周斌；蔡绍曦；赵海金；胡国栋
目的制备吗啡的单克隆抗体(mAb)并鉴定抗体的特性.方法6-琥珀酰化吗啡与Blue carrier(BC)载体蛋白交联制备6-琥珀酰化吗啡酯(M-6-S-BC),用其免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤,经筛选和3次克隆化,从制备的腹水中纯化单克隆抗体.结果获得4株杂交瘤细胞G1、G3、H4和B1,其分泌单抗的亚型均为IgG1型.经ELISA鉴定,该单克隆抗体可结合游离的吗啡、海洛因及可待因,而且对海洛因的结合优于吗啡,该单抗不与非阿片类药物结合.结论所制备的吗啡单克隆抗体可特异性结合吗啡等阿片类药,将为建立体外吗啡及海洛因的非同位素检测方法奠定基础.
作者：李琳；刘洁；朱平；徐江平；富宁 刊期： 2005年第07期
目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化.方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中.利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性.转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达.以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性.以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定.结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45 000的融合蛋白.纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别.所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性,并能够抑制AGE诱导的内皮细胞NF-kB的表达.结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与AGE的结合活性,并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用.
作者：赵善超；姜勇；刘靖华；李志杰；邓鹏；张桂林；刘志强；张训；侯凡凡；郑少斌 刊期： 2005年第07期
目的表达和纯化带His标记的小鼠线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,mtTFA)融合蛋白,并制备mtTFA的特异性多克隆抗体.方法提取正常BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增出无信号肽的mtTFA编码序列,克隆入经Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后的pET14b.酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍离子亲和树脂(Ni2+-NTA His·Bind Resin)纯化融合蛋白.用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.结果成功克隆出了mtTFA的编码序列,并构建了带His标记的小鼠mtTFA融合蛋白的重组表达质粒pET14b/His-mtTFA.表达的融合蛋白经亲和树脂纯化后得到大量的高纯度目的蛋白,获得了高特异性兔抗血清.结论获得了His标记的小鼠mtTFA原核表达载体,纯化得到高纯度的目标蛋白,并制备出高特异性兔抗血清,对进一步研究其生物学功能及调节细胞核同线粒体之间功能协同性的信号通路有重要意义.
作者：刘志锋；邵紫韫；徐佳；刘靖华；邓鹏；姜勇 刊期： 2005年第07期
目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性.方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺/N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子.将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基因组DNA芯片的制备,并进行杂交检测分析.结果经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层,与商业化的芯片比较发现,两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰,杂交点饱满、同一性好.结论两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功,其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产,是一种较理想的芯片表面制备方法.
作者：吴清华；马文丽；王洪敏；毛向明；张宝；李凌；郑文岭 刊期： 2005年第07期
目的探讨活血开窍方对缺血性中风患者血管内皮细胞(VEC)功能的影响.方法遵循随机、对照、双盲双模拟的原则,纳入98例急性缺血性中风(AIS)患者,治疗组65例、对照组33例,分别给予活血开窍方和尼莫通治疗3周,观察疗效并检测血栓素/前列环素、一氧化氮/血管内皮素.结果治疗组总有效率为92.3%,显效率为73.8%;对照组总有效率为87.8%,显效率为57.6%,两组总有效率和显效率比较无显著差异(P>0.05).结论活血开窍方能可能通过纠正血栓素/前列环素、一氧化氮/血管内皮素的失衡,改善血管内皮细胞功能,缓解动脉痉挛,增加脑血流,对缺血性脑细胞损伤具有保护作用.
作者：张丽；杨开清 刊期： 2005年第07期
目的介绍一种具有按摩、加压、温控等作用于一体的多功能瘢痕治疗仪的研制方法.方法通过步进电机的旋转和直线位移对瘢痕部位施加压力及按摩:采用半导体制冷片进行制冷、制热;利用单片机进行温度和压力的控制与显示.结果和结论该治疗仪使用方便,对机体瘢痕形成和增生可进行有效的预防和治疗.
作者：徐月华；王甲汉；李志清 刊期： 2005年第07期
目的研究紫杉醇、5-氟脲嘧啶(5-Fu)抑制肝癌细胞BEL-7402增殖和诱导凋亡的效果.方法采用ATP生物发光法检测肝癌细胞株的药物敏感性,以流式细胞术、形态学方法分析细胞凋亡和细胞周期.结果BEL-7402对紫杉醇高度敏感,对5-Fu低度敏感,抑制作用均存在剂量、时间效应.紫杉醇组3种浓度诱导细胞凋亡率均明显高于无药对照组(P<.05),但低于5-Fu组(P<.01);紫杉醇组细胞死亡率显著高于5-Fu组(P<.05).紫杉醇诱导凋亡率随药物浓度降低而增加,而5-Fu诱导凋亡率随药物浓度降低而降低.结论紫杉醇可抑制BEL-7402肝癌细胞增殖和诱导凋亡.5-Fu抑癌以诱导细胞凋亡为主,紫杉醇则以引起细胞坏死为主.
作者：余元龙；季明芳；何洁冰；李晓玲 刊期： 2005年第07期
目的观察肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae,Kle.p)感染对小鼠中性粒细胞细胞因子表达的影响.方法以热灭活的Kle.p感染小鼠肺部建立急性肺炎模型,分离并纯化中性粒细胞(PMN),用RT-PCR、Western blotting、ELISA等方法检测PMN中TNF-α和IL-1β的表达改变.结果Kle.p感染促进了早期小鼠中性粒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的mRNA表达及分泌,TNF-αmRNA表达在感染6 h高,12 h后降低;IL-1β的mRNA表达在感染12 h强;24 h后两者表达均减弱,但仍显著强于对照组.Western blotting结果显示,感染6 h后TNF-α、IL-1β的蛋白表达量高,24 h后表达明显减少.ELISA结果显示,TNF-α分泌量在感染后6 h高,24h后明显降低,但仍较对照组高;IL-1β分泌量峰值在感染12 h后出现.结论TNF-α可能主要参与小鼠感染热灭活Kle.p早期的PMN免疫防御功能;而IL-1β则主要参与感染中后期的PMN免疫防御功能.
作者：宋卉；钱元恕；董红梅 刊期： 2005年第07期
目的应用组织工程方法构建人瘢痕疙瘩动物模型,并探讨采用这一模型进行瘢痕疙瘩临床和实验室研究的可行性.方法对人体瘢痕疙瘩组织中成纤维细胞进行原代培养,将体外培养第6～8代的成纤维细胞,接种到培养液预湿的聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)支架,形成体外复合体,将复合体转移至旋转式细胞培养系统容器内培养;1周后种植在20只雌性裸鼠皮下,同体两侧对照,第4、8、16、24周取材,对获得的瘢痕疙瘩组织进行组织学评价.结果术后裸鼠全部成活.复合体移植24w后,在裸鼠皮下形成的瘢痕疙瘩保持了其原有的胶原形态,在电镜下可观察到植入物内同时存在纤维细胞和成纤维细胞,成纤维细胞内可见丰富的粗面内质网,细胞特性保持不变.结论PLGA与瘢痕疙瘩成纤维细胞具有较好的亲和性,PLGA-瘢痕疙瘩成纤维细胞复合体在裸鼠体内可形成瘢痕疙瘩,值得进一步开发研制.
作者：汪海滨；罗盛康 刊期： 2005年第07期
目的探讨胃癌组织内淋巴管的形态学及其与癌转移的关系.方法研究32例人胃癌组织和癌旁组织内淋巴管和毛细淋巴管的形态学改变.结果在胃癌组织内以条索状毛细淋巴管为多,而在癌旁组织内则以开放的淋巴管和毛细淋巴管为主;图像分析结果表明转移组胃癌组织与癌旁组织内淋巴管和毛细淋巴管腔面积、周径和管径有显著差异(P<.05);未转移组胃癌组织与癌旁组织内淋巴管毛细淋巴管腔面积、周径和管径也有显著差异(P<.05);转移组与未转移组癌旁组织内淋巴管毛细淋巴管大腔面积、周径和管径也有显著差异(P<.05).结论胃癌旁组织间质水肿导致淋巴管和毛细淋巴管扩张,有助于癌细胞的转移,癌细胞转移是通过浸润癌周围成熟的毛细淋巴管转移到淋巴结的.
作者：李志伟；梁志鹏；高焱明；廖新波；张卓军 刊期： 2005年第07期
目的研究人尾加压素(UⅡ)刺激人血管内皮细胞(HVEC)分泌肾上腺髓质素(Adm)的机制.方法以不同浓度的UⅡ(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)刺激培养的HVEC,放射免疫法测定其分泌Adm的量,以及不同的细胞信号转导阻滞剂(丝裂素活化蛋白激酶阻断剂PD98059、钙调素依赖性蛋白激酶阻断剂W7、P38蛋白激酶抑制剂SB202190、钙通道阻断剂nicardipine、蛋白激酶C阻断剂H7及钙调神经磷酸酶抑制剂环孢霉素)对其分泌的影响.结果UⅡ可促进HVEC分泌Adm,且呈时间和浓度依赖性.各组与对照组之间有显著差别.PD98059、W7、SB202190及nicardipine均能抑制UⅡ刺激的HVEC对Adm的分泌,其抑制率分别为67%(P<0.01)、77%(P<0.01)、23%(P<0.05)、24%(P<0.05).而H7、CsA对UⅡ刺激HVEC分泌Adm无显著影响(P>0.05).结论UⅡ能刺激HVEC分泌Adm,其机制与Ca2+、MAPK、CaM PK及P38信号转导通路介导有关.
作者：石向东；李志梁；吴宏超；王同汉；傅强；严全能；唐朝枢 刊期： 2005年第07期
目的评价支撑捆扎法在低位直肠癌保肛手术中低位吻合的价值.方法从929例低位直肠癌中选择629例实施保肛手术.手术方法有双吻合器吻合法(n=101)和经肛门支撑捆扎结肠-直肠(肛管)(n=528)吻合.外科切除范围:除残留肛侧直肠(肛管),肛提肌、肛门内外括约肌、坐骨盲肠窝脂肪组织、肛周皮肤外,与Miles手术相同.结果低位直肠癌保肛率67.69%.根治术后584例随访5年以上.5年生存率:吻合器组75%、支撑捆扎组76.59%.局部复发率:吻合器组5%、支撑捆扎组3.2%.手术合并症:吻合器组吻合口漏4%;支撑捆扎组吻合口漏2.5%.两种保肛方法5年生存、局部复发率及术后并发症无显著差异(P>0.05).结论低位直肠癌中,在确保根治和术后排便功能,能完成口侧结肠-直肠(肛管)吻合者,可作为保肛适应症选择范围.保肛术式选择,吻合口在盆腔内者选择吻合器技术,在耻骨直肠肌上缘到肌间沟者选择支撑捆扎吻合术.经肛门支撑捆扎吻合可以取代吻合器完成超低位及结肠-直肠(肛管)吻合,两种吻合方法之间对病人的预后影响无差异.
作者：董文广；詹文华；韩方海；张肇达；周总光；吴凌云 刊期： 2005年第07期
目的研究L-arg对大鼠皮脂腺增生作用机制的研究.方法雌、雄性SD成年大鼠各20只,5周龄小雌、雄性SD鼠各20只,按照不同性别和鼠龄随机分组,每组10只,共8组.不同性别、年龄的4组大鼠每天以10 mg/kg L-arg灌胃14d,另外4组给予生理盐水.待大鼠皮肤出现被毛潮湿、油腻、黄染等病理现象时,取血进行性激素检测,取皮肤组织进行组织学观察.结果L-arg灌胃7d左右,雄性成年大鼠组全部动物背部皮肤被毛潮湿、油腻、黄染,其血清中雄激素水平明显升高,组织学观察可见皮肤组织中皮脂腺异常丰富.雌性成年大鼠组用药时间至14 d,8例动物有背部皮肤被毛潮湿、油腻、黄染发生,组织学改变同样是皮脂腺异常增生.有皮脂腺增生改变的动物血清中雄激素水平明显高于对照组,也高于未发生皮脂腺增生的动物.5周龄小鼠组雌雄动物需用药时间至14 d全部动物才出现背部皮肤被毛潮湿、油腻、黄染,组织学改变也为皮脂腺异常增生,血清中雄激素水平明显高于对照组.结论L-arg可致大鼠正常皮肤皮脂腺异常增生,分泌增多,造成皮肤被毛潮湿、油腻、黄染发生,与L-arg及其体内产生的NO可使大鼠的雄激素分泌增多密切相关.
作者：尹艳茹；柏林；王斐 刊期： 2005年第07期
目的比较雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞的生物学作用及对护骨素(OPG)表达的影响.方法在新生SD大鼠头颅骨第二代成骨细胞培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬,并设立雌二醇阳性对照及空白血清对照组;分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能;半定量RT-PCR测定成骨细胞中OPG基因的表达.结果体外培养成骨细胞在加入不同剂量的雷洛昔芬后,细胞增殖率(A570)、OPG蛋白表达与空白对照组相比均无明显差异(P>0.05);但碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节数明显升高,与空白对照组相比差异显著(P<0.05,P<0.01),且与雷洛昔芬浓度呈量效关系;雌二醇对成骨细胞的A570值、ALP活性、矿化结节数量、OPG表达等的影响和对照组相比均有显著差异(P<0.01).结论雌二醇对体外成骨细胞生物学功能的影响非常显著,并可上调OPG蛋白表达及表达量:雷洛昔芬对体外成骨细胞分化矿化均有影响,但对增殖影响不显著;对OPG表达也无明显影响.此结果提示雷洛昔芬影响骨代谢可能不通过OPG代谢途径,它对体外成骨细胞的作用机制与雌二醇不完全相同.
作者：李娟；唐井钢；吴贺勇；吴伟康 刊期： 2005年第07期
目的比较静脉腔内激光(ELT)和传统手术治疗下肢静脉曲张(LEV)的近期疗效,探讨ELT的适应症.方法对20例22条肢体行ELT和30例36条肢体行传统手术的LEV患者的临床资料进行分析,比较两者手术时间、手术切口、术后疼痛、手术并发症、术后住院时间、一年复发率六项指标的优劣.结果ELT组在手术时间、手术切口、术后疼痛、术后住院时间四项指标明显优于传统手术组,而手术并发症、一年复发率与传统手术组无差异.结论ELT是一种安全、有效、无疤痕的微创治疗LEV新方法,有望替代传统手术应用于LEV的治疗,ELT扩大了传统手术的适应症.
作者：吴良平；黄宗海；王俊；周宏锋；张玉新 刊期： 2005年第07期
目的探讨在肺癌诊断过程中血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)含量的变化、敏感程度及联合检测的意义.方法使用IRMA法测定92例肺癌及23例肺良性病变患者的血清CA125、CYFRA21-1的含量,使用IRA法测定血清CEA的含量,并探讨CEA、CA125、CYFRA21-1含量与肺癌病理类型、肺癌分期的关系.结果肺癌患者血清CEA、CA125、CYFRA21-1的含量显著高于对照组.CYFRA21-1在鳞癌组高,腺癌组次之,鳞癌组与腺癌组及其他组有显著性差异(P<01),但腺癌组与其他组之间无差异.CEA在腺癌组中明显高于其他组(P<01).肺癌各组中CA125的含量无显著性差异(P>0.05).肺癌的Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者的血清CEA含量间差异无显著性,而Ⅲ期的血清CA125、CYFRA21-1显著高于Ⅰ期和Ⅱ期,Ⅳ期的血清CA125、CYFRA21-1显著高于Ⅲ期.结论血清CEA、CA125、CYFRA21-1联合检测对肺癌诊断有较高的临床参考价值,并有助于肺癌的病理类型和分期评估.
作者：梁建忠；黄国柱；谢裕达；苏毅 刊期： 2005年第07期
目的探讨对严重冠心病合并肾动脉狭窄的老年病人姑息性单纯行肾动脉成形术及支架植入术(PTRA)的可行性.方法选取2000年7月～2003年7月间严重冠心病合并肾动脉狭窄的未行冠脉搭桥及经皮冠脉成形术且单纯行PTRA治疗的病人共34例(男23人、女11人),并对病人心肾功能、心脏超声心动图观察左室射血分数(LVEF)以及SF-36调查表内容进行17～53个月[平均(35.0±9.3)月]的随访.结果随访中心绞痛发作次数由每周(14.0±3.9)次发展为6.5±3.3次(P<01),LVEF从(40.2±10.4)%发展为(45.3±7.8)%(P<05);SF-36调查表中评分总分由56.5±8.0好转为80.1±16.8(P<01),评分中的健康和日常活动、自我感觉、总的健康情况部分也有明显好转(P<01).结论严重冠心病合并肾动脉狭窄病人,如病人按目前条件不能行冠脉搭桥或冠脉成形术,姑息性单纯行PTRA是必要且可行的方法.
作者：耿庆山；周颖玲；黄文晖；罗建方；赵洪磊；陈纪言 刊期： 2005年第07期
目的利用电穿孔仪对成年雄性SPF KM小鼠睾丸进行电穿孔实验,以观察电穿孔对成年雄性SPF KM小鼠睾丸的损伤,为体内精子介导基因转移提供依据.方法设置高压和低压两组不同的体内电穿孔参数,将SPFKM小鼠睾丸置于电穿孔仪上的钳型电极的两侧进行体内电穿孔,2周后处死动物,分离睾丸和附睾,将睾丸称重后用4%多聚甲醛固定,常规组织切片和HE染色,显微镜下观察;将附睾置于M16培养基中分离其中精子,稀释后置显微镜下观察.结果(1)高压电穿孔2周后,附睾精子活力检查和睾丸组织切片镜下观察显示:高压电穿孔可造成睾丸的不可逆损伤;其睾丸质量也显著低于对照组睾丸质量(P<.01).(2)低压电穿孔2周后,附睾精子活力检查和睾丸组织切片镜下观察显示:低压电穿孔虽可造成睾丸一定的损伤,但这种损伤是可逆的,经过一段时间的恢复后雄鼠仍具有生殖能力.并且电穿孔后的睾丸质量与对照组睾丸质量不存在显著差异(P>0.05).结论合理地设计体内电穿孔参数,一方面不会对SPFKM雄鼠睾丸的生殖能力造成严重影响,另一方面它还可为外源基因导入到生殖细胞提供了一种可能.
作者：袁进；安靓；顾为望；黄吴健 刊期： 2005年第07期
目的观察经分离纯化的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白-4(AQP4)的表达.方法对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,经过特殊染色及电镜鉴定,用免疫细胞化学及免疫电镜方法检测水通道蛋白-4在该单细胞上的表达.结果大鼠肺泡Ⅱ型细胞免疫细胞化学水通道蛋白-4呈强阳性,免疫电镜结果细胞膜上可见高电子密度阳性反应.结论水通道蛋白-4存在于分离的大鼠肺泡Ⅱ型细胞膜上,对呼吸系统水转运可能起到重要作用.
作者：刘琳；李涛平 刊期： 2005年第07期
目的探讨运动是否会引起冠脉无明显狭窄的冠状动脉扩张症病人心肌缺血表现.方法分析2002年1月至2004年1月间41例(男36例,女4例)经选择性冠状动脉造影证实的冠脉无明显狭窄但有冠状动脉扩张症病人,作为研究组;另选取同期41例按性别、年龄等配对的冠脉造影结果正常的作为对照组,冠脉造影前进行临床调查及活动平板检查.结果研究组18例(43.9%)病人有典型心绞痛症状,而对照组仅2例有典型心绞痛症状,两组对比有显著差异(X2=10.498,P=0.001);研究组32例(78%)活动平板阳性,与对照组5例(12.2%)阳性比差异有显著性(X2=35.903,P<0001).结论冠状动脉扩张症病人,虽然冠脉无明显狭窄,但可有典型心绞痛症状,运动可以诱发心肌缺血表现,应当引起临床重视.
作者：黄文晖；罗建方；周颖玲；赵洪磊；陈纪言 刊期： 2005年第07期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
