学术投稿

应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库

徐劲松;蔡绍曦;邹飞;佟万成;万为人;赵海金

关键词:哮喘, 嗜酸细胞, 基因文库, 抑制消减杂交
摘要:目的:构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库.方法:采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落PCR进行鉴定.结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用PCR进行扩增,90%的克隆中均有200~600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段.结论:用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础.
实用医学杂志相关文献
  • HBV-pre-C区段变异患者血清前S1抗原检测的临床价值分析

    目的:探讨HBV-pre-C区段(nt1896)变异阳性患者血清HBV-pre-S1抗原检测的临床价值.方法:选取病毒复制为阳性的乙肝血清76份,其中,HBeAg(-)且HBV-pre-C区段(nt1896)变异阳性的46份;HBV-pre-C区段(nt1896)变异阴性的30份;体检正常对照30例.以ELISA法检测其血清乙肝病毒前S1抗原(HBV-pre-S1),同时检测血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)活性.结果:HBV-pre-C区段(nt1896)变异阳性血清中82.6%(38/46)HBV-pre-S1检测为阳性,其中92.1%(35/38)伴血清ALT活性异常增高;HBV-pre-C区段(nt1896)变异阴性的血清中83.3%(25/30)HBV-pre-S1检测为阳性,92.0%(23/25)伴血清ALT活性异常增高;正常对照组中HBV-pre-S1检测为阴性,血清ALT活性均正常.HBV-pre-C区段(nt1896)变异阳性组与阴性组,HBV-pre-S1检出率差异无显著性(P=2.1387,P>0.05),HBV-pre-S1阳性血清中伴ALT异常增高率在两组间差异也无显著性(P=3.4211,P>0.05).结论:当HBV发生基因变异时,HBeAg不能正常表达,血清中HBV-pre-S1抗原的检测可基本避免基因变异的干扰,大致反映病毒基因的复制及活动.

    作者:张悦;王惠萱;陈忠明;吕耀 刊期: 2004年第08期

  • 心脏非黏液性原发肿瘤51例临床分析

    目的:总结心脏非黏液性原发肿瘤的临床特征,提高对心脏非黏液性原发肿瘤的认识.方法:回顾性分析了51例心脏非黏液性原发肿瘤的临床表现、肿瘤发生部位及肿瘤性质等.结果:心脏非黏液性原发肿瘤常见临床表现是心悸(82.4%),气短(66.7%)和心脏杂音(27.5%).51例心脏非黏液性原发肿瘤中良性肿瘤25例(49.0%),恶性肿瘤26例(51.0%).左心肿瘤23例,良性肿瘤16例,恶性肿瘤7例;右心肿瘤23例,良性7例,恶性17例.结论:心脏非黏液性原发肿瘤中左心肿瘤以良性多见,右心肿瘤以恶性多见,良性心脏肿瘤手术治疗效果好,恶性心脏肿瘤预后差.

    作者:熊长明;柳志红;吴清玉;阮英茆 刊期: 2004年第08期

  • 经内镜逆行胰胆管造影并发急性胰腺炎的防治

    目的:探讨经内镜逆行胰胆管造影(ERCP)术后并发急性胰腺炎(AP)的防治方法.方法:回顾性分析1995年10月至2003年10月共计70例ERCP术后合并AP的临床资料,比较常规治疗、生长抑素和乌司他丁三组治疗方法对治疗ERCP术后AP中的差异.结果:全组病人在术后48 h后逐渐恢复,病程大多数不超过7 d,无一例转为重症胰腺炎(SAP).其术后血清淀粉酶和腹部体征变化显示:术后6 h三组病人血清尿淀粉酶变化差异无显著性;术后12 h生长抑素组和乌司他丁组与常规治疗组比较开始差异有显著性;术后48 h生长抑素组和乌司他丁组血清尿淀粉酶开始接近正常,和常规治疗组比较有明显差异;生长抑素组和乌司他丁组可明显减轻ERCP术后合并AP患者腹部体征和症状,分别达到88.5%和81.8%,而常规治疗组仅50%,有明显差异.结论:ERCP并发急性胰腺炎的防治在于操作者本身的技术的提高,生长抑素和乌司他丁是治疗ERCP术后AP的有效药物.

    作者:陈盛;王卫东 刊期: 2004年第08期

  • 高位腰椎间盘突出症的手术治疗

    目的:探讨高位腰椎间盘突出症的临床特点、诊断及治疗.方法:根据椎间盘突出部位与程度,分别采用3种手术方式治疗高位腰椎间盘突出症36例,其中采用单开窗法21例,双开窗法9例,半椎板切除法6例.结果:36例患者获随访,平均随访时间31个月,优良率91.7%.结论:高位腰椎间盘突出症的临床表现复杂,强调早期手术以及术中注意保持脊柱稳定性,术中仔细探察椎管和切除突出的髓核是治疗本病的关键.

    作者:李健;颜登鲁;高梁斌;谭平先;张在恒 刊期: 2004年第08期

  • 中耳胆固醇肉芽肿并中重度传导性耳聋

    目的:探讨伴中重度传导性耳聋的中耳胆固醇肉芽肿的诊断与治疗.方法:回顾分析了4例伴中重度传导性耳聋的中耳胆固醇肉芽肿的术前与术后情况,以及手术术式的选择.结果:随访2~4年,4例患者听力均明显提高,平均40dB.结论:对于后天性中重度传导性耳聋的青少年患者,应当注意中耳胆固醇肉芽肿的可能;根据术中所见选择适当的术式有助于手术成功.

    作者:刘翔;郑亿庆;丁健慧;陈穗俊;区永康 刊期: 2004年第08期

  • 老年2型糖尿病患者细胞免疫功能的临床观察

    目的:观察老年2型糖尿病患者的细胞免疫功能.方法:抽血检测老年2型糖尿病患者及非糖尿病患者(对照组)的T淋巴细胞亚群、空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、血浆总蛋白、白蛋白.结果:(1)老年2型糖尿病组的空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白值显著高于对照组(P<0.05).2型糖尿病组中糖耐量异常患者餐后2 h血糖、糖化血红蛋白显著高于对照组(P<0.05).(2)老年2型糖尿病患者的淋巴细胞免疫功能指标中除早期活化T淋巴细胞与对照组间差异有显著意义(P<0.05),余指标之间的差异均无显著意义.(3)糖耐量异常患者淋巴细胞、自然杀伤细胞、CD4/CD8、抑制性T细胞、杀伤性T细胞较对照组低(P<0.05).(4)糖耐量异常患者的CD4/CD8、淋巴细胞低于其他老年2型糖尿病患者(P<0.05).(5)有并发症的老年2型糖尿病患者CD4/CD8、抑制性T细胞、杀伤性T细胞低于没有并发症老年2型糖尿病患者(P<0.01).(6)各组间血浆总蛋白、白蛋白差异无显著意义.结论:老年2型糖尿病患者体内T淋巴细胞亚群异常情况与患者病程及是否存在并发症、血糖情况有关,而与患者的血浆白蛋白、血浆蛋白的关系不明显.老年2型糖尿病患者糖耐量异常阶段体内细胞免疫功能已出现异常.

    作者:林凯;邓海鸥;黎映兰;韩梅清 刊期: 2004年第08期

  • 应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库

    目的:构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库.方法:采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落PCR进行鉴定.结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用PCR进行扩增,90%的克隆中均有200~600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段.结论:用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础.

    作者:徐劲松;蔡绍曦;邹飞;佟万成;万为人;赵海金 刊期: 2004年第08期

  • 羊水过少90例临床分析

    目的:探讨羊水过少的主要妊娠合并症及与围产儿预后的关系.方法:对90例羊水过少病例进行回顾性分析,将同期分娩的羊水过少组与羊水正常组作对照,分析羊水过少的主要妊娠合并症及与围产儿预后的关系.结果:羊水过少的主要妊娠合并症为过期妊娠,羊水量的多少与胎盘的成熟情况及羊水污染程度存在高度相关.结论:加强产前监护对于羊水过少要适当放宽剖宫产指征.

    作者:毛新丽;张丽颖 刊期: 2004年第08期

  • 肠球菌败血症的细菌学及耐药性分析

    目的:探讨肠球菌败血症的临床微生物学状况及对抗生素耐药性特点,给临床治疗提供参考.方法:按<全国临床检验操作规程>进行鉴定,采用纸片扩散法进行耐药性测定.结果:50株肠球菌中,粪肠球菌42株,占84%,屎肠球菌8株,占16%,屎肠球菌对万古霉素100%敏感,粪肠球菌有1株耐药,对氯霉素、呋喃妥因耐药率较低,对其他7种抗生素的耐药率高达62.5%~92.8%,这些可能与宿主的免疫功能及各种诱发因素有关.结论:肠球菌败血症耐药性分析,提示临床在治疗此类菌感染时,应根椐分离株的耐药特点和药敏试验结果合理选用抗生素,以减少耐药菌株的产生,达到有效控制感染的目的.

    作者:黄淑萱;潘练华 刊期: 2004年第08期

  • 胆囊取石钳在34例复杂取环术中的应用

    取环是妇产科门诊非常常见的小手术,但常由于绝经多年,子宫萎缩,宫腔狭窄,粘连或节育环断裂,有尾丝环尾丝脱落,节育环嵌顿等使取环困难.本院1997年1月至2002年12月复杂取环术中共应用胆囊取石钳34例,顺利取出各种节育环,现总结如下.

    作者:罗正琴;姚爱香 刊期: 2004年第08期

  • 阿米洛利对心肌自律性的影响及其机制

    目的:研究阿米洛利(amiloride)对心肌自律性的作用及其电生理机制.方法:用培养乳鼠心肌细胞观察阿米洛利对心肌细胞搏动频率的影响;用标准微电极技术记录阿米洛利对家兔窦房结动作电位的作用;用膜片钳技术记录电压依赖性的钙通道电流.结果:100μmol/L阿米洛利可使培养心肌细胞收缩频率减慢;100μmol/L阿米洛利还可降低窦房结起搏细胞大除极化速率,使静息电位轻度正移.阿米洛利在10~100μmol/L范围内抑制L型及T型钙通道电流.结论:阿米洛利可抑制心肌L、T型钙通道电流,抑制窦房结自动除极过程,降低心肌细胞自律性来发挥抗心律失常的作用.

    作者:梁黔生;郑智 刊期: 2004年第08期

  • 心脏黏液瘤的诊断与外科治疗

    目的:探讨心脏黏液瘤的诊断与外科治疗.方法:回顾性分析我院自1980年5月至2003年5月手术治疗的116例心脏黏液瘤患者的临床资料,其中左房黏液瘤102例,右房黏液瘤14例.所有病例均经彩色超声心动图明确诊断.结果:均在体外循环下完整切除肿瘤,115例痊愈出院,1例死亡,病死率0.86%.随访5个月至23年未见复发.结论:心脏黏液瘤临床少见,其中左房黏液瘤占75%以上,因随时可能发生栓塞,甚至猝死,一旦明确诊断,应行急诊手术;因有复发可能,即使良性肿瘤也应适当扩大手术范围.

    作者:罗立国;景华;胡小南;李忠东;李德闽;董国华;申翼 刊期: 2004年第08期

  • 经尿道输尿管壁段切开在肾盂癌根治术中的应用

    2002年3月至2003年2月,我们采用经尿道输尿管口壁间段环形切开,腰部一处斜切口行肾输尿管全长切除术治疗肾盂移行细胞肿瘤12例,现报告如下.

    作者:何志新;温天奋;彭晓东;邓子贤;何自浪 刊期: 2004年第08期

  • 婴幼儿心脏直视术954例围术期处理

    目的:探讨婴幼儿心脏直视术围手术期的治疗方法.方法:统计分析1992年2月至2004年2月共954例婴幼儿围手术期治疗的临床资料.结果:本组死亡55例,病死率5.77%,术后发生并发症184例,发生率19.29%.结论:婴幼儿心脏直视术围手术期的治疗,重点在于输液成分和量的控制、血管活性药物的合理应用以及呼吸道的管理、防止多器官衰竭的发生.

    作者:姚滨;姬尚义;陈伟新;董卫欣 刊期: 2004年第08期

  • 血管炎、新月体肾炎伴肺纤维化、消化道出血1例

    血管炎是全身性疾病,常累及肾、肺等多个脏器,但同时具备多脏器累及的典型表现者少见报道,现报道1例如下.

    作者:周建辉;高菊;蔡广研;陈香美 刊期: 2004年第08期

  • 锁孔手术治疗前部颅底和脑深部肿瘤25例

    目的:探讨锁孔神经外科手术治疗前部颅底及脑深部肿瘤的手术技巧和适应证.方法:对25例前部颅底及脑深部肿瘤行锁孔开颅显微神经外科切除术,其中部分使用内窥镜及术时超声辅助技术.结果:20例实体瘤中17例全(或等体积)切除,3例次全切除,其余5例囊实性肿瘤全切除,无手术死亡、致残及相关并发症.结论:锁孔手术是治疗前部颅底和脑深部肿瘤的微创治疗技术,恰当选择适应证尤其重要,神经内镜及术时超声的应用可帮助提高手术疗效.

    作者:周迩;麦洁文;梁艺湖;李林繁;邓岳桥;古奕冕;钟桂年 刊期: 2004年第08期

  • 体外受精-胚胎移植后异位妊娠9例临床分析

    随着国内辅助生殖技术的不断普及,将有越来越多的试管婴儿诞生,同时因此而引起的异位妊娠病例也将越来越多,提示在辅助生殖临床对此必须高度警惕.本文回顾分析我院2000年1月至2003年6月间因接受体外受精-胚胎移植后异位妊娠9例的临床资料,报告如下.

    作者:苏春宏;佘若菁 刊期: 2004年第08期

  • Sorbalgon藻酸钙敷料在鼻内镜术后的应用

    目的:选择鼻内镜术后良好的鼻腔填塞材料.方法:比较鼻内镜术后应用Sorbalgon藻酸钙敷料和凡士林纱条填塞鼻腔的止血效果及填塞后鼻腔局部反应情况.结果:应用Sorbalgon藻酸钙敷料在鼻内镜术后填塞鼻腔的止血效果好;鼻腔疼痛及头痛程度轻(P<0.01);抽取填塞物时鼻出血少(P<0.01);术后鼻腔黏膜水肿反应轻(P<0.05).结论:Sorbalgon藻酸钙敷料是一种良好的鼻内镜术后鼻腔填塞止血材料.

    作者:杨礼明;莫宋平;彭峰 刊期: 2004年第08期

  • 宫腔镜治疗子宫内膜息肉样病变28例分析

    目的:探索宫腔镜在诊断及治疗不明原因异常子宫出血及子宫内膜息肉样病变的可行性及临床价值.方法:采用宫腔镜对64例经传统影像学方法未能明确诊断的阴道不规则出血患者进行宫腔镜检查治疗,对单发或2~3个孤立性息肉行即时宫腔镜下剪除术;对散发性多发息肉则在宫腔镜直视下刮宫处理.结果:本组镜下明确诊断为子宫内膜息肉28例并成功得到镜下治疗,术后随访1~2年,其中26例出血症状完全消失.2例失访.结论:宫腔镜可明确诊断异常子宫出血的原因,并使病变得以及时准确的治疗,是诊断及治疗异常子宫出血及子宫息肉样病变确实有效的方法.

    作者:霍金平;陈娟;罗国群 刊期: 2004年第08期

  • 尖锐湿疣的局部细胞免疫作用研究进展

    尖锐湿疣(CA)是人乳头瘤病毒(HPV)引起的一种上皮乳头瘤样增生,其中HPV的6、¨、16、18型较常见.

    作者:邹金波;王俐 刊期: 2004年第08期

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