学术投稿

逆转录病毒介导人重组骨形态发生蛋白基因转染骨骼肌卫星细胞mRNA的表达

魏宽海;金丹;裴国献;王珂;陈滨;马忠立;胡罢生

关键词:骨形态发生蛋白7, 骨骼肌卫星细胞, 逆转录病毒载体, 组织工程
摘要:目的探讨逆转录病毒介导重组人骨形态发生蛋白7(recombinant human bone morphogenetic protein7,rhBMP7)基因转染骨骼肌卫星细胞的可行性及目的基因的表达情况.方法体外获取和培养大鼠骨骼肌卫星细胞,构建rhBMP7逆转录病毒载体,利用脂质体介导的基因转移技术转染包装细胞PT67,经G418筛选后,制备含目的基因的重组逆转录病毒液,病毒液感染骨骼肌卫星细胞,使用RT-PCR方法检测rhBMP7 mRNA的表达情况.结果成功地构建了逆转录病毒真核表达载体,逆转录病毒介导rhBM7基因转染的骨骼肌卫星细胞能有效地表达外源性rhBMP7的mRNA.结论采用逆转录病毒介导的方法可将rhBMP7转染至骨骼肌卫星细胞中,目的基因可在mRNA水平有效表达.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 铁过载和肝脏疾病

    铁是人体必需的微量元素之一,为几乎所有人体细胞正常生长所必需.铁缺乏的危害已被人们所共知,但机体内铁过多与某些疾病的关系,以往人们对之却知之较少.本文就机体内铁过剩和常见肝脏疾病的关系作一综述.

    作者:黄聪武;白岚 刊期: 2002年第04期

  • 噬菌体抗体库技术应用中的几个问题及其对策

    噬菌体抗体库技术已广泛应用于抗体工程研究领域,但在几个主要环节中(如构建、筛选及表达)仍存在一些尚待解决的具体问题,本文旨在探讨所遇问题及其解决方案.

    作者:侯云霞;董文其;王萍 刊期: 2002年第04期

  • 一个表达序列标签的克隆——应用限制性显示技术

    目的应用限制性显示PCR(restriction displaypolymerase chain reaction,RD-PCR)技术分离克隆SH-SY5Y细胞的基因片段.方法从SH-SY5Y细胞中分离提纯mRNA,然后以Oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3A Ⅰ酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物扩增后,与载体pMD18相连,克隆、测序.结果分离出一段cDNA,经Blast分析,发现与基因组17号染色体的一段序列具有高度的相似性,运用GenScan分析这段DNA序列,提示这段表达序列标签(expressed sequencetag,EST)可能是一个未知基因的一部分.结论 RD-PCR技术是一种简便、有效的分离克隆基因片段的方法,运用生物信息学对EST的染色体定位以及下一步的实验可能具有一定的指导意义.

    作者:张宝;马文丽;刘莉扬;宋艳斌;郑文岭 刊期: 2002年第04期

  • 颅咽管瘤增殖细胞核抗原表达与肿瘤复发的关系

    目的分析颅咽管瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)指数及其与肿瘤复发的关系.方法采用免疫组化方法检测43例颅咽管瘤组织中PCNA表达,分析不同病理特征颅咽管瘤PCNA指数的差异及与术后复发的关系.结果成釉细胞型颅咽管瘤PCNA指数显著高于鳞状乳头型颅咽管瘤(P<0.01);鳞状乳头型颅咽管瘤未见术后复发:在成釉细胞型颅咽管瘤中,复发组PCNA指数高于非复发组,但无统计学意义(P>0.05).结论不同病理特征颅咽管瘤细胞增殖潜能不同,成釉细胞型颅咽管瘤细胞活跃的增殖能力是导致术后复发的主要原因.

    作者:潘军;漆松涛;邓永键;丁彦青;彭林;李晓强 刊期: 2002年第04期

  • 群体反应性抗体技术及HLA配型在1700例肾移植中的应用研究

    目的探讨群体反应性抗体(panel reactive antibody,PRA)、HLA配型技术对肾移植近远期的效果.方法对拟行肾移植的患者运用PRA检测、HLA组织配型,要求HLA抗原3~6个位点相合,PRA阳性(20%以上)给予3~5次血浆置换,共1 700例作为第一组,未采用PRA、HLA组织配型的423例患者为第二组.观察两组肾移植术后免疫指标变化,近期急性排斥反应发生率以及HLA-A、B、DR位点对长期存活的影响.结果第一组肾移植术后环孢素A(cyclosporineA,CsA)用量减至5~7mg@kg-1@d-1,移植肾功能恢复时间2~16d,平均5 d,均未发生超急性排斥反应,发生急性排斥反应252例(14.8%),1年人/肾存活率高达98.6%/96.7%,3年人/肾存活率93.1%/87.3%,5年人/肾存活率88.1%/83.6%.第二组肾移植术后CsA用量8~12mg@kg-1@d-1,移植肾功能恢复时间4~30d,平均13 d,发生超急性排斥反应者9例(2.1%),急性排斥反应198例(46.8%),1年人/肾存活率86.7%/76.3%,3年人/肾存活率72.5%/67.9%,5年人/肾存活率69.5%/59.3%.结论PRA阴性加良好的HLA配型可杜绝超急性排斥反应的发生,降低急性排斥反应发生率,提高人/肾长期存活率.

    作者:于立新;姚冰;叶桂荣;杜传福;邓文锋;徐健;马俊杰;付绍杰;萧露露 刊期: 2002年第04期

  • 新型室内杀虫剂KR-100的药效、毒性测试及杀虫机制的初步研究

    目的研制新型高效长效的室内卫生害虫杀虫剂KR-100.方法科学配伍拟除虫菊酯类药物、控制药物释放物质、增效剂等,在一定条件下按照一定的工序制备KR-100,测试其药效、毒性、稳定性和长效性,并在扫描电镜下观察KR-100的成膜形态.结果杀虫剂KR-100具有良好的杀虫效果,且药效稳定、持久,在电镜下显示为多孔样膜状结构.结论新型杀虫剂KR-100杀虫效果好,药效持久,安全,有良好的开发应用前景.

    作者:支国舟;陈晓光;郑学礼;柴克生;陈金波;林立丰;蔡松武 刊期: 2002年第04期

  • 血管内皮生长因子在急性髓系白血病细胞中的表达

    目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在成人急性髓系白血病(AML)的发生发展中的作用.方法采用逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)的方法研究50位AML病人及16位正常人骨髓细胞及血浆VEGF的表达.结果部分正常人和大多数AML病人的骨髓细胞及白血病细胞系均表达VEGF.AML病人骨髓细胞VEGF表达阳性率(82%)明显高于正常人(30.76%)及骨髓移植后的AML病人(41.76%).难治型和非难治型AML病人血浆中VEGF浓度均显著高于正常人和AML骨髓移植后病人(P<0.01).除正常人与骨髓移植后AML病人血浆中VEGF浓度比较无统计学差异外(P>0.05),另与其他两者之间均有显著性差异(P<0.01).难治型和非难治型白血病病人骨髓细胞分泌的VEGF分别比正常人高11.0和7.3倍,且两者之间比较有显著性差异(P<0.01).结论VEGF在AML病人中存在异常表达,在AML的发病机制中可能起一定的作用,且可能成为判断AML病人预后指标之一.

    作者:徐丹;孟凡义;张燕 刊期: 2002年第04期

  • TNP-470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响

    目的研究TNP470对血管平滑肌细胞生长的影响.方法采用MTT法检测TNP-470对体外培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测TNP-470对细胞周期分布及其相关蛋白CDK4、CyclinD1和p27表达的影响.结果 TNP-470对血管平滑肌细胞生长具有抑制作用,IC50约为23.3μg/L.TNP-470处理组细胞S期比率[(15.43±5.16)%]和G2/M期比率[(9.49±2.70)%]明显低于对照组[(22.29±6.80)%、(16.51±8.61)%,P<0.05,P<0.05];而G0/G1期则相反,G0/G1期比率[(75.14±6.62)%]显著高于对照组[(60.38±7.23)%,P<0.001];处理组PI(23.76±7.92)明显小于对照组(39.62±7.23,P<0.001).TNP-470处理组CyclinDl蛋白(27.93±4.22)和CDK4蛋白(51.80±6.65)表达明显低于对照组82.13±3.28、59.65±7.34,P<0.05、P<0.05);但p27蛋白(51.27±3.75)表达较对照组(39.62±7.23)显著增多(P<0.001).结论 TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制血管平滑肌细胞的生长,该抑制作用与TNP-470影响VSMCs中CyclinDl、CDK4和p27蛋白的表达有关.

    作者:范应方;黄宗海;聂晶 刊期: 2002年第04期

  • 米非司酮对卵巢癌细胞的增敏作用及其机制的研究

    目的研究米非司酮对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用及其作用机制.方法用卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP和敏感细胞系COC1为实验对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对COC1/DDP细胞的增敏作用,流式细胞仪检测米非司酮对凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响.结果 1.25 μmol/L的米非司酮能够增强COC1/DDP对顺铂的敏感性,并使Bcl-2的阳性率从(23.80±0.44)%下降至(19.40±0.69)%(P=0.000),Bax从(12.75±0.25)%上升至(25.60±0.88)%(P=0.000),其逆转作用有剂量依赖性.结论米非司酮逆转卵巢癌COC1/DDP细胞对顺铂的耐药可能与下调Bc1-2的表达、上调Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比率有关.

    作者:秦棠妮;王丽莉 刊期: 2002年第04期

  • 脂质体介导a1,4-Gal T反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系SWO-38的作用

    目的研究α1,4半乳糖糖基转移酶(α1,4Gal T)基因反义寡核苷酸(antisense oligonuc1eotide,ASO)对脑胶质瘤细胞系SWO-38细胞的增值与凋亡的影响和与Fas表达的关系.方法采用脂质体介导的基因转染方法将α1,4Gal T基因ASO转入SWO-38细胞中.应用RT-PCR检测对α1,4Gal T mRNA表达的影响,克隆形成试验检测对细胞增值的作用,流式细胞术(FCM)和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的发生,FACS检测凋亡相关蛋白Fas表达的变化.结果脂质体介导的ASO转染后,经RT-PCR检测证实α1,4GalTmRNA基因的表达下降;克隆形成试验显示细胞生长明显受到抑制(P<0.01);DNA电泳图像呈凋亡表现;FCM检测表明,导入α1,4Gal T基因ASO的SWO-38细胞的凋亡明显增加(P<0.01);Fas蛋白表达水平明显下降(P<0.01).结论α1,4GalT基因ASO可诱导脑胶质瘤细胞系SWO-38细胞凋亡发生,其机制可能与fas基因调控有关.

    作者:郑刚;张积仁;刘发全;饶智国;王雄文;张新宇 刊期: 2002年第04期

  • 手托法预防剖宫产儿早期胃食管返流误吸的临床观察

    目的探讨手托法在预防剖宫产儿早期胃食管返流误吸(GER-A)的临床作用.方法针对导致剖宫产儿胃食管返流误吸的主要原因,根据溺水救治原理,对496例择期剖宫产儿采取促使胃食管、气管内容物排空的手托法.结果所有处理后的新生儿无GER-A发生,无其他并发症发生.结论表明手托法能够有效地促使胃食管及气管中的内容物排出,有效地防止GER-A的发生,同时能够随时进行Apgar评分,安全易行.

    作者:郭会平;李晖;郭靖;李彦文 刊期: 2002年第04期

  • 肾上腺转移癌的超声诊断

    目的评价B型超声检查对肾上腺转移癌的诊断价值及临床意义.方法对39例临床后确诊的肾上腺转移癌的声像图特点进行分析,并与CT、MRI、DSA、ECG进行对照.结果超声对肾上腺转移癌敏感性强、准确性高.结论超声对准确诊断肾上腺转移癌有重要临床价值.

    作者:黄李芳 刊期: 2002年第04期

  • 三种新抗癌疫苗靶基因

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 染色体的衰老

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 实验性眼直肌内血管显微分离及眼前段病理学观察

    目的探讨一眼同时行4条直肌手术时采用直肌内血管显微分离术对眼前段的影响.方法16只犬眼,8只行直肌联结术,8只行直肌转位术,术中对睫状前动脉(ACAs)行显微分离术予以保留,术后观察眼前段3个月,对虹膜睫状体行组织学和超微结构观察.结果大多数ACAs成功分离并保留,发现垂直肌的血管较水平肌粗,易分离.术后未发现眼前段缺血(ASI).光、电镜观察组织细胞无缺血改变.结论将血管显微分离术应用于斜视手术中,可使累及三条以上直肌的手术一次完成,避免了ASI的风险.手术中应重点保护垂直肌的ACAs.

    作者:李珍;董松梅;章应华;耿明 刊期: 2002年第04期

  • 基因测序“鸟枪法”

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 幽门螺杆菌对蒙古沙土鼠胃上皮细胞增殖的影响

    目的在幽门螺杆菌(H.pylori)长期感染蒙古沙土鼠腺胃模型基础上,探讨H.pytori感染诱致胃癌发生的可能机制.方法采用H.pylori国际标准菌株NCTC11637灌喂蒙古沙土鼠,建立H.pylori长期感染动物模型;用免疫组化及原位杂交方法检测H.pylori感染致胃上皮细胞增殖的改变.结果成功建立了H.pytori长期感染蒙古沙土鼠腺胃模型,其胃粘膜的组织学变化显示,H.pylori感染可致正常胃粘膜发生慢性胃炎→胃萎缩→胃上皮肠化生→胃上皮异型增生的发展过程.H.pylori感染能引起胃窦上皮细胞增殖增加(P<0.05),随着H.pylori感染时间的延长,表皮生长因子(epidermal growthfactor,EGF)mRNA及表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)mRNA的阳性信号表达呈逐渐增加的趋势(P<0.05).结论 H.pylori定植致胃窦上皮细胞增殖的异常,对正常胃窦粘膜向不典型增生进展的过程起重要作用;EGF及EGFR在mRNA水平的异常表达可能是H.pylori定植致胃窦上皮细胞增殖异常的重要原因.

    作者:姚永莉;徐波;宋于刚;张万岱;张亚历;张振书 刊期: 2002年第04期

  • 新型单纯疱疹病毒防止癌细胞扩散

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 6815例腰椎间盘突出症的手术治疗

    目的探讨腰椎间盘突出症的手术治疗方法.方法采用脊神经后支阻滞麻醉屈曲位经椎板间隙侧方入路椎间盘摘除术、双开窗扩大减压治疗中央宽基底型椎间盘突出钙化、小切口开窗潜行减压髓核摘除术等三种方法共治疗腰椎间盘突出症6 815例.结果6 815例患者中5 324例经过半年至14年(平均6.3年)随访,优4 260例(80.02%)、良855例(16.06%)、进步209例(3.92%),优良率达96.08%.随访中X线检查显示手术后相应椎间隙不同程度的变窄,未见腰椎失稳和腰椎滑脱.结论采用的三种方法与传统术式比较创伤小,可大限度地保留腰椎后部结构的完整性,且手术时间短、康复快.

    作者:靳安民;张辉;刘成龙 刊期: 2002年第04期

  • 单兵生命状态远程监视及定位系统的研究

    目的研制一种用于战场伤员搜寻、急救的远程无线生理监护、定位系统--单兵状态监视器系统.方法从心电信号中提取心率,用温度晶体测量体温,采用个人状态监视器全球定位系统技术(global position system,GPS)确定单兵的位置,以扩频通讯芯片组实现生命信息和位置信息的无线扩频传送.结果扩频通讯数据传输可达1000 m明视距离;GPS定位误差小于100m,心率监测在30~250beats/min的范围内误差不超过1 beat,体温监测在25~45℃范围内误差不超过0.1℃.结论实现了1 000 m距离内生命、位置信息融合后的无线扩频传送.

    作者:郭劲松;邓亲恺;龚剑 刊期: 2002年第04期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学