黄美萍；余丹青；梁长虹；刘辉；郑君惠
目的 优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法.方法 采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化Haps蛋白,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280 nm波长处的光吸收值(D280),用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的 蛋白条带的出现.结果 弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液1洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol/LNaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110 000 D的目的 条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现.结论 Sepharose CM FF层析柱分离纯化Haps蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的 蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100 mmol/L NaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果.
作者：李婉宜；邝玉；李明远；杨远；蒋中华；姚锋；陈长春 刊期： 2007年第12期
目的 从珍珠层水溶性基质(WSM)对兔骨髓基质干细胞分泌的骨形成蛋白-2和核心结合因子基因表达的影响入手,研究WSM产生成骨作用的机制和途径.方法 培养新西兰大白兔的骨髓基质干细胞(BMSCs),并用低温下提取的珍珠层水溶性基质作用后,检测不同浓度WSM作用下碱性磷酸酶的活性,制定剂量-效应曲线,确定量效关系;采用一步RT-PCR方法检测不同浓度WSM诱导兔BMSCs后骨形成蛋白-2和核心结合因子的基因表达量并进行统计学分析.结果 WSM可以增加兔BMSCs中碱性磷酸酶的活性,在150～200 μg/ml浓度之间作用明显,碱性磷酸酶活性增加显著;WSM诱导兔BMSCs后骨形成蛋白的表达量明显增加,核心结合因子的表达量无明显变化.结论 WSM通过增加骨形成蛋白-2的基因表达量诱导兔BMSCs向成骨细胞分化,与核心结合因子的作用关系不明显.
作者：王建钧；陈建庭；杨春露 刊期： 2007年第12期
目的 评价电子束CT(EBCT)诊断主动脉壁内血肿的价值.方法 采用Imatron C-150型EBCT扫描机,连续容积增强扫描,对25例主诉急性胸背痛患者进行EBCT检查并诊断为主动脉壁内血肿.结果 25例按Stanford分型,A型7例,B型18例.EBCT所见主动脉壁内血肿的直接征象:主动脉壁呈新月形或环形增厚≥5mm,无内膜破裂形成的双腔主动脉征象.间接征象:钙化内移7例,穿透性溃疡征12例,主动脉壁粥样硬化改变18例,内膜渗漏5例.并发征象:心包积液5例,胸腔积液14例,主要分支血管受累5例,主动脉夹层3例,主动脉瘤4例.结论 EBCT能为主动脉壁内血肿的诊断和治疗提供重要信息,且便于治疗后随诊观察.
作者：杜渭清；张雪林；郑敏文；魏梦绮；徐俊卿；徐健 刊期： 2007年第12期
目的 建立大鼠血清中人参皂甙Rb1(G-Rb1)的免疫检识方法.方法 利用杂交瘤细胞技术制备抗G-Rb1单克隆抗体(mAb).含G-Rb1的大鼠血清用甲醇沉淀蛋白,制备供试样品,点样于聚醚砜膜上,以乙腈∶水∶冰醋酸按25∶75∶1的比例展开;NaIO4处理,与BSA结合,使G-Rb1固定于膜上.将PES膜上的G-Rb1与抗G-Rb1 mAb反应后,加过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG,用含0.03%H2O2的1 mg/ml 4-氯-1-萘酚磷酸缓冲液显色.结果 在聚醚砜膜上,在标准品和供试样品的相同位置可清晰地观察到一个青蓝色G-Rb1斑点,该方法检测限为0.25μg.结论 这种G-Rb1的免疫检识方法较薄层层析具有更好的专一性和可靠性,灵敏度接近高效液相色谱,且不需要昂贵的仪器,便于操作.
作者：马丽玲；晁志；田中宏幸；正山征洋 刊期： 2007年第12期
目的 探讨钙结合蛋白在胰腺癌中的表达及生物学意义.方法 用组织微阵列技术构建包含51例导管腺癌,3例胰岛细胞癌,6例慢性胰腺炎患者,3例正常胰腺组织的63点阵的石蜡组织芯片.用免疫组化SP法检测该芯片中钙结合蛋白的表达,分析其与胰腺癌临床病理因素的关系.结果 51例胰腺癌患者中,Calcyclin阳性表达率为76.5%(39/51),与正常组比较Calcyclin表达与胰腺癌显著相关(χ2=9.714,P=0.007),而慢性胰腺炎时Calcyclin亦有表达,但慢性胰腺炎组与正常组比较无明显相关性,同时胰腺癌组及慢性胰腺炎组间亦无明显相关性,Calcyclin表达与年龄、性别、组织分化程度及TNM分期无明显相关性.结论 Calcyclin与胰腺癌相关,可能与胰腺癌发生发展有密切关系.
作者：杨文彬；王永恒；蔡峰；曹罡；秦兆寅 刊期： 2007年第12期
目的 构建携带反义热休克蛋白70(HSP70)的重组腺病毒载体以用于喉癌的基因治疗研究.方法 将HSP70基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒PAdTrack-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌Bj5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带反义HSP70的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASHSP70.结果 成功的构建携带反义HSP70的重组腺病毒载体系统,经测病毒滴度可达8×109.HSP70反义RNA阻断了Hep-2细胞的HSP70的表达,经Western blotting和免疫组化证实,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70,而对照和空载体组高表达HSP70.转染反义HSP70的腺病毒载体的Hep-2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰,而空载体组没有.结论 构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASHSP70可望有效地将反义HSP70导入人喉癌细胞株,为进一步研究喉癌基因治疗提供实验基础.
作者：王晓侠；姚小宝；嵇宪生；李胜利；朱宏亮；樊代明 刊期： 2007年第12期
目的 探讨HCV核心蛋白与(HCBP1)HCV核心蛋白的相互作用蛋白在真核细胞内的相互作用.构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HCBP1融合蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位.方法 PCR分别扩增含HCV核心及HCBP1的cDNA片段,克隆入pGEMT载体,经测序正确后,分别克隆入哺乳双杂交的表达质粒pM和pVP16中,并转染入COS-7细胞,48 h后检测细胞中报告基因CAT的表达水平.将HCBP1的cDNA片段克隆入绿色荧光表达载体pEGFP-C1中,构建HCBP1-EGFP融合蛋白的表达载体,转染COS-7细胞,以Western blot和荧光显微镜分析融合蛋白的表达及其细胞定位.结果 CAT-ELISA检测显示pM-核心蛋白与pVP16-HCBP1实验孔吸光度值高于其他阴性对照,但低于阳性对照组.成功构建HCBP1-EGFP融合蛋白的表达载体,Western blot证实融合蛋白在转染细胞中的表达,荧光显微镜示HCBP1-EGFP融合蛋白分布于细胞浆,而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变.结论 成功构建HCBP1-EGFP融合蛋白表达载体,并在COS-7细胞中得到表达.哺乳双杂交系统证实HCV核心蛋白与新基因HCBP1确有一定的相互作用.
作者：陈天艳；刘敏；陈云茹；蔺淑梅；叶峰；张曦；刘锦锋；赵英仁；张树林 刊期： 2007年第12期
目的 探讨雷帕霉素对肾移植术后慢性移植物肾病(CAN)的疗效和安全性.方法 回顾性分析2002年3月起在本中心随访的31例CAN患者的临床资料,比较从钙神经蛋白抑制剂(CNI)为主的方案转换成SRL为主的方案前后的血清肌酐值(Cr)变化,统计用药相关的不良反应.结果 15名患者达到主要终点即恢复规律透析,8人肾功能改善,8人肾功能维持.其中高Cr0组(Cr0≥3 mg/dl, n=12)有9人恢复透析,两人肾功能改善;低Cr0组(Cr0＜3 mg/dl,n=19)中5人恢复透析,8人肾功能维持,6人肾功能改善;两亚组间有显著差异(P=0.003).14人到达次要终点即停用SRL,其中5人因感染停用SRL,终4人恢复透析,1人死于感染;9人因不良反应停用SRL改用其他免疫抑制剂,后4人恢复透析,2人肾功能维持,3人肾功能改善.高脂血症(51.6%)、白细胞减少(41.9%)、口腔溃疡(29.0%)和肝功能损害(16.1%)是本研究中SRL常见的不良反应.严重不良事件共13人次,包括脑出血死亡2例、感染死亡3例和需要住院治疗的肺部和泌尿道感染共8人次.结论 CNI转换为SRL对部分CAN患者有效,在基线肌酐水平低于3 mg/L的患者尤其明显;但SRL的应用必需注意高脂血症和白细胞减少等不良反应及其相关的脑血管意外和感染.
作者：王长希；陈思阳；陈立中；刘龙山；费继光；邓素雄；邱江；李军；郑克立；吴培根；纪玉莲；朱兰英 刊期： 2007年第12期
目的 探讨光动力作用(PDT)对体外培养的人食管癌细胞Eca-109的杀伤效应,初步揭示影响Eca-109细胞光动力疗法杀伤效应的主要影响因素.方法 以两种光敏剂血卟啉衍生物(HpD)和光敏素(Photofrin)不同浓度于特定光照剂量(15 J/cm2)下和不同浓度的HpD在三种不同光照能量密度(10 J/cm2,30 J/cm2,50 J/cm2)下作用于食管癌Eca-109细胞,光源采用DIOMED 630 PDT系统,24 h后通过MTT法检测细胞生存率,并应用荧光分光光度计RT-5000检测不同浓度HpD作用于Eca-109细胞4 h后胞内光敏剂荧光值.结果 两种光敏剂不同浓度间细胞生存率均有明显差异,三种不同光照能量密度下不同HpD浓度细胞生存率间亦存在明显差异(P＜0.05).同一浓度不同光照能量密度的细胞生存率间,前4个低浓度生存率间未见明显差异(P＞0.05),后4个高浓度生存率间则差异有统计学意义(P＜0.05).根据荧光分光光度计RT-5000测得的胞内荧光值及标准曲线取得胞内光敏剂浓度,并与孵育浓度进行回归分析,得相关系数r=0.997,即胞内光敏剂浓度与孵育浓度呈正相关.结论 特定光源下,光照能量密度、光敏剂的种类及其光敏剂的孵育浓度是影响Eca-109 PDT效应的主要因素.
作者：陈晓华；罗荣城；李黎波；丁雪梅；吕成伟；周小平；严晓 刊期： 2007年第12期
目的 探讨显微内窥镜椎间盘切除术(MED)结合MED专用高速电动磨钻治疗腰椎间盘突出并侧隐窝狭窄症的方法及效果.方法 2006年3月～2007年3月间应用MED+MED专用高速电动磨钻治疗腰椎间盘突出合并侧隐窝狭窄症患者28例,术前均行X线腰椎照片,腰椎管造影及CTM检查.结果 和结论全部病例获得随访,随访时间3～13个月,平均6.5个月.根据Nakai分级,优20例,良7例,可1例,优良率为96.4%,近期疗效满意.
作者：李俊；孟志斌；付昆 刊期： 2007年第12期
目的 探讨不同胎龄新生儿免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)基因重排情况.方法 排除宫内感染的新生儿,其中胎龄27周4例,28～32周9例、33～36周12例、37～42周13例,提取其外周血RNA、进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增其IgVH基因、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色.结果 各个胎龄VH1～VH7各家族均有多个重排条带表达,同一个VH家族重排基因的平均中分子量在各个胎龄组间差异无显著性.结论 27～42周新生儿IgVH基因VH1～VH7家族重排均具有多样性;对同一个VH家族来说,28～42周各胎龄组IgVH基因重排无显著性差异.
作者：毛晓健；肖昕；熊爱华；钱新华 刊期： 2007年第12期
目的 探讨野生云芝多糖水溶性新组分CVP-B对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的RAW264.7巨噬细胞糖胺聚糖(GAG)表达及细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的作用.方法 用超速离心法分离巨噬细胞膜,用1,9-二甲基亚甲基兰法测定CVP-B对AngⅡ诱导RAW264.7巨噬细胞膜GAG表达的影响;同时应用荧光分光光度法测定CVP-B对AngⅡ诱导RAW264.7巨噬细胞内GSH变化的影响.结果 AngⅡ(1 μmol/L)刺激RAW264.7细胞,细胞膜GAG含量升高115%;随着CVP-B浓度升高(1,10,50μg/ml),AngⅡ(1 μmol/L)诱导的细胞膜GAG分别降低13%、43%(P＜0.01)及52%(P＜0.01).同时,AngⅡ(1 μmol/L)刺激RAW264.7细胞,细胞内GSH活性降低69%(P＜0.01);随着CVP-B浓度升高(1,10,50μg/ml),AngⅡ(1μmol/L)诱导的GSH活性分别升高11%、104%(P＜0.01)及168%(P＜0.01).结论 CVP-B能明显抑制AngⅡ氧化应激诱导的RAW264.7巨噬细胞膜GAG表达.
作者：娄宁；马刚；汪道峰；朱志蔚；苏全冠；方翼 刊期： 2007年第12期
目的 探讨不同剂量氯胺酮对内毒素(LPS)诱导大鼠肺损伤的影响和作用机理.方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为4组:对照组,LPS组(5 mg/kg),低剂量氯胺酮治疗组(5 mg/kg),高剂量氯胺酮治疗组(10 mg/kg),每组12只.建立内毒素诱导的大鼠急性肺损伤模型,于注射LPS后4 h处死大鼠,测肺湿/干重比,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞计数比、蛋白浓度,测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、NO水平,RT-PCR测肺组织中iNOS mRNA表达,Western-blot测肺组织中NF-κB蛋白表达.结果 LPS组大鼠肺湿/干重比、BALF中性粒细胞计数比、蛋白浓度均明显增加(P＜0.01),肺组织中TNF-α、IL-8、NO水平显著性升高(P＜0.01),同时肺组织中iNOS mRNA和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达均增加.而氯胺酮治疗组的各项指标均较LPS组减轻,大剂量组作用更明显.结论 氯胺酮通过抑制NF-κB表达,减少炎症性细胞因子的产生,从而对内毒素(LPS)诱导的大鼠肺损伤有一定保护作用.
作者：王旭东；卢雅立；赖仁纯；李艳萍；黄婉；徐湄 刊期： 2007年第12期
目的 探讨皮肤软组织扩张术修复大面积头皮软组织缺损的手术方法和治疗效果.方法 采用一期置入扩张器行皮肤扩张术,注水充分扩张后,二期合理设计扩张皮瓣转移修复大面积头皮缺损的方法,治疗大面积头皮缺损23例,其中伴有颅骨缺损5例.各种原因引起头皮缺损范围8 cm×6 cm～20 cm×18 cm,颅骨缺损范围4 cm×5 cm～11 cm×9 cm.根据头皮缺损位置、形状置入1～3个扩张器行皮肤扩张,注射壶内置,注水扩张时间5～12周,扩张皮瓣的范围8 cm×8cm～23 cm×20 cm.5例伴有颅骨缺损病例在扩张皮瓣转移修复术时清除失活或浮动的骨碎片3例,咬除颅骨缺损周边患颅骨骨髓炎病骨2例,3～6月后行颅骨修补术.结果 23例大面积头皮软组织缺损均完全修复.5例伴有颅骨缺损病例后期行颅骨修补术成功,无感染,皮瓣坏死等并发症发生.本组出现并发症4例:皮瓣远段表皮坏死2例,经换药治疗后延期愈合;扩张器外露1例,取出扩张器,另一头皮切口再置入,头皮扩张成功;切口裂开1例,抽出扩张器已注入的水,分层严密缝合头皮后消失.术后随访6月～1年头发生长良好,疤痕隐蔽,外观满意.结论 皮肤软组织扩张术是一种修复大面积头皮软组织缺损的理想的手术方法,治疗效果满意.对伴有颅骨缺损病例在头皮软组织缺损修复后再行颅骨修补术成功率高.
作者：刘胜初；张毅；黄建斌；张剑伟 刊期： 2007年第12期
目的 研究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在骨肉瘤发生、发展中的作用,构建SAOS-2细胞cDNA文库,寻找与BMP-2相关作用蛋白.方法 从骨肉瘤细胞系SAOS-2中提取总RNA,进而分离poly(A)+RNA,用poly(A)+RNA进行反转录并以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(dT)为引物进行PCR扩增,得到两端具有同源臂的PCR片段,以此同源臂为基础在酵母中实现同源重组.通过文库片段,线形化的pGADT7-Rec和诱饵质粒pGBKT7/HA-BMP-2共转化酵母AH109菌株在文库构建的同时进行与BMP-2相互作用蛋白的筛选;或先将文库片段,线形化的pGADT7-Rec转化AH109,再利用AH109和Y187两种酵母菌株的接合生殖进行筛选.后用Far-Western blotting法进一步从体外论证BMP-2相互作用蛋白.结果 构建了具有基因多样性和库容量足够大的骨肉瘤cDNA文库,双链cDNA片段的长度大小范围为250～5000 bp.共转化的效率为4.3×105,重组效率为1.9×106,筛选的克隆数为4.3×105.接合法筛选时的接合效率为32%,筛选的克隆数为1.0×106.筛选到四个与BMP-2相互作用的阳性克隆.结论 此文库的多样性和库容量均符合筛选需求.可用于骨肉瘤相关基因的进一步筛选.
作者：邓少林；权毅；潘显明；屈波 刊期： 2007年第12期
目的 分析大肠癌发生过程中p53基因突变的作用,评估外周血p53基因突变分析作为大肠癌高危对象筛查指标的实际应用价值.方法 用LDR-PCR技术对100例大肠癌家系成员和100例健康人(对照组)的外周血p53基因第5-8外显子进行单核苷酸多态性(SNP)检测.结果 大肠癌家系成员和对照组的外周血p53基因的突变率为分别为24%和0,差异有显著性(P＜0.05).结论 p53基因突变在大肠癌的发生过程中起重要作用,外周血p53基因SNP突变分析可望成为大肠癌高危对象的早期诊断手段.
作者：刘清；赖卓胜；王伟；张燕；周淼 刊期： 2007年第12期
目的 探讨大剂量5-FU致肠黏膜严重损伤时肠上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及其意义.方法 成年C57BL/6J小鼠40只,分为对照组(n=8)和实验组(n=32).对照组给予腹腔注射PBS,实验组给予腹腔注射大剂量5-FU(150 mg/kg.d,连续五d),分别于处理后第1、3、5天,剖杀小鼠取小肠,常规HE染色,免疫组化检测PCNA的表达.结果 与对照组比较,腹腔注射大剂量5-FU后,小鼠肠黏膜遭受严重破坏,黏膜萎缩,绒毛、隐窝结构消失;免疫组化结果显示PCNA表达增加,PCNA指数显著增高(P＜0.01).结论 腹腔注射大剂量5-FU后,肠黏膜细胞中表达PCNA的肠上皮细胞比例增加,可能与肠黏膜损伤后修复有密切的关系.
作者：罗育其；吴承堂；闻英；廖康雄；张军花 刊期： 2007年第12期
目的 探讨短期胰岛素泵治疗对初诊2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的影响及其氧化应激机制.方法 应用胰岛素泵治疗初诊2型糖尿病患者2周,分析比较治疗前后空腹血糖、餐后2 h血糖、胰岛素分泌指数(Homaβ)、胰岛素抵抗指数(HomaIR)、血MDA和SOD的变化.结果 短期胰岛素泵治疗后,空腹血糖、餐后2 h血糖均较治疗前明显下降(P＜0.01);Homaβ较治疗前明显升高(P＜0.01),而HomaIR较治疗前显著下降(P＜0.05);血MDA水平较治疗前显著下降(P＜0.01),而血SOD水平较治疗前明显升高(P＜0.01).结论 短期胰岛素泵强化治疗可显著改善初诊2型糖尿病患者胰岛β细胞功能,可能是由于降低氧化应激对胰岛β细胞功能的损害.
作者：赵庆斌；王惠芳；孙超峰；马爱群；崔长琮 刊期： 2007年第12期
目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对脑缺血损伤的神经保护作用和机制.方法 SD大鼠侧脑室内注射VIP,通过管腔内线栓技术闭塞右侧大脑中动脉诱导建立暂时性局部脑缺血模型.采用TTC染色测定大鼠脑梗死体积;免疫组织化学染色观察S100β表达;双抗夹心ELISA检测血清S100β的含量.结果 VIP注射后大鼠脑梗死体积较对照组明显缩小,减少约32.3%(P＜0.05);S100β阳性细胞体积缩小,数目减少(P＜0.05);血清S100β含量也明显降低(P＜0.05).结论 VIP脑内注射可明显减小脑缺血后梗死体积,具有神经保护作用.VIP可以抑制S100β的过度表达,这可能是VIP的另一神经保护机制.
作者：杨杰；赵朝华；钱亦华；胡晓丹；李明；宗长宏 刊期： 2007年第12期
目的 探讨低氧预适应减轻大鼠缺血-再灌注性脑损伤中学习记忆能力及HSP-70、存活素蛋白表达的变化.方法 采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),将48只大鼠随机分为3组6个亚组:假手术组、缺血再灌注组(I/R)、低氧预适应组(HP+I/R),应用免疫组织化学法研究脑组织细胞凋亡相关蛋白存活素和应激蛋白HSP-70的表达情况;并通过Y-电迷宫测试缺血再灌注24 h后大鼠学习、记忆能力.结果 高倍视野下存活素和HSP-70蛋白阳性细胞数比较,HP+I/R组与I/R组及假手术组间差异具有统计学意义(P＜0.05).缺血3 h再灌注24 h后,Y-电迷宫测试大鼠学习记忆能力,HP+I/R组优于I/R组(P＜0.05).结论 低氧预适应可减轻局灶性缺血再灌注脑损伤,提高动物学习记忆能力和损伤后神经功能恢复;上调神经细胞中存活素、HSP-70蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一.
作者：卢娜；李晓娟；李成长；李东亮；崔鹏飞；侯宇宁；王寅琳 刊期： 2007年第12期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
