微创技术,可作为开放手术或其他微创方法的替代或补充,采用新的置管方法可缩短手术时间.

    作者:苏寒锦;丁勇泉;李汉强;周辉 刊期: 2010年第02期

  • 人体心脏心室肌纤维三维结构的研究

    目的 探索人体心脏心室肌纤维的三维结构.方法 获取8例人体心脏,供者均为男性,年龄(81.9±7.2)岁,心脏质量(455.6±65.7)g.心脏放入装满水的塑料容器中,立即进行弥散张量磁共振扫描,从供者死亡到标本扫描的间隔时间为(18.6±5.2)h.扫描使用3.0 T,GE CV/Ⅰ型磁共振机进行,采用8通道线圈扫描,sshEPI和SENSE扫描序列,层厚3mm.b值1000 s/mm~2,TR 2000 ms,TE 86.4 ms.FOV 14 cm×14 cm.Voxels 128×128.Resolution1.1 mm×1.1 mm×3 mm.然后采用GE Advantage Windows workstation通过纤维追踪进行心肌纤维的可视化重建,显示并观察心肌纤维的三维结构.结果 左心室前壁,室间隔,后壁及游离壁处的纤维均存在两个走行方向不同纤维层面,心内膜下层心肌纤维从基底部到心尖呈现纵斜形向下走行,中层的心肌纤维从心尖到基底部呈现横斜形向上走行,两者在心尖部呈螺旋形连接.结论人体心脏心室肌纤维的三维结构与Torrent心肌带假说所阐述的结构特征基本一致.

    作者:叶卫华;高长青;吕坤;李力兵;闫军兰 刊期: 2010年第02期

  • 高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法测定双黄连粉针剂中奎尼酸的含量

    目的 建立双黄连粉针剂和金银花药材中奎尼酸的高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱含量测定方法.方法 双黄连粉针及金银花药材中的奎尼酸分别用50%甲醇提取,以高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱进行分析,多反应监测扫描,母/子离子对为191/85.结果 奎尼酸保留时间为1.645 min,标准曲线在42.96~214.80 μg·ml~(-1)范围内线性关系良好(r2=0.9995),加样回收率97.61%,RSD 1.50%.结论该方法快速、准确、选择性好,灵敏度高,可为奎尼酸的含量测定提供参考.

    作者:王有志;罗奇志;罗佳波 刊期: 2010年第02期

  • KDR启动子驱动的双自杀基因对人结肠癌细胞的特异性杀伤作用

    目的 探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK对人结肠癌细胞SW480的特异性杀伤作用.方法 用腺病毒AdKDR-CDglyTK感染表达KDR的SW480细胞和不表达KDR的LS174T细胞,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测重组腺病毒及转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理,MTT法检测该系统对不同细胞株的杀伤效应和旁观者效应;用流式细胞术观察细胞内DNA含量和细胞周期的变化.结果 携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SW480和LS174T细胞中有GFP表达.RT-PCR检测发现SW480细胞有目的 基因的表达,而LS174T细胞无表达.在前药应用下,已转染腺病毒的SW480和LS174T细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SW480细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01).将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该系统有明显的旁观者效应.用流式细胞仪测定给药组出现典型的凋亡峰,细胞周期显示治疗组细胞G0-G1期比率增多,S期细胞减少.结论KDR启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人结肠癌SW480细胞,抑制其增殖并诱导细胞凋亡.

    作者:王朝阳;黄宗海;李强;姚晓军;俞金龙;历周 刊期: 2010年第02期

  • 深低温停循环对婴幼儿心脏手术围术期的影响

    目的 探讨深低温停循环(DHCA)在婴幼儿复杂先天性心脏病矫治术中的脑保护效果及对围手术期肾功能、凝血系统的影响.方法 回顾我院2006年1月~2008年12月74例术中应用DHCA的复杂先心患儿,并与同期应用常规体外循环患儿进行对照.所有病例均采用Stockert-Ⅲ型体外循环机转流,Dedico-901膜肺,红细胞及血浆预充,建立体外循环后肛温降到30℃时阻断升主动脉,灌注心肌停搏液.继续降温至鼻咽温18~20℃,肛温18~21℃,停循环时先停止动脉血泵的灌注,麻醉医生鼓肺、外科医生挤压肝区使体内血液回流入贮血室.钳夹动静脉输血管后氧合器自身循环.DHCA期间患儿头部冰敷.恢复体外循环后低温转流后再开始血流复温,并加入20%甘露醇、甲基强的松龙等.其中降温过程采用pH稳态,维持和复温过程采用α稳态分析,采用常规加改良超滤.结果 除术后第3天肾功能、腹透例数、引流量外,其他神经系统、凝血系统两组间无统计学差异.结论在婴幼儿复杂心脏手术体外循环中,选择合适的血气管理模式,适当的控制降温和复温过程,维持较高的红细胞压积,改良超滤的应用等进一步改善DHCA脑保护效果,减少手术并发症,是成熟的脑保护措施.

    作者:彭东 刊期: 2010年第02期

  • p38MAPK信号通路在甘草酸二铵减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用

    目的 观察p38MAPK信号通路在甘草酸二铵对兔心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 30只新西兰大白兔随机分为3组,每组10只:假手术组(Ⅰ组).缺血再灌注组(Ⅱ组)、甘草酸二铵处理组(Ⅲ组).Ⅰ组行冠脉套线不阻断,Ⅱ、Ⅲ组均行后冠状动脉前降支阻断40 min,再灌注120 min.其中Ⅲ组在阻断前用甘草酸二铵2.5 mg/kg静脉泵注.三组在阻断冠脉前20 min(T_0),阻断后20 min (T_1)、40 min(T_2)、再灌注后1 h(T_3)、2 h(T_4)取颈内动脉血测定血浆TNF-2、IL-6,IL-8细胞因子含量,再灌注结束后免疫印记法测心肌p38MAPK水平,再灌注结束后观察心肌细胞超微结构,同时用伊文思蓝和TIC染色法测心肌梗死面积.结果 与Ⅱ组比较Ⅲ组p38MAPK表达降低(P<0.05),细胞炎性因子含量减少(P<0.05).心肌细胞超微损伤减轻(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05).结论甘草酸二铵通用下调心肌P38MAPK表达,减少炎性因子生成,抑制过度的炎性反应,改善心肌细胞超微结构,从而减轻心肌缺血再灌注损伤.

    作者:刘流;周海洋;冉珂;王建斌 刊期: 2010年第02期

  • 后路寰椎侧块结合枢椎椎弓根螺钉固定治疗上颈椎不稳的临床研究

    目的 探讨应用寰椎侧块螺钉与枢椎椎弓根螺钉固定融合治疗上颈椎不稳的疗效.方法 2006年2月至2008年9月,采用寰椎侧块螺钉结合枢椎椎弓根螺钉技术治疗寰枢椎不稳10例,其中齿突陈旧性骨折3例,新鲜齿突骨折7例(Aderson ⅡC型).所有患者均伴有寰枢椎脱位或不稳,表现为不同程度的颈枕区疼痛,活动受限.寰椎侧块螺钉进钉点选择在寰椎后结节中点旁18~20衄与后弓下缘以上2mm的交点处,钉道与冠状面垂直,矢状面上螺钉向头侧倾斜约5°.枢椎椎弓根螺钉进钉点,为枢椎下关节突根部中点,钉道与矢状面夹角约15°,与横断面夹角约30°.螺钉直径3.5mm,寰椎侧块螺钉长28~32 mm,枢椎椎弓根螺钉长22~30 mm.均用Oasys固定.结果 10例患者共置入寰椎侧块螺钉和枢椎椎弓根螺钉各20枚.无一例患者发生脊髓和椎动脉损伤.所有患者均获随访,随访3~15月,平均8个月.术后3个月JOA评分13.2~16.8分,平均14.8分,改善率为87.5%.植骨块全部融合,无内固定断裂、松动.结论后路寰椎侧块螺钉结合枢椎椎弓根螺钉固定具有稳定的三维固定效果,可用于治疗上颈椎不稳.

    作者:张东;何秦;黄焱星 刊期: 2010年第02期

  • 比较基因组学平台的设计与实现

    目的 开发一个基于Web的本地服务器支持的功能全面的基因组比较和可视化平台,以加快对基因组的分析.方法 构建以Apache HTTP服务器为平台的WEB服务器,采用Perl语言编程,优选整合了MUMmer、LAGAN、Mauve等多个基因组学研究的软件和算法,针对生物学家不同的应用目的 ,可直接在网页上提交基因组序列数据和参数选项,经平台处理的结果通过网页以图形化的方式返回用户.结果 该平台可以处理多种序列数据输入格式,实现了完整的基因组序列和草图基因组序列比对,近远源物种的双基因组或多基因组比对,基因组间的同线性区域寻找,以及定位大范围的基因组重组(基因插入/缺失、重复、重排和水平转移)和小的核苷酸突变等功能:并将结果以图形化的方式显示.应用本平台,对10种新型甲型流感病毒株作基因组同源性分析,表明PB1基因可能来自于人H3N2,PB2、PA基因可能来自于禽类H3N2,而HA、NS基因可能来自于猪HIN1.在本平台上还对结核分枝杆菌(H37Rv、CDC1551)和牛分支杆菌(AF2122/97)基因组的研究分析,发现插入/缺失和重复序列是导致三个菌株基因组差异的主要来源.结论该平台功能资源整合较全面,应用界面友好,结果显示直观,故可作为比较基因组学常规研究的有效平台.

    作者:刘娜;郭云波;孙显赫;马骊;邓亲恺 刊期: 2010年第02期

  • HER-2/neu基因在肝细胞癌中的表达及意义

    目的 研究HER-2/neu在肝细胞癌(HCC)患者中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测30例HCC、10例肝硬化、10例正常肝组织中HER-2蛋白的表达情况.结果 HCC中HER-2阳性表达率显著高于肝硬化及正常肝组织(X~2=6.482,P=0.032);HCC中HER-2的表达与是否伴有肝硬化(P=0.041)、侵袭性(P=0.028)、Edmondson分级(P=0.012)有明显的相关性,与其他临床病理特征无明显相关性.HER-2表达阳性患者的平均生存时间明显短于阴性表达患者(P=0.036).结论HER-2/neu基因在HCC的侵袭性生长转移和发展中可能具有一定的促进作用,在HCC组织中HER-2/neu表达阳性的患者预示较差的预后.

    作者:张俊凯;潘佩玲;吴颖猛;萧剑军;彭杰文 刊期: 2010年第02期

  • HPLC法检测脊柱结核病椎内外异烟肼和乙酰异烟肼浓度

    目的 研究脊柱结核正规化疗后异烟肼及代谢产物在病椎内外分布的特点.方法 23例应用3SHRE/15HRE化疗方案结合手术治疗的脊柱结核患者,术前按年龄分4组行脊柱CT检查,测量核病灶、病灶外病椎及正常椎骨CT值.化疗第4周手术,术中再取病椎各部作高效液相色谱分析(HPLC),测量抗结核药异烟肼(INH)及其代谢产物乙酰异烟肼(AC-INH)浓度.结果 (1)INH和AC-INH在血液中的浓度水平高,在正常髂骨和非硬化骨病椎中浓度次之,硬化壁和病灶中浓度极低.(2)在病椎非硬化骨中INH和AC-INH浓度与正常椎骨之间无统计学差异(P<0.05).(3)在病椎硬化骨中INH和AC-INH浓度与正常椎骨之间有统计学差异(P<0.05).(4)在病灶中几乎测不出该药浓度.结论INH和AC-INH在脊柱结核患者正常椎骨与非硬化骨的病椎中可达到有效治疗浓度,而在病灶及有硬化骨的病椎中难以达到有效的药物浓度.

    作者:刘鹏;江建明;周枝凤 刊期: 2010年第02期

  • 他克莫司对全血细胞因子分泌的影响

    目的 研究免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)在体外对全血细胞因子分泌的影响.方法 健康志愿者全血加入不同浓度FK506.经佛波酯(PMA)和离子霉素(IONO)刺激后,用Bio-Plex悬浮蛋白芯片系统检测上清中细胞因子112、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF以及G-CSF的水平.结果 同对照组相比,高浓度组FK506(20 ng/ml)能显著抑制IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF和G-SCF的分泌(P<0.05);中浓度组FK506(5 ng/ml)能有效抑制GM-CSF的分泌,两组之间的差异有显著性(P<0.05).结论FK506对全血细胞促炎症细胞因子IL-6,IFN-γ和TNF-α的分泌有较强的抑制作用,同时对IL-2,IL-12,IL-17以及集落刺激因子因子GM-CSF,G-CSF也有明显抑制作用.因此FK506发挥免疫抑制功能可能通过抑制免疫细胞分泌各类细胞因子来实现.同时,由于FK506与细胞因子的分泌有剂量依赖关系,有望可以通过FK506浓度水平与细胞因子的抑制水平的依赖关系来评估临床病人FK506的用量是否合理.

    作者:何懿;李民;刘占国;罗宇维;王明;张婕;孙尔维 刊期: 2010年第02期

  • 真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-ZNF217的构建及表达

    目的 克隆人类ZNF217基因cDNA全长,构建ZNF217的真核表达载体,并在真核细胞中表达.方法 采用RT-PCR技术从人HO-8910卵巢癌细胞总RNA中扩增ZNF217cDNA基因片段,经过酶切鉴定后,克隆至pMD 19-Teasy,测序证实碱基序列无误后,再克隆到真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1)上,并转染到真核细胞,观察其在真核细胞中的表达.结果 序列测定证实克隆的ZNF217全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实ZN217正确插入pEGFP-N1载体中,该重组载体能够在真核细胞中表达.结论成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-ZNF217.

    作者:黎静;周军;钟梅 刊期: 2010年第02期

南方医科大学学报杂志

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