刘栋华；刘晓军；谭升顺
目的 鉴定人胰岛素基因启动子中的GC盒(-348～-338)是否是启动子中的关键顺式作用元件.方法 用PCR克隆人胰岛素基因启动子,构建由人胰岛素基因启动子驱动的分泌型碱性磷酸酶(SEAP)报告质粒,并对报告质粒中人胰岛素基因启动子中的GC盒进行删除和突变.将报告质粒转染到β细胞系βTC3中,测定细胞培养液上清中SEAP的活性强度,进而判定GC盒与人胰岛素基因启动子转录活性的关系.结果 删除和突变人胰岛素启动子中的GC盒不能显著改变胰岛素基因启动子在β细胞中的转录活性.结论 人胰岛素基因启动子中GC盒不是一个关键顺式作用元件.
作者：牛新捷；王作仁；SEUFERT Jochen 刊期： 2007年第01期
目的 克隆幽门螺杆菌(Hp)尿素膜通道基因(ureI)和构建能表达UreI蛋白的原核表达工程菌,并初步研究产物的表达特性和免疫特性.方法 用PCR方法从Hp基因组中克隆ureI基因,构建原核表达重组质粒pET32a/ureI,双酶切和测序鉴定正确后,重组质粒转染大肠杆菌BL21+(DE3),构建高效表达UreI的工程菌BL21+/UreI.不同温度条件下用1.0 mmol/LIPTG诱导重组蛋白表达,用SDS-PAGE和Gel-Pro Analyzer 4分析重组蛋白的表达,并用Western blotting对其免疫原性进行分析.结果 克隆到约650 bp的基因片段,测序结果与GENBANK中对应菌株的ureI序列100%同源,与其他Hp的序列同源性不低于98.5%.工程菌BL21+/UreI含完整的ureI基因.在37℃、1.0 mmo1/LIPTG诱导14 h后,重组蛋白表达量可达菌体总蛋白的20.2%.分析表明重组蛋白主要以包涵体形式表达,经免疫印迹证实该重组蛋白有一定的免疫反应性和特异性.结论 成功构建了Hp ureI基因的原核表达载体,该载体可高表达有免疫特性的重组蛋白,为进一步研究Hp在胃的定植机制和抗Hp新药奠定了基础.
作者：王保宁；施桥发；李虹；李明远；陈翠萍；郑庆文；蒋忠华；肖丽英 刊期： 2007年第01期
目的 探讨CT在睾丸占位性病变诊断及鉴别诊断中的价值.方法 13例睾丸占位性病变,11例经临床肿瘤标记物检查如甲种胎儿蛋白(AFP)和人绒毛膜促性腺激素.CT扫描层厚、层距各2 mm,平扫加60%优维显70 ml静脉团注后增强扫描.螺旋CT多平面重建采用GE LightSpeedl6图像后处理工作站.结果 13例病例均经手术病理证实,其中精原细胞瘤3例,内胚窦瘤1例,畸胎瘤2例,混合型生殖细胞瘤2例,淋巴瘤l例,脓肿2例,结核2例.精原细胞瘤仅1例AFP轻度升高,6例非精原生殖细胞瘤5例AFP升高.CT均存在有诊断价值的征像,尤其是多层螺旋CT多平面重建可显示病变的全貌及与周围结构的关系.结论 CT检查密切结合临床及肿瘤标记物检查,对于睾丸占位性病变的诊断和鉴别诊断有重要价值,多层螺旋CT多平面重建技术的应用对诊断有很大帮助.
作者：段刚；许乙凯；戴琳；张晓冬 刊期： 2007年第01期
目的 探讨雌激素在引产患者中预防产后出血及缩短产程中的临床治疗效果.方法 选择医学原因终止妊娠病例320例,随机分为实验组175例和对照组145例.实验组患者在羊膜腔注射利凡诺前1天开始口服已烯雌酚3 mg,3次/d,至排胎:对照组排胎前不给予雌激素类药物.两组均用容积法及称重法计算产后出血量,计算注药至宫缩发动及出胎时间.结果 (1)胎儿娩出后2 h出血量比较:实验组出血量(123.3±81.8)ml,对照组(206.3±114.4)ml,实验组产后出血例数2例,明显低于对照组的10例,差异均有显著性.(2)实验组注药至宫缩发动时间为(3l±11)h,对照组为(33±12)h,差异无显著性.实验组总产程时间(6.03±3.19)h,明显低于对照组的(9.7±5.9)h,差异有显著性.(3)两组产妇未出现明显副作用.结论 雌激素在引产患者产前给予,可提高子宫收缩敏感性,起到预防产后出血、减少产后出血量、缩短引产产程的作用,具有临床应用价值.
作者：周沫；王海英；杨春艳；冯锦玲 刊期： 2007年第01期
目的 利用体外细胞培养技术,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备.方法 分别采用间接接触法(MTT法)和直接接触法评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.MTT法:采用体外培养的小鼠成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液(0、50%和100%),于接种后第2、4、7天通过MTT法显色,在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值,计算相对增殖率,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行评价;直接接触法:将体外培养的L929细胞分为两组,空白对照组为常规培养的L929细胞,实验组为L929细胞与聚乳酸-甲壳素接骨板共培养,逐日用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学发生的变化,评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.结果 随道时间推移,不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液对L929细胞增殖均有促进作用(P＜0.01),在第2、4、7天各浓度之间无明显差异性(P＞0.05),提示L929细胞增殖与聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液的浓度无明显相关;L929细胞在聚乳酸-甲壳素接骨板表面粘附生长,随时间推移,粘附细胞数量增加,细胞数量及形态与空白对照组比较无明显差异,评分聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性为0级.结论 聚乳酸-甲壳素接骨板无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种具有发展前景的可吸收骨折内固定材料.
作者：李毅；李少萍 刊期： 2007年第01期
目的 构建THY1真核表达质粒,并探讨THY1基因对上皮性卵巢癌细胞系SKOV3生长的影响.方法 通过RT-PCR方法,从人正常卵巢组织中获得THY1基因,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建成重组质粒pcDNA3.1(+)-THY1,并转入大肠杆菌JM109,筛选出含有正确插入片段的克隆,经PCR、酶切及DNA测序鉴定;脂质体介导法转染SKOV3细胞并筛选稳定表达(SKOV3-THY1组),同时设空质粒转染组(SKOV3-Null组)和空白对照组(SKOV3组),RT-PCR和Western blotting鉴定重组质粒的表达情况;MTT法和流式细胞术检测THy1对SKOV3细胞生长和凋亡等生物学行为的影响.结果 经过PCR、酶切及DNA测序证实,外源性THY1基因正确插入到真核表达质粒pcD-NA3.1(+)中,RT-PCR和western blotting证实此重组质粒已整合于SKOV3细胞并获稳定表达;MTT法结果提示SKOV3-THYl组的细胞抑制率(第5天的细胞抑制率为56.6%)明显高于SKOV3-Null组(12.5%)(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,SKOV3-THY1组凋亡率(31.8%)明显高于SKOV3-Null组(10.5%)和SKOv3组(9.8%),差异有统计学意义(P＜0.05),SKOV3-Null组和SKOV3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建了THY1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-THY1,该质粒转染SKOv3细胞可抑制其生长,THY1基因可能在上皮性卵巢癌发生、发展的过程中起重要作用.
作者：曾俐琴；彭芝兰 刊期： 2007年第01期
目的 初步研究利用超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓基质细胞来源的神经干细胞及其对细胞活力、增殖等生物学活性的影响,并确定佳标记浓度.方法 无菌条件下取大鼠股骨骨髓,梯度密度离心法分离得到骨髓基质细胞.体外培养、诱导成神经干细胞,使用不同终浓度的(6.25、12.5、25、37.5、50μg/ml)Ferumoxides(超顺磁性氧化铁)标记神经干细胞,采用普鲁士蓝染色、MTT法、流式细胞仪、透射电镜等方法鉴定Ferumoxides标记神经干细胞的效率及对细胞活力、增殖等生物学特性的影响.结果 Ferumoxides可以高效率标记神经干细胞,标记效率在90%以上.普鲁士蓝染色显示标记的神经干细胞胞质内存在细小蓝色铁颗粒,细胞呈淡蓝至深蓝色,颜色的深浅与所加Ferumoxides的剂量成正相关.电镜结果显示标记的神经干细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡,主要集中在胞体上.当Ferumoxides终浓度高于25 μg/ml时,Ferumoxides颗粒在细胞内聚集成团块状,量较多,在一定程度上影响了细胞超微结构的观察;低于25 μg/ml时,Ferumoxides颗粒散布于细胞胞质内,并随着浓度的降低,Ferumoxides颗粒在胞质内分布越分散,量越少.MTT及流式细胞仪结果显示Ferumoxides终浓度大于25 μg/ml时则对细胞活力、增殖、凋亡有一定影响,小于等于25 μg/ml时对细胞活力、增殖无明显影响.结论 利用Ferumoxides在体外标记神经干细胞是一种可行的实验方案,其佳终浓度为25 μg/ml.
作者：代广辉；修俊刚；周振军；陈中灿；徐如祥；姜晓丹；杜谋选 刊期： 2007年第01期
目的 探讨妊娠晚期糖尿病孕妇的血小板活化状态、血管内皮损伤、抗凝及纤溶系统部分功能指标的变化及其临床意义.方法 检测了正常非孕妇女、正常晚期妊娠妇女各20例和46例妊娠晚期糖尿病孕妇的血管性血友病因子、血小板α-颗粒膜蛋白、抗凝血酶-Ⅲ、蛋白C系统筛选、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活物及其抑制物、D-二聚体等指标的含量.结果 与正常非孕组及正常晚期妊娠组比较,妊娠晚期糖尿病孕妇组血管性血友病因子、血小板α-颗粒膜蛋白、组织纤溶酶原抑制物水平均显著增高(P＜0.01),组织纤溶酶原激活物活性明显低于正常晚期妊娠组(P＜0.01);与正常非孕组比较,正常晚期妊娠组和妊娠期糖尿病组空腹血糖、纤溶酶原、D-二聚体等指标均显著增高(P＜0.01).与正常晚期妊娠组比较,妊娠期糖尿病组空腹血糖、纤溶酶原、D-二聚体均显著增高(P＜0.01),抗凝血酶-Ⅲ、蛋白C活性依赖凝固时间在正常晚期妊娠组较非孕组呈下降趋势,妊娠期糖尿病患者AT-Ⅲ水平与正常晚期妊娠组无显著差异.结论 正常晚期妊娠妇女血液处于血栓前状态,而糖尿病孕妇存在着明显的血栓前状态,因此,糖尿病孕妇产前测定凝血和纤溶功能指标,对监测病情、指导治疗、改善预后具有一定的价值.
作者：刘宝瑛；简奕婪；钟梅；余艳红；王前；张军 刊期： 2007年第01期
目的 观察大鼠角膜组织中树突状细胞的分布,以了解树突状细胞在穿透性角膜移植排斥反应中的作用.方法 制作大鼠穿透性角膜移植模型,观察角膜透明度、新生血管.采用免疫组织化学方法检测OX-62+树突状细胞在角膜的分布.结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管、角膜水肿、混浊、基质增厚.排斥反应发生率100%.正常角膜组织中未见OX-62+树突状细胞分布,在发生急性排斥反应的角膜上皮层中有阳性细胞表达.脾脏阳性细胞表达与文献报道一致.结论 OX-62+树突状细胞出现在移植后发生排斥的角膜组织中,角膜组织中的树突状细胞可能参与角膜移植后的免疫反应.
作者：白浪；陆晓和；党森涛；周瑾 刊期： 2007年第01期
目的 建立大鼠垂体压迫模型,观察和分析术后大鼠生物学特征的变化.方法 通过咽旁人路将自体肌肉填入垂体窝内达到压迫垂体的目的,观察术后动物的生存情况,测定垂体窝体积、体质量、进食量、饮水量、尿量及尿比重.结果 成功建立了大鼠垂体压迫模型,垂体窝体积增加了35%.术后体质量5周内明显减少,第10天时明显达31%,进食量虽在2周后有所恢复,但仍少于对照组.术后出现了渐进性中枢性尿崩症,2周后明显并持续存在.两组间2周后平均尿量(ml)(55.4±1 5.9 vs 18.5±5.8)、尿密度(1.011±0.004 vs 1.036±0.006)有显著差异.结论 通过咽旁人路将自体肌肉填塞入垂体窝可以建立大鼠的垂体压迫模型.垂体压迫后动物的生物学特征发生了改变,并且与垂体切除、垂体柄损伤等模型具有差异.
作者：王益华；漆松涛；潘军；公方和；刘承勇；张嘉林；袁智锐 刊期： 2007年第01期
目的 探讨韩氏仪穴位神经刺激与静脉注射恩丹西酮的联合应用对防治妇科腹腔镜手术后病人恶心、呕吐的疗效.方法 120例ASAI～Ⅱ级选择全麻下行妇科腹腔镜手术病人,以随机双盲法分为4组:A组韩氏仪穴位刺激+静脉注射恩丹两酮8 mg,B组单独应用韩氏仪穴位刺激,C组单次静脉注射恩丹西酮8 mg,D组静脉注射生理盐水4 ml.比较各组术后24 h内呕吐、恶心的发生率.结果 A、B、C组恶心呕吐发生率显著低于D组(P＜0.05),A组也显著低于B、C两组(P＜0 05),而B、C组间比较差异无显著性(P＞0.05).结论 韩氏仪穴位刺激联合静脉注射恩丹西酮能较有效降低妇科腹腔镜术后恶心、呕吐的发生率.
作者：李煜；劳建新；张永福；金宇林；刘文兴 刊期： 2007年第01期
目的 探讨二维超声心动图在三尖瓣下移畸形(Ebstein畸形)诊断中的应用价值.方法 应用经胸彩色多普勒超声心动图(TTE)诊断Ebstem畸形11例.结果 Ebstein畸形除了瓣叶起始部位下移和发育不良外,瓣叶末端附着异常也是其重要的病理学及形态学特征.结论 TTE能明确诊断Ebstein畸形并提供详细的形态特征,可为外科手术和内科治疗提供重要依据.
作者：陆培明；黄新胜 刊期： 2007年第01期
目的 探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响.方法 重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞生长增值的影响.结果 携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P＞0.05).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P＜0.01).融合基因的疗效优于单一自杀基因(P＜0.01).结论 KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,抑制其增值.
作者：李强；黄宗海；俞金龙；苏国强；厉周 刊期： 2007年第01期
目的 观察SD大鼠出生后的不同发育阶段眼内nestin阳性表达的部位、数量变化.方法 选取出生1、7、14、21、30d SD大鼠,通过免疫细胞化学方法检测nestin在大鼠眼内的阳性表达.结果 在出生后SD大鼠眼内视网膜及眼外肌均有nestin阳性表达,且随发育时间变化,在视网膜由各层分布到仅在神经纤维层偶有表达,而在眼外肌表达量逐渐减少.结论 出生后大鼠随年龄增长,视网膜及眼肌nestin阳性表达量逐渐减少.
作者：刘迎庆；原林；戴景兴；修贺明 刊期： 2007年第01期
目的 为探索参与调控结核分枝杆菌(MTB)持续性感染的相关分子,对MTB H37Rv株编码Rv1494、Rv1495假想蛋白基因进行克隆、表达及Western blotting鉴定.方法 采用Bioedit、Dnaman软件及Pfam数据库对MTB H37Rv株Rv1494、Rv1495基因编码蛋白质的氨基酸组分、蛋白模块以及其与大肠杆菌E.coli的mazEF蛋白家族的同源性进行分析.以H37Rv株基因组为模板,分别对Rv1494、Rv1495基因进行克隆,构建pET32a(+)原核表达质粒,转化BL21宿主菌.重组蛋白经SDS-PAGE电泳分离纯化和Western blotting鉴定.结果 生物信息学分析提示,Rv1494基因、Rv1495基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌E.coli染色体编码的mazEF家族中的抗毒素和毒素具有一定程度的同源性,分别为26%和29.75%;经测序表明原核表达重组质粒构建成功.负载重组质粒的BL21菌经IPTG诱导后可表达出分子大小与预期值相一致的融合蛋白,表达量均可达到菌体总蛋白的60%.重组蛋白经Western blotting检测出特异性阳性信号.结论 首次对MTB H37Rv株编码Rv1494、Rv1495假想蛋白基因进行克隆表达,为进一步探讨该基因在参与调控MTB持续性感染过程中的功能奠定基础.
作者：商正玲；鲍朗；姚素霞；张会东 刊期： 2007年第01期
目的 观察急性心肌梗死患者急诊介入治疗不同的再通时间与临床疗效的关系.方法 观察2000年7月至2005年4月间确诊急性心肌梗死且行急诊介入治疗患者164例,根据起病时间和第一次球囊扩张时间的间隔以及配对原则分为两组:6 h内(A组)和6～12 h(B组)两组,比较两组患者左室射血分数、心脏主要不良事件方面的差异.结果 A组患者术后30 d内左室功能较B组明显改善(P＜0.05),两组患者心脏主要不良事件发生率有显著差异(P＜0.05).结论 急性心肌梗死患者行冠脉介入治疗时应尽早开通血管.
作者：黄炫生；张励庭；袁勇；董剑廷；刘卫其；韩莹；邓志华 刊期： 2007年第01期
目的 研究辣椒素受体对内皮素-1(ET-1)引起热痛觉过敏的影响.方法 选用辣椒素受体基因敲除小鼠(KO小鼠)及其野生型C57BL/6J小鼠(WT小鼠),分为KO组与WT组,两组分别按3、10、30、100 pmol剂量足底注射ET-1(溶于10 μl磷酸盐缓冲液,n=6).测量注药前和注药后15、30、45及60min时逃避时间(PWT).结果 ET-1引起两组动物PWT降低,在WT组降低幅度更明显,WT组PWT随着ET-1剂量的增加而降低,而KO组PWT在剂量为30 pmol时降低为明显.结论 ET-1引起的热痛觉过敏部分通过辣椒素受体起作用.
作者：季文进；梁杰贤；赵国栋 刊期： 2007年第01期
目的 了解鸡羽根的结构特点,观察其在活体组织内的降解情况及其对周围组织的影响,为其作为组织工程备选支架材料提供依据.方法 健康鸡羽根,采用序贯的、不同程度(轻、中、重)理化处理程序,得到3种鸡羽根角蛋白(CCK-Ⅰ、CCK-Ⅱ、CCK-Ⅲ),光学显微镜/扫描电镜观察其形态结构.大鼠背部肌组织内植入鸡羽根角蛋白片(实验组)和未处理鸡羽根片(对照组),以及坐骨神经束间植入鸡羽根角蛋白丝(实验组)和未处理羽根丝(对照组),于不同时间点取材,观察其降解情况和组织相容性.结果 (1)光镜:鸡羽根管壁从内到外依次为4个致密层:嗜碱性均质状粗线,3～5层的嗜酸性角质层,60～100层含大量色素颗粒的环行角蛋白束和10～20层含少量色素颗粒的角蛋白束.扫描电镜:未处理的鸡羽根结构致密,管壁平整,无孔洞;处理后结构较疏松,可见大小、深浅不等的孔洞.(2)肌组织内植入:第8周材料呈细丝状或散在细颗粒状,部分被降解吸收,仍有少量炎性细胞,可见多核巨细胞;第12周材料降解为细小碎片.对照组各时间段材料结构完整.(3)神经束间植入:引起的组织反应与细胞类型同肌组织内植入组,神经组织无变性、坏死.结论 未处理的鸡羽根由多层致密的角蛋白束构成,含色素颗粒和少量基质.处理后表面出现许多孔洞,结构疏松,且体内可降解,其降解产物不引起机体组织的变性、坏死.鸡羽根有可能成为组织工程化器官或组织构建的备用支架材料.
作者：赵冰雷；陈英华；肖应庆；仇欣霞；董为人；邹仲之 刊期： 2007年第01期
目的 探讨乌司他丁对食管癌手术所致肺炎性反应的影响.方法 选择40例限期行食管癌根治术患者,随机分为对照组(n=20)和乌司他丁组(n=20).乌司他丁组按5000 U/kg给予乌司他丁,对照组以等量生理盐水代替.于手术前(T1),术中恢复双肺通气后10 min(T2)、24 h(T3)、48 h(T4)各监测时点抽取静脉血3 ml,并于T1和T2时点收集支气管肺泡灌洗液3 ml.用ELISA法测定血浆及支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-8的浓度.结果 两组患者T2、T3、T4时点的血浆及T2时点的支气管肺泡灌洗液中IL-6及IL-8浓度均升高,与术前比较差异有显著性(P＜0.01).乌司他丁组IL-6、IL-8增高幅度较C组小,两组比较有统计学差异(P＜0.05).结论 食管癌手术存在炎性反应,乌司他丁可抑制血浆及支气管肺泡灌洗液中IL-6及IL-8浓度.
作者：陆霄云；曾维安；林文前；陈秉学；何伟雄 刊期： 2007年第01期
目的 检测大鼠窦房结中电压门控钠通道不同亚型的表达情况并探讨其功能.方法 采用免疫荧光技术检测钠通道亚型Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3、Nav1.5、Nav1.6、Nav1.7在大鼠窦房结中的表达,用激光共聚焦显微镜进行观察和图像分析.建立大鼠离体灌流心脏模型,观察钠通道特异性阻断剂河豚毒素对离体灌流心脏自发性节律即固有心率的影响.结果 河豚毒素敏感的神经型钠通道亚型Nav1.1、Nav1.6、Nav1.7以及河豚毒素不敏感的心脏型Nav1.5均存在于大鼠窦房结组织中,但是神经型钠通道的蛋白表达更为丰富(P＜0.05).100 nmol/L河豚毒素灌流可以选择性阻断神经型钠通道亚型(推测为Nav1.1、Nav1.6、Nav1.7),同时不阻断河豚毒素不敏感的钠通道亚型(推测为Nav1.5),大鼠固有心率不受影响[(0.5±2.9)%,P＞0.05];2 μmol/L河豚毒素同时阻断河豚毒素敏感的钠通道亚型以及对河豚毒素不敏感的钠通道亚型后,大鼠固有心率显著下降[(22.1±2.1)%,P＜0.001].结论 Nav1.1、Nav1.5、Nav1.6和Nav1.7在大鼠窦房结组织中均有表达.虽然神经型钠通道亚型的蛋白含量更为丰富,心脏型Nav1.5对于维持正常的窦房结活动可能更为重要.
作者：黄欣；马爱群；杨佩；杜媛；席雨涛；耿涛 刊期： 2007年第01期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
