学术投稿

表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A点突变质粒的构建及在Huh7细胞中的表达

王雪萍;李富军;长野(藤井)基子;北山喜久美;堀田博

关键词:pSG5, 点突变, HCV NS3/4A, 二级结构, Huh 7细胞
摘要:目的 构建表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A的点突变质粒,并在Huh7细胞中进行表达.方法 以pSG5/M-H05-5/4A为模板(A1-1),根据分型标准设计点突变引物.首先构建4个单点突变质粒:pSG5/M-H05-5(A1-2)/4A(A1-2)(Y56F),pSG5/M-H05-5(B1-1)/4A(B1-1)(L80Q),pSG5/M-H05-5(B2-1)/4A(B2-1)(v5IA),pSG5/M-H05-5(B2-2)/4A(B2-2)(S61A).然后,分别以A1-2,B2-1,B2-2为模板,再将第80位的赖氨酸点突变为谷氨酸(L80Q),构建另外3个双点突变质粒:pSG5/M.H05-5(B1-2)/4A(B1-2),pSG5/M-H05-5(A2-1)/4A(A2-1)和pSG5/M-H05-5(A2-2)/4A(A2-2).每个质粒均进行序列测定验证点突变成功.用FuGene 6转染试剂将构建物转染入Huh7细胞,并应用间接免疫荧光试验和Western blotting检测构建物的表达.结果 免疫荧光实验检测到NS3的4种亚细胞定位方式:点状,弥漫样,面包圈样,及短棒状.WesternBlotting亦显示构建物均成功表达,同时发现A2-1和B2-1亚型NS3/4A存在不完全切割现象.表明与其他亚型相比,A2-1和B2-1 NS3 in cis 丝氨酸蛋白酶活性较弱.结论 成功构建表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A点突变质粒,为抗不同亚型HCV的深入研究提供基础.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 局部脑缺血后血管活性肠肽促进血管再生

    目的 研究局部脑缺血后血管活性肠肽(VIP)对血管再生的影响.方法 通过闭塞成年SD大鼠大脑中动脉(MCAO)120 min诱导建立局部脑缺血,缺血再灌注后大鼠侧脑室内注射VIP.采用免疫组织化学染色观测缺血边缘区血管再生、VEGF及其受体的表达;Western blotting分析脑内VEGF蛋白含量.结果 免疫组织化学染色显示VIP组大鼠脑缺血区周围BrdU免疫反应内皮细胞较对照组明显增加(P<0.05);VIP组大鼠脑缺血边缘区VEGF免疫反应细胞以及flt-1和flk-1免疫反应内皮细胞较对照组均显著增多(P<0.01);免疫印迹分析表明VIP组大鼠缺血侧脑组织VEGF蛋白水平较对照组大鼠明显上调(P<0.05).结论 VIP可以促进缺血脑的血管再生;上调的VEGF及其受体可能介导了VIP促血管再生作用.

    作者:杨杰;宗长宏;赵朝华;钱亦华;胡晓丹;刘勇 刊期: 2009年第04期

  • 冷浴喷膜疗法对烧伤浅Ⅱ°创面组织早期水肿的影响

    目的 从炎症角度探讨冷浴和喷膜疗法联合应用对大鼠早期烫伤创面的影响.方法 选择Wistar大鼠75只,随机分为5组,假致伤组、单纯烫伤组、冷浴组、喷膜组及冷浴喷膜组.伤后观察创面的大体情况,分别取不同时相点的创面标本,用干湿重法测定组织含水量;RIA法检测组织中PGE2的含量.结果 研究发现冷浴喷膜疗法能显著减轻创面肿胀.减少创面渗出;在各时相点冷浴组、喷膜组及冷浴喷膜组创面组织含水量和PGE2含量均低于单纯烫伤组(P<0.01).但高于假致伤组(P<0.01);在3个处理组中,冷浴喷膜组上述指标低,存在统计学差异(P<0.05);单纯烫伤组、冷浴组、喷膜组及冷浴喷膜组创面组织含水量与其PGE2含量存在正相关关系(r=0.739,P<0.001).结论 在浅Ⅱ°烫伤创而局部早期应用冷浴喷膜疗法能减轻创面组织水肿,可能与其抑制局部组织炎症反应存在一定关系.

    作者:黄惠民;王甲汉;杨磊;易朝辉 刊期: 2009年第04期

  • 脂肪源间充质干细胞与异种骨支架材料生物相容性研究

    目的 制备并检测异种骨支架材料和种子细胞的生物相容性、验证脂肪源间充质干细胞作为种子细胞及异种骨作为支架材料的可行性.方法 制备异种骨支架材料,并与脂肪源间充质干细胞复合培养,分别做扫描电镜观察、细胞活性检测和碱性磷酸酶的测定,各组均以人同种异体骨支架材料作对照.结果 复合培养4和10 d后电镜下两种材料均见到脂肪源性间充质十细胞的存活并伸出伪足黏附在材料上:MTT法显示两组材料上的细胞增殖数均随时间的延长而呈增长趋势;与同种异体骨支架材料相比,异种支架材料内细胞碱性磷酸酶的变化趋势与其基本一致,均随时间的延长而增高.结论 脂肪源间充质干细胞与异种骨支架材料有较好的生物相容性,两者复合构建组织化工程骨的前景值得进一步研究.

    作者:张学全;原林;杨林林;姜雪梅;杨春;余磊;戴景兴 刊期: 2009年第04期

  • 青藤碱对类风湿关节炎患者外周血单核源性树突状细胞趋化因子分泌和受体表达的影响

    目的 观察中药单体青藤碱对类风湿关节炎患者外周血单核源性树突状细胞趋化因子分泌和受体表达的影响.方法 分离8例类风湿关节炎患者的单核细胞,采用细胞因子刺激分化为树突状细胞.分别采用青藤碱高(5 mmol/L)、中(2 mmol/L)、低(1 mmol/L)剂量和空白对照干预.流式细胞仪检测各组树突状细胞趋化因子受体CCR5和CCR7的表达,半定量RT-PCR检测树突状细胞CCR5和CCR7mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中趋化因子CXCL9(MIG1、CXCL10(IP-10)、CXCL11(ITAC)的表达.结果 与对照组相比,经青藤碱高干预后的树突状细胞趋化因子受体CCR5、CCR7的蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05或P<0.01).青藤碱干预后的DC分泌CXCL9(MIG)、CXCL10(IP-10)降低(P<0.05或P<0.01).但对CXCL11(ITAC)的表达没有影响.结论 青藤碱可能通过抑制趋化因子对树突状细胞的趋化作用,减少其趋化因子的分泌,而产生治疗类风湿关节炎的作用.

    作者:余克强;罗仁 刊期: 2009年第04期

  • ZNF217基因在卵巢癌中的表达及意义

    目的 检测ZNF217基因在卵巢囊腺癌、卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中的表达,初步探讨其与卵巢癌发生发展的关系.方法 用免疫组织化学法及实时RT-PCR方法检测卵巢囊腺癌、卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中ZNF217基因在蛋白及转录水平的表达情况.结果 ZNF217基因在卵巢囊腺癌中的蛋白表达高于卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中的(P<0.05),而且ZNF217基因的蛋白高表达与卵巢癌的发生显著相关(r=0.627),卵巢囊腺瘤组织与正常的卵巢组织相比差异则无显著性(P0.05),在mRNA水平的检测与上述结果一致.结论 ZNF217基因的表达与卵巢癌的发生高度相关,且与卵巢癌的临床分期相关.ZNF217基因可能是导致卵巢癌发生发展的重要候选基因之一.

    作者:孙桂芹;钟梅;丁彦青;苏桂栋;宋天蓉;尹爱兰 刊期: 2009年第04期

  • 骨形态蛋白-7对糖尿病大鼠nephrin表达和分布的影响

    目的 观察骨形态蛋白-7(BMP-7)对糖尿病(DM)大鼠nephrin表达和分布的影响.方法 20只链脲左菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型随机分为糖尿病组(DM)和BMP-7治疗组(BMP-7)各10只,另以10只大鼠作对照组(NC).BMP-7组每周2次腹腔注射人重组BMP-7 30 μg/kg.DM组和NC组给予等量的生理盐水注射.于8、16、24周检测不同时间点24h尿蛋白、尿肌酐和血糖.24周处死动物.PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变,RT.PCR、免疫荧光检测nephrin的表达和分布,免疫组化技术检测TGF-β1和WT1的表达.结果 与NC组比,DM组24 h尿蛋白、肾质量/体质量指数、TGF-β1的表达均显著高于NC组(F值分别为174.3、38.9、117.7,P均小于<0.01)差异均具有统计学意义.而内生肌酐清除率(Cer)、足细胞数目、nephrin的表达显著低于NC组(F值分别为13.4、79.04、65.5,P均<0.01),而且nephrin由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团块状改变.BMP-7组24 h尿蛋白、肾质量/体质量、TGF-β1的表达较DM组显著降低,Cer、足细胞数目和nephrin mRNA的表达显著增加,且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布,肾脏病理改变减轻.结论 外源性的运用BMP-7可以有效地抑制糖尿病引起的nephrin表达的下凋,维持nephrin在足细胞上的正常分布;BMP-7对糖尿病大鼠肾脏保护作用町能与拮抗了TGF-β1的活化有关.

    作者:肖厚勤;史伟;张永;梁永正 刊期: 2009年第04期

  • ERK在大鼠浅筋膜中的表达及针刺后的改变特征

    目的 探讨针刺对SD大鼠浅筋膜层的细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)表达情况的影响.方法 18只SD大鼠随机分为6组,对照组和针刺1、2、3、4、5组,每组大鼠3只.针刺各组在大鼠腹股沟区给予电针治疗后,分别在针刺后0、1、6、12和36 h等5个时间点取以针刺点为圆心,直径约1.5 cm处的浅筋膜,对照组也在针刺点相应的部位和足三里穴区取材.用Westernblot蛋白免疫印迹方法检测各组的ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达情况.结果 穴位和非穴区的浅筋膜的ERK1/2和p-ERK均有表达,但两者未见明显差异,针刺后各组针刺侧的ERK1/2的表达均明显高于自身对照侧.结论 正常的疏松结缔组织中可能通过ERK细胞信号转导蛋白的磷酸化来参与组织的增殖和分化;而针刺对于ERK信号转导有促进作用,这也可能是针灸对机体的病理和生理状态进行调控的机制之一.

    作者:姜雪梅;杨春;原林;刁建新;张学全;黄泳;戴景兴;邱小忠;余磊 刊期: 2009年第04期

  • 血肿内麻醉对桡骨远端骨折整复中镇痛作用的随机对照研究

    目的 观察血肿内麻醉在桡骨远端骨折整复中的镇痛效果.方法 将63例患者随机分为观察组和对照组,观察组患者手法整复前予以血肿内麻醉;对照组则予以盐酸曲马多针肌肉注射.用划线记录法对二组患者术前术中及术后疼痛程度进行评定.结果 术中观察组疼痛程度为(6.56±1.62),对照组疼痛程度为(8.23±1.21);两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 血肿内麻醉比肌注盐酸曲马多针对缓解桡骨远端骨折整复中疼痛更有效.

    作者:吕燃;黄伟明;谢杰伟 刊期: 2009年第04期

  • 三维适形放疗同步化疗治疗直肠癌术后局部复发的临床观察

    目的 观察三维适形放疗同步应用奥沙利铂(L-OHP)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)/亚叶酸钙(LV)治疗直肠癌术后局部复发患者的疗效及毒副作用.方法 40例术后局部复发直肠癌患者,在三维适形放疗的同期应用L-OHP联合5-Fu/LV治疗3~6个周期:全盆腔三野同中心放射治疗50 Gy,针对局部肿瘤病灶予3DCRT加量至60~65 Gy;化疗方案为L-OHP 130 mg/m2,第1天,同时或之后予LV 200 mg/m2,第1,2天;5-Fu 400 mg/m2,静脉推注,600 mg/m2持续静脉滴注22h,第1,2天.每21 d为1个周期,共3~6个周期.结果 1、2、3年生存率分别为82.5%、59%、38%;1、2、3年局部控制率分别为63%、51%、46%,同时其治疗相关不良反应有所增加,但大部分为1、2级,未见4级治疗不良反应发生.治疗失败的原因为肿瘤远处转移及局部复发.结论 三维适形放疗同步应用L-OHP联合5-Fu/LV治疗直肠癌术后复发安全、有效,可作为优选治疗方案.

    作者:古伟光;谢忠;廖思海;罗海涛 刊期: 2009年第04期

  • 无钙化肺结核球CT动态增强扫描与病理对照研究

    目的 探讨无钙化肺结核球的CT增强特征及其病理基础.方法 分别对56例孤立性无钙化性肺结核球(直径1.1~4.2 cm)进行2~3 mm薄层CT平扫和动态增强扫描,重点观察病灶的强化特征并进行CT-病理对照研究.结果 56例结核球中45例无强化:7例晕薄层环状强化;4例呈厚环状强化.病理切片显示:无强化区主要是干酪样坏死组织,少数为液化性坏死.边缘强化部分是类上皮肉芽组织或纤维疤痕组织.结论 结核球主要为干酪坏死组织组成,增强扫描大多无强化,少数呈不同程度的环状强化,藉此能将绝大部分结核球与周围型肺癌相鉴别,CT增强扫描是诊断不典型结核球的非常有价值的方法.

    作者:周永生;苏锦权;许晓矛;江庆萍 刊期: 2009年第04期

  • 子痫前期患者脐血流与围产儿结局的相关性研究

    目的 探讨子痫前期患者脐动脉血流改变与围产儿结局的相关性.方法 观察记录106例子痫前期患者的脐动脉血流参数S/D值、搏动指数(PI)、阻力指数(RI)及新生儿出生时平均体质量、Apgar评分及胎盘重量变化等,分析血流参数与围产儿结局的相关性.结果 (1)随着子痫前期病情严重程度的增加,S/D、PI、RI均呈增高趋势,重度子痫前期比值明显高于正常组,统计结果有显著性差异(P<0.01),轻度子痫前期组与正常组比较增高趋势不明显,无显著性差异(P>0.05);(2)随着脐血流比值的增加,重度子痫前期的新生儿出生时平均体重、Apgar评分、胎盘重量均低于正常组,统计结果有显著性差异(P<0.01),FGR发生率、围产儿死亡率明显高于正常组,统计结果有显著性差异(P<0.01),但上述变化在轻度子痫前期组表现不为显著.结论 脐血流S/D、PI、RI值可以作为判断胎儿宫内状况的指标,为胎儿预后提供了一种监测手段.

    作者:陈洁;余艳红;王志坚;秦薇;张庆 刊期: 2009年第04期

  • 靶向NF-κB的小干扰RNA抑制人子宫内膜异位症体外血管生成模型的实验研究

    目的 探讨NF-κB p65 siRNA对子宫内膜异位症(EMs)血管生成的抑制作用,为抗血管途径治疗EMs提供依据.方法 将EMs患者在位子宫内膜组织接种于8 d胚龄的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上.建立EMs CAM模型.分设空白组、单纯接种组、阳性siRNA干预组和阴性siRNA干预组.通过Image-proplus软件测量新生血管面积与鸡胚尿囊膜面积比(VA/CAM)及组织病理学观察等方法评价沉默NF-κB基因对CAM血管生成及异位内膜病灶生长行为的影响.结果 各组VA/CAM分别是(22.18%±1.51)%、(30.28±3.91)%、(10.36±2.18)%及(28.60±4.22)%.组间比较:阳性干预组VA/CAM均低于其余3组,差异有显著性(P<0.05);接种组及阴性干预组VA/CAM均高于空白组,差异有显著性(P<0.05);接种组与阴性干预组间比较差异则无显著性(P>0.05).阳性干预组病灶在光镜下町见腺体完整性破坏.结论 NF-κB参与调控子宫内膜异位症的发生发展,沉默NF-κB基因可以显著抑制异位病灶的血管形成.并干扰子宫内膜的异位生长,抗血管途径可能成为治疗EMS的有效策略之一.

    作者:刘木彪;何援利;钟洁 刊期: 2009年第04期

  • ST段抬高性心肌梗死蛇毒纤溶酶治疗过程内皮祖细胞的变化

    目的 研究ST段抬高性心肌梗死患者经蛇毒纤溶酶治疗过程中外周血中循环内皮祖细胞(EPCs)形态、数量的变化.方法 选择ST段抬高性心肌梗死(STEMI)患者60例和对照镬组20例,分别在蛇毒纤溶酶给药前,给药3 d用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,用加入血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的RPMI-1640培养基培养细胞.用激光共聚焦显微镜初步鉴定DiL标记的乙酰化低密度脂蛋白和HTC标记的荆豆凝集素Ⅰ双染色阳性细胞为EPCs;相差显微镜分析细胞形态数量变化和集落形成单位的数量.结果 ST段抬高性心肌梗死患者给予蛇毒纤溶酶治疗3 d后EPCs数目较治疗前明显增加.7d有所下降,但仍高于对照组,但给药前后细胞集落形成单位的数量并尤变化.结论 ST段抬高性心肌梗死患者给予蛇毒纤溶酶治疗后,可引起EPCs数量的增加.

    作者:姜朝新;王前;郑磊;包杰 刊期: 2009年第04期

  • 上调表达的Tbx3可能是乳腺癌的恶性标志物之一

    目的 探讨Tbx3基因表达变异在乳腺癌发病过程的作用.方法 常规提取乳腺癌细胞系及正常乳腺组织中总RNA.在总RNA被逆转录成cDNA后,利用实时荧光定量PCR比较Tbx3基因mRNA在乳腺癌细胞系与正常乳腺组织中表达差异;随后利用免疫组化的方法验证Tbx3蛋白在乳腺癌与正常乳腺组织之间的表达差异.结果 实时荧光定量PCR检测发现,与正常乳腺组织相比,Tbx3基因明显在乳腺癌细胞中高表达.免疫组化检测了60例乳腺癌及34例正常乳腺组织后发现,Tbx3蛋白在乳腺癌组织细胞核内呈高表达,这与mRNA表达特征相一致.结论 Tbx3基因mRNA和蛋白在乳腺癌组织和细胞中明显高表达,其可能是乳腺癌发病过程中的恶性标志物之一.

    作者:陈忠华;吕光明;季天海 刊期: 2009年第04期

  • 异基因造血干细胞移植术后并特发性肺炎综合征1例并文献复习

    患者男性,49岁,慢性粒细胞性白血病,既往有慢性阻塞性肺病病史,于2004年4月15日行外周血异基因造血干细胞移植术(HSCT),2004年5月14日出现全身皮疹,诊断移植物抗宿主病(GVHD),给予免疫抑制剂(环孢素、强的松)及对症治疗后病情好转稳定.未再出现皮疹.近1年来出现间断反复咳嗽、咳痰、活动后气喘不适,症状逐渐加重,严重时感呼吸困难.为进一步明确诊断治疗于2006年5月19日入我院.

    作者:杜玮;黄文杰 刊期: 2009年第04期

  • 磁共振弥散加权成像ADC值诊断兔肝脏纤维化模型病理变化

    目的 研究磁共振弥散加权成像(MR-DWI)ADC值在诊断肝脏纤维化模型(Liver fibrosis model,LFM)病理变化中的价值和意义.方法 对4只正常和13只LFM兔进行MR-DWI检查,选择b值为200 s·mm-2、500 s·mm-2、300 s·mm-2、600 s·mm-2,分别在肝脏左右侧获得4个ADC值.按照ISHAK肝脏病理组织学评分和纤维化分期标准,对全部兔肝脏标本进行组织病理学评分分级(1~6分为一级、7~12分为二级、13~18分为三级)和纤维化分期(Ⅰ期~Ⅵ期),以此为标准统计分析ADC值的变化情况.统计学分析应用SPSS13.0统计软件包,采用单向方差分析方法(Analysis of variance,ANOVA).P<0.05为差异有统计学意义.结果 兔LFM组中4个ADC值均明显低于正常对照组,统计分析表明正常对照组与模型组、不同病理评分分级和纤维化分期间ADC值差异性均有统计学意义,P=0.000.结论 肝脏发生纤维化时,肝组织的ADC值明显降低,随着病理评分分级和纤维化分期的增加,ADC值降低越加显著.肝细胞变性、肿胀和炎细胞浸润,以及间质内胶原纤维沉积,使水份含量减少,水的自山运动受到限制,是导致ADC值降低的主要病理学基础.

    作者:李绍林;张雪林;朱幼芙;陈平雁;陈斌;曲华丽 刊期: 2009年第04期

  • 坏死细胞诱导并促进炎症反应

    目的 研究坏死细胞对炎症的诱导以及促进作用.方法 以加热法诱导小鼠胸腺细胞坏死.在体外培养的小鼠巨噬细胞株RAW264.7中加入坏死细胞(巨噬细胞:坏死细胞=1:5),或者同时加入坏死细胞与内毒素脂多糖(LPS,100 ng/ml),18 h后收集上清.以Bio-Plex悬浮蛋白芯片系统检测上清中细胞因子分泌和表达变化情况.结果 和单纯培养的巨噬细胞相比,培养体系中加入坏死细胞后,炎症性细胞因子TNF-α和IL-6分泌表达明显增加.若同时加入坏死细胞和LPS,则两者发生协同作用,更加显著地促进上述因子的分泌.结论 坏死细胞不仅本身能诱导炎症性细胞因子TNF-α和IL-6表达,还能与LPS发生协同作用,进一步促进上述细胞因子的分泌,表明在炎症反应的发生和加重过程中,坏死细胞起着重要的作用.

    作者:刘璇;罗宇维;孙尔维 刊期: 2009年第04期

  • PPARγ激动剂罗格列酮对缺氧/复氧大鼠心肌细胞氧化应激和凋亡的影响

    目的 观察不同浓度PPARγ激动剂罗格列酮对缺氧/复氧大鼠心肌细胞氧化应激影响及细胞活力和凋亡情况.方法 建立大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型.培养大鼠心肌细胞分为5组:Ⅰ组(正常组)、Ⅱ组(20μmo/L ROS组)、Ⅲ组(I/R组)、Ⅳ组(FR+20μmol/LROS组)、Ⅴ组(I/R+80μmol/LROS组),Ⅳ组和Ⅴ组在缺氧/复氧前12 h经ROS处理.分别在光镜和透射电镜下观察缺氧/复氧后各组心肌细胞形态改变,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶(SOD)活力,采用2,4-二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用MTT法比较各组心肌细胞活力和采用流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率.结果 与Ⅰ组相比,Ⅲ组的MDA和LDH含量及细胞凋亡率明显升高(P<0.05),SOD含量和细胞活力降低(P<0.05);Ⅳ组和Ⅴ组MDA和LDH含量及细胞凋亡率较Ⅲ组降低(P<0.05)而SOD含量和细胞活力增加(P<0.05).Ⅴ组MDA和LDH含量及细胞凋亡率较Ⅳ组降低(P<0.05)而SOD含量和细胞活力增加(P<0.05).电镜下观察到Ⅲ组(I/R组)心肌细胞形态出现明显凋亡损伤改变,凋亡小体形成,而Ⅴ组改变轻微.结论 罗格列酮可以显著减轻心肌细胞缺氧/复氧导致的氧化应激损伤,改善细胞活力和减轻心肌细胞凋亡率,并存在量效关系.

    作者:姚友杰;耿登峰;王景峰;杨敏华;张玉玲;聂如琼;周淑娴 刊期: 2009年第04期

  • 重组腺病毒介导的1.2拷贝HBV DNA在3种肝细胞中的表达

    目的 利用所构建的具复制能力的HBV重组腺病毒感染体外培养肝细胞,观察HBV的表达情况,从而初步了解该重组HBV腺病毒的生物学特性.方法 以25 pfu/细胞的重组腺病毒感染3种肝源性细胞株:人肝癌细胞株HepG2、人正常肝细胞株L02和禽肝细胞株LMH.感染3 d后以RT-PCR检测3种感染肝细胞中的HBV mRNA;HBV荧光定量PCR检测培养上清中HBV DNA;ELISA检测培养上清中HBsAg和HBeAg.结果 3种被感染肝细胞均被检测到HBV特异的mRNA;培养上清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的表达量随时间而增加.结论 重组腺病毒可以介导HBV在该3种不同来源的肝细胞中建立HBV的感染状态.

    作者:梁蔚芳;刘志华;骆抗先 刊期: 2009年第04期

  • 呼吸道合胞病毒感染促进哮喘小鼠气道分泌TSLP和Th2炎症反应

    目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)对哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)分泌的影响,以探索RSV对哮喘小鼠Th1/Th2免疫反应的调节作用.方法 雌性BALB/c小鼠32只.随机分成4组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、RSV组、OVA/RSV组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘;无创肺功能检测小鼠气道反应性,ELISA法检测小鼠血清IL-4、IFN-γ、IL-5、IL-13水平;ELISA法检测气管灌洗液(BALF)TSLP含量并进行细胞分类计数;小鼠肺组织病理观察炎症反应,免疫组化观察小鼠气管上皮细胞TSLP表达水平.结果 RSV感染促进哮喘小鼠呼吸道分泌TSLP增加,OVA/RSV组小鼠TSLP浓度达(2.13±0.05)ng/ml,高于其他组(P<0.01);同时促进IL-4、IL-5、IL-13等Th2型细胞因子的分泌,并增加IFN-γ分泌;0VA/RSV组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数与其他各组比较均明显增加;无创肺功能检测显示OVA/RSV组小鼠气道反应性明显增高,乙酰甲胆碱浓度达6.25 mg/ml时,Penh值(318.66±50.87)明显增加,与其他各组比较具有统计学意义(P<0.01);病理观察显示RSV感染明显加重哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实RSV/OVA组小鼠气道上皮细胞TSLP表达量较高.结论 RSV感染可以增加小鼠气道上皮细胞表达TSLP,促进Th2细胞因子的表达,加重哮喘小鼠肺部Th2炎症反应.

    作者:夏虎;蔡绍曦;佟万成;骆利敏;于化鹏 刊期: 2009年第04期

南方医科大学学报杂志

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