学术投稿

荧光染料CFSE标记大鼠间充质干细胞的体外研究

李艳菊;邓兰;黄睿;郭坤元

关键词:荧光染料, 间充质干细胞细胞, MTT法, CFSE
摘要:目的 探究荧光染料CFSE对大鼠间充质干细胞细胞(MSCs)标记的理想条件及跟踪时限.方法 采用终浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L的CFSE在1、5、10 min三个不同的时间点标记MSCs,用流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞的转染率和荧光强度.以此来筛选CFSE标记MSCs的理想条件;采用MTT方法检测在此理想条件下CFSE对MSCs的增殖是否有影响:用流式细胞仪和荧光显微镜检测在此理想条件下CFSE跟踪MSCs的大时限.结果 终浓度为20.0 μmol/LCFSE作用5 min为CFSE标记MSCs细胞的理想条件,在此理想条件下MSCs细胞的荧光强度能跟踪到第21天时与未标记细胞的荧光强度相接近,并且此理想条件下的CFSE对MSCs细胞的增殖无影响(P0.05).结论 在体外正常的培养条件下终浓度为20.0 μmol/L CFSE作用5 min为其标记MSCs细胞的理想条件,在此理想条件下的CFSE能够跟踪MSCs细胞的大时限为21d.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 运用混合插值法降低金属伪影

    目的 运用混合插值方法去除CT图像金属伪影.方法 对目前常用的线性插值、样条插值和多项式插值方法进行了简单介绍,并利用这方法分别对基于Sheep-Logan模型的仿真结果和实际的CT扫描结果进行校正,在对这些单一插值方法进行比较的基础上,提出了一种混合插值的新方法.即对金属植入物采用四次多项式的插值方法,条状伪影采用线性插值的方法,然后再把两种插值的结果按一定权重结合起来.结果 每种插值方法各有特点,混合插值方法性能较优.结论 混合插值方法可以用于去除CT图像金属伪影.

    作者:余晓锷;李婵娟;陈武凡 刊期: 2009年第01期

  • 早期自然流产绒毛细胞培养及染色体核型分析110例

    目的 探讨早期自然流产病例中绒毛染色体核型检查的必要性和重要性,更好地开展优生优育工作.方法 针对110例早期自然流产患者的绒毛标本进行细胞培养和染色体制备及核型分析.结果 110例早期自然流产绒毛中,细胞培养成功103例,成功率为93.7%,其中,染色体核型异常52例,占50.5%,并以三体型为常见.单一流产与反复流产(≥2次)的异常胚胎比例分别为29例(52.9%)与23例(42.6%),无统计学差异.自然流产胚胎中女性胚胎78例,占75.5%;染色体异常的胚胎中,女性35例,占染色体异常胚胎的67.3%,两者均明显高于男性.结论 胚胎染色体异常是早期自然流产的主要原因,在临床上对早期自然流产胚胎开展染色体检查有利于判断流产的原因,并达到针对性地指导优生优育的目的.

    作者:熊丽;刘洁;邓康;刘思平;贾蓓;吴瑞枫;钟梅;曾嵘 刊期: 2009年第01期

  • 磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病小鼠黑质iNOS表达的影响

    目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元丢失的可能机制.方法 建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、iNOS和P-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平的变化,并观察给予人参皂甙Rg1(Rg1)对上述变化的影响.结果 模型组小鼠出现典型PD行为学症状.在MPTP第5次注射后7 d,与对照组相比黑质区TH阳性神经元数量显著丢失77%(P<0.01),中脑黑质TH蛋白印记表达水平显著降低约75%(P<0.01);Rg1预处理后,PD小鼠行为学症状减轻,与对照组相比TH上述指标分别下降约44%和41%(P<0.01).MPTP第3次注射后1.5 h P-ERK1/2核内始见,至6 h iNOS有较高表达.Rg1预处理可显著阻抑P-ERK1/2和iNOS的表达(P<0.01).Spearman相关性分析,P-ERK1/2和iNOS的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 P-ERK1/2可能通过捌控iNOS表达进而导致PD黑质DA能神经元丢失,Rg1可能阻抑此通路以保护DA能神经元.

    作者:石冲;张宇新;张作凤 刊期: 2009年第01期

  • A68930对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响

    目的 探讨激活多巴胺D1受体对延髓脑片基本节律性呼吸放电的影响.方法 用SPF级新生SD大鼠(0~3 d)制备离体延髓脑片标本,随机分成Ⅰ~Ⅳ组(每组n=5),以改良的Kreb's液恒温灌流,稳定记录到与之相连的舌下神经根的呼吸节律性放电活动(RRDA).Ⅰ组为对照组,只用Kreb's液灌注;Ⅱ~Ⅳ为实验组,分别给予1、2、5 μmol/L的多巴胺D1受体特异性激动剂cis-(±)-1-(aminomethyl)-3,4-dmydro-3-phenyl-1H-2-benzopyran-5,6一diolhydrochlo-ride(A68930)持续灌流10min:观察各组改灌前以及改灌后1、3、5min时舌下神经的呼吸节律性放电活动的变化.结果 (1)给药后RRDA的呼吸周期(RC)和呼气时间(TE)随时间延长逐渐缩短,放电积分幅度(LA)逐渐增大,5 min时RC、TE和IA的变化明显:在2、5μmol/L组与用药前比较三项指标有统计学差异(2μmol/L组1 min时的IA与用药前相比较没有统计学差异);(2)随用药浓度增大RC、TE逐渐减小,而IA逐渐增大,5 μmol/L时RC、TE、IA变化明显;用2、5μmol/L的A68930灌流后,三项指标与对照组比较有统计学差异.结论 多巴胺D1受体参与节律性呼吸的调节;多巴胺D1受体可能主要是通过缩短呼气时程增加呼吸的频率,通过增强吸气放电幅度来参与呼吸运动强度的调节.

    作者:焦勇钢;吴敏;吴中海 刊期: 2009年第01期

  • 肾移植急性排斥前后外周血淋巴细胞Notch1表达的变化

    目的 研究移植肾急性排斥反应前后外周血淋巴细胞Notch1的表达及意义.方法 40例肾移植受者按术后是否出现急性排斥反应分为排斥组(n=20)及无排斥组(n=20).应用流式细胞技术检测两组术前、术后排斥反应发生时及抗排斥治疗后的外周血淋巴细胞Notch1的表达,观测各组的Notch1阳性淋巴细胞率,对各组各时间点间的测得值进行比较分析.结果 排斥组在术后排斥发生时的Notch1阳性淋巴细胞率明显高于术前(t=4.245,P=0.000),也明显高于无排斥组(t=3.839,P=0.000),抗排斥治疗后明显下降(t=3.102,P=0.004);而无排斥组术后的Notch1阳性淋巴细胞率与术前无显著性差异(P=0.409);不同的免疫抑制方案间亦无显著性差异(P0.05).结论 监测外周血淋巴细胞Notch1的表达有助于诊断急性排斥反应,并可提示抗排斥治疗的效果.

    作者:朱明德;于立新;徐健;杜传福;付绍杰;邓文锋;王亦斌 刊期: 2009年第01期

  • 多表位HBV DNA疫苗的中试制备及质量研究

    目的 建立多表位HBVDNA疫苗(PVAX-HS)的中试制备及质量控制方法.方法 采用分批补料发酵方式,碱裂解结合超滤浓缩,三步柱层析制备DNA疫苗,并对终产品进行全面质量控制.结果 分批补料发酵获得生物量50~60g/L,质粒终产量约为1.0 mg/g菌体,符合药用DNA疫苗质量标准.结论 建立了质量稳定的PVAX-HS中试制备工艺,符合规模化生产要求.

    作者:郭妍;惠长野 刊期: 2009年第01期

  • 肥胖患者手术切口的缝合方式探讨

    目的 探讨肥胖患者手术切口的缝合方式.方法 选取行腹部纵切口的肥胖患者共60例,随机分为两组,各30例.A组常规方法缝合:1号丝线缝合皮下组织,1号丝线缝合皮肤;B组缝合方法:缝合前对切口适当清创,清除游离的脂肪组织,切口张力大的患者用张力线全层缝合(非褥式);切口张力不大的患者,用4号丝线将皮肤及皮下组织全层褥式缝合.术后常规换药.视切口愈合情况7~10d拆线.对比两组的缝合时间,脂肪液化、伤口裂开及切口感染情况,数据分析采用t检验和Fishet's精确概率法.结果 B组缝合时间短于A组,脂肪液化、伤口裂开及切口感染少于A组,差别有统计学差异.结论 对手术切口适当清创、全层缝合,有利于肥胖患者切口的愈合.

    作者:周水生;梅志雄;黄敏;李小毛 刊期: 2009年第01期

  • 大骨节病和骨性关节炎患者滑膜白介素-1β和肿瘤坏死因子-α的比较

    目的 比较大骨节病(KBD)和骨性关节炎(OA)关节滑膜和滑液中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,探讨两种病的发病机制.方法 分别收集大骨节病和骨性关节炎患者关节滑膜和滑液20例和18例,以单纯半月板损伤患者的关节滑膜和滑液19例为对照;采用免疫组织化学染色法,观察大骨节病、骨性关节和半月板患者关节滑膜IL-1β和TNF-α阳性表达强度;采用ELISA法检测三种滑液标本IL-1β和TNF-α的水平.结果 TNF-α在KBD和OA滑膜组织中的表达与对照组相比有显著性差异(P<0.05);IL-1β在KBD和OA滑膜组织中的表达与对照组相比也有显著性差异(P(0.01);IL-1β和TNF-α在KBD滑膜组织中的表达与OA相比无显著性差异(P0.05).TNF-α和IL-1β在KBD和OA滑液中的水平与对照组相比均有显著性差异(P<0.05);IL-1β和TNF-α在KBD滑液中的水平与OA相比均无显著性差异(P0.05).结论 IL-1β和TNF-α可能在KBD和OA发生发展中扮演着重要的角色.

    作者:孙正明;凌鸣;刘森;张银刚 刊期: 2009年第01期

  • 乙型肝炎病毒核心抗体IgM时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

    目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒抗HBc-IgM的检测试剂盒.方法 采用捕获法建立抗HBc IgM TRFIA检测试剂盒.对自制试剂盒的各项性能指标进行评估.结果用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为4.8~7.2%,7.5~8.6%;与抗-HBs,抗-HBc IgG和抗-HBe无交叉反应;对584份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果 显示自制试剂盒的灵敏度更高;300份健康者血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×3.5.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代酶免法试剂盒.

    作者:胡妮娅;董志宁;周卓龙;李明;吴英松 刊期: 2009年第01期

  • 经皮冠状动脉介入术后支架内血栓对临床预后的影响

    目的 评价经皮冠状动脉介入(PCI)治疗后支架内血栓形成的危险凶素及其对临床预后的影响.方法 入选我院资料库登记成功实施PCI治疗的1283例患者.男860例,女423例,年龄(61.2±8.3)岁(14~84岁).围手术期采用阿司匹林、氯吡格雷/噻氯匹定、低分子肝素/普通肝素进行标准的三联抗血小板、抗凝治疗.PCI手术方案:经股(桡)动脉人路,按标准的PCI手术规范治疗.平均随访(12±8)月(4-23月).结果 在1 283例常规PCI患者中发生12例次支架内血栓形成.发生率为0.94%(12/1020).其中急性支架内血栓1例,亚急性血栓9例,延迟血栓2例.合并危险因素,急性冠脉综合症(ACS)10例,弥漫长病变8例,心功能不全8例.临床转归:8例治愈出院,死亡4例.死亡的4例均为心绞痛并LAD支架内血栓形成,3例合并严重心功能不全.结论 支架内亚急性血栓多发生于ACS、弥漫长病变、支架贴壁不良及心功能不全患者.合并不稳定性心绞痛、心功能不全、前降支支架内血栓形成是导致患者死亡的主要原因之一.

    作者:修建成;侯玉清;黄铮;郭志刚;周忠江;贾满盈;吴平生;许顶立 刊期: 2009年第01期

  • 超细鼻胃镜辅助胃造瘘

    目的 探讨超细鼻胃镜在经鼻经皮内镜下胃造瘘术(nPEG)中的应用.方法 采用Introducer法.对9例连续住院需胃造瘘病人分别用普通胃镜和超细鼻胃镜经皮内镜下胃造瘘.4例nPEG患者中,3例为鼻咽癌放疗术后患者,其中2例张口困难,1例张口困难伴咽喉部狭窄.分别比较两种方法操作的时间、安全性和并发症及舒适性.并观察超细鼻胃镜在张口困难或咽喉部狭窄患者中的应用情况.结果 在本组的9例病人中,5例用普通胃镜进行了胃造瘘,4例用超细鼻胃镜胃造瘘,都取得了成功.普通内镜胃造瘘的时间平均为(17±3.5)min,而nPEG组的时间平均为(17±3.1)min.两种方法均无并发症,但npEG组患者舒适性更好.结论 超细鼻胃镜辅助胃造瘘更舒适安全的胃造瘘方法,特别适应于各种原因致张口困难和/或咽喉部狭窄的患者.

    作者:陈学清;冯灼彬;钟亮玉;黄敏菁;卢俊勇;吴静;詹红 刊期: 2009年第01期

  • 胃癌中HB-EGF的表达及意义

    目的 研究HB-EGF在胃癌的不同发展阶段中的表达.方法 用免疫组织化学和原位杂交的方法榆测正常组织,肠化生组织,早期胃癌和进展期胃癌中HB-EGF蛋白和mRNA的表达变化.结果 在正常组织中,HB-EGF仪表达于胃底腺胃壁细胞和幽门腺G细胞;在肠化生组织中,可见HB-EGF阳性染色于胃黏膜上皮细胞中,但表达较弱;在早期胃癌中可见表达于全层胃黏膜上皮细胞中.染色较肠化生组织重,而在进展期胃癌中强表达.结论 HB-EGF的升高可能参与胃癌的发生和发展.

    作者:王国荣;郑焱;车向明;王小强;王晓维;潘承恩;何文宪 刊期: 2009年第01期

  • 急性分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基mRNA表达

    目的 研究急性大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道各亚基的表达.方法 20只健康SD大鼠,对其肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测ENaC三个亚单位α、β、γmRNA水平.结果 急性分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞ENaC三个亚单化均有表达,其中α-业基mRNA表达强,显著高于β-和γ-业基,β-和γ-亚基mRNA表达无显著性差别.结论 大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道在DNA水平上表达以α-亚基为主,α-亚基在肺水清除中起主要作用.

    作者:周望梅;何琳;李涛平;游杰 刊期: 2009年第01期

  • CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与2型糖尿病肾病的关系

    目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)与2型糖尿病肾病之间的关系,为2型糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路.方法 采用流式细胞仪胞内染色技术测定60例2型糖尿病患者和15例正常对照组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率.结果 ①CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率在2型糖尿病组和对照组之间无显著性差异.②微量蛋白尿组和大量蛋白尿组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率较对照组有显著性降低(P<0.05),而且大量蛋白尿组较微量蛋白尿组表达率降低更明显(P<0.05).③病程与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率呈显著负相关;UAER分级的等级变量与CD4+D25+Foxp3+Treg细胞表达率之间有显著的负相关性.结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞可能参与了2型糖尿病肾病的发生和发展.

    作者:徐静;苏鸿莉;王俊宏;张春虹 刊期: 2009年第01期

  • KDR启动子驱动的双自杀基因对人肝癌细胞及脐静脉内皮细胞的特异性杀伤作用

    目的 探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基凶系统CDglyTK对人肝癌细胞及脐静脉内皮细胞的特异性杀伤作用.方法 用腺病毒AdKDR-CDglyTK感染表达KDR的BEL-7402、HUVEC细胞和不表达KDR的HepG2细胞,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测重组腺病毒及转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理,MTT法检测该系统对不同细胞株的杀伤效应和旁观者效应.结果 以感染复数MOI为100的腺病毒AdKDR-CDglyTK分别感染各细胞株,重组腺病毒对三种细胞具有相似的感染效率.RT-PCR检测发现,重组腺病毒及感染AdKDR-CDglyT的三种细胞均有目的基因CDglyTK的表达.感染腺病毒的BEL-7402、HUVEC细胞对前药具有较高的敏感性,而HepG2细胞对前药不敏感(P<0.001).将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该系统有明显的旁观者效应.结论 KDR启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK对肝癌细胞及人脐静脉内皮细胞具有特异性的杀伤作用.

    作者:杨六成;黄宗海;孔恒;李强;陈飞;俞金龙;厉周 刊期: 2009年第01期

  • 广东省医药卫生人才现况及其对医学教育发展的需求分析

    卫生事业的发展需要高素质医药卫生人才的支持,医药卫生人才来源于医学教育的培养.文章通过对广东省2002年至2006年医药卫生人才现况和医学教育需求进行比较分析,结合广东省医疗人力现状及发展趋势,从提高培养层次,改变培养结构,优化专业设置,合理配置医学教育资源等方面对医学教育发展进行了讨论.

    作者:曾志嵘;王鹏飞;周增桓;徐庆锋 刊期: 2009年第01期

  • 尿道脱细胞基质修复兔尿道缺损的实验研究

    目的 制备兔尿道脱细胞基质(UAMG),检测其生物相容性,并探讨其修复兔尿道缺损的效果.方法 制备兔UAMG,光镜和扫描电镜下观察其结构特点.将体外培养的兔膀胱平滑肌细胞与UAMG体外复合培养,观察细胞在材料表面的生长增殖情况.MTT法检测UAMG材料浸提液对膀胱平滑肌细胞的细胞毒性.将UAMG植入兔背部皮下检测其生物相容性.取24只雄兔,随机分为实验组(n=12)和对照组(n=12).实验组手术切除2 cm尿道缺损,应用UAMG修复;对照组切除2 cm尿道缺损后即关闭切口依靠尿道自体组织再生修复缺损.实验兔分别在术后2、4、8、12周取材.进行组织学和免疫组织化学检测.结果 兔UAMG为胶原纤维网状结构,无细胞残留.兔膀胱平滑肌细胞能够在UAMG表面正常生长,细胞形态良好.UAMG材料细胞毒性分级为0级或1级,皮下植入实验中动物无异常反应,材料能在体内逐渐降解,生物相容性好.UAMG修复兔尿道缺损后12周,修复区再生出结构完整的新尿道组织,与正常兔尿道组织近似.结论 UAMG具有良好的生物相容性,能够诱导尿道上皮细胞和平滑肌细胞再生,可以作为尿道修复重建的替代材料.

    作者:韩平;宋超;杨宇如;魏强;李虹;王坤杰 刊期: 2009年第01期

  • MTT法检测乳腺癌细胞株对化疗药物5-氟脲嘧啶的敏感性

    目的 探讨四氮唑蓝比色分析法(MTT法)用于指导临床个体化化疗药物选择的实用性,为乳腺癌临床化疗用药提供参考.方法 采用MTT法测定乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S对不同浓度的化疗药物5-氟脲嘧啶(5-Fu)的体外敏感性.结果 不同浓度的5-Fu对高转移和低转移乳腺癌细胞株的生长均有一定的抑制作用,且抑制率呈剂量依赖性.结论 MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果,减少毒副作用,为乳腺癌临床个体化化疗方案的选择提供客观依据.

    作者:韩方璇;林慧;汝玲 刊期: 2009年第01期

  • 重组卵泡刺激素预充注射笔在控制性超促排卵中的临床应用

    目的 探讨重组卵泡刺激素预充注射笔在中国人控制性超促排卵中的效果与可行性.方法 对南方医科大学南方医院生殖医学中心2007.01~2008.04间就诊的184例需行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)不孕症妇女,采用黄体期长方案,随机分别给予重组卵泡刺激素预充注射笔(A组)和重组卵泡刺激素冻干粉制剂(B组)进行卵巢刺激,分析比较两组间用药情况、促排卵与IVF-ET结局.结果 A组rFSH总用量、前往医疗单位次数、购药和注射费用明显少于B组(P<0.05);在用药时间上没有显著性差异(P0.05);A组剩余药量明显高于B组(P0.05).A组用药局部红肿的比例显著少于B组(P<0.05),但用药局部瘀斑的比例明显多于B组(P<0.05).A组药物易用性和方便性评分均显著高于B组(P<0.05);两组在疼痛感受上没有显著性差异(P0.05).A组进行了更频繁的药物个体化调整(P<0.05),而其hCG日血清E2浓度明显低于B组(P<0.05).但两组hCG日内膜厚度、总获卵数、第二次减数分裂中期卵子数量、每周期移植胚胎数以及临床妊娠率没有显著性差异(P0.05).A组成熟卵子比例、优质胚胎率和胚胎着床率明显高于B组(P<0.05),而发生中重度OHSS的例数明显少于后者(P<0.05).结论 重组卵泡刺激素预充注射笔具有高效、安全、易用、价廉和患者耐受性好等优点,有利于个体化COS治疗方案的实施,在临床推广中应注意合理选择和搭配制剂种类并加强对患者的健康教育.

    作者:陈雷宁;全松;李红;杨晓萍;陈思梅;张小育;林蕾;邢福祺;陈士岭;万昭君;王忆 刊期: 2009年第01期

  • GSTM1基因编码区SNP位点T1270533G与鼻咽癌的相关性

    目的 通过筛查GSTM1基因SNPs位点,研究该基因编码区单核苷酸多态位点T1270533G与鼻咽癌易感性和临床表型的关系.方法 用PCR方法对中国人群27个个体DNA标本进行扩增、纯化及测序,从中获得GSTM1编码区、调控区和侧翼区及部分内含子区SNP位点,所获数据进行LD分析.选择编码区多态性位点T1270533G(该位点在中国人群罕见等位基因频率为22.2%),用tetra-PrimerARMS-PCR结合测序方法对鼻咽癌患者和对照人群进行相关性分析.结果 通过测序共获取29个SNPs;其中13个SNPs位点之间均呈高度连锁不平衡;编码区多态性位点T1270533G的变异与鼻咽癌临床表型之间无明显关联(RR=0.170,95%CI=0.95-0.306 for homozygote TT).结论 编码区多态位点T1270533G虽然发生了碱基颠换,产生了错义突变,导致了氨基酸的改变,但并没有影响其解毒功能.该位点在鼻咽癌患者和对照人群中等位基因型频率差别很小,与中国广东地区鼻咽癌易感性无明显关联.

    作者:何英;周钢桥;李欣;董晓佳;姚开泰 刊期: 2009年第01期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学