孟凡义;郑维扬;刘晓力;徐兵;宋兰林;张钰;黄芬
目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株.方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测、鉴定重组细胞表达产物.结果筛选所得稳定表达细胞株经RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Westernblotting等方法检测均呈阳性反应,而阴性对照及空白对照未出现相应阳性反应.结论筛选获得稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组细胞株,命名为NS/HBc-Mep.为建立HBc-Mep特异的cELISA及CTL活性测定等实验方法提供可靠的靶细胞.
作者:田泽维;董文其;刘朝霞 刊期: 2003年第11期
目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况.方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoVN蛋白.结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoVN蛋白单克隆抗体均为阳性.结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织.SARS-CoVN蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义.
作者:贺莉;丁彦青;车小燕;张庆玲;黄仲曦;王慧君;申洪;李祖国;蔡俊杰;张进华;耿舰;李欣;张文丽;韩慧霞;康伟;杨磊;陆药丹 刊期: 2003年第11期
目的明确6-羟基多巴(6-OHDA)致多巴胺能神经元凋亡与氧化应激的关系,中脑区总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化情况,以及外源性SOD对多巴胺能神经元凋亡的保护作用.方法144只SD大鼠数字化随机分为正常组、模型对照组、模型组、处理对照组及处理A、B、C、D、E组,应用相关试剂盒分别检测各组大鼠左、右中脑活性氧、总抗氧化能力和SOD活性水平;术后第10天,大鼠腹腔注射阿扑吗啡(0.5 mg/kg@b.w.)进行旋转行为测试;应用冰冻切片漂浮法,分别进行酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)单克隆抗体免疫组化和TUNEL法染色,观察各组大鼠中脑黑质部位TH阳性细胞和阳性凋亡细胞的情况.结果6-OHDA注入黑质区后,总抗氧化能力变化不明显,活性氧升高至(130±17)μ/mg@prot,SOD活性下降;外源性SOD注入后中脑区活性氧水平降低,SOD活性提高,使大鼠右侧中脑黑质TH阳性细胞数明显增多,而凋亡细胞有所减少,大鼠的旋转圈数从(166.7±31.0)圈/30min明显减少至(87.6±25.0)圈/30min.同时,处理各组出现SOD保护作用的时相性差异.结论在6-OHDA致大鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的过程中,氧化应激起着一定的作用;而外源性SOD增强了对活性氧的灭活能力,减弱了6-OHDA的神经毒作用,提高了多巴胺能神经元的存活率,改善了大鼠的旋转行为.同时,也提示外源性SOD作用短暂,对急性期氧化应激抑制有较明显的时相性特点.
作者:徐强;徐如祥;张世忠;张旺明 刊期: 2003年第11期
目的探讨应用小剂量低谷值浓度他克莫司(FK506)治疗终末期糖尿病肾病肾移植患者的疗效和安全性.方法选择因终末期糖尿病肾病行尸肾移植的患者64例,随机分成小剂量低谷值浓度FK506组33例和环孢霉素(CsA)组31例2组,术后根据血糖水平调整胰岛素用量.比较两组急性排斥反应发生率、血糖水平、胰岛素用量的变化及对血压、血脂代谢和肝功能的影响.结果FK506组1年人/肾存活率为96.97%/93.94%,CsA组为96.77%/90.32%.FK506组4例患者(12.12%)发生急性排斥反应,CsA组11例(35.48%)发生急性排斥反应,差异显著(P<0.05).术后1个月内,FK506组胰岛素平均用量34.35 U/d,CsA组胰岛素平均用量28.15 U/d;术后1年,FK506组胰岛素平均用量14.09 U/d,CsA组胰岛素平均用量13.05U/d,同期两组胰岛素用量无统计学差异(P>0.05).FK506组中有21例(63.63%)患者需要降压治疗,5例(15.15%)患者需要降血脂治疗,3例(9.09%)患者出现肝功能损害,需要护肝治疗;CsA组有28例(90.32%)患者需要降压治疗(P<0.05),13例(41.94%)患者需要降血脂治疗(P<0.05),11例(35.48%)患者出现肝功能损害,需要护肝治疗(P<0.05),均差异显著.结论终末期糖尿病肾病肾移植患者,小剂量低谷值浓度FK506疗效好,副作用小,对糖代谢的影响与CsA相近.
作者:于立新;单海涛;付绍杰;杜传福;马俊杰;徐健;邓文锋;王亦斌 刊期: 2003年第11期
采用LabVIEW技术完成对心电、呼吸、无创血氧和无创血压信号的采集与处理,而后通过MATLAB模糊测量系统对采集的人体生理信号进行模糊预测分析.通过实验检验了人体生理信号检测、处理和模糊预测分析方法的可靠性.LabVIEW技术对人体生理信号的模糊预测分析是有效的,可用于检测阻塞性睡眠呼吸暂停患者的生理状态信号.
作者:徐现通;卢广文;马波 刊期: 2003年第11期
目的探讨胃底贲门癌手术入路的佳方法.方法将157例胃底贲门癌患者按手术入路分为经腹组(57例)和经胸组(100例),对比两组疗效.结果经腹组平均术中输血(164.91±36.83)m1,手术时间(219.04±10.72)min,住院时间(14.39±1.39)d,淋巴结清除数(6.04±2.84)个,未出现胸腔积液并发症,随访期间(3~60月)复发率22.80%;经胸组平均术中输血(575.50±40.12)ml、手术时间(286.40±7.94)min、住院时间(20.32±0.81)d,淋巴结清除数(3.62±2.56个),术后并发左侧胸腔积液15例,随访期间复发率41.00%,两组疗效有统计学差异.结论与经胸入路手术相比,胃底贲门癌经腹手术平均术中输血少、手术和住院时间短、淋巴结清除率高、肺部并发症少、术后复发率低,具有较好的临床疗效.
作者:郑永波;黄祥成;何仕平;吴承堂;姚学清 刊期: 2003年第11期
目的分析颅内室管膜瘤的MR表现.方法回顾分析13例经手术病理证实的颅内室管膜瘤的MR表现.结果脑室系统室管膜瘤10例,其中四脑室室管膜瘤3例、侧脑室室管膜瘤7例,其MRI T1WI呈等或稍低信号,T2WI呈不均匀高信号,瘤周无水肿,增强扫描呈不均质强化.脑实质室管膜瘤3例,幕上2例、幕下1例,肿瘤实质MRI T1WI信号稍低于脑实质,T2WI似灰质信号或稍高于灰质信号,肿瘤周围有轻度水肿,增强扫描肿瘤实质部分呈轻到中度强化.结论MRI表现有助于室管膜瘤的鉴别诊断.
作者:邱士军;张雪林 刊期: 2003年第11期
胫前粘液性水肿是一种自身免疫病变,可伴或不伴甲亢,在临床上尚无统一有效的治疗方案.作者近期在临床上遇到1例典型病例,采用局部激素治疗效果显著,现报告如下.
作者:关美萍;沈洁;薛耀明 刊期: 2003年第11期
目的克隆和构建带人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α.方法以大肠癌细胞株HT29的总RNA为模板,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),获得HIF-1α的cDNA,克隆入T载体,测序证实后克隆入真核表达载体pcDNA3.1+,酶切鉴定重组子.将构建好的pcDNA3.1+-HIF-1α用脂质体法转入HEK293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒的表达.结果扩增出HIF-1α cDNA全长,测序结果与Genbank记载完全一致,成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1+;建立了稳定的细胞株HEK293/PcDNA3.1+-HIF-1α.结论成功克隆和构建带人HIF-1α基因真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α,并证明其能在真核细胞内表达.
作者:傅锐斌;吴平生;戴铁英;赖文岩;邱建 刊期: 2003年第11期
目的对我们发现的中国人Brugada综合征新的SCN5A基因突变K317N进行体外定点诱变研究,并构建携带有基因突变K317N的pRc/CMV-hH1的表达载体.方法采用PCR定点突变技术,根据突变位置附近的两个单一限制性内切酶位点Age I/Sse 8387I设计一对定点诱变引物,将突变位点设计在引物上,通过PCR扩增,使扩增片段上含有所需要的突变位点,后将扩增片段克隆入pRc/CMV-hH1载体中.结果DNA测序表明,在预期位点巳经发生突变,SCN5A基因在第317密码子由赖氨酸(K)突变为天冬氨酸(N),成功实现定点诱变.结论PCR技术诱导定点突变,准确、高效.pRc/CMV-hH1(K317N)的成功构建,为进一步进行该突变的结构与功能研究奠定了基础.
作者:易绍东;孟素荣;崔英凯;陈哲明;彭健 刊期: 2003年第11期
目的制备细小病毒诊断芯片探针.方法利用Primer Premier 5.0针对细小病毒B19基因保守区域设计PCR引物,将PCR产物克隆pMD-18 T载体.结果序列分析显示,PCR产物均为细小病毒B19特异保守基因.结论利用PCR扩增产物制备诊断芯片探针是一种简便有效的方法.
作者:吕梁;马文丽;王洪敏;马晓冬;孙朝晖;郑文岭 刊期: 2003年第11期
目的观察碘仿在体内及体外的抑菌作用.方法①比较碘仿和四环素在体外对不同种类细菌的抑菌作用并绘制抑菌曲线;②建立48只肝外伤合并肝创面感染(分别用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单孢菌)大白兔模型,不同组肝创面分别填塞6%碘仿绷带、10%碘仿绷带、四环素软膏+普通纱布、生理盐水+普通纱布,术后1、3、7 d检验肝创面细菌并计数.结果体外抑菌实验证实碘仿组对大部分需氧菌的抑菌作用强于四环素组,对厌氧菌的抑菌作用与四环素类似;在大白兔体内,10%碘仿组对上述3种细菌抑菌作用显著优于四环素组(P0.01).结论碘仿对大部分细菌的抗菌作用强于四环素.
作者:唐力军;高毅;赵子粼;龙军;周东耀 刊期: 2003年第11期
目的探讨广东地区大肠癌发病特点.方法统计南方医院1986~2002年经病理确诊的所有大肠癌病例并进行分析.结果17年共收治大肠癌2 037例,其中男性患者1 165(57.19%)例、女性患者872(42.81%)例,男女比例为1.34:1.41~70岁为发病高峰(70.74%).发病人数从1994年来呈现较快增长的趋势.直肠仍为大肠癌的好发部位(55.87%),但结肠癌有明显上升趋势(44.13%).与中老年大肠癌病人相比,青年病人(年龄≤40岁)右半结肠癌发生率较高.根据Dukes分期,B、C和D三期病例共占96.17%,表明大肠癌患者就诊时大部分已为中、晚期.组织学类型主要为高、中分化腺癌(71.18%),而低分化癌、粘液癌也有较高比例(21.11%).青年大肠癌以低分化癌及粘液癌居多(35.96%),远高于中老年患者(12.74%),按Dukes分期则以C、D两期所占比例多.结论该地区大肠癌呈较快增长趋势,且患者就诊时多为中晚期.由于青年大肠癌多具有家族遗传倾向,因此对大肠癌应早发现、早诊断、早治疗,从而提高病人生存率.
作者:杨磊;丁彦青;张进华 刊期: 2003年第11期
目的研究红藻氨酸(Kainic acid,KA)诱导大鼠癫痫发作后海马内神经元和星形胶质细胞的反应变化情况.方法立体定向大鼠侧脑室内注射KA引起大鼠癫痫发作,用抗即早反应基因Fos蛋白和抗神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法,分别观察痫性发作后在各时间点反应性神经元和星形胶质细胞在海马各区的分布情况.结果KA诱导大鼠癫痫发作后,海马内Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多.癫痫发作30min后GFAP开始增多,1 h达高峰;1 h后Fos阳性产物开始增多,2 h达高峰.结论海马内反应性的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作后增加,反应性星形胶质细胞可能参与癫痫的发生及其调节.
作者:刘智良;徐如祥;杨志军;戴宜武;罗成义;杜谋选;姜晓丹 刊期: 2003年第11期
目的研究昆虫变态激素蜕皮甾酮(EDS)是否能抑制内皮细胞的凋亡.方法采用亚砷酸钠(Ars)致培养内皮细胞凋亡的模型,流式细胞术测定内皮细胞的凋亡细胞数、细胞间粘附因子-1及氧化状态,观察EDS对内皮凋亡的影响.结果40、80、160 mmol/L剂量的Ars均可引起培养内皮细胞凋亡数目增加,以160 mmo1/L剂量的Ars的作用强.EDS可影响Ars诱导的内皮细胞凋亡:50、200 mg/L EDS减少Ars诱导的内皮细胞凋亡,而800 mg/L EDS却增加内皮细胞凋亡.EDS(50、200 mg/L)还可减少Ars所致的细胞间粘附分子增加,但不能显著升高Ars所致的内皮细胞氧化状态降低(P>0.05).结论Ars可剂量依赖地诱导内皮细胞凋亡;EDS能剂量依赖地影响Ars诱导的内皮细胞凋亡;EDS(50、200mg/L)能减少内皮细胞的凋亡细胞数和细胞间粘附分子表达量,从而表现出对内皮细胞凋亡的保护作用.
作者:吴旭;王武军 刊期: 2003年第11期
目的介绍一种闭合房间隔缺损的微创伤非体外循环手术方法.方法对2002年1~12月在我院治疗的5例继发房间隔缺损患者经右前胸小切口直接闭合房间隔缺损.结果5例手术均1次成功,无残余分流,无封堵器脱落,平均住院时间7 d.结论该方法创伤小,操作简单,安全性高,具有推广应用价值.
作者:童健;阎玉生;钱希明;陈群清;陈坤堂;唐晓明 刊期: 2003年第11期
目的研究致敏受者细胞因子基因多态性与肾移植急性排斥反应的关系.方法应用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对97例术前群体反应性抗体阳性肾移植受者的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)的基因型进行测定,并探讨细胞因子基因型对急性排斥反应发生率的影响.结果97例致敏肾移植受者术后3个月内共有23例发生了急性排斥反应,其中TNF-α和IL-10高产量基因型组受者的急性排斥反应发生率分别高达51.9%和55.5%,显著高于相应的低产量基因型受者的12.9%和13.3%(P<0.01).联合TNF-α和IL-10发现,高TNF-α产量基因型和高、中IL-10基因型受者的急性排斥反应发生率为62.5%,显著高于两者均为低产量基因型者的8.5%(P<0.01).未发现TGF-β1、IL-6、IFN-γ细胞因子基因多态性与急性排斥反应的关系.结论TNF-α和IL-10基因多态性对致敏受者肾移植术后的急性排斥反应发生率有明显影响,测定TNF-α和IL-10基因型有利于制订合理的免疫抑制方案.
作者:顾新伟;赵明;李留洋;李民;钱俊 刊期: 2003年第11期
目的:建立小鼠溃疡性结肠炎动物模型并检测其肠粘膜中致炎细胞因子TNF-α、IL-1β的表达和NF-κB的激活.方法用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)口饲法制备小鼠UC模型;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对UC小鼠肠粘膜中TNF-α、IL-1β的表达水平进行半定量测定;应用免疫电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测急性期和慢性期UC小鼠肠粘膜细胞NF-κB的激活.结果模型组肠粘膜中TNF-α、IL-1β的表达较正常对照组显著增加(P=0.009),NF-κB的核内结合活性也显著增强。结论UC的发生、发展过程伴随致炎细胞因子表达的升高,可以加剧炎症,致上皮细胞凋亡.该过程可能受NF-κB激活的调控.
作者:王群英;陈村龙;王继德;马强;赖卓胜;张亚历 刊期: 2003年第11期
目的介绍一种利用L-精氨酸(L-ARG)制作成年大鼠皮肤坏死模型的新方法.方法给大鼠饮水中增加L-ARG,用量为500mg/kg@b.w.@d,时间1周左右.结果L-ARG可使50%左右的大鼠皮肤坏死、溃疡面形成.结论一定量的L-ARG可引起成年大鼠皮肤坏死,可用于制作皮肤坏死模型.该方法简捷、成模时间短、成模率高.
作者:尹艳茹;柏林 刊期: 2003年第11期
目的观察金钱鱼凋亡相关基因SaR(Scatophagus argus apoptosis related gene)对成纤维细胞增殖的影响.方法体外培养NIH-3T3细胞,应用脂质体将不同浓度的pcDNA3-SaAR真核表达质粒分别转染细胞并设立对照组进行比较,应用流式细胞术测定细胞凋亡率.结果SaAR基因可显著诱导NIH-3T3细胞凋亡,并呈现剂量依赖性(P<0.05).结论5aAR基因对体外培养的血管外膜成纤维细胞凋亡有一定的诱导作用.
作者:欧阳平;陈慧萍;赖文岩;杨文利;徐安龙 刊期: 2003年第11期