学术投稿

一个表达序列标签的克隆——应用限制性显示技术

张宝;马文丽;刘莉扬;宋艳斌;郑文岭

关键词:表达序列标签, 克隆, 限制性显示
摘要:目的应用限制性显示PCR(restriction displaypolymerase chain reaction,RD-PCR)技术分离克隆SH-SY5Y细胞的基因片段.方法从SH-SY5Y细胞中分离提纯mRNA,然后以Oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3A Ⅰ酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物扩增后,与载体pMD18相连,克隆、测序.结果分离出一段cDNA,经Blast分析,发现与基因组17号染色体的一段序列具有高度的相似性,运用GenScan分析这段DNA序列,提示这段表达序列标签(expressed sequencetag,EST)可能是一个未知基因的一部分.结论 RD-PCR技术是一种简便、有效的分离克隆基因片段的方法,运用生物信息学对EST的染色体定位以及下一步的实验可能具有一定的指导意义.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • DNA直接感染细胞核的新技术

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 摘要的类型及英文摘要写作中常见的问题

    本文列举了医学论文英文摘要的常见类型,并对目前国内中文医学期刊中英文摘要写作中存在的一些问题作了初步探讨.

    作者:王征爱;宋建武 刊期: 2002年第04期

  • 支气管和肺组织损伤的CT与X线胸片比较:37例临床分析

    目的探讨CT在支气管肺外伤诊断中的作用.方法回顾性分析并比较37例胸部外伤患者支气管和肺组织损伤的X线胸片和CT表现.结果轻度肺组织损伤9例,5例x线胸片漏诊;中度15例,x线胸片显示病变较CT显示的范围小,程度轻;重度13例,4例X线胸片漏诊.支气管损伤3例,X线胸片均不能显示,常规CT扫描显示不肯定.结论胸部创伤的急诊检查,不能满足于X线胸片的粗略显示,还应该重视CT检查.

    作者:商雪林;张玉忠;张雪林 刊期: 2002年第04期

  • 三种新抗癌疫苗靶基因

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 米非司酮对卵巢癌细胞的增敏作用及其机制的研究

    目的研究米非司酮对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用及其作用机制.方法用卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP和敏感细胞系COC1为实验对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对COC1/DDP细胞的增敏作用,流式细胞仪检测米非司酮对凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响.结果 1.25 μmol/L的米非司酮能够增强COC1/DDP对顺铂的敏感性,并使Bcl-2的阳性率从(23.80±0.44)%下降至(19.40±0.69)%(P=0.000),Bax从(12.75±0.25)%上升至(25.60±0.88)%(P=0.000),其逆转作用有剂量依赖性.结论米非司酮逆转卵巢癌COC1/DDP细胞对顺铂的耐药可能与下调Bc1-2的表达、上调Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比率有关.

    作者:秦棠妮;王丽莉 刊期: 2002年第04期

  • 衰老和DNA损坏

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 基因测序“鸟枪法”

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 一种新型胎儿宫内生长迟缓大鼠动物模型

    目的建立一种良好的胎儿宫内生长迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)动物模型,以利于IUGR的病因、病理及治疗学方面的研究.方法采用子宫动静脉中段部分结扎法,结扎孕龄为17d的SD大鼠子宫动静脉.结果结扎组SD大鼠体质量为(3.32±0.54)g和胎盘质量为(0.38±0.05)g,对照组SD大鼠体质量为(4.55±0.76)g和胎盘质量为(0.44±0.11)g,实验组和对照组有显著性差异(P<0.005);实验组IUGR发病率(33.33%)较对照组(1.14%)明显增高(P<0.005);实验组胎鼠死亡率(4.94%)与对照组(3.41%)无显著性差异(P<0.05).结论采用双侧子宫动静脉中段部分结扎法可建立良好的IUGR动物模型.

    作者:潘石蕾;余艳红 刊期: 2002年第04期

  • 染色体的衰老

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 应用正电子发射断层显像技术评价聚能刀射频治疗恶性肿瘤的近期疗效

    目的探讨以正电子发射断层显像(PET)技术评价恶性肿瘤射频治疗术近期疗效的可行性.方法应用PET对恶性肿瘤患者经聚能刀射频治疗前后靶区的放射性强度进行观察.结果聚能刀射频治疗后,33例患者54个治疗靶区均可测得治疗区域中心放射性缺损,提示治疗区域组织被灭活.结论PET检查对聚能刀射频治疗的近期疗效评价具有独特的重要作用.

    作者:廖旺军;罗荣城;康世均;吴湖炳;王传斌;罗宇玲;张鸣江 刊期: 2002年第04期

  • 肾上腺转移癌的超声诊断

    目的评价B型超声检查对肾上腺转移癌的诊断价值及临床意义.方法对39例临床后确诊的肾上腺转移癌的声像图特点进行分析,并与CT、MRI、DSA、ECG进行对照.结果超声对肾上腺转移癌敏感性强、准确性高.结论超声对准确诊断肾上腺转移癌有重要临床价值.

    作者:黄李芳 刊期: 2002年第04期

  • 脂质体介导a1,4-Gal T反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系SWO-38的作用

    目的研究α1,4半乳糖糖基转移酶(α1,4Gal T)基因反义寡核苷酸(antisense oligonuc1eotide,ASO)对脑胶质瘤细胞系SWO-38细胞的增值与凋亡的影响和与Fas表达的关系.方法采用脂质体介导的基因转染方法将α1,4Gal T基因ASO转入SWO-38细胞中.应用RT-PCR检测对α1,4Gal T mRNA表达的影响,克隆形成试验检测对细胞增值的作用,流式细胞术(FCM)和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的发生,FACS检测凋亡相关蛋白Fas表达的变化.结果脂质体介导的ASO转染后,经RT-PCR检测证实α1,4GalTmRNA基因的表达下降;克隆形成试验显示细胞生长明显受到抑制(P<0.01);DNA电泳图像呈凋亡表现;FCM检测表明,导入α1,4Gal T基因ASO的SWO-38细胞的凋亡明显增加(P<0.01);Fas蛋白表达水平明显下降(P<0.01).结论α1,4GalT基因ASO可诱导脑胶质瘤细胞系SWO-38细胞凋亡发生,其机制可能与fas基因调控有关.

    作者:郑刚;张积仁;刘发全;饶智国;王雄文;张新宇 刊期: 2002年第04期

  • 逆转录病毒介导人重组骨形态发生蛋白基因转染骨骼肌卫星细胞mRNA的表达

    目的探讨逆转录病毒介导重组人骨形态发生蛋白7(recombinant human bone morphogenetic protein7,rhBMP7)基因转染骨骼肌卫星细胞的可行性及目的基因的表达情况.方法体外获取和培养大鼠骨骼肌卫星细胞,构建rhBMP7逆转录病毒载体,利用脂质体介导的基因转移技术转染包装细胞PT67,经G418筛选后,制备含目的基因的重组逆转录病毒液,病毒液感染骨骼肌卫星细胞,使用RT-PCR方法检测rhBMP7 mRNA的表达情况.结果成功地构建了逆转录病毒真核表达载体,逆转录病毒介导rhBM7基因转染的骨骼肌卫星细胞能有效地表达外源性rhBMP7的mRNA.结论采用逆转录病毒介导的方法可将rhBMP7转染至骨骼肌卫星细胞中,目的基因可在mRNA水平有效表达.

    作者:魏宽海;金丹;裴国献;王珂;陈滨;马忠立;胡罢生 刊期: 2002年第04期

  • 新型单纯疱疹病毒防止癌细胞扩散

    作者: 刊期: 2002年第04期

  • 常见病原菌对环丙沙星的耐药现状

    目的调查医院常见病原菌对环丙沙星(ciprofloxacin,CIP)的耐药现状,为遏制细菌对其耐药性提供帮助.方法分析1997~2000年住院患者标本中分离出的3 800株病原菌对CIP药敏试验结果.结果4年间金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和肠球菌属几种主要革兰阳性球菌,对环丙沙星的耐药率较高,且有逐渐上升的趋势,耐药率分别由1997年的50%、25.6%和40.3%上升到2000年的62.2%、53.4%和63.6%.大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌肠杆菌属对CIP的耐药率均在40%以上,铜绿假单胞菌和不动杆菌对其耐药率2000年分别达到31.1%和34.0%.2000年分离到的189株致医院感染菌中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌对CIP的耐药率均高达70%以上.结论常见病原菌对CIP的耐药率较高,且4年间有逐渐上升之势,要严格限制此药的不合理应用.

    作者:张亚莉;耿穗娜;赖福才;汪能平 刊期: 2002年第04期

  • 新型室内杀虫剂KR-100的药效、毒性测试及杀虫机制的初步研究

    目的研制新型高效长效的室内卫生害虫杀虫剂KR-100.方法科学配伍拟除虫菊酯类药物、控制药物释放物质、增效剂等,在一定条件下按照一定的工序制备KR-100,测试其药效、毒性、稳定性和长效性,并在扫描电镜下观察KR-100的成膜形态.结果杀虫剂KR-100具有良好的杀虫效果,且药效稳定、持久,在电镜下显示为多孔样膜状结构.结论新型杀虫剂KR-100杀虫效果好,药效持久,安全,有良好的开发应用前景.

    作者:支国舟;陈晓光;郑学礼;柴克生;陈金波;林立丰;蔡松武 刊期: 2002年第04期

  • 慢性细菌性前列腺炎临床综合治疗(附52例报告)

    目的探讨慢性细菌性前列腺炎临床综合治疗疗效.方法对2000年6月~2001年6月间52例慢性细菌性前列腺炎患者进行临床综合治疗并总结分析.结果52例中治愈27例,占51.9%;好转21例,占40.4%;无效4例,占7.7%.结论根据Nickel治疗原则,临床运用综合治疗方法,治疗慢性细菌性炎患者取得较好疗效.

    作者:周大庆;文海涛;谭万龙 刊期: 2002年第04期

  • 噬菌体抗体库技术应用中的几个问题及其对策

    噬菌体抗体库技术已广泛应用于抗体工程研究领域,但在几个主要环节中(如构建、筛选及表达)仍存在一些尚待解决的具体问题,本文旨在探讨所遇问题及其解决方案.

    作者:侯云霞;董文其;王萍 刊期: 2002年第04期

  • 幽门螺杆菌对蒙古沙土鼠胃上皮细胞增殖的影响

    目的在幽门螺杆菌(H.pylori)长期感染蒙古沙土鼠腺胃模型基础上,探讨H.pytori感染诱致胃癌发生的可能机制.方法采用H.pylori国际标准菌株NCTC11637灌喂蒙古沙土鼠,建立H.pylori长期感染动物模型;用免疫组化及原位杂交方法检测H.pylori感染致胃上皮细胞增殖的改变.结果成功建立了H.pytori长期感染蒙古沙土鼠腺胃模型,其胃粘膜的组织学变化显示,H.pylori感染可致正常胃粘膜发生慢性胃炎→胃萎缩→胃上皮肠化生→胃上皮异型增生的发展过程.H.pylori感染能引起胃窦上皮细胞增殖增加(P<0.05),随着H.pylori感染时间的延长,表皮生长因子(epidermal growthfactor,EGF)mRNA及表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)mRNA的阳性信号表达呈逐渐增加的趋势(P<0.05).结论 H.pylori定植致胃窦上皮细胞增殖的异常,对正常胃窦粘膜向不典型增生进展的过程起重要作用;EGF及EGFR在mRNA水平的异常表达可能是H.pylori定植致胃窦上皮细胞增殖异常的重要原因.

    作者:姚永莉;徐波;宋于刚;张万岱;张亚历;张振书 刊期: 2002年第04期

  • 手托法预防剖宫产儿早期胃食管返流误吸的临床观察

    目的探讨手托法在预防剖宫产儿早期胃食管返流误吸(GER-A)的临床作用.方法针对导致剖宫产儿胃食管返流误吸的主要原因,根据溺水救治原理,对496例择期剖宫产儿采取促使胃食管、气管内容物排空的手托法.结果所有处理后的新生儿无GER-A发生,无其他并发症发生.结论表明手托法能够有效地促使胃食管及气管中的内容物排出,有效地防止GER-A的发生,同时能够随时进行Apgar评分,安全易行.

    作者:郭会平;李晖;郭靖;李彦文 刊期: 2002年第04期

南方医科大学学报杂志

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