学术投稿

ExoQuick 提取人血清外泌体方法改良及比较

王仁峰;耿振;李朝阳;鲍会静;李雪;周迪苏;宋士伟;刘运德

关键词:外泌体, 超速离心法, ExoQuick试剂盒法, 方法改良
摘要:目的:优化经ExoQuick 提取人血清中外泌体(exosome)的方法以获得高质量 exosome,并与超速离心法进行比较.方法:分别采用ExoQuick试剂盒及其改良方法、超速离心法提取人血清exosome.利用透射电镜进行形态学观察;2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法进行蛋白定量;Western blot检测exosome 表面标志物CD63;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达差异.结果:3种方法均可提取到血清exosome ,电镜下观察到圆形或椭圆形膜性囊泡结构;ExoQuick试剂盒法及其改进方法提取所得样本浓度显著高于传统超速离心法(P < 0.05);SDS-PAGE显示3种方法提取样本蛋白表达强度及丰度存在差异;Western blot表明3种方法提取exosome 均表达其表面特异性标志物CD63, 且含同浓度蛋白的情况下, ExoQuick 试剂盒法及改良法其 CD63 含量明显高于传统超速离心法. 结论:3 种方法均能提取血清中exosome,ExoQuick试剂盒法及改良方法提取exosome 效率更高, 同时改进方法能够有效地去除提取样品中的杂蛋白.
实用医学杂志相关文献
  • 恒温滚环扩增技术检测肠道病毒71型

    目的:建立一种三向连接构造(three-way junction formation,3WJ)组合引物介导的滚环扩增技术(primer generation-rolling circle amplification,PG-RCA)检测肠道病毒71型(EV71). 方法:根据EV71 VP1基因保守区设计3WJ模板T、3WJ引物P以及环状探针CP前体. 对EV71进行恒温滚环扩增,检测患者咽拭子中EV71. 结果:建立的新的滚环扩增技术能检测到amol级的合成RNA,检测临床标本时特异性强、敏感度好. 结论:3WJ组合PG-RCA恒温滚环扩增技术检测肠EV71特异性强、敏感性好、不需昂贵的PCR荧光检测仪,便于基层医院开展.

    作者:张宏萍;周敏;陆仁飞;李雪梅 刊期: 2015年第15期

  • 请选用规范医学名词

    作者: 刊期: 2015年第15期

  • 中老年人亚临床甲减对肺部感染发病的影响

    亚临床甲减是指促甲状腺激素(TSH)升高,血浆游离甲状腺素(FT4)正常,无明显临床症状的甲减. 其对血脂、心血管系统、精神状况以及生育能力的危害已被许多研究所证实,英国流行病学研究发现,8%的女性,3%的男性患有亚临床甲减, 在55岁以上的女性人群中, 该病的发病率高达10%,其每年向临床甲减转化的发生率为3%~4%[1]. 现该病已在临床工作中逐渐受到重视,但相关亚甲减与肺部感染的研究乏善可陈[2]. 本文收集了我院住院患者的相关资料,着眼于亚甲减发病率较高的中老年患者,发现了该病常见并发症的同时,观察到其对中老年患者肺部感染发病率也有明显影响,为给临床治疗提供依据,特报告如下.

    作者:李洋阳 刊期: 2015年第15期

  • 异丙酚不同镇静深度对全麻老年患者脑氧代谢的影响

    目的:评价异丙酚不同镇静深度对全麻老年患者脑氧代谢的影响. 方法:选择腹腔镜下胆囊切除术老年患者60例,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,年龄65 ~ 75岁,体质量45 ~ 75 kg. 采用随机数字表法分为3组(n = 20). 并根据异丙酚靶控浓度分为A组(3 μg/mL)、B组(4 μg/mL)、C组(5 μg/mL),在麻醉诱导后调整各组靶控浓度,于麻醉诱导前(T0)、气管插管时(T1)、切皮时(T2)、手术结束时(T3)时经桡动脉、颈内静脉球部采集血样行血气分析,计算动脉-颈内静脉血氧含量差(Da-jvO2)和脑氧摄取率(CERO2).结果:B、C两组T2、T3时Da-jvO2和CERO2显著低于 A 组,而 CjvO2则显著高于 A 组;而 B、C 两组间差异无统计学意义(P > 0.05);T1~T3时A组NI值显著高于B组,B组NI值显著高于C组(P < 0.05). 结论:异丙酚靶控浓度4 μg/mL更能改善全麻老年患者的脑氧代谢,减少脑氧摄取率.

    作者:郭瑞;何婉雯;王立勋;李辉;陈友利;李建宾 刊期: 2015年第15期

  • 全膝关节置换术后应用自体血回输装置有效性及安全性的Meta分析

    目的:以 Meta 分析的方法评价全膝关节置换术后使用自体血回输装置的有效性和安全性.方法:计算机全面检索 Pubmed、Embase、Cochrane Library、CBMdisc、CNKI、VIP、WANGFANG 等数据库,采用Cochrane 协作网推荐的 RevMan 5 . 3 . 5 软件进行 Meta 分析. 结果:共纳入随机对照试验文献 17 篇,共计1 993例患者.Meta 分析结果显示,术后使用自体血回输装置可减少术后异体血输血率,与负压引流装置组对比,差异具有统计学意义[16.59% vs 37.47%, OR:0.28(0.14 ~ 0.55), Z = 3.67, P < 0.000 1],而与不引流组对比,其差异无统计学意义,但具有一定临床价值及意义[13.05% vs 16.91%, OR:0.73(0.47 ~ 1.13), Z = 1.41, P = 0.16]. 在术后第3天血红蛋白(Hb)水平、住院时间、术口感染这三个结局指标上,自体血回输装置与负压引流装置/不引流比较差异无统计学意义. 结论:本系统评价为自体血回输装置降低输血率的临床有效性提供循证医学的证据支持,对术后第3 天Hb 水平、住院时间、术口感染等有效性及安全性进行系统评价,与常规负压引流装置/不引流进行比较,术后使用自体血回输装置是安全可靠的.

    作者:洪坤豪;潘建科;潘碧琦;杨伟毅;刘军;谢辉;郭达 刊期: 2015年第15期

  • 小机器跳数对宫颈癌调强计划的影响

    目的:探讨宫颈癌术后调强放疗计划设计中小机器跳数对计划质量的影响,为计划设计时小机器跳数的设置提供参考.方法:运用Pinnacle治疗计划的DMPO优化方式对10例宫颈癌病例进行调强计划设计,小机器跳数分别取4 MU、5 MU、6 MU、8 MU、10 MU、12 MU、15 MU , 每个患者共得到 7 个计划,所有计划的小子野面积均取5 cm2,计划的优化目标与约束条件与小机器跳数为4 MU的计划保持一致. 处方剂量为95% PTV 45 Gy,1.8 Gy/次. 根据剂量体积直方图统计靶区V95%、V105%、V110%、Dmean、适形指数(CI)及均匀指数(HI),危及器官受照射体积占总体积的百分比(V30%、V40%),子野数量及机器跳数.将结果与小机器跳数为4 MU的计划相比较.结果:随着小机器跳数的增加,V95%小幅降低,V110%与Dmean小幅增加,而V105%、增加的幅度较大,适形度降低,均匀性变差. 统计学比较显示当小机器跳数低于10 MU时,V105%、V110%、Dmean、CI、HI的均P > 0.05,当小机器跳数≥10 MU时,靶区的部分剂量学指标开始出现显著性差异. 随着小机器的增加,子野数目显著降低,机器跳数及危及器官剂量的变化均未出现显著性差异.结论:在使用Pinnacle3治疗计划系统设计宫颈癌调强计划时,小机器跳数可适当提高,这样不会引起靶区及危及器官剂量的显著改变,同时可以达到减少子野数量的效果.

    作者:陈亮;艾源;倪佰会;娄凤君;王焕坤 刊期: 2015年第15期

  • 慢性胃炎不同病理类型与水通道蛋白3、水通道蛋白4表达的相关性

    目的:探讨不同病理类型胃炎与胃黏膜水通道蛋白3(AQP3)、水通道蛋白4(AQP4)表达的相关性. 方法:胃镜下取胃黏膜,通过普通病理组织学检测胃黏膜病理类型及其活动性,免疫组织学检测AQP3、AQP4表达. 结果:慢性非萎缩性胃炎胃黏膜AQP3、AQP4蛋白表达均明显高于非胃炎组和慢性萎缩性胃炎组,差异有显著性(P < 0.01),其中活动期的慢性非萎缩性胃炎 AQP3、AQP4 蛋白表达升高更为明显,慢性萎缩性胃炎胃黏膜AQP3、AQP4表达低于非胃炎组,但差异无统计学意义,活动期的慢性萎缩性胃炎AQP3表达明显低于非胃炎组,差异有显著性(P < 0.05). 结论:不同病理类型的慢性胃炎胃黏膜AQP3、AQP4表达不同,AQP3、AQP4可能成为不同病理类型的慢性胃炎诊断和治疗的靶点之一.

    作者:杨鹏;徐华;张华;车会刚;王建祥 刊期: 2015年第15期

  • 干扰高迁移率族蛋白A2的表达对NB4细胞裸鼠种植瘤生长的影响

    目的:建立裸鼠体内 NB4/ShHMGA2 细胞种植瘤模型, 探索稳定敲低高迁移率族蛋白 A2 (HMGA2)的表达对白血病细胞生物学形状的影响. 方法:每组5只4~5周龄的BALB/c裸鼠,经4 Gy 60 Co照射后腋窝皮下分别接种 8 × 106个NB4/ShHMGA2、NB4/ShControl 细胞(对照组),观察成瘤性,3 周后处死裸鼠.免疫组化法检测NB4细胞种植瘤组织切片中Ki-67蛋白的表达水平.结果:NB4/ShHMGA2及对照细胞在裸鼠腋下均成瘤,NB4/ShHMGA2细胞肿瘤生长速度明显慢于对照组,NB4/ShHMGA2 细胞与对照组瘤体体积分别为(1 484.25 ± 156.342)和(3 228.674 ± 285.64)mm3,差异有统计学意义(P < 0.05);NB4/ShHMGA2细胞与对照组瘤块重量分别为(650.46 ± 85.12)和(2 135.33 ± 198.05)mg,差异有统计学意义(P <0.05). 免疫组化检测显示NB4/ShHMGA2细胞组种植瘤组织切片Ki-67蛋白表达水平低于对照组. 结论:敲低HMGA2的表达在体内可抑制白血病细胞的增殖.

    作者:魏小平;谭丽;潘庆珍;林伟尚 刊期: 2015年第15期

  • 文拉法辛联合吗啡治疗中、重度癌性疼痛的效果观察

    目的:评价文拉法辛联合盐酸吗啡缓释片治疗中、重度癌性疼痛患者的镇痛效果和药物不良反应. 方法:将中、重度癌痛122例患者随机分组,其中62例予以文拉法辛联合盐酸吗啡缓释片(试验组),60例予以盐酸吗啡缓释片治疗(对照组),评价两组疗效和副反应. 结果:两组用药后疼痛强度、中度以上疼痛缓解率第一天、第二天、第三天差异有显著性(P < 0.05),第四天及以后差异无显著性(P > 0.05),试验组优于对照组. 平均维持剂量、 平均大剂量及达到维持剂量平均时间试验组与对照组分别为 57.5 mg/d vs 80.4 mg/d、59.0 mg/d vs 80.7 mg/d、1.4 h vs 1.9 h,两组差异有统计意义(均P < 0.05). 消化道反应试验组优于对照组(27.4% vs 53.3%)(P < 0.05). 结论:文拉法辛联合吗啡治疗癌性疼痛缓解率高,吗啡剂量减少,副反应少.

    作者:黄小红;周斌 刊期: 2015年第15期

  • 水通道蛋白在肺部疾病诊断治疗中的研究进展

    水通道蛋白(Aquaporins, AQPs)是一组构成水通道并与水通透性密切相关的细胞膜转运蛋白, 广泛存在于动物、 植物和微生物界. 它的发现和研究在分子水平上进一步阐释了水跨膜转运的调节机制. 从AQP 的发现至今 20余年间,有关它的研究越来越多,也越来越深入,尤其是在肾脏疾病及中枢神经系统疾病中.鉴于AQP对水分子跨膜转运的重要调节作用, 肺作为存在水液交换的又一重要脏器,有关AQP对肺液体平衡的调节作用同样引起重视. 本综述主要讨论了 AQP 与肺液体调节的相关性及其在肺部疾病诊疗中的新研究进展及未来发展趋势.

    作者:沈楚婕;张伟 刊期: 2015年第15期

  • 自制水囊行后鼻孔填塞治疗高血压患者后鼻孔出血78例

    高血压患者后鼻孔出血是耳鼻喉科常见急症,可发生于单侧,亦可发生于双侧,可间歇反复出血,也可持续出血而危及生命. 此类患者常出血量较多,导致鼻内镜检查及处理受到限制[1].而采取纱球后鼻孔填塞后患者感觉较为痛苦, 且临床并发症颇多. 因此,继续探讨迅速、有效的止血措施非常重要. 2013年7月1日至2014年7月1 日, 我科应用自制水囊行后鼻孔填塞治疗中老年高血压后鼻孔出血患者78例,疗效满意,现报告如下.

    作者:刘铭芳;庞康;邓斌 刊期: 2015年第15期

  • 超声引导下球囊扩张法建立标准通道经皮肾镜取石508例

    目的:探讨超声引导下球囊扩张法建立标准通道的经皮肾镜取石术的安全性和有效性. 方法:回顾2012年12月至2014年12月于四川省人民医院泌尿外科行超声引导下穿刺、球囊扩张法建立标准通道的经皮肾镜碎石、取石术治疗上尿路结石的 508 例患者资料,患者男女比例 340:168,平均年龄(48.4 ± 12.0)岁;共540 侧上尿路结石,包括肾结石 495 侧(91.7%),输尿管上段结石 45 侧(8.3%);其中鹿角形结石98侧(18.1%),多发结石335侧(62.0%),单发非鹿角形结石107 侧(19.8%). 既往曾行开放手术取石者31例;平均结石大径(31.3 ± 11.9)mm. 结果:共完成手术559例次,均一期成功建立通道,其中单通道手术543例次、双通道手术16例次. 平均手术时间(79.3 ± 38.1)min,平均首个通道建立时间(8.2 ± 3.0)min,平均结石处理时间(40.5 ± 35.4)min;术后平均住院时间(7.9 ± 2.9)d. 一期手术结石清除率80.4%,其中单发非鹿角形结石为100.0%、多发结石及鹿角形结石75.5%;再次手术28 例(再次经皮肾镜手术19 例,输尿管软镜手术9例),终手术清石率85.4%. 术中及术后并发症68例(12.2%),其中术后发热45例(8.1%),无感染性休克患者;接受输血22例(3.9%),行选择性肾动脉栓塞5 例(0.9%),无肾切除患者. 无中转开放手术,气胸1例,无其他毗邻脏器损伤. 结论:超声引导下球囊扩张法建立标准通道的经皮肾镜取石术对于上尿路结石的治疗安全有效.

    作者:黄建林;廖勇;安宇;黄翔;何鹏;邱明星 刊期: 2015年第15期

  • 消痈止痛饮内服外用治疗早期肛痈35例

    肛痈又称肛门痈疽、肛周脓肿,指发生于肛门与肛周范围内的疮痈. 本病占肛肠疾病的 34%,好发于青年男性,且随着饮食结构、作息规律等变化,近年来该病的发病率有递增的趋势. 早期肛痈也称为肛痈初起期,此时火毒蕴结,经络阻塞,气血凝滞,但脓液尚未形成. 根据《金匮要略》等中医理论,未成脓期,当治以消法,使邪毒消散 [1]. 肛痈在西方医学中属肛门直肠周围脓肿的范畴,是指肛门直肠周围组织及间隙内发生的急慢性化脓性感染. 肛痈的治疗以手术为主,对肛周脓肿初期炎症浸润尚未化脓者,也可根据炎症的临床表现,选用抗生素治疗. 本研究选择 70 例早期肛痈患者,分为观察组和对照组,分别予以中西医治疗, 观察比较中西疗法治疗早期肛痈的临床疗效.

    作者:梁冬旭 刊期: 2015年第15期

  • 肝硬化营养支持治疗的研究进展

    肝硬化患者常存在营养不良,营养不良与腹水、肝性脑病、感染等并发症及病死率有关[1-2]. 营养支持治疗可改善肝硬化患者的生存质量及临床预后[3-4]. 然而,在我国肝硬化的营养支持治疗并未引起临床医师足够重视, 即使给予了一定的治疗,其主观性、随意性也较大. 另外,营养风险筛查与营养评定本是营养诊疗的两个基本步骤, 对下一步的营养支持治疗至关重要, 但国内多数文献常将其混为一谈,许多临床医师更是如此. 2011 年美国肠外肠内营养学会(The American Society for Parenteral and Enteral Nutrition , ASPEN)临床指南[5]明确指出:营养风险筛查、评定及支持治疗是营养诊疗的关键步骤, 建议对住院患者进行营养风险筛查; 对筛查出有营养风险的患者进行营养评定; 对筛查和评定出有营养风险和营养不良的患者进行营养支持治疗. 本文以营养风险、筛查及支持治疗为主线,就肝硬化营养支持治疗的研究进展进行综述.

    作者:刘林玲;颜琼;汪敏;邓明明 刊期: 2015年第15期

  • 羟考酮缓释片转换为芬太尼贴剂出现呼吸抑制1例

    患者男,42岁. 2年前行乙状结肠癌根治术,术后病理:肿瘤位于乙状结肠,大小 3.6 cm × 4.0 cm,为溃疡型中低分化腺癌,肿块切缘阴性,肿瘤侵出浆膜,周围脂肪组织内结节形成. 送检腹膜结节为癌结节. 自检肠周淋巴结1/7枚见癌转移.后病灶进展,腹部CT提示:乙状结肠术后改变,周围局部肠系膜轻度增厚、粘连,左上腹小肠系膜间隙、髂总动脉分叉之间、吻合口周围多个软组织结节影, 大直径 22 cm ,转移病灶考虑. 患者出现脐周、腰背部疼痛,考虑为癌性疼痛,长期予以羟考酮缓释片口服. 予以姑息性化疗多次,病灶稳定, 患者自行调整羟考酮缓释片早口服70 mg ,晚口服90 mg ,间隔时间12 h,疼痛控制可,NRS 法评分 1 分左右,无明显恶心、呕吐,口服通便药物,二便正常,入院准备再行化疗以及姑息性粒子植入.

    作者:韩海成 刊期: 2015年第15期

  • 剔除Bcl-2基因对胃癌细胞HGC-27凋亡及5-氟尿嘧啶敏感性的影响

    目的:探讨剔除Bcl-2表达对胃癌HGC-27细胞凋亡、增殖及5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响.方法:将 HGC-27 细胞分为 5 组:空白对照组、阴性对照组(对照 siRNA )、干扰组( Bcl-2 siRNA )、5-FU 组( 5-FU )、联合组( Bcl-2 siRNA 与 5-FU );通过流式细胞术、MTT 方法检测 HGC-27 细胞凋亡、增殖水平,用 ELISA 法测定半胱氨酸蛋白酶的活力及 Cytochrome C 释放水平. 结果:转染 Bcl-2 siRNA 能提高HGC-27 细胞凋亡率,降低肿瘤细胞的增殖率;相对于 5-FU 单独处理组,转染 Bcl-2 siRNA 与 5-FU 联合组的细胞凋亡水平明显上升, 细胞增殖率显著降低,Caspase-3 和 Caspase-9 活力显著升高,Cytochrome C释放水平亦显著增加(P < 0.01). 结论:剔除Bcl-2基因能诱导HGC-27细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖,增强5-FU 的敏感性.

    作者:欧阳小明;吴坤河;曾涛 刊期: 2015年第15期

  • 自制单孔多通道装置在基层医院开展单孔腹腔镜技术的应用价值

    单孔腹腔镜技术是目前微创外科的热点.国内外学者已开展了单孔腹腔镜手术[1-3]. 受单孔通道商品化及单孔腹腔镜操作器械价格昂贵等原因的制约,单孔腹腔镜技术难以向基层医院普及.我院自2014年1-12月应用自制单孔多通道装置及常规腹腔镜操作器械成功在基层开展了单孔腹腔镜手术.现报告如下.

    作者:唐松林;韩芳;赵海生;张晓华;黄明华 刊期: 2015年第15期

  • 整合素与肿瘤细胞耐药

    整合素是一类存在于细胞表面的跨膜糖蛋白受体,能通过促进细胞-细胞和细胞-细胞外基质之间的相互作用,以及介导多种细胞信号传导系统的活性而参与细胞生存维持、细胞周期调节、细胞迁移和细胞凋亡等重要生理过程.近来研究发现, 整合素也在肿瘤细胞耐药机制的形成中发挥重要作用,可望成为肿瘤治疗的新靶点.

    作者:吕帅;王艳林;艾文兵 刊期: 2015年第15期

  • 不良发声性嗓音疾病的门诊电子喉镜下手术治疗和护理体会

    目的:探讨电子喉镜下不良发声性嗓音疾病的手术治疗和护理体会. 方法:在表面麻醉下,对1 264例不良发声性嗓音疾病的患者,在门诊行电子喉镜下病变摘除术;通过对患者进行术前心理疏导、术后对患者的院外健康宣教,达到佳的护理效果. 结果:其中1 261 例患者均一次性手术成功,无严重并发症发生. 仅3例患者因息肉较大,患者过度紧张,配合欠佳,未能一次性切除而改行全麻支撑喉镜下 CO2激光切除获得成功. 结论:患者喉部表面经充分麻醉后,术者依据病变的性质、大小,使用合适的钳夹方式,可以有效地提高手术质量.术前、术中、术后细致有效的护理及对术后患者发音方面详细入微的健康宣教可以大限度避免日后复发,提高疗效.

    作者:曾芳芳;彭新宇;王路;杨华 刊期: 2015年第15期

  • ExoQuick 提取人血清外泌体方法改良及比较

    目的:优化经ExoQuick 提取人血清中外泌体(exosome)的方法以获得高质量 exosome,并与超速离心法进行比较.方法:分别采用ExoQuick试剂盒及其改良方法、超速离心法提取人血清exosome.利用透射电镜进行形态学观察;2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法进行蛋白定量;Western blot检测exosome 表面标志物CD63;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达差异.结果:3种方法均可提取到血清exosome ,电镜下观察到圆形或椭圆形膜性囊泡结构;ExoQuick试剂盒法及其改进方法提取所得样本浓度显著高于传统超速离心法(P < 0.05);SDS-PAGE显示3种方法提取样本蛋白表达强度及丰度存在差异;Western blot表明3种方法提取exosome 均表达其表面特异性标志物CD63, 且含同浓度蛋白的情况下, ExoQuick 试剂盒法及改良法其 CD63 含量明显高于传统超速离心法. 结论:3 种方法均能提取血清中exosome,ExoQuick试剂盒法及改良方法提取exosome 效率更高, 同时改进方法能够有效地去除提取样品中的杂蛋白.

    作者:王仁峰;耿振;李朝阳;鲍会静;李雪;周迪苏;宋士伟;刘运德 刊期: 2015年第15期

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主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所