学术投稿

实时荧光聚合酶链反应检测HBV基因型B~D方法的建立

沈建坤;周荣;王战会;白培盛;马世武;张克;侯金林

关键词:肝炎病毒, 乙型, 基因型, 实时荧光聚合酶链反应
摘要:目的建立实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型B~D方法并验证其准确性.方法比较GenBank中已发表的明确分型的143株HBV全序列,设计特异的组合引物探针,应用实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法对兰州地区128例慢性乙型肝炎患者血清标本进行基因型B、C、D检测,并随机对检测的基因型各3株标本进行S基因测序验证.结果 128例标本中B型检出率为20.3%(26/128),C型71.9%(92/128),D型7.8%(10/128);18株HBV克隆标本S基因测序结果与本分型法完全一致.结论实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型,适宜用于HBV基因型的大规模临床和流行病学调查.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 关节镜在膝关节急性关节软骨损伤中的诊断价值

    目的探讨关节镜在膝关节急性软骨损伤中的临床诊断价值.方法 27例(平均年龄29.4岁)膝关节急性损伤关节积血患者在1~5 d内行膝关节镜手术.结果膝关节镜检查发现7例髌骨软骨骨折、3例股骨髁软骨骨折、6例胫骨平台软骨骨折.结论关节镜是诊断膝关节急性软骨损伤的一种有价值的工具.

    作者:张毅;赵新建;熊想莲;杨林;黄星球 刊期: 2005年第06期

  • 陈旧性旋转及垂直不稳定骨盆骨折的手术治疗

    目的探讨陈旧性旋转及垂直不稳定骨盆骨折手术治疗的效果.方法本组9例采用骶髂关节前后联合入路切开复位手术治疗.结果随访6~30月,骨盆骨折均获良好复位.临床功能恢复满意,9例患者均下地行走,8例无腰腿痛、患肢缩短等并发症.结论骶髂关节前后联合入路手术可有效复位固定旋转及垂直不稳定骨盆骨折,矫正畸形,重建骨盆环的稳定性.

    作者:赵明杰;刘宁;林宏生;徐荣明 刊期: 2005年第06期

  • 血清S100蛋白与星形细胞瘤放射性脑损伤的关系

    目的研究血清S100蛋白在诊断星形细胞瘤放射性脑损伤中的作用.方法采用酶联免疫吸附试验检测86例星形细胞瘤术后患者放射治疗前后血清S100蛋白水平.结果放射治疗前、治疗疗程中期及治疗疗程结束后血清S100蛋白阳性率分别为0、9.3%(8/86)和19.8%(17/86),治疗前后及治疗组间比较血清S100蛋白阳性率有显著性差异(P<0.05).结论星形细胞瘤放射性脑损伤可导致血清S100蛋白水平升高且与星形细胞瘤治疗疗程和剂量相关,检测血清S100蛋白可作为星形细胞瘤放射性脑损伤诊断较早期指标.

    作者:宋维舒;郭立兵;黄志勇;李俊杰;吴军 刊期: 2005年第06期

  • 外周血干细细移植后GVHD的动态监控可溶性人类白细胞抗原-Ⅰ及临床意义

    目的研究动态监测可溶性人类白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)血清浓度对预测异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的意义.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗夹心法,以W6/32单克隆抗体包被酶标板,加被检血清,再加抗β2m辣根过氧化物酶及底物显色.测定63名中国汉族正常献血员sHLA-Ⅰ含量,并对24例异基因外周血干细胞移植患者移植前及移植后不同时间段血清sHLA-Ⅰ含量进行连续检测.结果6例未发生GVHD和4例仅发生Ⅰ度GVHD移植受者sHLA-Ⅰ水平在移植前后无明显变化(P>0.05);而发生Ⅱ-Ⅳ度GVHD的14例移植患者在发生GVHD前3~7 d,sHLA-Ⅰ浓度就有统计学意义的升高(P<0.05),在GVHD期升高程度更明显,具有显著性差异(P<0.005).经免疫抑制剂冲击治疗至稳定期又降至基础水平.结论动态监控allo-PBSCT患者血清中sHLA-Ⅰ含量对预测外周血干细胞移植后GVHD及治疗效果和预后有重要意义.

    作者:夏荣;邱慧颖;章卫平;曹琼;兰炯采;温宏升;王健民 刊期: 2005年第06期

  • 百赛诺对慢性乙型肝炎患者细胞免疫应答的影响

    目的研究百赛诺治疗慢性乙型肝炎(CHB)对患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清IL-4、IL-10和IFN-γ水平的影响.方法选择30例CHB患者给予百赛诺治疗,分别在治疗前、治疗后1个月和3个月抽取全血,同时选择7例健康人群作为对照组.结果 CHB组PBMC培养上清分泌IL-4水平显著高于对照组[(17.18±7.43)pg/ml vs(8.24±4.16)pg/ml,P<0.05],而IFN-γ水平则显著低于对照组[(36.25±19.92)pg/mlvs(121.68±44.40)pg/ml,P<0.01)];百赛诺治疗后,在第3个月IFN-γ水平较治疗前显著升高[(53.19±7.28)pg/mlvs(36.25±19.92)pg/ml,P<0.05],IL-4水平则较治疗前显著降低[(9.74±7.75)pg/mlvs(17.18±7.43)pg/ml,P<0.01];HBeAg阳性组百赛诺治疗后IL-4水平较治疗前下降,IFNγ水平较治疗前上升,均有统计学意义[(8.74±6.12)pg/mlvs(20.51±9.16)pg/ml,(50.71±30.76)pg/mlvs(26.03±10.48)pg/ml,P<0.05];而HBeAg阴性组各细胞因子水平治疗前后无明显差异(P>0.05).结论百赛诺治疗CHB可提高患者Th1型细胞因子、降低Th2型细胞因子水平,在CHB治疗中有一定调节免疫功能的临床价值.

    作者:施斌斌;彭劼;温帆渊;侯金林 刊期: 2005年第06期

  • 超声诊断脐带绕头的临床价值(附3例报道)

    脐带缠绕为妊娠晚期的多发病,及时准确地作出诊断,可给临床处理提供有效指导,减少胎儿宫内窘迫及死亡率.脐带绕颈发生率较高,而脐带绕头国内文献较少报道.我们回顾已检查诊断的3例脐带绕头,探讨超声对脐带绕头诊断的临床价值.

    作者:陈庆康;田雷容 刊期: 2005年第06期

  • 复方红衣补血口服液与硫酸亚铁治疗小儿缺铁性贫血疗效比较

    目的观察复方红衣补血口服液治疗小儿缺铁性贫血的疗效.方法选择缺铁性贫血患儿100例,随机分为治疗组和对照组(各50例).治疗组服复方红衣补血口服液,3次/d,每次2~3 ml;对照组服硫酸亚铁片,5 mg/kg·d,2次/d,两餐之间服.两组疗程均为4周.结果治疗组贫血症状改善及血红蛋白、血清铁、血清铁蛋白回升均比对照组快(P<0.05).结论复方红衣补血口服液治疗小儿缺铁性贫血疗效理想,耐受性好.

    作者:李玉权;麦露丝;常惠礼;余炳坚;黄之樑 刊期: 2005年第06期

  • 血小板受体特异性微泡造影剂靶向粘附血栓的实验研究

    目的构建能够靶向血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体的特异性脂质微泡,观察其对微血栓、体外人工血栓的粘附效应.方法用RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser)耦联的方法构建靶向微泡,观察其对血小板聚集形成的微血栓的粘附效应.另在体外制作人工血栓模型,在二维超声下观察微泡造影剂对声学信号的影响.结果血小板聚集后加入经构建的靶向微泡,后粘附在血小板微血栓周围;而加入普通微泡的对照孔则未见这种粘附效应.体外血栓模型中,未加微泡的血栓超声图像周围边界模糊,加入靶向微泡后血栓图像边界明显增强.结论血小板受体特异性靶向微泡对血栓有明显的趋附作用,并且能够增强血栓的超声信噪比.对血栓的临床诊断和治疗有潜在的意义.

    作者:区文超;修建成;谢晋国;查道刚;刘俭;郝睿;宾建平;刘伊丽 刊期: 2005年第06期

  • B超下经母腹脐带穿刺术的临床应用

    目的评价PTC穿刺针在B超引导下行脐带穿刺术的安全性及成功率.方法对103例有各种产前诊断指征的孕妇在B超引导下行脐带穿刺术.结果穿刺成功率为98.1%(101/103).发现染色体异常核型5例,宫内巨细胞病毒(CMV)感染2例,重型α-地中海贫血Hb Bart's水肿胎3例.穿刺术后未出现流产、胎死宫内、胎盘早剥、宫内感染等严重并发症.结论 B超引导下经母腹脐带穿刺术是一种成功率高、安全可靠的产前诊断方法.

    作者:李萍;范瑞莲;周沫;杜娟 刊期: 2005年第06期

  • 整合素avβ3单克隆抗体对小鼠子宫内膜异位病灶的抑制作用

    目的研究整合素avβ3单克隆抗体对SCID小鼠子宫内膜异位病灶生长和微血管形成的影响.方法建立人子宫内膜异位症小鼠皮下移植病灶模型.治疗组尾静脉注射整合素avβ3单克隆抗体Lm609(250μg/只),对照组给予相应体积的PBS,1周2次.4周后处死动物,测量病灶,采用免疫组化法检测病灶微血管密度(MVD)及整合素avβ3的表达.结果治疗组与对照组皮下移植病灶质量分别为(0.82±0.09)g和(0.51±0.93)g(P<0.05),病灶组织中MVD则分别为31.2±4.4和14.4±1.8(P<0.05),治疗组病灶受到显著抑制.结论整合素avβ3单克隆抗体通过抑制微血管形成而抑制子宫内膜异位病灶的生长.

    作者:赵军;宗利丽;李亚里 刊期: 2005年第06期

  • 2型糖尿病患者血清血管性血友病因子、血小板活化因子水平与糖尿病肾病的关系

    目的探讨2型糖尿病患者尿微量白蛋白(UALB)、血管性血友病因子(vWF)、血小板活化因子(PAF)变化及临床意义.方法研究对象分5组:糖尿病肾病患者(A组),2型糖尿病无肾病并发症患者(B组)、糖耐量受损者(C组)、糖耐量正常的2型糖尿病患者一级亲属(D组)、无2型糖尿病家族史糖耐量正常受试者(E组),每组30例,分别检测UALB、vWF、PAF水平,并进行统计分析.结果 A组UALB、PAF含量明显高于其他4组(P<0.01),其他4组间UALB、PAF差异无显著性(P>0.05);A组vWF含量与B、C、D组比较差异有显著性(P>0.05).结论2型糖尿病微血管并发症患者存在肾功能损害和血小板活化,两者变化同步,提示其血管损伤与PAF含量升高有关.

    作者:方咏红;张继平;周少雄;郑菊芬;余永卫;晏世刚;范文奎;陈月崧 刊期: 2005年第06期

  • 大骨节病关节软骨细胞凋亡及其相关调控因子的表达

    目的探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达分布的特点.方法收集15例大骨节病儿童和15例正常对照儿童关节软骨.采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶(B-SA)法染色,观察大骨节病儿童和正常对照儿童关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白阳性表达细胞的密度与分布.结果 (1)大骨节病儿童关节软骨中层凋亡阳性细胞数[(33.60±2.71)%]较正常关节软骨[(1.33±0.41)%]显著增多(t=11.59,P<0.01);(2)大骨节病儿童关节软骨表层和中层Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达显著高于正常关节软骨中的表达(t=11.75~18.65,P<0.01);大骨节病儿童关节软骨各层Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性率有显著性差异(F=73.49~114.42,P<0.01),以表层多[分别为(41.93±12.26)%、(45.60±15.78)%、(53.60±16.49)%和(45.47±14.02)%],其次为中层[分别为(14.93±3.50)%、(13.87±4.32)%、(23.27±4.83)%、(21.67±6.82)%].结论大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas、iNos表达较正常人显著增多.

    作者:王世捷;郭雄;左弘;张银刚;许鹏;平智广;张增铁;耿冬 刊期: 2005年第06期

  • 131I-Herceptin对乳腺癌细胞株的体外杀伤效应

    目的研究核素131I标记Herceptin对Her-2表达阳性乳腺癌细胞株的特异性杀伤作用.为放射免疫导向治疗奠定基础.方法应用IODO-GEN方法将131I标记于抗Her-2单克隆抗体Herceptin,用MTT法检测131I-Herceptin对SK-BR-3、MCF-7、A549 3种细胞株体外生长的抑制作用.结果 131I-Herceptin的免疫活性与Herceptin无差异;131I-Herceptin对Her-2表达阳性的肿瘤细胞株的杀伤作用较Herceptin、131I明显增强(P<0.05),对于Her-2表达阴性或弱阳性的肿瘤细胞株无明显杀伤作用.结论 131I-Herceptin可特异性杀伤Her-2表达阳性的肿瘤细胞.

    作者:林菁;罗荣城;李爱民;张军一;吕成伟;严晓 刊期: 2005年第06期

  • 灵芝孢子油对MPTP处理小鼠行为学及黑质区病理变化的影响

    目的研究灵芝孢子油对MPTP帕金森病(PD)小鼠模型行为学及病理改变的影响,探讨灵芝孢子油治疗帕金森病的可能性.方法 C57BL小鼠分为正常对照组、MPTP组、灵芝孢子油+MPTP组.MPTP组皮下注射MPTP(30mg/kg×6 d)及喂食生理盐水,灵芝孢子油+MPTP组在注射MPTP前2 d开始鼻饲灵芝孢子油1.5 g/kg·d,连续8 d.2周后用高效液相色谱法检测小鼠纹状体多巴胺(DA)及其代谢物含量,免疫组织化学法检测SNpc酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,Western blot法对中脑TH蛋白进行半定量测定.结果 (1)爬杆实验中肢体出现刻板抖动行为的小鼠数目比例灵芝孢子油+MPTP组较MPTP组显著减少(12.5%vs 68.7%).(2)DA及其代谢物含量在两组间有差异,灵芝孢子油+MPTP组各项指标均高于MPTP组.(3)灵芝孢子油+MPTP组小鼠在SNpc的TH阳性细胞、中脑TH蛋白含量均较MPTP组明显增多.结论灵芝孢子油能明显改善MPTP小鼠模型行为学,增加纹状体DA及其代谢物含量,减少黑质DA能神经元的损伤,提示灵芝孢子油可能具有减缓PD病变进程的神经保护作用.

    作者:朱蔚文;刘焯霖;徐浩文;褚文政;叶钦勇;谢安木;陈玲;黎锦如 刊期: 2005年第06期

  • 重组腺相关病毒介导内皮抑素的表达及体外活性研究

    目的构建携带人内皮抑素基因的重组腺相关病毒rAAV-hEndo,介导其体外表达并检测其生物活性.方法采用无需包装辅助病毒的双质粒共转染方法制备rAAV-hEndo,测定其滴度及感染效率.免疫荧光染色检测内皮抑素蛋白在体外感染细胞中的表达,并通过MTT法、细胞周期检测及TUNEL法检测细胞凋亡指数,观察其对人脐静脉内皮细胞ECV304的影响.结果所制备的重组腺相关病毒滴度为2×1012vg/ml,感染效率达98%.免疫荧光染色显示内皮抑素蛋白主要表达于细胞胞质.rAAV-hEndo感染细胞培养上清对ECV304细胞72 h增殖抑制率为67.3%.内皮细胞转染内皮抑素基因后细胞周期明显阻滞于G1期,其G1期占(72.5±4.0)%,与对照组(52.1±2.1)%比较有显著差异(P<0.01).TUNEL法检测实验组内皮细胞凋亡指数为(32.6±3.2)%,与对照组(4.2±1.9)%比较有显著差异(P<0.01).结论所制备的重组腺相关病毒rAAV-hEndo能有效介导具有生物活性的内皮抑素表达,为进一步肿瘤抗血管生成基因治疗动物实验奠定了基础.

    作者:李晓华;李湘平;李刚;刘雄 刊期: 2005年第06期

  • 改进的核移植方法完成小鼠卵丘细胞重组胚的早期发育

    目的建立一种快速、简便、有效且损伤小的核移植方法,研究来源于小鼠体细胞重组胚的早期发育.方法用尖锐的去核针在MⅡ期卵母细胞透明带上切开一个25 mm左右的小口,首先将第一极体挑出,再轻轻地挤压和负压吸引卵母细胞,去除包含有MⅡ期染色体-纺锤体复合体的少量细胞质.随后,将直径为10~12 mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核-卵母细胞复合体.用电融合的方法诱导复合体融合,并对重组胚激活.体外培养72 h,对重组胚发育到2细胞、4~8细胞和桑椹胚期等各阶段进行观察和计数.结果完成一个MⅡ期卵母细胞去核的平均时间为15 s;Hoechst 33342染色证明可以完全去除MⅡ期卵母细胞细胞核:去核成功率为95.5%,注核成功率为76.7%,供体核-卵母细胞复合体融合和重组胚原核形成率分别为68.2%和62.2%;重组胚体外培养72 h内发育到2细胞、4~8细胞和桑椹胚期的比率分别为57.5%、39.1%和27.6%;用2个微卫星位点D7Mit22和D4Mit204引物,扩增不同发育阶段重组胚的DNA片段,表明重组胚来源于供体卵丘细胞.结论应用改进的核移植方法,不仅可以有效地去除卵母细胞细胞核,去核成功率高,而且操作简便,去核迅速,对卵母细胞损伤小,是研究小鼠体细胞核移植的一种简便可行的新方法.

    作者:沈新明;乔贵林;江培洲;李欣;黄华;姚开泰 刊期: 2005年第06期

  • 蛋白质中变构通讯结构基础的方法分析与实现

    对变构通讯的理解是研究细胞信号转导的一个基本目标.本文介绍一种基于蛋白质家族序列的统计偶联分析方法,通过计算蛋白质序列中各氨基酸位点之间的统计偶联而获得相互偶联的氨基酸位点,构成变构通讯的结构基础.利用MATLAB语言编程实现了统计偶联分析方法;并首次根据2004年4月Swiss-Prot库中63 395条真核蛋白质序列计算了各氨基酸在所有真核细胞蛋白序列中的频率分布平均值,这一结果与Steve W.Lockless等根据1998年10月Swiss-Prot库蛋白序列计算的结果基本一致.

    作者:谭小丹;卢智勇;苏永春;董爱荣;邓亲恺 刊期: 2005年第06期

  • 类风湿性关节炎患者氧化还原物水平的测定

    目的通过检测类风湿性关节炎(RA)患者体内氧化还原物水平,探讨氧化还原物水平与类风湿性关节炎发生、发展的关系.方法选择83例RA患者,采用高效液相色谱电化学法检测其血浆总抗坏血酸(TAA)、脱氢抗坏血酸/总抗坏血酸(DHAA/TAA)、维生素E、晚期蛋白质氧化产物(AOPP)、血浆丙二醛(MDA)等氧化还原指标;对RA患者血浆AOPP、MDA及高敏C-反应蛋白(hs-CRP)做相关分析,并以30名健康人作为对照进行统计分析.结果 RA患者血浆MDA、AOPP及DHAA/TAA水平显著高于正常人(P<0.05),AOPP增高则极为显著(P<0.01);维生素E与正常人无显著差异(P>0.05).RA患者MDA与hs-CRP明显相关(P<0.01),AOPP与hs-CRP则无相关性(P>0.05).结论 RA患者体内氧化还原水平明显升高,是RA病程发展的重要机制;AOPP、MDA两项指标可反映RA患者体内的高氧化水平.

    作者:蔡文灿;王海;李瑞青;高玲 刊期: 2005年第06期

  • 超声心动图评价以右心室病变为主的心肌病

    目的探讨以右心室病变为主的心肌病的彩色多普勒超声显像特点.方法应用彩色多普勒超声心动图诊断以右心室病变为主的心肌病患者13例.结果 11例患者右心房明显增大,所有患者均有不同程度的三尖瓣关闭不全,1例患者左心室轻度增大.超声心动图观察右心室形态变化,8例以右心室显著增大为主要特点,表现为右心室弥漫性扩大或局限性扩张,右室壁变薄,右室壁普遍性或局限性运动减弱,心尖小梁部和右室流入部肌小梁粗大,回声增强.5例以右室心尖小梁部闭塞为主要特点,表现为右室腔缩小、变形,心尖小梁部明显缩小或完全闭塞,右室流出道正常或扩张,增厚的右室壁回声增强,心包膜厚度正常.结论以右心室病变为主的心肌病超声显像特点为右室扩大、室壁变薄、运动减弱或右室腔缩小、变形,心尖小梁部明显缩小或完全闭塞等两种表现.这些特征对以右心室病变为主的心肌病具有较高的诊断价值.

    作者:赖玉琼;黄新胜;陆堃 刊期: 2005年第06期

  • Sorbalgon藻酸钙敷料应用于鼻窦内窥手术的疗效观察

    目的研究Sorbalgon藻酸钙敷料用于鼻窦内镜手术后鼻腔填塞止血的可行性及疗效.方法选择50例双侧慢性鼻窦炎鼻息肉患者,同体比较鼻窦内镜手术后Sorbalgon藻酸钙敷料(治疗侧)与凡士林纱条(对照侧)鼻腔填塞止血效果和填塞后鼻腔反应情况.结果治疗侧鼻胀痛少见且程度轻,鼻腔无明显出血;抽出填塞物后鼻腔粘膜反应轻,恢复快,鼻腔恢复通气所需时间短.而对照侧多数出现疼痛反应,且程度重,大多有不同程度出血;抽纱条后鼻腔粘膜反应重,恢复慢,鼻腔恢复通气所需时间长.治疗侧和对照侧术后3个月的术腔上皮化情况基本相同.结论应用Sorbalgon藻酸钙敷料止血效果好,在鼻窦内镜手术中具有良好的应用价值.

    作者:宋文光;曹磊;廖涛;胡亿文 刊期: 2005年第06期

南方医科大学学报杂志

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