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固定方式对神经细胞膜NMDAR1免疫细胞化学定位的影响

郁毅刚;徐如祥;姜晓丹;柯以铨

关键词:神经细胞, 细胞培养, N-甲基-D-天冬氨酸受体NRl亚基, 免疫细胞化学, 固定
摘要:目的探讨不同固定方式对神经细胞膜NMDA受体NRl亚基免疫细胞化学定位结果的影响,并确定NRl在膜上的亚细胞定位分布.方法采用免疫细胞化学ABC法观察不同固定方式分组时NRl亚基在神经元膜上的定位分布.结果-20℃纯甲醇和-20℃纯丙酮固定5 min组呈现NRl典型的细胞膜阳性染色,定位在神经元两极靠近树突起始部及树突干上.4%多聚甲醛及加上0.5%戊二醛固定20 min组呈现染色假阴性.95%乙醇固定10min组呈现细胞膜染色假阴性,细胞核染色假阳性.结论每种抗原免疫细胞化学检测中都有各自适合的固定方法.NMDARl抗原需要应用缓和的固定方式,-20℃纯甲醇和-20℃纯丙酮5min短时间固定效果好.NMDARl分布于神经元膜两端树突起始部及树突干上.
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  • 固定方式对神经细胞膜NMDAR1免疫细胞化学定位的影响

    目的探讨不同固定方式对神经细胞膜NMDA受体NRl亚基免疫细胞化学定位结果的影响,并确定NRl在膜上的亚细胞定位分布.方法采用免疫细胞化学ABC法观察不同固定方式分组时NRl亚基在神经元膜上的定位分布.结果-20℃纯甲醇和-20℃纯丙酮固定5 min组呈现NRl典型的细胞膜阳性染色,定位在神经元两极靠近树突起始部及树突干上.4%多聚甲醛及加上0.5%戊二醛固定20 min组呈现染色假阴性.95%乙醇固定10min组呈现细胞膜染色假阴性,细胞核染色假阳性.结论每种抗原免疫细胞化学检测中都有各自适合的固定方法.NMDARl抗原需要应用缓和的固定方式,-20℃纯甲醇和-20℃纯丙酮5min短时间固定效果好.NMDARl分布于神经元膜两端树突起始部及树突干上.

    作者:郁毅刚;徐如祥;姜晓丹;柯以铨 刊期: 2004年第04期

  • 创伤性癫痫的临床特征及外科治疗

    目的探讨创伤性癫痫的临床特征、外科治疗方法的选择及其效果.方法对35例创伤性癫痫病人进行电生理学、CT、MRI、SPECT及PET检查后行外科治疗,开颅手术病例术中行皮层脑电监测.结果在皮层脑电监测下16例行癫痫病灶切除、7例行多处软脑膜下横纤维切断术,12例在PET引导下行立体定向放射外科治疗,癫痫灶大都位于脑软化灶周边.术后得到随访32例(时间1至4年),18例无癫痫发作,10例明显好转,4例无改善.结论创伤性癫痫发作会加重原创伤引起的神经功能障碍,外科治疗均能取得良好效果并可减轻药物的毒副作用.近年来采用PET引导下的立体定向放射外科治疗具有无创、有效的特点,是一个非常有前景的创伤性癫痫外科新方法.

    作者:漆松涛;邱炳辉;欧阳辉;彭玉平 刊期: 2004年第04期

  • N-甲基-D-天门冬氨酸受体介导缺氧SD大鼠PO//AH区神经元Ca2+浓度的变化

    目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体特性,探讨NMDA对缺氧大鼠PO/AH区神经元Ca2+浓度的影响.方法给大鼠应用NMDA受体激动剂NMDA和拮抗剂丙戊酸,观察其在正常和缺氧条件下对PO/AH区神经细胞内Ca2+浓度的影响.结果在正常条件下,细胞内Ca2+荧光比值为0.95,第40秒加入NMDA后[Ca2+]i的荧光强度迅速增高,25s后达到峰值2.054,并稳定在此水平,其升幅为(109±52)%,加入激动剂后30 s内达到峰值3.783,并持续稳定在此水平,加入NMDA后[Ca2+]i升高了(286±91)%;缺氧条件下神经元[Ca2+]i在加入丙戌酸后由平台向下的降幅为(103±45)%.结论[Ca2+]i的升高主要是由于NMDA受体通道开放,细胞外游离Ca2+易化扩散入胞内所致,丙戊酸可有效地降低NMDA受体活性,从而使细胞内游离Ca2+浓度明显下降,具有保护神经元免受缺氧损伤的作用.

    作者:赵庆平;邹飞;陈光忠;李铁林 刊期: 2004年第04期

  • 葛根芩连方药中黄连总生物碱的含量测定

    目的建立葛根芩连汤及其制剂中黄连总生物碱的含量测定方法.方法氧化铝柱纯化,紫外分光光度法350nm处测定含量.结果葛根芩连汤水提物中总生物碱含量为32.4mg/g,加样回收率为98.1%(RSD=2.9%).葛根芩连微丸中总生物碱含量为19.6 mg/g.结论该法测定黄连总生物碱方法简单、结果准确,可为葛根芩连微丸质量标准、葛根芩连方及其他含黄连的方剂中生物碱的含量测定提供参考.

    作者:戴开金;罗奇志;罗佳波;谭晓梅;马安德 刊期: 2004年第04期

  • 腹腔镜下卵巢恶性肿瘤细胞减灭术(附4例报告)

    报道了2002年10月~2003年6月本科在腹腔镜下完成的4例卵巢恶性肿瘤细胞减灭术病例.从初步的体会看,腹腔镜技术不仅在卵巢癌的诊断、分期和随访中具有肯定作用,在早期癌的肿瘤细胞减灭术中也能达到与开腹手术相同的效果.

    作者:何援利;张凌云;彭冬先 刊期: 2004年第04期

  • 肥厚左心室肌中层细胞Na+/Ca2+交换体电流及钾电流重构特征

    目的探讨肥厚左心室肌中层细胞Na+/Ca2+交换体电流(Na+/Ca2+ exchanger current,INa+/Ca2+)及钾电流重构特征,揭示心肌肥厚时心律失常发生的离子基础.方法新西兰兔分为正常对照组及手术组各10只,手术组通过肾上腹主动脉次全缩窄诱发左室肥厚.采用全细胞膜片钳技术分别记录对照组及手术组左心室肌中层细胞的动作电位、INa2+/Ca2+、慢激活的延迟整流钾电流(slowly activatingdelayed rectifier potassiUum current,IKs)、快激活的延迟整流钾电流(rapidly activatingdelayed rectifier potassium current,IKr)等.结果在基础刺激周长为2 s时,对照组和手术组的90%动作电位时程(90%action potential duration,APD90)分别为522.0±19.5 ms(n=6)、664.7±32.7 ms(n=7);在测试电位为+40 mV时,外向INa+/Ca2+密度在对照组及手术组分别为0.94±0.11pA/pF(n=9)、1.30±0.11pA/pF(n=8);在测试电位为-100mV时,内向INa2+/Ca2+密度在对照组及手术组分别为0.40±0.05 pA/pF(n=9)、0.56±0.02 pA/pF(n=8);在测试电位为+50 mV时,对照组及手术组的IKs尾电流密度分别为0.26±0.03 pA/pF(n=8),0.17±0.01 pA/pF(n=9);在测试电压为+50 mV时,对照组及手术组的IKr尾电流密度分别为0.34±0.02 pA/pF(n=8),0.23±0.02 pA/pF(n=9),以上二者相比均有统计学意义.结论肥厚左心室肌中层细胞的电生理特性发生改变,表现为动作电位时间延长、INa+/Ca2+上调、Iks及IKr下调.

    作者:王军奎;崔长琮;姚青海;姚晓伟;廉姜芳;韩克 刊期: 2004年第04期

  • 半叶马尾藻多糖体内抗肿瘤作用及其机制探讨

    目的研究半叶马尾藻(SC)多糖体内抗肿瘤作用及其机制.方法观察SC多糖对S180小鼠瘤质(重)量、胸腺等免疫器官的影响及分别测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),丙二醛(MDA)的活性.结果SP可明显抑制S180小鼠瘤体的生长,腹腔注射SC150 mg/kg.· bw.,连续注射10 d,可使肿瘤抑制率达63.52%;小鼠血清中SOD、GSH-PX的活性分别由(350.76±31.34)NU/ml,(299.36±43.63)U增加到(487.76±16.67)NU/ml(P<0.01),(370.90±16.49)U(P<0.01);MDA由(9.46±1.77)nmol/ml降至(7.26±1.18)nmol/ml(P<0.05).结论SC多糖可通过提高机体免疫功能和抗氧化能力从而抑制肿瘤的生长.

    作者:刘秋英;孟庆勇 刊期: 2004年第04期

  • 睾酮对人单核细胞雄激素受体蛋白表达的影响

    目的研究不同浓度的睾酮对人单核细胞中雄激素受体(AR)蛋白表达的影响.方法对培养的人单核细胞株THP-1予不同浓度的睾酮刺激,采用Westernblotting检测细胞中AR蛋白表达量,进行半定量比较.结果人的单核细胞中存在AR.AR表达量随睾酮浓度的增加而减少.加用选择性受体阻滞剂氟他胺可使这种作用完全阻滞.结论AR表达量随睾酮浓度的增加而减少,并具有一定的时间、剂量依赖性.

    作者:刘长青;吴赛珠;王子东;赖文岩;孙飞 刊期: 2004年第04期

  • 肿瘤坏死因子对滋养细胞侵袭性的影响

    目的探讨外源性肿瘤坏死因子(TNF-αr)及其多克隆抗体对原代滋养细胞侵袭力的影响.方法采用逆转录多聚酶链反应(RT*PCR)方法,检测TNF-α、anti TNF-α、TNF-αr+anti TNF-α对原代滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)及其组织抑制因子(TIMP-2)表达的影响.结果原代滋养细胞表达MMP-2,经过5 ng/ml的TNF-α、TNF-α+antiTNF-d分别刺激培养原代滋养细胞48h后,细胞MMP-2的表达显著性提高(P<0.001),50ng/ml的antiTNF-α刺激培养后MMP-2的表达显著性降低(P<0.001);各组间MMP-2的表达存在显著性差异(P<0.001),但是均未见明显的TIMP-2的表达.结论外源性细胞因子TNF-α可以增强滋养细胞的侵袭力,多克隆抗体antiTNF-α则降低其侵袭力.

    作者:陈慧;庞战军;陈士岭;邢福祺 刊期: 2004年第04期

  • 脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂制备及膜剂中鬼臼毒素含量的测定

    目的筛选出脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂制备的佳配方,制备脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂并测定膜剂中鬼臼毒素的含量.方法选择制备壳聚糖膜剂所需的壳聚糖、醋酸、明胶作为三个因素,脂质体鬼臼毒素作为空白因素,每个因素三水平进行正交实验设计,根据正交实验设计的结果制备不同配方的膜剂,将膜剂的粘附性、溶解性作为评价指标进行综合评价,确定膜剂制备的佳配方.采用紫外分光光度法对所制备膜剂中鬼臼毒素的含量进行测定,检测波长为292 nm.结果对各配方膜剂的综合评价进行统计分析,以2%壳聚糖、1%醋酸、2%明胶、2.8%脂质体鬼臼毒素为配方制备的脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂的综合评价高;紫外分光光度法检测结果显示鬼臼毒素在5~25 tμg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 89),平均回收率为99.7%(n=5),相对标准误差(RSD)=1.11,膜剂中鬼臼毒素平均含量为10.46%,RSD=1.61%.结论根据正交实验结果制备的膜剂,在粘附性、溶解性方面均符合要求,紫外分光光度法测定脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂中鬼臼毒素含量快捷、准确,膜剂中鬼臼毒素的含量基本符合要求,鬼臼毒素在膜剂中的分布较为均一.

    作者:曾抗;朱晓亮;李国锋;周再高 刊期: 2004年第04期

  • 高效毛细管电泳法测定蒲公英及妇洁灌肠液中咖啡酸的含量

    目的采用高效毛细管电泳法对妇洁灌肠液及蒲公英原药材中所含咖啡酸进行含量测定,尝试从原药材到成品二个层面来控制妇洁灌肠液的质量.方法高效毛细管电泳法.电泳条件为:石英毛细管柱(75μm×60cm);运行缓冲液为20 mmo1/L的硼砂溶液(25℃时pH=9.18);分离电压12 kV;真空进样时间为5 s;温度为25℃,紫外检测波长为313 nm.结果咖啡酸在10~100μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.999 2).平均回收率大于95%;RSD均小于3%(n=3).结论本法简单、快捷、灵敏,可用于蒲公英及妇洁灌肠液的质量控制.

    作者:晏媛;许重远;陈志良;谭亚非;郭丹 刊期: 2004年第04期

  • 冠心病患者血清中肺炎衣原体免疫复合物及抗体检测的临床分析

    目的了解冠心病患者肺炎衣原体感染状况,探讨肺炎衣原体(Cpn)感染与冠心病的发生发展关系.方法采用双抗体夹心法、间接ELISA法检测了160例经冠状动脉造影证实的冠心病患者和40例非冠心病患者血清中肺炎衣原体免疫复合物(CPn CIC)和IgG抗体.结果冠心病组CpnigG型免疫复合物的阳性率(63.8%)高于对照组(40.0%,P<0.05).CPnIgG抗体阳性率冠心病组为65.0%对照组为32.5%,前者阳性率显著同于后者(P<0.05).结论Cpn感染与冠心病关系密切,但尚需进一步深入探讨.

    作者:孙芸芸;蒋文玲;罗宪玲;陈纪言 刊期: 2004年第04期

  • 过氧化氢抑制三氧化二砷诱导的伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡

    目的探讨过氧化氢(H2O2)对三氧化二砷(As2O3)诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响及双染法荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用.方法应用AsO3诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞株BJAB细胞凋亡,采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)核染料双染法荧光显微镜和透射电镜对细胞死亡进行观察及定量分析.结果BJAB细胞经As2O3处理后,荧光显微镜下可见大多数细胞出现细胞染色质凝集、核边集、核碎裂等凋亡的特征性改变;在低剂量(200μmo1/L)H2O2的影响下,抑制了As2O3诱导的细胞凋亡,降低细胞的死亡率;细胞的死亡方式由凋亡转变为核固缩性坏死,表现为既无凋亡的特征性改变,又非典型的细胞坏死,死亡细胞的细胞核呈固缩状态而非肿胀.结论低浓度(200μmol/L)H2O2可抑制临床治疗浓度的As2O3诱导的人类伯基特氏淋巴瘤BJAB细胞凋亡;双染法荧光显微镜技术不但可明确区分细胞凋亡及坏死,还可判断早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞,并可进行定量分析,是一种良好的细胞凋亡检测方法.

    作者:陆地;白晓春;刘斌;李秀梅;邓凡;李明;程宝鸾;罗深秋 刊期: 2004年第04期

  • 冠心病不同类型间T细胞增殖反应的比较研究

    目的研究T细胞增殖反应与冠心病斑块稳定性的关系.方法采用MTS/PMS比色分析法测定13例急性心肌梗死、22例不稳定性心绞痛、15例稳定性心绞痛和16例对照者的T细胞对植物血凝素(PHA)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及低密度脂蛋白(LDL)的增殖反应.结果急性心肌梗死组和不稳定性心绞痛组的T细胞对PHA的增殖反应高于稳定性心绞痛组和对照组(P<0.05),急性心肌梗死组和不稳定性心绞痛组的T细胞对5和1 μg/ml oxLDL的增殖反应高于稳定性心绞痛组和对照组(P<0.05),急性心肌梗死组和不稳定性心绞痛组的T细胞对3种浓度(10、5和1μg/m1)oxLDL的增殖反应均高于对同浓度的LDL的增殖反应(P<0.05).结论T细胞介导的细胞免疫,尤其是对特异性抗原oxLDL的免疫反应,在导致斑块的不稳定及急性冠状动脉综合征的发生中可能起着重要的作用.

    作者:郑华;吴赛珠;赖文岩 刊期: 2004年第04期

  • 电视宫腔镜电切术临床应用775例

    目的总结宫腔镜电切术治疗子宫良性病变的经验体会.方法对775例宫腔电切术的手术时间、出血量、并发症及预后进行回顾性分析.结果平均手术时间(26.5±10.3)min;术中出血量为(40.1±12.5)ml;539例门诊患者术后观察2 h回家,236例住院患者术后住院日2~3 d.随访3月到6年,经宫颈子宫内膜电切术(TCRE)术后闭经率88.9%,17例4~22个月再次少量出血;经宫颈子宫内膜息肉电切术(TCRP)后息肉复发6例(5.5%);经宫颈子宫肌瘤电切术(TCRM)后月经均恢复正常;经宫颈子宫纵隔电切术(TCRS)6月后宫腔镜复查宫腔形态均恢复正常,无粘连发生;经宫颈宫腔粘连切除术(TCRA)后月经改善55例(96.5%).近期并发症为中度低钠血症1例,全组病例无死亡、子宫穿孔及电损伤等并发症.远期并发症有1例经宫颈宫颈病变切除术(TCRC)术后4个月发现宫颈及宫腔粘连.结论宫腔镜电切术能有效治疗子宫内良性病变,且具有不开腹、创伤小、出血和并发症少,不影响卵巢功能等特点.

    作者:刘木彪;何援利;宗利丽;杨芳 刊期: 2004年第04期

  • 急性胰腺炎72例误诊分析

    急性胰腺炎是急诊科常见的急腹症.病死率为6%~23%,若病情发展为重症坏死性胰腺炎,其病死率更高达20%~50%,亦系猝死的病因之一.由于其症状、体征无特异性,痛程早期B超及CT影像等检查不能准确反映病情,故临床误诊率较高.早期诊断对患者的生存,预后有很大影响.2000年1月至2003年6月来我院急诊的急性胰腺炎误诊72例分析如下.

    作者:陆婷;程兴利 刊期: 2004年第04期

  • 神经内镜治疗导水管梗阻性脑积水12例临床经验

    目的总结神经内镜下手术治疗12例导水管水平梗阻性脑积水的初步体会.方法12例脑积水患者中导水管水平阻塞为原发性10例,继发于顶盖区肿瘤者2例.均采用神经内镜经侧脑室额角入路,经室间孔行三脑室底脚间池造瘘.结果12例患者造瘘术过程顺利,术中术后并发症少而轻,12例中术后3个月已随访的患者9例,7例有效,2例无效.结论神经内镜是治疗导水管梗阻性脑积水的有效手段,近期疗效满意.术中应针对三脑室底不同的特点采用适当的造瘘方法,随访应以确定颅内压是否正常、症状是否消失作为判断疗效的主要依据.

    作者:彭玉平;张喜安;漆松涛 刊期: 2004年第04期

  • 高效毛细管电泳法测定尿液中柠檬酸盐、草酸盐的含量

    目的以高效毛细管电泳法测定尿液中柠檬酸盐、草酸盐的含量.方法以毛细管区带电泳分离分析尿样中的柠檬酸盐、草酸盐,以铬酸钠为紫外吸收剂进行间接紫外检测.结果柠檬酸根、草酸根阴离子在5min内得到很好的分离,迁移时间分别为3.76、3.14min,柠檬酸根在4.00~40.00μg/ml浓度范围内、草酸根在2.00~40.00 μg/ml浓度范围内线性关系良好,柠檬酸根阴离子低检测限为2μg/ml、草酸根阴离子的低检测限为1μg/ml.加样回收率分别为97.53%、99.11%.结论该方法简单,准确,成本低,可为尿液中柠檬酸盐、草酸盐的直接测定提供参考.

    作者:罗奇志;戴开金;马安德;周俊岭 刊期: 2004年第04期

  • 大鼠海马CA3区神经元和星形胶质细胞三维结构重塑

    目的观察大鼠海马CA3区神经元锥体细胞及其周围星形胶质细胞(AST)的分布,重塑两者之间的三维构象.方法采用脑片膜片钳全细胞记录、细胞内荧光黄(LY)染色、免疫荧光和激光共聚焦显微镜检查(LSCM)相结合的技术.结果根据放电形式的不同把海马锥体细胞分为位相型和非位相型放电神经元.LSCM下单层光学图像和三维立体重建显示许多AST紧密围绕在LY染色锥体细胞周围并形成紧密接触.2类神经元与AST形成接触的部位存在区别.非位相型放电神经元的树突和胞体周围都有许多AST形成接触的部位在,而位相型放电神经元则仅位于树突.结论不同特性海马神经元周围AST的空间分布可能存在差异.

    作者:杨志军;饶志仁;徐如祥;魏玲;王晓斌;姜晓丹 刊期: 2004年第04期

  • 大鼠坐骨神经再生过程中的神经元轴突自噬作用

    目的探讨大鼠坐骨神经变性轴突清除中的自噬作用.方法横切大鼠坐骨神经制作Wallerian变性模型,造模后不同时间点取远断端组织行电镜结构观察和酸性磷酸酶(AcPase)活性检测.结果坐骨神经横切后轴突发生变性,主要变化为术后第5小时~2天轴质肿胀,轴突与髓鞘分离,术后第4天轴质浓缩,轴突与髓鞘完全分离形成游离轴突体.术后初期变性轴突主要形成大小不等的空泡,后期轴突与髓鞘完全分离并形成较大的游离轴突体,轴突体外包一层轴突膜是神经元细胞膜的延续,轴突体轴质浓缩,含大量各级自噬泡和纵横交错的神经丝、微管和微丝.经酸性磷酸酶(AcPase)染色证实自噬泡均呈AcPase阳性,第7天后轴突体被降解吸收,形成的空腔内偶见巨噬细胞.结论大鼠坐骨神经再生过程中变性轴突的清除主要靠轴突自身的自噬和施万细胞吞噬机制,而巨噬细胞只起辅助作用.

    作者:朴仲贤;王万山;徐锡金;王启伟;霍霞;韩明虎;朴英杰 刊期: 2004年第04期

南方医科大学学报杂志

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