学术投稿

In-Fusion技术构建Ⅰ型钠通道与红色荧光蛋白共表达载体及其突变载体

刘超;汤斌;曾杨;于美娟;石奕武;廖卫平

关键词:钠通道, 红色荧光蛋白, In-Fusion技术, 诱变, SCN1A, 癫痫
摘要:目的:构建Ⅰ型钠通道(NaV1.1)与红色荧光蛋白(DsRed)共表达载体及其突变载体.方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到DsRed真核细胞表达载体(pCMV-IRES-DsRed).限制性内切酶对载体进行酶切并回收线性载体片段,PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到pCMV-SCN1A-IRES-DsRed.将其转染HEK293T细胞,Western blot检测NaV1.1的表达.定点诱变试剂盒对其进行定点诱变.结果:成功构建NaV1.1与DsRed共表达载体,SCN1A基因所编码的第1 623位密码子由谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala).结论:NaV1.1与DsRed共表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致NaV1.1功能的改变奠定了基础.
实用医学杂志相关文献
  • 多重荧光STR-PCR方法在血友病A携带者产前基因诊断中的应用

    目的:通过血友病A家系遗传连锁分析,建立血友病A携带者产前诊断方法.方法:采用多重荧光STR-PCR方法对50例正常女性进行检测和20个血友病A家系进行连锁分析.结果:DXS15、DXS9901、G6PD、DXS1073、DXS1108和F8Civs13的杂合率分别为88%、84%、20%、62%、22%和30%;用这6个位点提供的遗传信息成功为20个血友病A携带者进行了产前诊断.结论:多重荧光STR-PCR方法是一种快速、简便、实用的血友病A产前诊断方法.

    作者:李少英;马晓燕;张慧敏;王晓蔓;黎青 刊期: 2011年第11期

  • 预防注射抗狂犬病血清引起局部反应的方法探讨

    目的:探讨减轻或预防因注射抗狂犬病血清引起的局部反应的方法.方法:156例注射抗狂犬病血清患者随机分为4组:空白组、对照1组(注射后72 h内给予湿热敷)、对照2组(注射后72 h 内给予土豆片外敷)、实验组(注射后72 h内给予湿热敷30 min + 土豆片外敷).冬季用保鲜膜固定,夏季用纱布绷带固定.结果:实验组局部反应的发生率、局部反应的严重程度明显低于空白组、对照1组、对照2组.结论:注射后72 h给予湿热敷30 min + 土豆片外敷可以减轻或预防注射抗狂犬病血清引起的局部反应.

    作者:李晓华;陈丹红;李玲娇 刊期: 2011年第11期

  • 帕瑞昔布对神经外科经蝶入路术后疼痛和机体应激相关细胞因子的影响

    目的:观察帕瑞昔布对经蝶入路术后机体应激相关细胞因子和术后疼痛的影响.方法:经蝶入路手术患者90例,分为超前镇痛组、术后镇痛组和对照组,比较给药前后各组ET-1、TNF-α、IL-6变化,VAS疼痛评分,术后曲马多使用人次数.结果:对照组术后ET-1、TNF-α、IL-6水平较术前显著升高(P < 0.05),VAS评分较其他两组高(P < 0.05);术后曲马多使用人次数对照组高于其他两组(P < 0.05).结论:帕瑞昔布能明显缓解围手术期的过度应激反应,有效减轻神经外科术后疼痛.

    作者:马薇涛;李红英;于卫;赵国栋 刊期: 2011年第11期

  • 异丙酚对大鼠胚胎神经干细胞增殖及凋亡的影响

    目的:探讨异丙酚对体外培养大鼠胚胎神经干细胞增殖及凋亡的影响.方法:分离培养胚胎神经干细胞并用Nestin鉴定,采用Brdu、MTT法观察异丙酚对胚胎神经干细胞增殖的影响,流式细胞术检测异丙酚对胚胎神经干细胞凋亡的影响.结果:分离培养的神经干细胞95%以上呈Nestin阳性,不同浓度异丙酚组Brdu阳性细胞百分数差异无显著性(P = 0.766),MTT显示异丙酚剂量增加生存率逐渐降低,异丙酚剂量增加细胞凋亡百分数增多.结论:临床相关剂量异丙酚对体外培养大鼠神经干细胞增殖没有影响,但能引起细胞凋亡.

    作者:肖华平;古妙宁;肖金仿 刊期: 2011年第11期

  • 天津市和平区居民主客观健康状况相关回归分析

    目的:通过调查社区居民主观健康及客观健康的现状,分析影响居民主观健康认知的客观因素,进而探讨影响社区居民健康的主要问题,并提出促进健康的方法.方法:随机抽取社区居民,使用<社区居民卫生调查表>调查居民的客观健康状况,同时使用<自测健康评定量表(SRHMS)>调查居民的主观健康状况,对调查结果进行相关分析和回归分析.结果:居民的生活行为方式、基本健康知识水平及患病情况与自测健康水平相关,相关系数分别为r = 0.200、r = 0.182、r = 0.159;合理饮食和自我保健意识与自测健康水平呈负相关,r = -0.011、r = -0.016,但相关性无统计学意义;生活行为方式、基本健康知识水平及患病情况3个因素均进入自测健康的回归方程.结论:居民普遍认为拥有良好的生活行为方式,掌握了一定的健康知识,并对自身已患疾病的了解有肋于保持一定的健康水平.但是居民认为饮食是否合理、是否有自我保健意识与自身健康无关,因此需要社区卫生工作者加强对居民的健康教育,普及定期的体检和重点慢性病的筛查工作,增加居民对自身的身高、体重、血压等基本健康状况的检查.

    作者:陈晶;毛富强;王连胜;詹启生 刊期: 2011年第11期

  • 悬浮芯片检测血清HIF-1α和Her-2水平对于乳腺癌的诊断价值

    目的:探讨乳腺癌血清中HIF-1α 和Her-2 的表达水平、二者相关性及其对乳腺癌临床诊断的价值.方法:悬浮芯片法检测117 例乳腺原发癌、10例复发乳腺癌、20例乳腺良性肿瘤和31例正常人血清HIF-1α和Her-2含量.结果:原发、复发乳腺癌血清HIF-1α和Her-2水平高于良性肿瘤和正常人(P < 0.01),复发乳腺癌高于原发乳腺癌(P < 0.05),良性肿瘤和正常人血清中HIF-1α和Her-2的水平无统计学差异(P > 0.05);不同病理类型组内血清HIF-1α和Her-2含量有统计学差异(P < 0.05);乳腺癌患者血清HIF-1α和Her-2的水平呈正相关( P = 0.00).结论:血清HIF-1α和Her-2能准确反映乳腺癌的生物学特性,是评估乳腺癌患者预后的重要指标.

    作者:杨华锋;李占文;纪术峰;吴爱国 刊期: 2011年第11期

  • 颗粒细胞凋亡在卵泡闭锁中的研究进展

    青春与美丽是女性永恒的追求,然而因年龄渐长,卵巢衰老却不可避免.卵巢衰老导致心血管疾病、骨折、老年痴呆等发病率增加,严重影响女性的生存质量.卵泡数目的减少、周围微环境的改变及其对外界刺激的反应力降低是卵巢衰老的主要原因,而卵泡数目的减少与卵泡闭锁密切相关.女性一生中能够发育成熟并终释放的卵泡仅400 ~ 500个.因此,有超过99.9%的卵泡发生闭锁并终消失.颗粒细胞凋亡是启动卵泡闭锁的重要机制.卵泡闭锁受到多种因素调控,如下丘脑-垂体-性腺轴、卵巢微环境、各种调节因子等.本文就与颗粒细胞凋亡相关的因素在卵泡闭锁中的研究进展进行综述.

    作者:杨书红;罗爱月;王世宣 刊期: 2011年第11期

  • 成人法洛四联症的围术期管理

    目的:探讨成人法洛四联症的围术期管理经验.方法:2009年9月至2010年8月,手术矫治大于14岁的成人法洛四联症39例,均采用胸部正中切口、低温体外循环下行一期矫治术.均行右室流出道切口,32例加作右心房切口,用涤纶片修补室间隔缺损,右室流出道切口用自体心包片外加涤纶补片扩大,30例合并肺动脉狭窄或者肺动脉瓣环小者作跨瓣环补片.结果:全组无围术期死亡.1例急性肾功能衰竭用血液滤过治疗后肾功能恢复.Ⅲ度房室传导阻滞1例,术后第3天恢复窦性心律.术后因胸内出血而需再次开胸止血1例.随访1 ~ 12个月,无晚期死亡,患者心功能均恢复至Ⅰ或Ⅱ级.结论:手术矫治成人法洛四联症可取得满意的临床结果,彻底的畸形纠正和合理的围术期处理是手术成功的关键.

    作者:王克学;王平凡;杨再珍;张力;谌启辉 刊期: 2011年第11期

  • 胸膜孤立性纤维性肿瘤临床病理特征及免疫组化研究

    目的:探讨胸膜孤立性纤维性肿瘤(SFT)的临床表现、组织学特征、免疫组化表达及鉴别诊断.方法:对12例SFT病例进行组织学观察,并行免疫组化CD34、Vim、CD99、Bcl-2、SMA、CK5/6、CD68、CD117、S-100、Mesothelial Cell (MC)和Calretinin (Cal)蛋白染色.结果:免疫组化染色示12例SFT CD34 100%阳性(12/12)、Vim 100%阳性(12/12)、CD99 75.0%阳性(9/12)、Bcl-2 83.3%阳性(10/12);SMA、CK5/6、CD68、CD117、S-100、MC和Cal均阴性.结论:SFT是一组形态多样,起源于一种CD34阳性的树突状间叶细胞的良性肿瘤,确诊有赖于组织学及免疫组织化学检查.SFT的生物学行为取决于肿瘤的大小及生长方式,手术切除肿瘤是治疗SFT好的治疗手段,完全切除肿块者预后较好.

    作者:邢荣格;张荣菊;张晓玲;田亮;苗玉;张欣;周玮玮 刊期: 2011年第11期

  • 阿托伐他汀对早期糖尿病肾病老年患者外周血NF-kB和尿白蛋白排泄率的影响

    目的:观察阿托伐他汀对早期糖尿病肾病老年患者外周血单个核细胞中核因子-κB(NF-κB) P65(Ser536)的磷酸化水平和血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症指标,以及UAER的影响.方法:设对照组(NC组,n = 30),66例2型糖尿病早期肾病老年患者随机分为糖尿病常规治疗组(DN1组,n = 31)及糖尿病常规治疗联合阿托伐他汀干预组(DN2组,n = 35).观察3组炎症指标,比较DN1组、DN2组治疗前后炎症指标、UAER的变化.结果:糖尿病患者外周血NF-κB P65(Ser536)水平显著高于对照组(0.95 ± 0.18 vs 0.47 ± 0.15,P < 0.01),血清hs-CRP、TNF-*9琢、IL-6、IL -1β水平明显高于对照组(P < 0.01).治疗12周后,DN2组炎症指标、UAER明显降低(P < 0.01),NF-κB水平由0.95 ± 0.17降至0.81 ± 0.14(P < 0.01).DN1组无显著下降(P > 0.05).结论:阿托伐他汀可降低糖尿病肾病患者炎症水平,减少尿白蛋白,延缓肾损害的发展进程.

    作者:李建英;路文盛;刘斐;郭进;陈健;叶伟林 刊期: 2011年第11期

  • 臭氧介入治疗腰椎间盘突出症临床分析

    目的:探讨腰椎间盘突出症臭氧介入治疗疗效.方法:在C臂机透视引导下臭氧介入治疗腰椎间盘突出症153例.结果:153例患者治疗后6 ~ 12个月随访,按MacNab疗效标准评定:显效47例,有效78例,无效28例,总有效率达81.7%.结论:臭氧介入治疗腰椎间盘突出症是一种操作简单、创伤小、安全、疗效确切的方法.

    作者:胡广健;冯锡光;陈俊柱;李伟明;蒋佑升 刊期: 2011年第11期

  • 枸橼酸莫沙必利片联合维生素B1片和双歧三联活菌制剂治疗功能性便秘62例

    目的:观察枸橼酸莫沙必利片联合维生素B1片和双歧三联活菌制剂治疗功能性便秘的疗效.方法:功能性便秘患者121例,随机分为两组,治疗组62例,予以枸橼酸莫沙必利片联合维生素B1片和双歧三联活菌制剂口服,每次2片,每天3次;对照组59例,单用枸橼酸莫沙必利片每次2片,每天3次,治疗1、2个月后,两组进行疗效对比.结果:治疗1个月后,治疗组总有效率85.5%,对照组78.0%(P < 0.05);治疗2个月后,治疗组总有效率98.4%,对照组86.4%(P < 0.01),两组患者均未出现明显药物不良反应.结论:枸橼酸莫沙必利联合维生素B1片、双歧三联活菌制剂治疗功能性便秘的疗效显著,值得在临床上推广使用.

    作者:骆晓豪;曹晓鹏;危艳平;农海玲 刊期: 2011年第11期

  • 氟比洛芬酯用于乳腺癌改良根治术患者超前镇痛及对血小板聚集的影响

    目的:观察氟比洛芬酯对于乳腺癌改良根治手术超前镇痛的效果,同时探讨对患者凝血状况的影响.方法:选择48例ASA分级为Ⅰ~Ⅱ级拟在全麻下行乳腺癌改良根治术患者,随机分为A、B、C 3组,每组16例,其中A组为氟比洛芬酯超前镇痛组,B组为氟比洛芬酯术后镇痛组,C组为对照组.记录患者术后1、3、6、12、24、48 h的VAS、Ramsay评分,以评价镇痛效果.术前和静脉注射试验药物后1、3、6、12 h抽取A组及C组患者的静脉血,测定1、5 min及大分值血小板聚集(PAG)功能.记录患者围手术期情况及术后使用镇痛药物的情况.结果:术后1、3 h时A组的VAS 显著低于B组(1 h:A组/B组:3.5 ± 1.1/4.7 ± 1.0; 3 h:A组/B组:2.9 ± 1.1/4.0 ± 0.9,P < 0.01),A组与C组相比,除48 h两组的VAS差异无显著性 (P = 0.34)外,之前各时点A组的VAS均显著低于C组(P < 0.01);B组6、12、24 h时点显著低于C组(P < 0.05),Ramsay镇静评分A、B组6 h内高于C组(P < 0.05)首次需求镇痛药时间A、B组均较C组延迟[A、B/C组:(168.4 ± 12.2)、(160.6 ± 18.5)/(88.4 ± 10.2)min,P < 0.05],24 h内镇痛药使用次数A组少于B、C组.A组及C组患者术中出血、术后引流管血性液体量、术前及术后1、6、12 h的血小板聚集功能差异无显著性.结论:氟比洛芬酯脂微球注射液在乳腺癌改良根治术中预先使用可以达到较好的超前镇痛效果,能够有效缓解乳腺癌改良根治术引起的术后早期疼痛,而并未增加围手术期出血的风险.

    作者:李倩;梁磊 刊期: 2011年第11期

  • 糖尿病和非糖尿病患者尿路感染的临床分析

    目的:通过对糖尿病患者与非糖尿病患者之间尿路感染的临床分析,探讨糖尿病患者的尿路感染特点,为进一步临床诊治提供依据.方法:将确诊为尿路感染的230例住院患者,分为糖尿病组和非糖尿病组,通过病例对照研究两组的症状、病原菌分布及药敏情况.结果:糖尿病组的尿路感染无临床症状的占21.1%,高于非糖尿病组(2.6%),两组尿路感染均以大肠埃希菌为主,但糖尿病组大肠埃希菌的比例较高,药敏以对舒普深敏感.结论:糖尿病患者无症状性菌尿发生率较高,感染产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌及真菌的几率高,总的治愈率较低,住院时间长.因此要重视糖尿病患者中段尿的培养,选择敏感抗生素或抗真菌药.

    作者:廖慧华;蔡德鸿 刊期: 2011年第11期

  • 可逆性后部白质脑病综合征1例

    头痛剧烈伴恶心、呕吐,并出现进行性视力下降至无光感.查体: BP 212/127 mmHg,嗜睡,反应迟钝.双眼无光感,双视乳头水肿.余颅神经(-),四肢肌力肌张力正常,双侧腱反射正常存在,病理征未引出.头颅CT示:双侧枕叶可疑低密度,不除外静脉窦血栓,急行头颅MRV检查结果正常.脑脊液:压力280 mmHg,蛋白稍高,细胞学:轻微混合性炎性细胞反应,OB + ,余正常.请眼科会诊:双眼视乳头水肿.既往胆结石、胰腺炎病史,经治疗后好转.否认高血压、冠心病、糖尿病.吸烟30年,20支/d.家族史无特殊.

    作者:王丽 刊期: 2011年第11期

  • 曲马多超前镇痛对乳腺癌根治术后疼痛的影响

    目的:探讨曲马多超前镇痛对乳腺癌根治术后疼痛的影响.方法:将60例ASA评估Ⅰ~Ⅱ级拟全麻下行乳腺癌根治术的患者随机分为两组,每组30例.超前镇痛组切皮前10 min静脉给予曲马多针3 mg/kg + 地塞米松针5 mg;对照组切皮前10 min静脉注射生理盐水5 mL + 地塞米松针5 mg,观察术后24、48、72 h患者安静卧床时的镇痛效果和疼痛评分(VAS评分)及有无恶心、呕吐、呼吸抑制等相关并发症发生.结果:超前镇痛组术后24、48 h的镇痛效果显著优于对照组,VAS评分显著低于对照组,组间比较差异有统计学意义(P < 0.05),术后72 h的镇痛效果组间比较差异无统计学意义(P﹥0.05).结论:行乳腺癌根治术前预先给予曲马多可产生良好的超前镇痛效果.

    作者:喻其霞;郭文利;陆雅萍;黄冰 刊期: 2011年第11期

  • ABO血型正反定型不符41例原因分析及解决方法

    目的:分析ABO血型正反定型不符的原因,寻找解决问题的方法,并初步建立起血型正反定型不符时的操作规程.方法:对41例ABO血型正反定型不符的标本分别选用洗涤、改变反应温度、吸收放散试验,直接、间接抗人球蛋白实验,以及检测血型物质等实验方法.结果:经确认试验,分别判定为:22例抗体减弱,13例冷凝集,2例红细胞抗原表达减弱,2例白蛋白/球蛋白比例失调引起正反定型不符,1例由于血液中可溶性血型物质过多引起正反定型不符,1例金黄色葡萄球菌感染引起血型抗原改变.结论:ABO血型鉴定出现正反定型不符时,应根据表现型的具体情况和患者的临床资料设计血清学试验,正确鉴定ABO血型.

    作者:曹越;蔡元菊;刘彦明 刊期: 2011年第11期

  • 后腹腔镜输尿管切开取石术中放置双J管方法改进

    目的:探讨后腹腔镜输尿管切开取石术(RLUL)治疗输尿管上段结石的临床价值及术中放置双J管方法的改进.方法:总结2007年11月至2009年11月,我院完成的RLUL 17例,均为输尿管上段结石.重点探讨腹腔镜下放置双J管方法的改进.结果:17例均手术成功,术后4 ~ 6周复查B超无输尿管结石残余,患肾积水消失或好转.手术时间65 ~ 205 min;改进方法后放置双J管时间2 ~ 23 min;术中平均出血量约20 mL;无严重并发症出现.结论:RLUL可以作为微创治疗输尿管上段结石重要方法之一,有其存在的价值.本文介绍的置放双J管方法原理科学,操作简单易行,且不需特殊器械,不会增加医院及患者的经济负担,值得推广.

    作者:王斌;胡安定;胡孟忠 刊期: 2011年第11期

  • 甲状旁腺次全切除术治疗尿毒症继发性甲状旁腺功能亢进

    目的:研究甲状旁腺次全切除术对维持性血液透析患者继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)的临床疗效.方法:对2003年1月至2009 年12月期间在我院接受甲状旁腺次全切除术治疗的维持性血液透析患者13例进行回顾性分析,对手术前及手术后3 d、1周、1个月、3个月、6个月的全段甲状旁腺激素(iPTH)、血钙、血磷及钙磷乘积进行统计学分析,统计术前及术后骨痛缓解情况及手术并发症.结果:患者术后骨痛明显缓解,无一例出现手术并发症.13例患者均有完整统计学数据.患者术后3 d、1周、1个月、3个月、6个月的iPTH较术前明显下降,有统计学意义;术后3个月、6个月iPTH较术后1月升高,有统计学意义;术后血钙、血磷及钙磷乘积较术前明显下降,有统计学意义.术后6个月有4例复发,复发率30.8%.结论:甲状旁腺次全切除术能有效治疗维持性血液透析患者SHPT,短期治疗效果满意,手术安全,尽管远期有一定复发率,但仍能较好地控制血钙和血磷.

    作者:马锦华;唐晓虹;苏振国;莫靖梧;陈立英 刊期: 2011年第11期

  • 氯沙坦对D-半乳糖致衰老大鼠肾脏肾小管上皮细胞转分化的影响

    目的:探讨D-半乳糖致衰老大鼠肾脏中是否存在肾小管上皮细胞转分化及血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦对其的影响.方法:大鼠随机分为3组:对照组、模型组、治疗组,每组12只.D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老模型.观察肾组织病理改变,免疫组化方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖性细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:模型组肾小球体积增大,局灶节段性肾小球硬化,肾小管腔扩大,灶状小管萎缩,间质纤维化,而治疗组肾组织改变与模型组相比有所减轻.模型组α-SMA、PCNA的表达较对照组明显升高,而治疗组α-SMA、PCNA的水平较模型组减低(P < 0.05).结论:氯沙坦可以抑制α-SMA、PCNA的表达,抑制小管上皮细胞转分化,抑制细胞外基质的积聚,从而减轻衰老.

    作者:李垚;冯欣 刊期: 2011年第11期

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主办:广东省医学情报研究所