学术投稿

重组结核分枝杆菌ESAT6-PPE68融合蛋白的制备

李红霞;陈建平;曾林子;刘刚;姚卫;杨筠;刘杨椅;王涛;田玉

关键词:结核分枝杆菌, esat6-ppe68融合基因, rESAT6-PPE68融合蛋白, 原核表达
摘要:目的 构建结核分支杆菌esat6-ppe68融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白ESAT6-PPE68.方法 用基因拼接(GeneSOEing)法扩增esat6-ppe68融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGesat6-ppe68.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)诱导表达约69 000带谷胱苷肽硫转移酶蛋白(GST)标签的正SAT6-PPE68融合蛋白,经谷胱苷肽-硫-转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting鉴定.结果 重组质粒pGesat6-ppe68中目的基因测序结果与报道序列完全相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Westernblotting结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.结论 成功构建了原核表达载体pGesat6-ppe68,获得了rESAT6-PPE68融合蛋白,为rESAT6-PPE68融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 重度卵巢刺激综合征并左输卵管峡部妊娠及黄体破裂1例报告

    重度卵巢刺激综合征是在促排卵过程中发生的严重的医源性并发症.本文报道1例重度卵巢刺激征并左输卵管妊娠,行左输卵管部分切除术后发生左卵巢黄体破裂诊治过程,以供参考

    作者:孙静;郭智勇 刊期: 2007年第02期

  • 亚健康状态中医证候调查表的评价

    目的 研制亚健康状态中医证候调查表,评价其信度和效度.方法 采用现场调查的方式,调查表回收率为96.3%,条目应答率为97.2%.结果 调查表的内部一致性系数很高(0.9274~0.9676),各条目与其所属因素有较强的相关性(除女性躯体症状外,其他项目的Spearman相关系数多在0.6以上),经因子分析,因子载荷和结构与调查表内容基本吻合.结论 研制的亚健康状态中医证候调查表是可信和有效的.

    作者:王学良;霍云华;李俊;赵晓山;罗仁 刊期: 2007年第02期

  • 红背叶根拮抗酒精性肝纤维化大鼠模型的作用机制

    目的 研究红背叶根拮抗酒精性肝纤维化大鼠模型的作用机理.方法 制备酒精性肝纤维化大鼠模型,观察红背叶根对该模型动物血清中转化生长因子β1、基质金属蛋白酶组织抑制因子1的影响及透明质酸酶、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶的变化.结果 红背叶根组血清中的以上8项指标与模型组相比显著减少.结论 红背叶根抗肝纤维化,可能是通过对转化生长因子β1、基质金属蛋白酶组织抑制因子1表达的抑制.

    作者:吕小燕;刘强;陈育尧;宋雨鸿;吕志平 刊期: 2007年第02期

  • 血卟啉衍生物光动力对两株人鼻咽癌细胞杀伤实验的对比研究

    目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1的生物作用.方法 向体外培养的CNE2和C666-1分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/m)孵育4 h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐比色法测定细胞存活率.结果 HpD-PDT能有效地杀伤体外培养的人鼻咽癌CNE2和C666-1细胞,其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P<0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml或2.0μg/ml时,其杀伤CNE2、C666-1细胞的作用明显;HpD-PDT对CNE2和C666-1的半数杀伤度分别为0.7μg/ml、1.2μg/ml,两者存在显著性差异(P<0.05).相同HpD浓度、激光剂量条件下,C666-1细胞存活率显著高于CNE2(P<0.05).结论 HpD-PDT对CNE2和C666-1细胞均有杀伤作用,但C666-1细胞对HpD-PDT的敏感性低于CNE2.

    作者:杨小民;罗荣城;马红京;李黎波;丁雪梅;严晓;吕成伟;周晓平 刊期: 2007年第02期

  • 具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

    目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.

    作者:张艳飞;刘莉;丁彦青 刊期: 2007年第02期

  • 嗜肺军团菌pilE基因体外表达及其免疫原性研究

    目的 构建嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛pilE基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-pilE,研究其真核细胞中的表达及其免疫原性.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌pilE基因,将其定向插入载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1.-pilE.经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-pilE转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western-blot分别鉴定pcDNA3.1-pilE的瞬时和稳定表达产物.将pcDNA3.1-pilE作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN-γ产生水平、CTL杀伤活性等指标,评价疫苗的免疫原性.结果 扩增出了429 bp的PilE基因,在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,在相对分子质量15000处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA3.1-pilE在细胞内表达PilE蛋白.pcDNA3.1-pilE免疫组的免疫原性均高于对照组pcDNA3.1(+)组(P<0.01).结论 成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中得到了表达,免疫小鼠后诱导了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答.

    作者:杨志伟;陈建平;王涛;田玉;刘德松 刊期: 2007年第02期

  • 骨原发性恶性淋巴瘤影像学诊断与组织病理对照研究

    目的 探讨骨原发恶性淋巴瘤(PLB)的影像学表现特点.方法 回顾性分析经手术或穿刺活检病理学证实的PLB 9例,其中男6例,女3例,年龄9~60岁,中位年龄26.5岁.9例中X线平片检查8例、CT检查5例、MRI检查7例.其中2例行X线平片和MR检查,2例CT和MR检查,4例具有X线、CT和MR资料.2例为穿刺活检证实;7例行手术切除和病理学检查证实,全部病例均做了常规的组织切片HE染色和免疫组化检查.结果 病灶位于骨盆4例、额骨1例、枕骨斜坡1例、脊柱1例、股骨上端2例.影像学表现:X线表现,病变骨组织外形基本正常4例,内部可见斑点状、大小不等的虫蚀状骨质破坏;4例表现为病变骨质轻度~中度膨胀性改变,局部骨质呈明显溶骨性破坏:CT表现骨髓腔内和骨皮质上可见大小不等的溶骨性破坏,病变骨质周围围绕明显的软组织肿块;MR表现病变区骨髓腔内及周围软组织肿块在T2WI上呈不均匀中度~明显高信号,T1WI上呈均匀等信号.增强扫描后骨髓腔内病灶和周围软组织肿块在CT和MRI上均呈中度~明显强化.病理结果B细胞型5例、T细胞型4例.结论 影像学上PLB以斑点状或渗透性溶骨性破坏为主,病变骨质外形可正常或呈膨胀性改变,伴有明显的周围软组织肿块,中块以病骨为中心生长并有明显强化为其特征.

    作者:李绍林;张雪林;韩惠霞;陈斌 刊期: 2007年第02期

  • 腰大池置管控制引流速度治疗自发性蛛网膜下腔出血

    目的 研究腰大池置管匀速引流治疗自发性蛛网膜下腔出血(SAH)的临床效果,并探讨佳引流速度.方法 62例SAH病人随机分组,实验组行腰大池置管持续引流,并予3种不同引流速度,对照组行腰穿脑脊液置换术,其它治疗相似.结果 实验组脑脊液澄清时间(5.1±2.1)d、脑血管痉挛率(14%)及二次出血率(2.3%)较对照组明显降低(P<0.05),但发生颅内感染、低颅压综合症及脑积水的概率与对照组无明显差别(P>0.05);控制引流速度在(10±1)ml/h,能有效的缩短置管时间,同时不增加血管痉挛、二次出血、颅内感染和脑积水的概率.结论 腰大池置管持续引流脑脊液在治疗SAH的临床应用中操作简单易行,并发症少,治疗安全有效,引流速度控制为(10±1)ml/h能有效缩短治疗时间,减少并发症.

    作者:闻林;林亮楠;邹宇辉;陈宁;古林静 刊期: 2007年第02期

  • 超短波联合消炎利胆片治疗慢性胆囊炎的疗效观察

    目的 观察超短波联合消炎利胆片治疗慢性胆囊炎的疗效.方法 120例慢性胆囊炎患者被随机分为治疗组和对照组,每组各60例,治疗组在服消炎利胆片的同时配合超短波治疗,对照组只口服消炎利胆片,对比观察两组患者的疗效.结果 治疗组在疼痛、发热以及B超检查方面的总有效率分别为90%、83.33%、8235%,而对照组则为63.33%、42.85%、62.5%,两组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05);在临床治愈方面,治疗组总有效率为90%,而对照组为63.33%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 超短波联合消炎利胆片是一种治疗慢性胆囊炎的有效方法,值得临床推广.

    作者:阎玉兰 刊期: 2007年第02期

  • 胎膜早破患者血清及羊水中瘦素水平的检测

    目的 观察胎膜早破孕妇血清及羊水中瘦素水平,探讨其临床意义.方法 采用放射免疫法检测30例无胎膜早破产妇及27例胎膜早破孕妇羊水及血清中瘦素蛋白水平,其中胎膜早破72h以内孕妇20例,胎膜早破达到或超过72h的研究组7例.结果 胎膜早破72h以内的孕妇血清与羊水瘦素水平与对照组相比均无统计学差异,胎膜早破达到或超过72 h的孕妇血清瘦素水平与对照组相比无统计学差异(P>0.05),羊水中瘦素水平高于对照组及破膜72h以内孕妇组(8.23±3.05)ng/ml,有统计学差异(P<0.05).结论 胎膜早破孕妇,随破膜时间延长,其羊水中瘦素水平有升高趋势,提示羊水瘦素水平可作为预测感染趋势的指标.

    作者:郭智勇;郭新宇;李文玲;于秋江;孙静;陈紫芬 刊期: 2007年第02期

  • 晚期糖基化终产物受体Gly82Ser多态性与2型糖尿病相关性的研究

    目的 探讨晚期糖基化终产物受体(RAGE)基因Glv82Ser多态性在中国汉族人中的分布特点和对中国2型糖尿病易感性的影响.方法 应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测194例2型糖尿病患者和546例非糖尿病对照者的Gly82Ser多态性基因型.结果 中国人RAGE基因Gly82Ser多态基因型以GG型、等位基因以G型为主,其频率分布显著高于其他国家和种族.2型糖尿病患者和非糖尿病对照者间,RAGE基因Gly82Ser多态性的基因型(GG、GS、SS)频率或等位基因(G、S)分布皆无显著性差异(P>0.05).结论 RAGE基因Gly82Ser多态性与中国2型糖尿病的发病、发展无关,提示RAGE基因Gly82Ser并非中国2型糖尿病的易感基因.然而,与其他国家、种族相比,RAGE基因Gly82Ser多态性在中国汉族人群、中国2型糖尿病人群呈高分布频率.

    作者:高锦雄;许顶立;邵亚辉;赖文岩;林晟;张彬 刊期: 2007年第02期

  • 苦参碱诱导K562细胞合成γ珠蛋白

    目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.

    作者:张翠梅;封志纯 刊期: 2007年第02期

  • L-精氨酸治疗妊娠期高血压疾病患者胎儿生长受限效果及其机制

    目的 探讨L-精氨酸治疗妊娠期高血压疾病所致胎儿生长受限的效果及其对脐血流参数和一氧化氮(NO)水平的影响.方法 妊娠期高血压疾病合并胎儿生长受限妊娠的孕妇68例,其中25例在常规治疗的基础上加用L-精氨酸治疗,监测治疗前后胎儿脐血流参数变化、孕妇外周血和新生儿出生时脐血NO水平.结果 L-精氨酸治疗后,胎儿脐血收缩期峰值/舒张期峰值、搏动指数和阻力指数下降(P=0.000 0),快速血流比值升高(P=0.000 0);L-精氨酸组孕妇血清NO水平明显高于常规治疗组(P=0.000 0),但仍低于对照组(P=0.000 8);L-精氨酸组新生儿脐血清NO水平高于常规组(P=0.001 7),但仍低于对照组(P=0.000 0);L-精氨酸组新生儿出生体质量大于常规治疗组(P=0.006 8),与对照组相比无统计学差异(P=0.176 2).结论 L-精氨酸能显著提高妊娠期高血压疾病合并胎儿生长受限孕妇外周血及脐血中NO水平,改善脐血流,有助于胎儿宫内生长.

    作者:张宁;熊爱华;肖昕;李莉平 刊期: 2007年第02期

  • 绿色荧光蛋白标记骨髓基质干细胞在恒河猴体内构建组织工程骨的示踪作用

    目的 用绿色荧光蛋白(GFP)标记恒河猴骨髓基质干细胞(rBMSC),以示踪其在体内参与组织工程骨形成的情况.方法 用OBI-293A细胞对腺病毒Ad5.CMV-GFP进行扩增,用Ad5.CMV-GFP转染rBMSc,将转染成功的第三代BMSc在转染后48 h消化制成细胞悬液,接种至块状可吸收HA上,体外培养3 d后,将其植入恒河猴(同体移植)背阔肌的肌袋内,以未转染GFP的BMSC用同样的方法接种块状可吸收HA上,作为对照,术后6周取材,4%的中性多聚甲醛固定,塑料包埋,制作骨磨片PI染色在激光共聚焦显微镜下进行观测.结果 转染GFP后,rBMSc仍贴壁生长,呈梭形或多角形,仍分裂增殖,但增殖速度有所降低.48 h可见细胞发出强烈的荧光,呈全细胞分布,计数转染率达80%.在激光共聚焦显微镜下观察骨磨片,可见材料内有发出较强荧光的细胞结构,能同时被PI染液着色.结论 绿色荧光蛋白能有效示踪组织工程骨种子细胞,种人体内的BMSC是组织工程骨骨组织形成的主要细胞来源.

    作者:汪群力;裴国献;云雄;金丹;魏宽海;任高宏 刊期: 2007年第02期

  • 三维适形放疗后放射性肝损伤的MRI表现

    目的 分析放射性肝损伤的MRI表现.方法 回顾性分析2001年9月至2005年10月我科的20例放射性肝损伤的MRI资料,20例患者均因肝脏肿瘤接受过1~2疗程的三维适形放疗,MRI资料包括平扫与增强扫描,4例因疑肿瘤复发而经穿刺确诊为放射性肝损伤.结果 急性放射性肝损伤表现为与受照射区形态相似大片状肝水肿,T1WI上为低信号,T2WI为高信号,Gd-DTPA增强后动脉期无强化.慢性放射性肝损伤平扫T1WI为不规则片状稍低信号,T2WI为稍高信号,Gd-DTPA增强后动脉期强化不明显,静脉期及延迟期强化明显.结论 放射性肝损伤MRI表现有一定的特征性;MRI平扫与动态增强扫描有较高的诊断价值.

    作者:陈大朝;陈龙华;金吴东;许乙凯;许鹏君 刊期: 2007年第02期

  • MMP-2/TIMP-2在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及意义

    目的 探讨金属基质蛋白酶-明胶酶A(MMP-2)及其抑制剂(TIMP-2)在妊娠滋养细胞疾病发生、发展及预后中的作用.方法 采用原位杂交、免疫组化法分别从mRNA、蛋白质水平检测MMP-2/TIMP-2在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达.结果 未恶性转化葡萄胎MMP-2低表达,TIMP-2高表达,恶性转化葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌中MMP-2表达逐渐增强,TIMP-2表达相反.妊娠滋养细胞肿瘤组与正常绒毛、葡萄胎组相比,MMP-2、TIMP-2的表达均有显著性差异(P<0.01,P<0.001).结论 金属基质蛋白酶的激活与抑制比例失衡在妊娠滋养细胞疾病发展、浸润和转移中起重要作用.

    作者:丁峰;张秋实;邢福祺 刊期: 2007年第02期

  • 重组结核分枝杆菌ESAT6-PPE68融合蛋白的制备

    目的 构建结核分支杆菌esat6-ppe68融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白ESAT6-PPE68.方法 用基因拼接(GeneSOEing)法扩增esat6-ppe68融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGesat6-ppe68.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)诱导表达约69 000带谷胱苷肽硫转移酶蛋白(GST)标签的正SAT6-PPE68融合蛋白,经谷胱苷肽-硫-转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting鉴定.结果 重组质粒pGesat6-ppe68中目的基因测序结果与报道序列完全相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Westernblotting结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.结论 成功构建了原核表达载体pGesat6-ppe68,获得了rESAT6-PPE68融合蛋白,为rESAT6-PPE68融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.

    作者:李红霞;陈建平;曾林子;刘刚;姚卫;杨筠;刘杨椅;王涛;田玉 刊期: 2007年第02期

  • 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生

    目的 探讨经尿道前列腺汽化电切术的特点.方法 回顾性分析256例经尿道前列腺汽化电切术治疗患者的临床资料.结果 手术时间40~100 min,平均70min.术后3个月随访,术后尿流率、剩余尿量、国际前列腺症状评分、生活质量评分均得到明显改善.大尿流率由6.5~12.5ml/s提高到15~24ml/s,残余尿由60~180ml降至0~30ml,国际前列腺评分由19~25降至0~8分.结论 经尿道前列腺汽化电切术适用于不同程度增生的患者,值得推广.

    作者:罗汉宏;曾京华;王晓春;刘一枚 刊期: 2007年第02期

  • EB病毒转化人胃上皮细胞GES-1中bcl-2基因的表达

    目的 研究EBV感染人胃上皮细胞系GES-1后bcl-2基因的表达状况,探讨6cl-2基因在EBV相关胃癌发生中所起的作用.方法 采用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV产生细胞系Akata 1061以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,经有限稀释法克隆和G418筛选获得感染和转染细胞克隆,用pcDNA3空载体质粒转染的人胃上皮细胞系GES-1细胞作对照:采用免疫细胞化学染色(ICC)法测定EBNA1基因的表达以鉴定EBV感染细胞克隆及测定EBV感染细胞中Bcl-2蛋白的表达.结果 与对照相比较,感染细胞中Bcl-2蛋白的表达阳性.结论 EBV感染可使人胃上皮细胞Bcl-2蛋白表达增高,EBv对人胃上皮细胞的转化作用可能与bcl-2基因的过度表达有关.

    作者:朱丽华;周天戟;史国友;章广玲;李淑英 刊期: 2007年第02期

  • 人鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达分析

    目的 用cDNA微阵列膜比较鼻咽癌组织及正常组织的基因表达谱,研究鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达,为进一步探讨差异表达基因的调控机制奠定基础.方法 24例鼻咽癌组织总RNA和正常对照总RNA(24例正常鼻咽组织RNA等质量混合)分别经逆转录探针标记与微阵列膜杂交.然后用Pathway4.0软件分析杂交结果,并用RT-PCR反应验证微阵列杂交结果.结果 在1625个鼻咽癌差异表达基因中,共有转录因子相关基因35个,12个基因表达上调,23个基因表达下调.结论 在鼻咽癌组织中,多个转录因子相关基因的表达水平发生了变化,这些转录因子在鼻咽癌组织的基因表达调控中发挥重要作用.

    作者:王爽;吕丽春;方唯意;姚开泰 刊期: 2007年第02期

南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志

主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学