李生伟；吴传新；石毓君；刘长安
我们应用一种活体荧光标记对E-cadherin表达被E-cadherin单抗阻断后肝癌7721细胞粘附力的变化进行研究。对深入研究肿瘤细胞的侵袭转移机制和防治具有重大意义。一、材料与方法 1. 细胞系：SMMC-7721细胞引自上海细胞生物学研究所。
作者：贺建宇；周信达；刘银坤；汤钊猷；姚 刊期： 2001年第02期
目的为激发机体对HBsAg的CTL反应，寻求对慢性乙型肝炎更有效的治疗方法。方法构建了共表达HBsAg及B7-2抗原的E1区插入重组腺病毒载体，用脂质体法转染293细胞，经空斑筛选表达目的抗原的重组腺病毒，用ELISA法及Western blotting法分别检测HBsAg及B7-2抗原表达。在293细胞中扩增，再纯化、浓缩后，体内感染C57小鼠，检测体液免疫反应和细胞免疫反应。结果重组腺病毒在体外培养的293细胞及HepG2细胞中高效表达HBsAg及B7-2抗原。感染小鼠体液免疫较弱，但可通过注射乙型肝炎疫苗而加强；重组腺病毒载体能诱导强而有效的细胞免疫反应；未观察到明显毒副作用。结论 HBsAg及B7-2抗原重组腺病毒载体体外感染293、HepG2细胞后高效表达目的抗原，感染免疫后诱导有效的细胞免疫反应。初步结果显示腺病毒载体是一种高效、安全的载体系统。
作者：周智；张定凤；任红 刊期： 2001年第02期
肝纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的修复反应，其形成与发展是肝病慢性化的重要成因。肝纤维化的治疗包括病因防治、抗肝纤维化及对症治疗三方面，但不少病例祛除原发病因后，主动性肝纤维化仍继续发展，故抗肝纤维化治疗成为控制慢性肝病进展不可缺少的环节。
作者：曾民德 刊期： 2001年第02期
细针穿刺细胞学是早期诊断肝癌的有效方法之一。现将本院1999年32例肝脏穿刺涂片介绍如下。 1. 资料与方法：我院1999年间行细针穿刺而且有病理学诊断的病例32例。均经Ｂ超或CT定位，皮肤消毒，用９号带槽套管针对肝脏肿块进行穿刺，穿出物立即涂片，固定于甲醇溶液中，常规HE染色，显微镜观察。
作者：丁伟 刊期： 2001年第02期
目的观察内毒素肝损伤过程中库普弗细胞（KC）清道夫受体（SR）表达的动态变化，进而探讨内毒素肝损伤的机理。方法经尾静脉内注射不同剂量（1mg/kg、10mg/kg）大肠杆菌内毒素（LPS），复制内毒素肝损伤模型。采用免疫组织化学方法观察小鼠肝脏SR表达变化；酶联免疫吸附法（ELISA）测定肝组织TNFFα、IL-6的水平，光镜观察肝组织学变化。结果 (1)内毒素肝损伤过程中，KC表面SR表达呈进行性下调，且与内毒素呈明显的量效关系。(2)SR表达的平均光密度值（A值）与肝组织TNFα、IL-6及血清ALT、TBil呈显著的负相关。结论内毒素肝损伤过程中，随着SR表达下调，KC对内毒素的清除作用下降，内毒素对KC的激活作用则相应增强。KC SR表达变化与肝损伤密切相关。
作者：谢国旗；蒋建新；朱佩芳；王正国；邱俊 刊期： 2001年第02期
目的探讨bcl-2、bax及肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机理中的作用。方法采用免疫组织化学单、双标记染色和TUNEL技术，检测77例丁型肝炎患者肝组织HDAg、bcl-2、bax及肝细胞凋亡表达，以67例乙型肝炎作对照。结果 bcl-2和bax均以肝细胞浆表达为主。HDAg以肝细胞核表达为主。HDAg和Bax与凋亡细胞表达及分布有相关性，三成分在各型肝炎中的表达强度差异有显著意义（P＜0.05）。结论 HDAg、bax和肝细胞凋亡表达强度和阳性细胞分布均与肝组织炎症活动及病理损害程度相关，HDV感染可诱导肝细胞表达bax，增强肝细胞凋亡，这一机制在丁型肝炎发病机理中可能有一定重要作用。
作者：顾小红；李奇芬；王宇明 刊期： 2001年第02期
目的研究大鼠肝再生增强因子（augmenter of liver regeneration，ALR）在大鼠基因组中的存在方式。方法以大鼠基因组DNA为模板，根据ALR cDNA序列设计引物，用多聚酶链反应（PCR）扩增产物，连入pGEM Teasy Vector后测序。结果 PCR法扩增出两条产物，其一经测序发现为ALR的假基因，预测氨基酸序列与ALR的同源性为88.8%。结论作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子，大鼠ALR存在假基因，提示可能存在ALR多基因家族。为研究ALR分子的进化规律提供了依据。
作者：董菁；成军；刘友昭；王刚；施双双；王勤环；斯崇文 刊期： 2001年第02期
现将我院1990年1月～2000年8月住院患者因异烟肼利福平致严重肝功能损害35例诊治情况进行分析。一、临床资料 1. 选例标准[1]：(1)活动性结核诊断明确；(2)用药前肝功能正常；(3)服药后，STB≥51.3μmol/L皮肤黄染；(4)ALT单项≥400U/L；(5)除外其他药物、酒精、病毒性肝炎等因素引起的肝功能损害。
作者：王导新 刊期： 2001年第02期
目的对肝豆状核变性（WD）基因编码产物WD蛋白进行检测，探讨WD的发病机制。方法应用Western-blot蛋白印迹技术对诊断为WD的患者进行WD蛋白的研究。结果发现患者WD蛋白在肝内表达缺失或者含量改变。结论 WD患者可能同时存在有WD基因exon8和 exon5的突变，直接检测WD基因产物为进一步研究WD的病理机制奠定了基础。
作者：梁秀龄；陈嵘；徐评议；黄帆；王莹；闫振文；欧翠华；侯国庆 刊期： 2001年第02期
目的观察内毒素（LPS）对肝细胞的直接作用及重组人生长激素（rhGH）的干预效果。方法内毒素诱导肝细胞损害，HepG2细胞传代培养24h后，换用含内毒素（20μg/ml）和/或rhGH、肝细胞生长因子（HGF）的新鲜培养液继续培养16h，观察药物对LPS作用的干预效果。结果 HepG2细胞经 LPS作用16h，透射电镜观察既有形态正常的细胞，同时也出现典型的凋亡细胞：表现为胞浆浓缩核凝聚成块状，凋亡小体形成，细胞器（包括线粒体）结构基本正常；TUNEL标记后胞核呈棕褐色染色，而对照细胞无阳性染色信号，证实LPS作用16h后HepG2细胞已发生凋亡。将rhGH与LPS同时加入培养液中共同作用16h， rhGH可明显减少HepG2细胞经LPS诱导的细胞凋亡数量对照组为（99±0.8）%, rhHG处理组为（36±5.6）%, P＜0.001。结论重组人生长激素可以抑制LPS致肝细胞凋亡作用。
作者：张大志；张定凤；任红；周卫平 刊期： 2001年第02期
目的探讨癌基因rasp21、C-myc、C-erbB-2和AFP在2-乙酰氨基芴诱发的实验性大鼠肝癌变过程中的分布情况及关系。方法 rasp21、C-erbB-2、C-myc和AFP，采用免疫组织化学SP方法检测分析。结果诱癌早期小叶周边增生及变异的肝细胞灶中即显示rasp21、AFP和C-myc的表达，并随增生肝细胞结节的形成和演进，所表达的细胞也增多并且相伴而存。诱癌中期出现C-erbB-2的表达。结论癌基因蛋白rasp21、C-myc、AFP是大鼠实验性肝癌变中较早出现的分子改变，可能与肝癌的启动和演进有关，也是肝癌形态发生的分子基础之一。三者具有协同作用。而C-erbB-2的异常表达则可能对癌前期病变的发展具有促进作用。同时也表明肝细胞的恶性转化需要多个癌基因的协同作用。
作者：施公胜；孙超；韩新华；孟宪镛；王淼；顾美珍 刊期： 2001年第02期
目的探讨己酮可可碱（pentoxifylline，PTX）对人α1(Ⅰ)前胶原（COL1A1）基因启动子活性的作用及其机制。方法构建含人COL1A1基因启动子序列-2483～+42bp片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因的重组体pCOLH2.5，将其瞬时转染至人皮肤成纤维细胞，加入PTX或/和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及胰岛素，测定CAT活性。结果 0.4mmol/L、2mmol/L和10mmol/L的PTX使pCOLH2.5的活性降至对照的（82±9）%、（58±8）%与（32±13）%。IGF-1与胰岛素能促进pCOLH2.5的活性。PTX能拮抗IGF-1与胰岛素的这一促进作用。结论 PTX能下调人COL1A1启动子的活性，而IGF-1与胰岛素能上调该启动子的活性。PTX 能拮抗IGF-1与胰岛素的这一上调作用。
作者：伍严安；高春芳；万伟东；仲人前；孔宪涛 刊期： 2001年第02期
一、资料与方法 1. 标本：13例正常肝组织来自尸检标本；15例HCC组织和15例HCC癌旁组织取自手术患者。 2. 方法：N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ（GlcNAcT-Ⅴ）、N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（GlcNAcT-Ⅲ）、(1，6核心岩藻糖转移酶（α1-6 FucT）和β-肌动蛋白（β-actin）四种扩增基因引物由Primer3引物设计程序设计。以β-actin 为内标，采用RT-PCR法检测以上三种基因mRNA的表达情况。PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳后用ImageMaster VDS图像分析系统处理并计算基因表达值。基因表达值（%）＝［各基因条带面积×（条带辉度-背景辉度）］÷［β-actin基因条带面积×（条带辉度-背景辉度）］×100。
作者：陈国千；关明；苏兵；吕元 刊期： 2001年第02期
目的研究中药复方861对肝星状细胞NF-κB活性的影响。方法将5mg/ml的复方861加入体外培养的大鼠肝星状细胞系作用48h。NF-κB活性的检测采用凝胶电泳移动抑制法，细胞培养液中细胞因子的检测采用ELISA法，细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测。结果复方861作用使体外培养的肝星状细胞NF-κB结合活性比未加药的空白对照组显著减弱，细胞培养液中的IL-6和sICAM水平减低（P＜0.05），星状细胞凋亡增加（P＜0.01）。结论复方861显著抑制体外培养的肝星状细胞NF-κB活性可能为治疗肝纤维化中的重要机理之一。
作者：尤红；王宝恩；马雪梅 刊期： 2001年第02期
近年来肝硬化基因治疗的研究已越来越受到关注。现对实验性肝硬化的基因治疗研究进展作一简单介绍并对应用前景进行展望。一、治疗策略和目的基因 由于肝硬化是一种肝脏内实质细胞广泛破坏和再生以及结缔组织弥漫性增生引起肝小叶和血管结构发生紊乱的慢性疾病，因此理想的肝硬化的治疗策略应该包括促进肝细胞再生、防止纤维化的发生、逆转已发生的纤维化以及促使正常肝结构的形成等方面[1]。
作者：郭津生；王吉耀 刊期： 2001年第02期
对慢性肝炎肝纤维化及早期肝硬化之中医治疗多以活血化瘀为主，兼以益气补虚、养血柔肝或滋补肝肾。国内研究发现抗肝纤维化有效的单味中药有丹参、黄芪、柴胡、桃仁、当归、冬虫夏草、齐墩果酸、葫芦素Ｂ等；而各家根据中医理论、临床经验或动物实验研究结果所拟定的中药复方，亦取较好的效果，并运用现代细胞及分子生物学手段对其抗纤维化机理进行了较为深的研究。比较有代表性抗肝纤维化中药复方有861合剂、319方、鳖甲软肝片等。
作者：贾继东；王宝恩 刊期： 2001年第02期
目的探讨经输血传播病毒（TTV）在肝及肝外组织的定位、分布及其意义。方法采用PCR及原位杂交方法，对13例非甲－非庚型病毒性肝炎患者的尸解肝、胰、肾、脾、睾丸和心脏石蜡包埋组织中的TTV DNA进行了检测。结果 5例肝组织、3例肾脏及胰腺、脾脏组织各2例中检出了TTV核酸杂交信号，2例睾丸及心肌组织各检出1例。阳性信号主要定位于肝及肝外组织实质细胞的核内。这些肝外组织未见明显的病理损伤改变。PCR的检出率与原位杂交基本一致。结论 TT病毒能感染肝及肝外组织，肝外组织中的感染可能与TT病毒的再度感染及在不同人群中的较高感染率有关。
作者：郎振为；金荣华；阎惠平；罗朝霞；黄德庄；王勇；周育森 刊期： 2001年第02期
噬菌体单链抗体（ScFv）弥补了传统McAb制备繁琐、抗原性强、穿透力弱等不足，为HCC临床和基础研究提供新的手段。我们用基因工程技术和噬菌体表面呈现技术构建和筛选特异性抗HCC噬菌体ScFv库。 1. 材料与方法：(1)抗HCC噬菌体ScFv库的构建：应用HCC细胞常规免疫BALB/C小鼠，从其脾脏提取tRNA并纯化mRNA，逆转录合成cDNA，PCR扩增抗体轻链和重链可变区，应用linker-（Gly4Ser）3装配ScFv基因，在其5′端和3′端分别引入内切酶SfiⅠ和NotⅠ酶切位点，连接到噬菌体载体pCANTAB 5E，转化大肠杆菌TG1细胞，铺SOBAG平板，记数菌落。
作者：毕向军；杨冬华；崔俊；范子荣 刊期： 2001年第02期
目的对11株经输血传播病毒（transfusion transmit virus，TTV）进行基因型分析。方法用巢式PCR扩增不同地区不明病因的急、慢性肝炎，肝硬化、肝癌和自然健康人群TTV DNA片段，并对此巢式PCR产物进行克隆，测序分析和同源性比较。结果 11例标本的222bp（引物序列除外）的TTV DNA同源性比较结果为：武汉WH1、WH2、WH3 3个患者血清中TTV DNA序列与N22同源性分别为97.0%、97.0%和98.0%；广州GZ1、GZ2、GZ3 3患者血清中TTV DNA 序列与N22同源性分别为98.0%、95.0%和95.0%；山东SD2、SD3 TTV DNA序列与N22同源性分别为94.6%和95.5%；广州GZ4、山东SD1，新疆XJ1患者TTV DNA序列与TX011同源性分别为98.0%、98.0%和95.0%。结论根据 Okamoto的分类方法，这11株TTV可属于两个亚型，即基因1型的a和b亚型。
作者：肖红；梁蔚芳；王燕军；张建树；骆抗先 刊期： 2001年第02期
我们利用Vero、 HepG2两种细胞系同时来验证人乳铁蛋白的抗HCV作用并初步确定蛋白的作用对象—细胞还是病毒，以此为该蛋白用于抗HCV临床治疗提供理论依据。一、材料与方法 1．细胞和血清：HepG2细胞系（Dr. Schinazi馈赠），Vero细胞系（由湖北医科大学病毒研究所保存）；细胞培养方法见文献[1]。阳性血清：７份HCV患者血清，混合后作为病毒接种物（测得HCV阳性混合血清的+RNA阳性，-RNA阴性；HCV RNA 拷贝数为5×104；HAV和HBV阴性）由湖北医科大学附属第一和第二医院传染科提供；阴性血清：2份（HCV和抗-HCV均为阴性）来自一健康体检者。
作者：洪俊；林雨霖；洪流 刊期： 2001年第02期
中华肝脏病杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
