学术投稿

血卟啉衍生物光动力对两株人鼻咽癌细胞杀伤实验的对比研究

杨小民;罗荣城;马红京;李黎波;丁雪梅;严晓;吕成伟;周晓平

关键词:鼻咽癌, 血卟啉衍生物, 光动力学疗法
摘要:目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1的生物作用.方法 向体外培养的CNE2和C666-1分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/m)孵育4 h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐比色法测定细胞存活率.结果 HpD-PDT能有效地杀伤体外培养的人鼻咽癌CNE2和C666-1细胞,其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P<0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml或2.0μg/ml时,其杀伤CNE2、C666-1细胞的作用明显;HpD-PDT对CNE2和C666-1的半数杀伤度分别为0.7μg/ml、1.2μg/ml,两者存在显著性差异(P<0.05).相同HpD浓度、激光剂量条件下,C666-1细胞存活率显著高于CNE2(P<0.05).结论 HpD-PDT对CNE2和C666-1细胞均有杀伤作用,但C666-1细胞对HpD-PDT的敏感性低于CNE2.
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  • 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生

    目的 探讨经尿道前列腺汽化电切术的特点.方法 回顾性分析256例经尿道前列腺汽化电切术治疗患者的临床资料.结果 手术时间40~100 min,平均70min.术后3个月随访,术后尿流率、剩余尿量、国际前列腺症状评分、生活质量评分均得到明显改善.大尿流率由6.5~12.5ml/s提高到15~24ml/s,残余尿由60~180ml降至0~30ml,国际前列腺评分由19~25降至0~8分.结论 经尿道前列腺汽化电切术适用于不同程度增生的患者,值得推广.

    作者:罗汉宏;曾京华;王晓春;刘一枚 刊期: 2007年第02期

  • 晚期糖基化终产物受体Gly82Ser多态性与2型糖尿病相关性的研究

    目的 探讨晚期糖基化终产物受体(RAGE)基因Glv82Ser多态性在中国汉族人中的分布特点和对中国2型糖尿病易感性的影响.方法 应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测194例2型糖尿病患者和546例非糖尿病对照者的Gly82Ser多态性基因型.结果 中国人RAGE基因Gly82Ser多态基因型以GG型、等位基因以G型为主,其频率分布显著高于其他国家和种族.2型糖尿病患者和非糖尿病对照者间,RAGE基因Gly82Ser多态性的基因型(GG、GS、SS)频率或等位基因(G、S)分布皆无显著性差异(P>0.05).结论 RAGE基因Gly82Ser多态性与中国2型糖尿病的发病、发展无关,提示RAGE基因Gly82Ser并非中国2型糖尿病的易感基因.然而,与其他国家、种族相比,RAGE基因Gly82Ser多态性在中国汉族人群、中国2型糖尿病人群呈高分布频率.

    作者:高锦雄;许顶立;邵亚辉;赖文岩;林晟;张彬 刊期: 2007年第02期

  • 大鼠磷脂酶C-γ1前体mRNA剪接的初步鉴定

    目的 探讨在大鼠中是否存在磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)选择性剪接变异体的表达及其可能意义.方法 针对在人中已发现的选择性剪接位点(即第30内含子的3'末端与第31外显子交界处)自行设计引物,将大鼠RNA逆转录为cDNA后,再用该对引物进行PCR扩增及序列测定.用此方法初步筛查了大鼠包括胚胎时期、出生早期、成年时期6种脏器组织心、肝、肺、肾、脑和眼球样品共21份.结果 在大鼠中未发现与人相似的第一种剪接方式PLC-γ1aNM 002660).结论 (1)由于不同物种之间的差异,在大鼠中可能不存在与在人类中已发现的PLC-γ1前体mRNA相似的选择性剪接方式,在大鼠中PLC-γ1转录后的剪接主要以与人类相似的第二种剪接方式(PLC-γ1b)为主.(2)在大鼠中PLC-γ1的选择性剪接位点可能与人不同而位于其他位点.

    作者:刘忠英;罗深秋;赵永忠 刊期: 2007年第02期

  • 苦参碱诱导K562细胞合成γ珠蛋白

    目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.

    作者:张翠梅;封志纯 刊期: 2007年第02期

  • 超短波联合消炎利胆片治疗慢性胆囊炎的疗效观察

    目的 观察超短波联合消炎利胆片治疗慢性胆囊炎的疗效.方法 120例慢性胆囊炎患者被随机分为治疗组和对照组,每组各60例,治疗组在服消炎利胆片的同时配合超短波治疗,对照组只口服消炎利胆片,对比观察两组患者的疗效.结果 治疗组在疼痛、发热以及B超检查方面的总有效率分别为90%、83.33%、8235%,而对照组则为63.33%、42.85%、62.5%,两组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05);在临床治愈方面,治疗组总有效率为90%,而对照组为63.33%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 超短波联合消炎利胆片是一种治疗慢性胆囊炎的有效方法,值得临床推广.

    作者:阎玉兰 刊期: 2007年第02期

  • 人鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达分析

    目的 用cDNA微阵列膜比较鼻咽癌组织及正常组织的基因表达谱,研究鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达,为进一步探讨差异表达基因的调控机制奠定基础.方法 24例鼻咽癌组织总RNA和正常对照总RNA(24例正常鼻咽组织RNA等质量混合)分别经逆转录探针标记与微阵列膜杂交.然后用Pathway4.0软件分析杂交结果,并用RT-PCR反应验证微阵列杂交结果.结果 在1625个鼻咽癌差异表达基因中,共有转录因子相关基因35个,12个基因表达上调,23个基因表达下调.结论 在鼻咽癌组织中,多个转录因子相关基因的表达水平发生了变化,这些转录因子在鼻咽癌组织的基因表达调控中发挥重要作用.

    作者:王爽;吕丽春;方唯意;姚开泰 刊期: 2007年第02期

  • 严重烧伤后阿米卡星在痂下水肿液药代动力学变化

    目的 探讨阿米卡星于严重烧伤患者早期单剂使用后在痂下水肿液的药代动力学变化.方法 10例严重烧伤早期患者在60min内单剂匀速静脉滴注阿米卡星400mg,给药后不同时间采集痂下水肿液,利用TDx以荧光偏振免疫法测定浓度,使用3P97软件计算其相关药代动力学参数,采用SPSS10.0进行统计学处理.结果 研究显示-静脉滴注400mg阿米卡星后,痂下水肿液药物浓度一时间数据以二房室模型拟合佳,阿米卡星主要药代动力学参数:t1/2α=(4.35±1.66)h,t1/2β=(80.04±9.52)h,Vc=(13.17±1.32)L,AUC=(1802.49±285.68)μg·h·ml-1,CLs=(0.2272±0.0383)L·h-1.结论 阿米卡星在严重烧伤患者痂下水肿液的总体清除率明显减少,半衰期明显延长,为正常健康者血清半衰期的(28.20~44.78)倍,单剂使用后其有效抗菌浓度可维持24 h以上,说明早期短程用药即能长时间潴留在第三间隙,在创面基底和创周形成有效的抗生索屏障,有利于防治烧伤创面侵袭性感染.

    作者:杨荣华;荣新洲;张涛;华荣 刊期: 2007年第02期

  • 嗜肺军团菌pilE基因体外表达及其免疫原性研究

    目的 构建嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛pilE基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-pilE,研究其真核细胞中的表达及其免疫原性.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌pilE基因,将其定向插入载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1.-pilE.经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-pilE转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western-blot分别鉴定pcDNA3.1-pilE的瞬时和稳定表达产物.将pcDNA3.1-pilE作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN-γ产生水平、CTL杀伤活性等指标,评价疫苗的免疫原性.结果 扩增出了429 bp的PilE基因,在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,在相对分子质量15000处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA3.1-pilE在细胞内表达PilE蛋白.pcDNA3.1-pilE免疫组的免疫原性均高于对照组pcDNA3.1(+)组(P<0.01).结论 成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中得到了表达,免疫小鼠后诱导了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答.

    作者:杨志伟;陈建平;王涛;田玉;刘德松 刊期: 2007年第02期

  • 具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

    目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.

    作者:张艳飞;刘莉;丁彦青 刊期: 2007年第02期

  • 腰大池置管控制引流速度治疗自发性蛛网膜下腔出血

    目的 研究腰大池置管匀速引流治疗自发性蛛网膜下腔出血(SAH)的临床效果,并探讨佳引流速度.方法 62例SAH病人随机分组,实验组行腰大池置管持续引流,并予3种不同引流速度,对照组行腰穿脑脊液置换术,其它治疗相似.结果 实验组脑脊液澄清时间(5.1±2.1)d、脑血管痉挛率(14%)及二次出血率(2.3%)较对照组明显降低(P<0.05),但发生颅内感染、低颅压综合症及脑积水的概率与对照组无明显差别(P>0.05);控制引流速度在(10±1)ml/h,能有效的缩短置管时间,同时不增加血管痉挛、二次出血、颅内感染和脑积水的概率.结论 腰大池置管持续引流脑脊液在治疗SAH的临床应用中操作简单易行,并发症少,治疗安全有效,引流速度控制为(10±1)ml/h能有效缩短治疗时间,减少并发症.

    作者:闻林;林亮楠;邹宇辉;陈宁;古林静 刊期: 2007年第02期

  • 亚健康状态中医证候调查表的评价

    目的 研制亚健康状态中医证候调查表,评价其信度和效度.方法 采用现场调查的方式,调查表回收率为96.3%,条目应答率为97.2%.结果 调查表的内部一致性系数很高(0.9274~0.9676),各条目与其所属因素有较强的相关性(除女性躯体症状外,其他项目的Spearman相关系数多在0.6以上),经因子分析,因子载荷和结构与调查表内容基本吻合.结论 研制的亚健康状态中医证候调查表是可信和有效的.

    作者:王学良;霍云华;李俊;赵晓山;罗仁 刊期: 2007年第02期

  • MMP-2/TIMP-2在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及意义

    目的 探讨金属基质蛋白酶-明胶酶A(MMP-2)及其抑制剂(TIMP-2)在妊娠滋养细胞疾病发生、发展及预后中的作用.方法 采用原位杂交、免疫组化法分别从mRNA、蛋白质水平检测MMP-2/TIMP-2在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达.结果 未恶性转化葡萄胎MMP-2低表达,TIMP-2高表达,恶性转化葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌中MMP-2表达逐渐增强,TIMP-2表达相反.妊娠滋养细胞肿瘤组与正常绒毛、葡萄胎组相比,MMP-2、TIMP-2的表达均有显著性差异(P<0.01,P<0.001).结论 金属基质蛋白酶的激活与抑制比例失衡在妊娠滋养细胞疾病发展、浸润和转移中起重要作用.

    作者:丁峰;张秋实;邢福祺 刊期: 2007年第02期

  • 重酒石酸卡巴拉汀的合成

    目的 研究抗老年痴呆药物重酒石酸卡巴拉汀的合成新工艺.方法 以3-羟基苯乙酮为原料,经过成肟反应,Al-Ni合金催化还原,Eschwe以er-clarke N-甲基化反应得重要中间体3-[1-(二甲基氨基)乙基]苯酚,再与另一侧链甲乙氨基甲酰氯连接,合成外消旋的卡巴拉汀,经DDTA拆分,再与酒石酸成盐,终得到目标产物.结果 对卡巴拉汀的合成工艺进行了改进,总产率达4.17%.结论 新工艺原料易得,条件温和,收率较高,适合工业生产.

    作者:冯金;陈卫民;孙平华 刊期: 2007年第02期

  • 大叶钩藤非生物碱部分的化学成分研究

    目的 研究中药大叶钩藤(Urncaria macrophylla Wall.)非生物碱部分的化学成分.方法 用硅胶柱层析分离,并用各种波谱(MS、IR、NMR)法对化合物的结构进行鉴定.结果 从大叶钩藤中分离鉴定了6个化合物,其结构分别为β-谷甾醇、β-胡萝卜苷、乌苏酸、α-香树素乙酸酯、3β,6β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid、3β-hydroxyurs-12-en-27,28-dioic acid.结论 大叶钩藤非生物碱部分主要含乌苏酸.α-香树素乙酸酯和3β-hydroxyurs-12-en-2728-dioic acid 为首次从该植物中获得.

    作者:伍俊妍;李国成;王定勇 刊期: 2007年第02期

  • 睾丸内注射和体内电穿孔法建立转基因小鼠的实验研究

    目的 探讨在体睾丸生精小管注射合并体内电穿孔建立转基因小鼠的可行性.方法 将两种不同处理的转染液分别注射到4组SPF级雄性昆明小鼠睾丸生精小管内,然后对同一种转染液注射的两组动物中的一组进行体内电穿孔,另一组则不进行体内电穿孔;2周后各组SPF级雄性昆明小鼠分别与超排处理的SPF级雌性昆明小鼠合笼交配,后对各组新生仔鼠进行PCR-Southern检测.结果 PCR检测,四组之间存在显著差异(P<0.01),并且以A组高(45%);Southern blotting检测,4组之间差异不显著(P>0.05),但A组的整合效率(25%)仍高于其他3组.结论 运用在体睾丸生精小管内注射合并体内电穿孔技术可以显著地提高外源基因的转染效率,该方法是否可广泛用于生产转基因动物还有待于进一步深入研究.

    作者:袁进;安靓;顾为望;黄吴健 刊期: 2007年第02期

  • 重组结核分枝杆菌ESAT6-PPE68融合蛋白的制备

    目的 构建结核分支杆菌esat6-ppe68融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白ESAT6-PPE68.方法 用基因拼接(GeneSOEing)法扩增esat6-ppe68融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGesat6-ppe68.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)诱导表达约69 000带谷胱苷肽硫转移酶蛋白(GST)标签的正SAT6-PPE68融合蛋白,经谷胱苷肽-硫-转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting鉴定.结果 重组质粒pGesat6-ppe68中目的基因测序结果与报道序列完全相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Westernblotting结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.结论 成功构建了原核表达载体pGesat6-ppe68,获得了rESAT6-PPE68融合蛋白,为rESAT6-PPE68融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.

    作者:李红霞;陈建平;曾林子;刘刚;姚卫;杨筠;刘杨椅;王涛;田玉 刊期: 2007年第02期

  • 血卟啉衍生物光动力对两株人鼻咽癌细胞杀伤实验的对比研究

    目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1的生物作用.方法 向体外培养的CNE2和C666-1分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/m)孵育4 h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐比色法测定细胞存活率.结果 HpD-PDT能有效地杀伤体外培养的人鼻咽癌CNE2和C666-1细胞,其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P<0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml或2.0μg/ml时,其杀伤CNE2、C666-1细胞的作用明显;HpD-PDT对CNE2和C666-1的半数杀伤度分别为0.7μg/ml、1.2μg/ml,两者存在显著性差异(P<0.05).相同HpD浓度、激光剂量条件下,C666-1细胞存活率显著高于CNE2(P<0.05).结论 HpD-PDT对CNE2和C666-1细胞均有杀伤作用,但C666-1细胞对HpD-PDT的敏感性低于CNE2.

    作者:杨小民;罗荣城;马红京;李黎波;丁雪梅;严晓;吕成伟;周晓平 刊期: 2007年第02期

  • 胎膜早破患者血清及羊水中瘦素水平的检测

    目的 观察胎膜早破孕妇血清及羊水中瘦素水平,探讨其临床意义.方法 采用放射免疫法检测30例无胎膜早破产妇及27例胎膜早破孕妇羊水及血清中瘦素蛋白水平,其中胎膜早破72h以内孕妇20例,胎膜早破达到或超过72h的研究组7例.结果 胎膜早破72h以内的孕妇血清与羊水瘦素水平与对照组相比均无统计学差异,胎膜早破达到或超过72 h的孕妇血清瘦素水平与对照组相比无统计学差异(P>0.05),羊水中瘦素水平高于对照组及破膜72h以内孕妇组(8.23±3.05)ng/ml,有统计学差异(P<0.05).结论 胎膜早破孕妇,随破膜时间延长,其羊水中瘦素水平有升高趋势,提示羊水瘦素水平可作为预测感染趋势的指标.

    作者:郭智勇;郭新宇;李文玲;于秋江;孙静;陈紫芬 刊期: 2007年第02期

  • 人表皮生长因子-天花粉蛋白融合蛋白的基因克隆、表达及纯化

    目的 构建人表皮生长因子(EGF)-linker-天花粉蛋白(TCS)融合蛋白的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化EGF-linker-TCS融合蛋白.方法 用PCR方法扩增EGF及柔性连接肽Linker基因片段,插入质粒PQE30-TCS中,转化至大肠杆菌M15中,表达该融合蛋白(EGF-linker-TCS).表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化.结果 PQE30-EGF-linker-TCS蛋白在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达.目的蛋白占细胞总蛋白的40%左右,以可溶性形式存在,表达上清柱纯化后纯度达95%以上.结论 应用基因工程技术,成功地构建了融合蛋白EGF-linker-TCS的表达载体,表达并纯化了该融合蛋白,为进一步研究其结构功能关系和肿瘤临床应用奠定了基础.

    作者:李咏梅;杨海文;罗仁 刊期: 2007年第02期

  • ZNF217肿瘤基因shRNA表达载体的构建及鉴定

    目的 构建针对ZNF217肿瘤基因的shRNA表达载体,以用于后续的RNAi研究.方法 依据设计shRNA的原则,针对人ZNF217的mRNA序列,设计并合成编码的shRNA的两条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至PGenesil-1质粒,构建重组体PGenesil-ZNF217,进行测序鉴定,然后转染重组体至HO-8910细胞中.转染24 h后流式细胞仪检测转染率.结果 酶切及测序证实质粒PGenesil-ZNF217构建成功,转染24 h的HO-8910细胞发出绿色荧光.结论 成功构建的针对人ZNF217基因shRNA表达质粒PGenesil-ZNF217转染进人卵巢癌细胞株HO-8910细胞,为后续研究以及卵巢癌的基因治疗奠定了基础.

    作者:钟梅;孙桂芹;丁彦青;黎静 刊期: 2007年第02期

南方医科大学学报杂志

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