刘煜；张雪；刘胜军；林敬明
目的 筛选特异高效抗乙型肝炎病毒(HBV)的小干扰RNA分子(siRNA),评价其干扰效果.方法 在HepG2.2.15细胞内导入筛选的3条特异抗HBV的siRNA分子,用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测干扰后HBV的mRNA表达水平;Western blot检测细胞上清中乙肝表面抗原(HBsAg),分析siRNA对HBV基因表达的抑制作用.结果 导入特异siRNA分子细胞中HBV的mRNA表达量明显降低(P＜0.05),上清中HBsAg含量显著减少.阴性对照细胞中HBV的mRNA含量和上清中HBsAg含量基本不变(P＞0.05).结论 所筛选的siRNA分子能特异性抑制HBV的mRNA和蛋白的合成.
作者：焦京；曹虹；周美娟；刘志华；丁振华 刊期： 2007年第04期
目的 确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子区结合.方法 应用生物信息学方法获得PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的Snail结合位点进行预测,进一步应用Snail抗体染色质免疫共沉淀技术结合PCR技术检测PRL-3基因启动子序列,以确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子结合.结果 应用TRED在线分析系统确定PRL-3基因的启动子区域位于PRL-0基因上游-700 bp至299 bp之间,在该启动子区域存在多个转录因子如Snail、n-MYC、ARNT、E74A、NF-kappaB、NRF-2及AML-1等的结合位点;在启动子区域的-500 bp至-451 bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG,在其他多个区域存在多个类似这一核心序列的DNA序列;应用染色质免疫沉淀技术结合PCR扩增的方法对人大肠癌细胞株SW480细胞进行分析,发现Snail可与人大肠癌细胞株SW480 PRL-3基因的启动子区域的DNA片断结合.结论 转录因子Snail可与人大肠癌细胞SW480 PRL-3基因启动子结合,参与PRL-3基因的调控.
作者：杨发达；李建明；周军；柳玉红；丁彦青 刊期： 2007年第04期
目的 用蛋白质组学方法筛选精液不液化患者及正常生育患者精浆中的差异蛋白.方法 通过蛋白质芯片-飞行时间质谱仪,对6例精液不液化患者的精浆和11例正常生育男性精浆样本进行检测,比较两组间蛋白质图谱表达差异.结果 正常组与不液化组精浆比较,有19个蛋白表达存在差异,其中有6个蛋白P＜0.01.结论 精液不液化患者与正常生育患者精浆中存在较多差异蛋白质,差异蛋白质群的结构、功能变化是导致精液液化异常的主要原因;本研究对进一步探索不液化的病因及其临床治疗具有重要意义.
作者：孙玲；白洁；陈士岭；邱卓琳；张为青；杨杰；邢福祺 刊期： 2007年第04期
目的 探讨抗病毒药丽科明(0.1%更昔洛韦眼用凝胶)联合贝复舒(重组牛碱性成纤维细胞生长因子)滴眼液治疗病毒性角膜炎的临床观察.方法 病毒性角膜炎患者34眼,根据病毒性角膜炎的发病特点,更昔洛韦眼用凝胶联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液治疗,并根据两种药物的药理作用进行分析.结果 联合用药治愈率为94.1%,总有效率为97.1%,平均治愈时间16 d.结论 更昔洛韦眼用凝胶联合治疗病毒性角膜炎具有较好的临床效果.
作者：刘春霞；蓝育青；伍俊妍；刘瑞珍 刊期： 2007年第04期
目的 观察活动舌弓+再曲簧临床扩弓效果,寻找一种简便、有效,尤其对下颌牙弓更理想的扩弓方法.方法 选择临床牙弓狭窄伴牙列轻度拥挤患者.其中上颌扩弓者9例,下颌扩弓者8例,随机分为两组,分别采用活动舌弓+再曲簧和四眼簧进行扩弓,比较两组的扩弓效果.结果 通过8周的扩弓治疗,活动舌弓组U4-U4及U5-U5间宽度分别平均扩大2.2 mm和3.0 mm,四眼簧组U4-U4及U5-U5间宽度平均扩大2.3 mm和3.5 mm,两处理组组间比较无显著性差异(P＞0.05).通过12周的扩弓治疗,活动舌弓组L4-L4及L5-L5间宽度分别平均扩大2.3 mm及2.5 mm,四眼簧组L4-L4及L5-L5间宽度平均扩大1.0 mm和1.2 mm,两处理组组间比较有显著性差异(P＜0.05).结论 活动舌弓+再曲簧可明显扩大牙弓中段(前磨牙区),尤对下颌牙弓的扩弓作用明显优于四眼簧.
作者：孙风阳；张宇 刊期： 2007年第04期
目的 观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养的人脐静脉内皮样细胞株ECV304增殖及syndecan-4蛋白表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮样细胞株ECV304,分别应用1、10、20、100 ng/ml的TNF-α作用24 h及36 h并设立对照组进行比较,采用MTS/PES法确定人脐静脉内皮样细胞的增殖状态.利用Western blotting蛋白免疫印迹法测定细胞syndecan-4蛋白的表达情况.结果 24 h各组细胞增殖率分别为对照组(1.956±0.214),TNF-α100 ng/ml组(2.154±0.250),TNF-α20 ng/ml组(2.26±0.151),TNF-α10 ng/ml组(2.118±0.205),TNF-α1 ng/ml组(2.106±0.136).统计分析显示低至1 ng/ml的TNF-α仍能明显刺激人脐静脉内皮样细胞的增殖(P＜0.05),其中以TNF-α 20 ng/ml组细胞增殖显著P＜0.05).36 h各剂量组的细胞增殖率均明显低于24 h的细胞增殖率(P＜0.05).TNF-α对人脐静脉内皮样细胞的syndecan-4蛋白表达有显著的增强作用(P＜0.05).结论 TNF-α对体外培养的人脐静脉内皮样细胞的增殖及syndecan-4蛋白表达均有明显的促进作用,但随着时间的改变,这种作用有所变化.
作者：张彬；欧阳平；陈烨；赖文岩；谢晋国；许顶立 刊期： 2007年第04期
目的 研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300 μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72 h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果 原花青素可引起LNCaP细胞形态较明显改变.不同浓度(100、200、300 μg/ml)原花青素对LNCaP细胞作用的细胞增殖抑制率分别为27.1%、72.1%和86.4%.流式细胞术检测表明原花青素可诱导LNCaP细胞凋亡,300μg/ml原花青素处理72 h引起36.5%的凋亡率.这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强.结论 原花青素可在体外抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,并促进其凋亡.
作者：吴自勍；黄浩；丁雪梅；罗荣城 刊期： 2007年第04期
目的 了解本院临床分离细菌和念珠菌的分布特征、耐药谱和耐药机制,为合理使用抗生素提供依据.方法 大多数分离细菌的鉴定和药敏试验利用BD Phoenix仪,少数利用手工鉴定和Kirby-Bauer法.念珠菌利用显色平板分离和鉴定,K-B法药敏.数据分析用WHONET5软件.结果 2478株细菌和念珠菌中前6位为铜绿假单胞菌15.6%、大肠埃希菌11.5%、白色念珠菌9.6%、肺炎克雷伯菌9.3%、金黄色葡萄球菌8.2%、表皮葡萄球菌7.5%.革兰氏阴性杆菌合计耐药率较低的为美洛培南14.4%、头孢哌酮/舒巴坦14.8%、亚安培南21.9%、哌拉西林-他唑巴坦27.4%、头孢他啶30.0%、阿米卡星31.1%、头孢吡肟33.1%.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率为47.4%和37.3%.革兰氏阳性球菌合计耐药率较低的为万古霉素0.9%、替考拉宁1.1%、呋喃妥因6.9%、阿米卡星20.1%、氯霉素30.7%、头孢哌酮/舒巴坦31.5%.金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌甲氧西林耐药率为57.1%、65.0%和66.0%.念珠菌合计对常用抗真菌药物的耐药率为两性霉素B0.3%、制菌霉素的0.3%、伊曲康唑5.6%、氟康唑9.4%和氟胞嘧啶9.4%.结论 本院临床细菌产ESBLs和苯唑西林耐药率较高,应加强抗生素的合理使用以降低耐药率,采取有效的隔离措施以减少多重耐药菌的扩散.
作者：耿穗娜；周晓红；芮勇宇；王前；张洁 刊期： 2007年第04期
目的 研究腺病毒介导的HSV-TK系统联合羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用.方法 使用含有HSV-TK基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒转染人膀胱癌细胞T-24细胞,表达GFP为转染成功标志,同时观察转染率,PCR检测TK表达.以正常T-24细胞为空白对照,转染成功后分别加入GCV、GCV+HCPT,采用MTT法测定单纯HCPT作用于人膀胱癌细胞72 h细胞增殖抑制率、各组治疗转染后人膀胱细胞24、48、72 h细胞存活率;流式细胞仪检测GCV(0.5 mg/ml)+HCPT(10 mg/L)作用T-24细胞4h后的凋亡情况.结果 随着浓度的增高,HCPT对T-24细胞的生长抑制率逐渐增高,HCPT浓度为0.01 mg/L时T-24生长抑制率为14%,50 mg/L时T-24生长抑制率为63%,当HCPT浓度大于100 mg/L时,抑制作用无明显增加(P=0.216).GCV组、GCV+HCPT各组对转染后细胞有明显杀伤作用(P=0.00),GCV+HCPT组随HCPT浓度增高和作用时间的延长,杀伤效率明显增高.0.5 mg/ml GCV单独作用于转染后的膀胱癌细胞72 h后,细胞存活率为34.6%,GCV(0.5 mg/m1)+HCPT(10 mg/L)组的细胞存活率仅为8.07%(P=0.00).GCV+10 mg/mlHCPT作用后4h,T-24细胞出现M1期前典型的细胞凋亡峰,凋亡率达52.93%.结论 HSV-TK/GCV系统联合HCPT治疗能增强自杀基因系统对人膀胱癌的杀伤作用,能够良好地诱导人膀胱癌细胞的凋亡.
作者：黄河；谭万龙；朱文辉；梁仲琨 刊期： 2007年第04期
目的 观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病肾病(DN)模型大鼠足细胞去氧肾上腺素(nephrin)、肌间线蛋白(desmin)表达的影响,探讨其在DN治疗中发挥肾保护作用的机制.方法 应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组:厄贝沙坦组、模型对照组;另设正常对照组.各组分别干预8周后,利用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组化技术观察足细胞nephrin、desmin表达的变化情况.结果 应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠肾脏病理改变显著减轻、足细胞nephrin、desmin的表达量明显减少.结论 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对DN的肾保护作用机制可能与调节足细胞nephrin的表达量有关,通过延缓或抑制nephrin的损伤、维护足细胞结构和功能的完整而发挥减少尿蛋白、延缓DN进展的作用.
作者：龙海波；钟娟；魏连波；周伟东；许兆忠 刊期： 2007年第04期
目的 研究不同激活状态的单核细胞在乳腺癌发展中的作用,探索肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌中的作用机制.方法 体外分离培养人外周血单核细胞,分为经典激活、替代激活、空白对照3组,分别采用细菌脂多糖IL-4、培养基进行相应激活.48～72 h后,采用RT-PCR、与人乳腺癌细胞株SKBR3共培养、建立鸡胚尿膜囊血管生成模型等方法检测各组TNF-α、AMAC-1、β-actin mRNA表达的差异,观察3种不同活化状态的单核巨噬细胞对乳腺癌细胞生长的影响以及对肿瘤诱导新生血管形成的影响.结果 经典激活组高表达TNF-α,替代激活组则高表达AMAC-1,3组间分子标志物的表达差异具有统计学意义(P＜0.05).共培养实验显示经典激活的单核细胞呈现出明显抑瘤效应,3 d后效应明显高于其他两组(P＜0.05),替代激活的单核细胞则在第5天开始呈现出明显促肿瘤效应(P＜0.05).在鸡胚尿囊膜血管生成模型中,替代激活的单核细胞可以明显促进肿瘤新生血管的生成(5733±14.82),与经典激活(20.44±6.50)及未激活组(32.22±8.33)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-4可以促进人外周血单核细胞向替代激活的方向分化并高表达替代激活的分子标志物AMAC-1,而替代激活的单核巨噬细胞在与肿瘤细胞的共培养中可以促进肿瘤细胞的生长以及刺激肿瘤新生血管的生成.提示肿瘤相关巨噬细胞在体内很可能主要以替代激活的方式存在,从而直接或间接地促进了肿瘤的进展.
作者：郭巨江；苏逢锡；姚和瑞；陈积圣 刊期： 2007年第04期
目的 研究慢性粒细胞性白血病(CGL)MICA*008基因与HCMV感染的相关性.方法 应用PCR/SSP方法分别检测86例慢性粒细胞性白血病患者和81例无血缘关系的随机健康个体的MICA*008基因,同时用ELISA的方法分别检测随机健康个体和慢性粒细胞性白血病患者接受骨髓移植手术前、后外周血HCMV-IgM抗体.结果 ①CGL患者组MICA*008基因频率(22.2%)比对照组(34.3%)低(χ2=4.98,P＜0.05);②MICA*008基因阴性个体的HCMV感染率高于阳性个体的HCMV感染率(P＜0.05),MICA*008基因与HCMV感染关系呈中度相关(C=0.5829,0.6142).结论 MICA*008基因阳性个体对HCMV不易感,阴性个体对HCMV易感,即MICA*008基因与HCMV负相关.
作者：黄柏胜；罗奇志；梅冰；余平 刊期： 2007年第04期
目的 探讨全膀胱切除异位可控膀胱术后远期并发症的发生原因及其防治方法.方法 追踪广西壮族自治区人民医院1998年2月～2005年12月施行的30例全膀胱切除异位可控膀胱手术病人,总结其术后远期并发症、发生原因及防治措施.结果 28例获得随诊(93.33%),时间6月～94月,平均68个月.病人长存活时间为8年,短为6个月.术后出现与泌尿系有关的远期并发症包括:贮尿囊过度扩张11例,贮尿囊结石合并出血10例,营养代谢障碍、水电解质紊乱及酸碱平衡失调4例(主要为高氯血症),输出道狭窄5例,肾功能损害2例,肾输尿管积水2例,严重泌尿系感染2例,勃起功能障碍12例.这些并发症中,早出现的时间是术后1年,集中的时间为术后2～3年,术后因并发症而再次住院治疗达12人次.其中贮尿囊过度扩张与贮尿囊结石合并出血这两项是常见和困扰病人生活质量的并发症.结论 选择合适的病人施行可控膀胱手术,加强术后护理指导工作,提高病人自我护理能力,能有效地减少术后远期并发症的发生,发挥手术的大效果.
作者：蒋敦厚；陈羽；李信众 刊期： 2007年第04期
目的 研究骨髓干细胞在大鼠移植肝中的诱导分化情况及对大鼠长期存活的影响.方法 雌性受体大鼠随机分3组:空白对照组(A组)、D-hanks液组(B组)、骨髓干细胞组(C组).观察大鼠的中位生存时间、肝组织病理变化,基因Sry原位杂交和甲胎蛋白免疫组化双检测观察骨髓干细胞的分化情况.结果 C组中位生存时间大于180 d(P＜0.05);C组无明显的急性排斥反应.基因Sry原位杂交阳性,并且表达甲胎蛋白.结论 骨髓干细胞门静脉输注能减轻急性排斥反应,诱导大鼠肝移植术后长期存活;并能在移植肝的环境中诱导分化为肝细胞,表达甲胎蛋白,并逐渐替代移植肝本身的细胞.
作者：孔凡东；潘明新；王海澜；单毓强；高毅 刊期： 2007年第04期
目的 将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率.方法 将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48 h用RT-PCR检测目的 基因的表达情况.结果 质粒2～10 μg获得佳的转染效率,提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率.RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin阳性细胞有PDX-1表达.结论 通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞的效率,为其成为组织工程的种子细胞提供了实验依据.
作者：王海澜；潘明新；张会迎；安靓；高毅 刊期： 2007年第04期
目的 体外分离培养兔骨髓基质细胞并进行鉴定,为组织工程提供适宜的种子细胞.方法 抽取新西兰白兔红骨髓,在体外分离纯化获取骨髓基质细胞,分别用倒置显微镜观察骨髓基质细胞的增殖分化,用HE染色光镜下观察对细胞进行鉴定,用MTT法描绘细胞生长曲线,并对传代培养的细胞进行冻存复苏.结果 骨髓基质细胞在在培养皿中贴壁生长、增殖,经鉴定为单核细胞;细胞生长曲线显示在接种后前6 d细胞持续旺盛生长,第8天细胞活力高;复苏冻存56d的细胞,培养,发现细胞依然生长良好,增长迅速.结论 可以通过在体外分离纯化骨髓基质细胞并传代培养、冻存复苏,获得足够数量有多向分化潜能骨髓基质细胞,可作为组织工程的种子细胞.
作者：徐忠世；杨述华；肖德明；林博文；卢小虎；李冉 刊期： 2007年第04期
目的 检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在子宫内膜异位症(EMs)中的表达,探讨其在EMs发病机制中的作用.方法 取68例EMs的异位内膜、20例在位内膜和20例正常子宫内膜标本,用免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白的表达情况,并用组织学评分对其结果进行半定量统计,比较其表达强度.结果 HIF-1α主要定位于腺上皮细胞的胞浆中.EMs患者中异位内膜组表达强度显著高于在位内膜组及对照组(P＜0.01),各组中分泌期与增生期表达强度比较无显著性差异(P＞0.05).结论 HIF-1α在EMs患者中的表达显著升高,推测HIF-1α与EMs的发病密切相关.
作者：任旭；何援利；潘石蕾；彭冬先 刊期： 2007年第04期
目的 探讨CD-TK融合双自杀基因对前列腺细胞的杀伤作用.方法 应用缺陷性腺病毒载体将CD-TK融合双自杀基因以及绿色荧光蛋白基因(GFP)转染RM-1细胞,以GFP是否表达作为间接鉴定转染成功的标志,以RT-PCR鉴定作为是否转染的标准.联合前药5-FC和/或GCV作用于转染了CD-TK基因的RM-1细胞,以MTT法检测自杀基因系统对转染后的RM-1细胞的杀伤作用,以未转染的RM-1细胞作对照.结果 以腺病毒感染RM-1细胞72 h后,在荧光显微镜下可见每个细胞都能发出淡绿色荧光,表明该基因已转染到RM-1细胞中,RT-PCR可检测到转染双基因的RM-1细胞含有CD-TK基因.与对照组相比较,当GCV浓度为125 μg/ml时,转染了CD-TK基因的RM-1细胞的存活率为47.27%;与对照组相比较,当5-FC浓度为160 μg/ml时,RM-1细胞的存活率为71.56%;而两种前药联合应用时RM-1细胞的存活率为18.45%,低于单一用药组(P＜0.05).结论 CD/5-FC、TK/GCV自杀基因系统对前列腺癌细胞具有较强的杀伤作用,而应用CD-TK融合自杀基因系统明显优于单一的自杀基因系统.
作者：朱文辉；谭万龙；黄河；石向华；谢毅 刊期： 2007年第04期
目的 分析导致Osaka超声多参数预测胎儿体质量公式误差的因素及其改良方程.方法 回顾性分析本院519例足月单胎孕妇在超声测量后3 d内分娩的正常体质量儿的出生体质量、各项胎儿生物指标,用相关分析及多元线性逐步回归的方法新建的3个回归方程,与Osaka University公式一起应用于199例前瞻性验证,分别进行了预测符合率、绝对误差与相对误差的比较.结果 胎儿腹部面积及腹围对胎儿体质量的影响显著,胎儿肱骨长在预测胎儿体质量上优于股骨长.结论 胎儿腹部面积、腹围及胎儿肱骨长是胎儿体质量较敏感的指标.
作者：裘毓雯；钟梅；陈翠华；胡茂兰；陈雷宁；孙秀云；苏桂栋；宋天蓉；余艳红 刊期： 2007年第04期
目的 将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定型人CD80重组基因的真核细胞表达质粒pRM10/GPI-CD80转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),构建CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株.方法 将pRM10/GPI-CD80用脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选出阳性细胞克隆.采用流式细胞术和免疫荧光染色检测CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株表达GPI-CD80蛋白的效率的变化.结果 转染GPI-CD80基因的CHO细胞在G418筛选下出现阳性克隆,且经过传代后不同代数的克隆细胞表面表达GPI-CD80的阳性率差异无统计学意义.结论 pRM10/GPI-CD80在CHO细胞中成功表达,表达稳定且效率较高.
作者：刘煜；张雪；刘胜军；林敬明 刊期： 2007年第04期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
