学术投稿

人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

杨玉琮;李旭;陈葳

关键词:膀胱癌, 表型, 基因, 抑制性消减杂交
摘要:目的筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因.方法以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cDNA文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片段,测序并与Genbank比对,Northern blotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达.结果建立了两个消减文库,分别含有168和206个白色克隆,白色克隆含有约200~700 bp的插入片段,对这些克隆进行筛选,获得35个差异表达基因片段,其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因,另外19个为未知功能基因,1个为新EST片段,注册Genbank(注册号为DR008207).结论抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段;kratin 7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达,与细胞形态的表型差异有关;DDH等代谢基因的不同,与细胞的药物敏感性差异相关;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 心肌型脂肪酸结合蛋白早期诊断急性冠脉综合征

    目的探讨心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)在病人出现急性胸痛症状早期区分诊断急性冠脉综合征(ACS)患者与正常人的效果.方法人为纳入正常人、急性心肌梗死(AMI)确诊病人比例2:1以及正常人、不稳定心绞痛(UAP)确诊病人比例2:1的小样本人群.采用双抗体夹心ELISA法对40例正常人、19例AMI患者以及20例UAP患者血清H-FABP浓度进行定量.分别绘制H-FABP在正常人、AMI患者组成的人群以及正常人、UAP患者组成的人群中用于诊断AMI和UAP者的特征曲线(ROC曲线)并比较曲线下面积(AUC)与0.5的大小,0.5被认为是确定一项指标是否具有任何诊断意义的AUC临界值.结果H-FABP浓度定量正常人组为(1.29±0.64)ng/ml、AMI组为(24.45±32.40)ng/ml、UAP组为(1.95±3.11)ng/ml,依此绘制出的ROC曲线其AUC分别为AUC-AMI:0.978(95%CI:0.948~1.000),AUCUAP:0.503(95%CI:0.334~0.671).前者与0.5相比具有显著差异而后者没有.结论H-FABP具备在急性胸痛症状出现早期区分AMI与正常人的能力,但不具备早期区分UAP与正常人的能力.H-FABP定量检测可用于AMI早期诊断.

    作者:张鹏;王前;郑磊;曾方银;裘宇容 刊期: 2006年第03期

  • L4、5神经前支和腰骶干与骶髂关节关系的三维重建

    目的重建L4、L5神经前支和腰骶干以及与骨盆的三维图像,使之得以直观、形象和生动地体现.方法福尔马林灌注固定的成年男性尸体标本1具.显露L4、L5神经前支、腰骶干和骶髂关节前方,将钛粉和粘合剂的混合物均匀涂抹在L4、L5神经前支、腰骶干、股神经神经以及闭孔主干表面.神经表面涂抹的混合物固化变干后,在螺旋CT下行二维断层扫描,层厚3mm,获取159张连续的二维CT断层图像.将获取的二维图像数据在个人电脑上采用3D-DOCTOR软件进行三维重建.结果重建的三维图像,可以直观形象生动的体现神经与骨盆的空间位置关系,并可按各种方向任意旋转演示.结论三维重建图像较好地描述了神经与骨盆的相关关系,同时还可应用于临床教学.

    作者:张景僚;顾立强;王龙江;谢颍涛 刊期: 2006年第03期

  • Survivin siRNA协同5-FU抑制MCF-7细胞的增殖

    目的研究以survivin为靶标的小干扰RNA(siRNA)与化疗药5-FU联合应用抑制MCF-7细胞增殖的作用.方法利用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA并筛选出一条RNA干扰survivin基因的靶序列.以脂质体为载体,将survivin siRNA转染至人乳腺癌MCF-7细胞中,用四氮唑盐(MTT)法染色并计算siRNA联用5-FU对MCF-7细胞的抑制率,用SAS统计软件及金正均Q值法进行统计分析.结果单用5-FU处理细胞,其IC50为4.42 μg/ml,而加入5 nmol/L siRNA后,其IC50降为1.18 μg/ml,siRNA与5-FU联用对MCF-7细胞的抑制作用较单用5-FU明显增强(F=26.74,P<0.01);Q值分析表明survivin siRNA与中低浓度的5-FU联用,有较好的协同作用(Q≥1.15).结论survivinsiRNA可显著增强5-FU对MCF-7细胞增殖的抑制,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,克服耐药性的产生.

    作者:张淑群;张淑慧;薛兴欢;王西京;姜建涛 刊期: 2006年第03期

  • 阻断PLC-γ1通路对TNF-α抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡的影响

    目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用.方法应用PLC-γ1的特异性抑制剂U73122抑制SWO胶质瘤细胞PLC-γ1活性,用MTT法观察在阻断PLC-γ1通路前后,TNF-α对SwO胶质瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测TNF-α诱导SWO胶质瘤细胞凋亡的情况;Western免疫印记法检测TNF-α是否激活caspase-3以及抑凋亡蛋白bcl-2表达的情况.结果抑制PLC-γ1活性后,SWO胶质瘤细胞对低浓度TNF-α的敏感性显著增加.结论阻断PLC-γ1通路本身虽不能直接启动凋亡,但却能增加SWO胶质瘤细胞对某些调亡因素(如TNF-α)的敏感性,其分子机制之一可能是下调抑凋亡基因bcl-2的表达.

    作者:林骏;杨进城;谭丽;罗深秋 刊期: 2006年第03期

  • 家族性肌萎缩侧索硬化症转基因鼠的繁殖和鉴定

    目的建立家族性肌萎缩侧索硬化症(FALS)转基因模型鼠的繁育方法,并对其子代鼠进行基因鉴定.方法(1)以6只B6SJL SOD1G93A/+半合子雄鼠与6只B6SJLF1/J+/+雌鼠(1:1)交配;(2)由鼠尾血提取基因组DNA,PCR扩增hmSOD1基因的片段,电泳后观察结果;(3)对PCR产物进行纯化测序,并通过BLAST验证.结果6对种鼠交配产鼠仔53只,存活率为98%(52/53);G93AhmSOD1阳性鼠约占44.2%(23/52);PCR扩增产物分别为内对照(IL-2):324bp;Tg(hmSOD1):236 bp;测序证实PCR产物的基因序列和hmSOD1基因片段中的序列一致,并存在G93A突变.结论B6SJL-Tg(SOD1-G93A)1Gur/J雄鼠与B6SJLF1/J雌鼠配种能成功繁育出Tg(hmSOD1)阳性的ALS半合子子代鼠;本实验的PCR法能准确鉴定hmSOD1基因阳性鼠,并证实该转入的基因按近似孟德尔方式遗传,为ALS实验研究奠定了基础.

    作者:黄慧;张成;席静;姚晓黎;邱国光;熊符 刊期: 2006年第03期

  • 茶碱对慢性哮喘和肺功能改善的作用

    目的了解茶碱在慢性哮喘轻症患者临床症状缓解和气道炎症抑制作用的机制.方法选择41例慢性哮喘的第1级及第2级中的轻症患者,口服缓释茶碱每天4~6mg/kg·b.w.,每12h1次,连用16周.对照组15例,未服药治疗.对比评估临床症状,检测晨间大呼气流黄(PEFam)、用力肺活量(FyC)、1秒钟用力呼气容积(FEV1)、1秒钟用力呼气容积降低20%所需药物累积量(PD20),静脉血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的变化.结果经茶碱口服治疗后,临床症状评分、PD20、PEFam、FEV1,CD3+、CD4+与对照组比较差异有显著意义.结论慢性哮喘轻症患者小剂量茶碱口服治疗16周后,哮喘患者临床症状有明显改善,气道高反应性与对照组比较得到改善(P<0.01).

    作者:黄少丹;阳隽;张世叶;田利奇;潘巧红 刊期: 2006年第03期

  • 5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学治疗胃癌的实验研究

    目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的光动力学对人胃癌细胞MGC-803的治疗作用.方法将不同浓度的5-ALA加入细胞培养基中,随之给予相同剂量的激光辐射;之后用固定浓度的5-ALA处理细胞,并给予不同剂量的激光辐射.MTT法测定细胞生存率.结果在相同的辐射剂量下,经0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L的5-ALA处理的细胞生存率分别为(70.07±5.37)%、(50.04±4.99)%、(34.53±5.30)%、(26.89±4.44)%和23.90%±2.80%,除2.0和4.0 mmol/L5-ALA两组间外,其余各组间具有显著性差异(F=266.39,P<0.001).在相同的5-ALA的浓度下,辐射剂量为6.25、12.5、25.0、50.0、100 J/cm2的细胞生存率分别为(83.50±10.43)%、(67.96±9.23)%、(33.80±8.26)%、(23.31±5.98)%和(14.96±3.50)%,各组之间有显著性差异(F=226.31,P<0.0001).而单用5-ALA处理细胞,对应于其浓度为0.25、0.5、1.0、2.0,和4.0 mmol/L时的细胞生存率分别为(96.46±6.72)%、(97.48±5.27)%、(98.33±6.67)%、(99.47±6.97)%和(95.66±7.72)%,各浓度之间无显著性差异(F=0.79,P=0.5383).单纯激光辐射,其剂量为6.25、12.5、25.0、50.0、100.0 J/cm2时的细胞生存率也无显著性差异(F=0.61,P=0.6551).结论在较低的浓度范围内,5-ALA介导的光动力学治疗对人胃癌MGC-803细胞的杀伤作用随着5-ALA浓度的增加而增加,在较高浓度时则存在饱和现象,杀伤力与光剂量成正比.单纯激光不能产生光动力效应,5-ALA本身对细胞无毒性作用.5-ALA介导的光动力学治疗是很有希望的胃癌治疗方法.

    作者:黄宗海;周广军;俞金龙;厉周;丁涟沭;徐如祥;姜晓丹 刊期: 2006年第03期

  • 医用尼龙线和改良软尿道扩张器在防治后尿道狭窄的应用

    目的总结尿道内留置尼龙线引导下行改良软尿道扩张器尿道扩张的临床经验,提高后尿道狭窄的防治水平.方法创伤性后尿道狭窄男性患者38例,年龄4~45岁,平均25岁.后尿道狭窄长度0.8~4.5 cm,平均2.2 cm.均行内窥镜术或开放手术治疗,术中尿道内留置尼龙线.留置尿管2~4周,拔除尿管后即行尿道内尼龙线引导下改良软尿道扩张器的尿道扩张.结果38例患者经平均3个月、长9个月的尿道扩张,排尿通畅后拔除尼龙线.随访6个月~5年,排尿正常,无尿失禁.结论尿道内留置尼龙线引导下用改良软尿道扩张器行尿道扩张术治疗尿道狭窄效果显著.与金属尿道探子下行尿道扩张相比,具有取材方便,患者易于配合,减少尿道损伤,避免假道形成等特点,减少了因尿道狭窄复发而多次手术的次数,对男性儿童及复杂性后尿道狭窄患者尤为适宜.为创伤性后尿道狭窄的预防和治疗开辟了新方法.

    作者:齐桓;付晓幼 刊期: 2006年第03期

  • S-生物丙烯菊酯对人淋巴细胞的影响

    目的运用基因芯片技术研究S-生物丙烯菊酯对正常人淋巴细胞的作用.方法取正常人外周血淋巴细胞,加入S-生物丙烯菊酯刺激,分别进行光镜、流式细胞仪、电镜、DNA梯度和基因芯片检测,研究正常淋巴细胞在S-生物丙烯菊酯刺激后的变化.结果正常淋巴细胞在S-生物丙烯菊酯刺激后发生凋亡,并有346个基因表达发生改变.结论S-生物丙烯菊酯可导致正常淋巴细胞凋亡和基因表达谱改变.

    作者:刘玥;梁丽燕;马文丽;郑文岭 刊期: 2006年第03期

  • 兔VX2种植型肝癌模型动态磁共振张量成像的量化研究

    目的探讨对兔VX2种植型肝癌模型的成瘤过程进行动态磁共振张量成像(DTI)量化研究的可行性及价值.方法在肿瘤植入后第14、18、22、26天分别对4组共16只新西兰大白兔VX2种植型肝癌模型和4组共4只正常新西兰大白兔进行磁共振成像及DTI;动态量化分析平均弥散系数(ADC)、指数弥散系数(eADC)的变化规律并与病理结果对照.结果兔VX2种植型肝癌模型的ADC呈先递增后递减趋势;eADC呈先递减后递增趋势;与对照组间存在显著性差异;病理结果的多项分析中,瘤内凝固性坏死和纤维增生呈明显递增趋势.结论DTI的量化指标(ADC、eADC)能够动态观测兔VX2种植型肝癌模型的部分生长特性;为DTI对肝脏病变的临床应用提供一定的理论指导.

    作者:徐绍斌;全显跃;孙希杰 刊期: 2006年第03期

  • 人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

    目的筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因.方法以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cDNA文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片段,测序并与Genbank比对,Northern blotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达.结果建立了两个消减文库,分别含有168和206个白色克隆,白色克隆含有约200~700 bp的插入片段,对这些克隆进行筛选,获得35个差异表达基因片段,其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因,另外19个为未知功能基因,1个为新EST片段,注册Genbank(注册号为DR008207).结论抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段;kratin 7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达,与细胞形态的表型差异有关;DDH等代谢基因的不同,与细胞的药物敏感性差异相关;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础.

    作者:杨玉琮;李旭;陈葳 刊期: 2006年第03期

  • 己酮可可碱对人肝癌细胞株Hep3b的放射增敏作用

    目的观察己酮可可碱(PTX)对人肝癌细胞株Hep3b的放射增敏作用.方法以Hep3b人肝癌细胞株为研究对象,应用MTT法检测PTX的药物毒性;应用克隆形成实验(colony forming assay)观察PTX对Hep3b细胞株的放射敏感性的影响;流式细胞仪(FCM)技术测定照射后Hep3b细胞株细胞周期的再分布并观察PTX能否去除放射引起的细胞周期阻滞.结果不同浓度的PTX作用于人肝癌Hep3b细胞株48 h后,其细胞毒性呈剂量依赖性,适浓度为2 mmol/L.PTX能明显降低放射后Hep3b细胞的克隆形成率,其放射增敏比为2.68±0.24(P>0.05).FCM实验结果显示,照射明显导致Hep3b细胞株G2期阻滞,Hep3b细胞在照射后20 h G2/M期比例分别为86.8%和14.8%(P<0.05),PTX能够去除放射引起的Hep3b细胞G2期阻滞.结论PTX对Hep3b细胞株有放射增敏作用,其作用机制可能与PTX去除放射引起的G2期阻滞有关.

    作者:吴德华;刘莉;陈龙华 刊期: 2006年第03期

  • 人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体的制备及3株人冠状病毒N蛋白的抗原相关性观察

    目的通过制备和鉴定人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),观察3株人冠状病毒的N蛋白抗原相关性.方法分别用基因重组SARS-CoV、229E和OC43N蛋白免疫BALB/c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光进行筛选和鉴定,同时用mAb分析3株人冠状病毒N蛋白之间的免疫交叉反应.结果获得多株抗SARS-CoV、229E和OC43 N蛋白mAb杂交瘤细胞株,ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光结果均显示,所有的mAb仅与各自病毒的N蛋白特异性反应,而在3株人冠状病毒N蛋白抗原之间不产生免疫交叉反应.结论获得的特异性抗人冠状病毒N蛋白mAb为进一步研究3株人冠状病毒的抗原决定簇相关性奠定了基础.

    作者:丘立文;王压娣;廖志勇;温坤;车小燕 刊期: 2006年第03期

  • 新生儿皮肤T细胞淋巴瘤1例报告

    1临床资料患者男性,新生儿,34 d,自出生后即发现右耳后、右颈窝、左上腹部、左大腿外侧及右手食指末端等处有多个小米粒大小的皮肤结节,红色,无明显隆起.随后各处结节均有不同程度的增大,但以颈部结节增大较明显,约米粒至黄豆大小,表面有糜烂.新生儿睡眠欠佳,无发热,饮食无明显影响.

    作者:韩慧霞;朱梅刚 刊期: 2006年第03期

  • 利用小干扰RNA表达框鉴定小鼠骨髓树突状细胞有效沉默RelB基因的实验研究

    目的构建靶向小鼠RelB基因的小干扰RNA(siRNA)表达框,鉴定针对小鼠骨髓树突状细胞(DC)的RelB基因有效的siRNA序列.方法利用PCR方法构建3个不同位点的表达框,R1/siRNA、R2/siRNA和R3/siRNA分别位于1027、302和1121位点.利用阳离子脂质体AdvantGene转染小鼠骨髓DC,转染24h后,脂多糖(LPS)刺激DC,用RT-PCR和免疫荧光方法检测DC RelB基因表达的变化.结果经LPS刺激后DC成熟,RelB基因表达显著高于未成熟DC;R1/siRNA和R3/siRNA转染DC后,LPS刺激仍然可以增强RelB基因表达,而R2/siRNA转染DC后,LPS刺激不能增加RelB基因表达.结论R2/siRNA可有效抑制RelB基因表达,有望用于构建新的耐受性DC应用于临床免疫耐受的诱导.

    作者:郑磊;包杰;王前;杨红玲;裘宇容 刊期: 2006年第03期

  • 人巨细胞病毒诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡

    目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染ECV304血管内皮样细胞的致病机制.方法常规方法传代细胞和接种病毒.以PCR法和间接免疫荧光法检测病毒即刻早期基因(IE gene)及其蛋白表达;相差显微镜及电子显微镜观察病毒感染后细胞和细胞器形态变化;DNA梯度法和流式细胞术检测细胞凋亡.结果病毒感染后72 h开始出现胞体变圆、缩小、脱壁,胞质内颗粒增多,细胞边缘模糊不清的特征,可明显检测出病毒特异IE gene及其蛋白表达;电镜结果显示病毒感染96 h后,胞质内明显空泡化,细胞膜微绒毛减少,核染色质浓集、边缘化,线粒体出现溶酶体化、空泡化和自噬现象,呈早期凋亡特征;DNA梯度电泳结果显示感染细胞DNA片段化特征的条带;流式细胞仪检测发现感染4 d和6 d时,细胞调亡率分别为4.1%和45.7%.结论巨细胞病毒在体外细胞培养中可诱导ECV304血管内皮样细胞的凋亡.

    作者:张亚莉;马文丽;莫小阳;赵海全;柯昌文;郑焕英;郑文岭 刊期: 2006年第03期

  • 131I-Herceptin的制备、质控及在新西兰兔的生物分布

    目的探讨131I-Herceptin的免疫活性、生物分布及代谢规律,为乳腺癌的131I-Herceptin放射免疫治疗提供实验依据.方法①采用Iodogen法对Herceptin进行131I标记,以HPLC法测定放射化学纯度(RCP).以与BT-474细胞结合率(BR)鉴定131I-Herceptin的免疫活性.②按74 MBq/kg·b.w.对3只新西兰兔注射131I-Herceptin,注射后3 h及第1、3、5天进行透射CT显像.以肌肉为参照,计算各脏器放射性计数比值(O/M).③第5天处死动物,取血、心、肺、肝、肾等脏器,计算每克组织摄取分数(ID%/g),对结果进行统计分析.结果131I-Herceptin的标记率为93%,RCP为95%,在BT-474细胞结合率为(36.9±4.7)%.注射131I-Herceptin后不同时间均以心脏、肺、肝浓聚显著,肌肉、肠影像稀疏.随时间延迟,心影逐渐稀疏,肝脏影像浓聚.注射后3 h,心脏O/M值显著高于肺及肝、肾、肠等脏器.随时间延迟,心脏O/M值于注射后1 d显著降低(t=10.817,P<0.001),第3、5天亦显著降低,肝脏O/M值在第1、3、5天均比注射后3 h显著下降.每克组织的摄取分数以血液高,为(11.3 ID/g)%、肝为(2.8 ID/g)%、心肌仅为(1.8 ID/g)%.结论131I-Herceptin的免疫活性高.机体分布以血液、肝、肾为主,心肌摄取量低.

    作者:范义湘;罗荣城;方永鑫;严晓 刊期: 2006年第03期

  • 医学三维动态超声实时体绘制

    三维动态超声具有非常广泛的发展前景和临床应用.但是三维动态超声的数据结构不属于三维规则数据场,所以不能直接在微机上采用三维纹理加速算法实现实时体绘制.本文首先介绍了基于微机平台的针对三维规则数据场三维纹理体绘制加速算法.通过现代微机显卡结构的分析讨论,本文提出了利用现代微机显卡中的顶点渲染器编程实现三维动态扇扫数据场到三维规则数据场的快速变换,然后利用显卡中的三维纹理快速运算功能,从而在普通微机平台上实现了三维动态超声的实时体绘制.本方法具有很广泛的应用价值.

    作者:郝立巍;陈武凡 刊期: 2006年第03期

  • 吻合器痔上直肠黏膜环切除术前两种肠道准备方法的比较

    目的探讨吻合器痔上直肠黏膜环切除手术前两种肠道准备方法的效果.方法将100例病人随机分为甲组和乙组,甲组采用生理盐水进行清洁灌肠;乙组采用口服蓖麻油行肠道准备,对比肠道清洁度及不良反应等.结果和结论两者在肠道清洁度上无显著性差异,均是有效的灌肠准备方法.口服蓖麻油对患者造成的不良反应低于生理盐水清洁灌肠,而且经济,患者容易接受.

    作者:张海平;肖梅;何丽芳;黄永红 刊期: 2006年第03期

  • 重组人表皮生长因子促进宫颈糜烂愈合

    目的观察应用重组人表皮生长因子(rhEGF)促进宫颈糜烂愈合的情况.方法对48例宫颈患者用rhEGF治疗,30例用自凝刀(射频治疗仪)治疗,观查两组糜烂面愈合情况、愈合时间、阴道流液流血及持续时间.结果rhEGF组创面愈合时间较对照组明显缩短,且阴道流液量少、持续时间短、无阴道流血.结论重组人表皮生长因子可明显促进宫颈糜烂愈合.

    作者:胡彩华;许红雁;张德君;黄志锋;祝文峰;范舒舒;徐静;何剑芬;彭金秀;刘春梅 刊期: 2006年第03期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学