王导新
目的探讨肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC) 热休克蛋白70（heat shock proteins 70，HSP70）的表达及其与自发性癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法和原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测68例HCC手术标本中HSP70表达和细胞凋亡指数，以癌旁肝组织作为对照。结果 HCC和癌旁组织中HSP70阳性率分别为71%和28%，过表达分别为53%和21%，两组之间差异有非常显著意义（P＜0.01)，HSP70阳性率和凋亡指数有正相关关系（r＝0.8765，P＜0.05)，两者都随HCC 组织学分级增高而增加。结论 HCC组织中存在HSP70过表达和自发性癌细胞凋亡，两者正相关性机理尚不明了，可能是HCC生物学恶性行为的标志。
作者：尹燕明；秦庆亮；赵晶；张长丽；张伟；于建国 刊期： 2001年第02期
噬菌体单链抗体（ScFv）弥补了传统McAb制备繁琐、抗原性强、穿透力弱等不足，为HCC临床和基础研究提供新的手段。我们用基因工程技术和噬菌体表面呈现技术构建和筛选特异性抗HCC噬菌体ScFv库。 1. 材料与方法：(1)抗HCC噬菌体ScFv库的构建：应用HCC细胞常规免疫BALB/C小鼠，从其脾脏提取tRNA并纯化mRNA，逆转录合成cDNA，PCR扩增抗体轻链和重链可变区，应用linker-（Gly4Ser）3装配ScFv基因，在其5′端和3′端分别引入内切酶SfiⅠ和NotⅠ酶切位点，连接到噬菌体载体pCANTAB 5E，转化大肠杆菌TG1细胞，铺SOBAG平板，记数菌落。
作者：毕向军；杨冬华；崔俊；范子荣 刊期： 2001年第02期
我们利用Vero、 HepG2两种细胞系同时来验证人乳铁蛋白的抗HCV作用并初步确定蛋白的作用对象—细胞还是病毒，以此为该蛋白用于抗HCV临床治疗提供理论依据。一、材料与方法 1．细胞和血清：HepG2细胞系（Dr. Schinazi馈赠），Vero细胞系（由湖北医科大学病毒研究所保存）；细胞培养方法见文献[1]。阳性血清：７份HCV患者血清，混合后作为病毒接种物（测得HCV阳性混合血清的+RNA阳性，-RNA阴性；HCV RNA 拷贝数为5×104；HAV和HBV阴性）由湖北医科大学附属第一和第二医院传染科提供；阴性血清：2份（HCV和抗-HCV均为阴性）来自一健康体检者。
作者：洪俊；林雨霖；洪流 刊期： 2001年第02期
细针穿刺细胞学是早期诊断肝癌的有效方法之一。现将本院1999年32例肝脏穿刺涂片介绍如下。 1. 资料与方法：我院1999年间行细针穿刺而且有病理学诊断的病例32例。均经Ｂ超或CT定位，皮肤消毒，用９号带槽套管针对肝脏肿块进行穿刺，穿出物立即涂片，固定于甲醇溶液中，常规HE染色，显微镜观察。
作者：丁伟 刊期： 2001年第02期
目的对11株经输血传播病毒（transfusion transmit virus，TTV）进行基因型分析。方法用巢式PCR扩增不同地区不明病因的急、慢性肝炎，肝硬化、肝癌和自然健康人群TTV DNA片段，并对此巢式PCR产物进行克隆，测序分析和同源性比较。结果 11例标本的222bp（引物序列除外）的TTV DNA同源性比较结果为：武汉WH1、WH2、WH3 3个患者血清中TTV DNA序列与N22同源性分别为97.0%、97.0%和98.0%；广州GZ1、GZ2、GZ3 3患者血清中TTV DNA 序列与N22同源性分别为98.0%、95.0%和95.0%；山东SD2、SD3 TTV DNA序列与N22同源性分别为94.6%和95.5%；广州GZ4、山东SD1，新疆XJ1患者TTV DNA序列与TX011同源性分别为98.0%、98.0%和95.0%。结论根据 Okamoto的分类方法，这11株TTV可属于两个亚型，即基因1型的a和b亚型。
作者：肖红；梁蔚芳；王燕军；张建树；骆抗先 刊期： 2001年第02期
我们检测了慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者血清TNF-α水平，并同步观察了肝组织FasL的表达，现将结果报告如下。一、资料与方法 1. 病例来源：我院1999年3月～2000年3月经过肝穿刺活检确诊的28例慢乙肝患者。男23例，女5例。年龄18～56岁。慢性轻度8例，中度10例，重度10例。肝组织病理学改变符合1995年病毒性肝炎修订的诊断标准。
作者：郑瑞丹；张闽峰；徐忠玉；林福地；饶日春；张阳根 刊期： 2001年第02期
目的研究大鼠肝再生增强因子（augmenter of liver regeneration，ALR）在大鼠基因组中的存在方式。方法以大鼠基因组DNA为模板，根据ALR cDNA序列设计引物，用多聚酶链反应（PCR）扩增产物，连入pGEM Teasy Vector后测序。结果 PCR法扩增出两条产物，其一经测序发现为ALR的假基因，预测氨基酸序列与ALR的同源性为88.8%。结论作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子，大鼠ALR存在假基因，提示可能存在ALR多基因家族。为研究ALR分子的进化规律提供了依据。
作者：董菁；成军；刘友昭；王刚；施双双；王勤环；斯崇文 刊期： 2001年第02期
一氧化氮（NO）在门静脉高压以及肝病的损伤过程的作用受到重视。本实验目的在于了解肝硬化消退中肝组织NO水平的变化。 1. 材料与方法：大鼠肝硬化模型以CCl4加乙醇法制备,共12周。第12、16、19、22、25周各取5～6只行病理检查及NO测定。肝组织切片按照Knodell和国际肝病协会推荐的慢性肝炎诊断标准、王宝恩等的肝纤维化分级标准分别进行组织炎症活动性和纤维化评分。肝组织NO测定应用南京建成公司试剂盒。NO与组织学改变的相互关系应用相关分析,相关系数的显著性差异应用t检验。
作者：张弛；王吉耀；贺伯明 刊期： 2001年第02期
在众多的肥胖者中发生脂肪肝的患者尚不足20%[1]，同样是肥胖，脂肪的代谢特点各有差别。 一、资料与方法 男79例，女47例。询问病史，排除有病毒性肝炎、酗酒、糖尿病、内分泌病史等。体重指数（BMI）= 体重（kg）/身高2（m）计算，BMI＞25以上为肥胖。
作者：徐芸；王振豫；李继昌；尚佳 刊期： 2001年第02期
现将我院1990年1月～2000年8月住院患者因异烟肼利福平致严重肝功能损害35例诊治情况进行分析。一、临床资料 1. 选例标准[1]：(1)活动性结核诊断明确；(2)用药前肝功能正常；(3)服药后，STB≥51.3μmol/L皮肤黄染；(4)ALT单项≥400U/L；(5)除外其他药物、酒精、病毒性肝炎等因素引起的肝功能损害。
作者：王导新 刊期： 2001年第02期
近年来肝硬化基因治疗的研究已越来越受到关注。现对实验性肝硬化的基因治疗研究进展作一简单介绍并对应用前景进行展望。一、治疗策略和目的基因 由于肝硬化是一种肝脏内实质细胞广泛破坏和再生以及结缔组织弥漫性增生引起肝小叶和血管结构发生紊乱的慢性疾病，因此理想的肝硬化的治疗策略应该包括促进肝细胞再生、防止纤维化的发生、逆转已发生的纤维化以及促使正常肝结构的形成等方面[1]。
作者：郭津生；王吉耀 刊期： 2001年第02期
目的观察内毒素（LPS）对肝细胞的直接作用及重组人生长激素（rhGH）的干预效果。方法内毒素诱导肝细胞损害，HepG2细胞传代培养24h后，换用含内毒素（20μg/ml）和/或rhGH、肝细胞生长因子（HGF）的新鲜培养液继续培养16h，观察药物对LPS作用的干预效果。结果 HepG2细胞经 LPS作用16h，透射电镜观察既有形态正常的细胞，同时也出现典型的凋亡细胞：表现为胞浆浓缩核凝聚成块状，凋亡小体形成，细胞器（包括线粒体）结构基本正常；TUNEL标记后胞核呈棕褐色染色，而对照细胞无阳性染色信号，证实LPS作用16h后HepG2细胞已发生凋亡。将rhGH与LPS同时加入培养液中共同作用16h， rhGH可明显减少HepG2细胞经LPS诱导的细胞凋亡数量对照组为（99±0.8）%, rhHG处理组为（36±5.6）%, P＜0.001。结论重组人生长激素可以抑制LPS致肝细胞凋亡作用。
作者：张大志；张定凤；任红；周卫平 刊期： 2001年第02期
目的对肝豆状核变性（WD）基因编码产物WD蛋白进行检测，探讨WD的发病机制。方法应用Western-blot蛋白印迹技术对诊断为WD的患者进行WD蛋白的研究。结果发现患者WD蛋白在肝内表达缺失或者含量改变。结论 WD患者可能同时存在有WD基因exon8和 exon5的突变，直接检测WD基因产物为进一步研究WD的病理机制奠定了基础。
作者：梁秀龄；陈嵘；徐评议；黄帆；王莹；闫振文；欧翠华；侯国庆 刊期： 2001年第02期
目的研究中药复方861对肝星状细胞NF-κB活性的影响。方法将5mg/ml的复方861加入体外培养的大鼠肝星状细胞系作用48h。NF-κB活性的检测采用凝胶电泳移动抑制法，细胞培养液中细胞因子的检测采用ELISA法，细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测。结果复方861作用使体外培养的肝星状细胞NF-κB结合活性比未加药的空白对照组显著减弱，细胞培养液中的IL-6和sICAM水平减低（P＜0.05），星状细胞凋亡增加（P＜0.01）。结论复方861显著抑制体外培养的肝星状细胞NF-κB活性可能为治疗肝纤维化中的重要机理之一。
作者：尤红；王宝恩；马雪梅 刊期： 2001年第02期
目的通过离散因子/肝细胞生长因子（scatter factor/Hepatocyte growth factor，SF/HGF）cDNA转染肝癌SMMC7721细胞来探讨SF/HGF对肝癌生长和转移的影响。方法用脂质体法进行基因转染，以ELISA和western blot检测SF/HGF及其受体c-met的表达，通过生长曲线、划痕实验比较转染前后细胞的增长状况及细胞的运动能力。以转染前后细胞分别接种裸鼠，观察移植瘤的生长及转移情况。结果转染后细胞表达SF/HGF的量为694pg/ml，其受体c-met量未见明显变化；转染后细胞增殖明显加快，运动能力增强，并伴明显的形态学变化。初步动物实验显示转染后细胞生长较快，瘤组织中有瘤栓形成，并在肺内发现转移灶。结论 SF/HGF在肝癌细胞中的高表达能促进肝癌细胞生长、侵袭及转移。
作者：谢倩；刘康达；胡美玉；吴祥甫；周康 刊期： 2001年第02期
目的研究醛固酮合成酶基因-CYP11B2在大鼠肝组织中的表达与肝纤维化的关系及安体舒通抗肝纤维化的作用。方法取雄性Wistar大鼠120只，随机分为3组，每组40只。模型组：CCl4油0.25ml/100mg皮下注射，3次/周；安体舒通组：CCl4油注射的同时予以安体舒通20mg·kg-1·d-1灌胃，1次/日；对照组：橄榄油皮下注射。光镜下动态观察组织学改变，图像分析系统测量胶原面积。RT-PCR和原位杂交检测CYP11B2的表达。结果原位杂交及RT-PCR显示CYP11B2表达定位于肝星状细胞胞浆，在纤维化形成时表达增强。第4周、6周，安体舒通组肝纤维化分级、胶原面积低于模型组（P＜0.05）。第8周，安体舒通组与模型组相比差异无显著性意义（P＞0.05）。结论 CYP11B2在纤维化肝脏的肝星状细胞中表达增强。安体舒通对早中期肝纤维化具有一定的治疗作用。
作者：李旭；杨希山；孟莹；吴平生；李素梅；赖文岩；张虹 刊期： 2001年第02期
目的探讨血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘蛋白、Ⅳ型胶原等血清肝纤维化标志物与慢性肝炎肝组织炎症活动度及纤维化程度的相关性。方法 278例慢性肝炎患者经肝脏活检后常规病理检查，肝活检前同时采血检测血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘蛋白、Ⅳ型胶原，结果应用χ2检验及t检验进行统计学处理。结果肝组织纤维化程度与炎症活动度呈正相关关系，透明质酸可反映中度以上慢性肝炎炎症活动度及纤维化程度，且呈正相关；肝脏存在纤维化时层粘蛋白水平升高，与纤维化程度正相关；Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原水平升高与炎症活动度有关。结论血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘蛋白、Ⅳ型胶原可不同程度反映肝组织纤维化程度，可作为血清肝纤维化检测指标，透明质酸更可反映肝硬化发展趋势。
作者：丁红兵；陈永鹏；冯筱榕；刘定立；吴爱华；章廉 刊期： 2001年第02期
一、资料与方法 1. 标本：13例正常肝组织来自尸检标本；15例HCC组织和15例HCC癌旁组织取自手术患者。 2. 方法：N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ（GlcNAcT-Ⅴ）、N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（GlcNAcT-Ⅲ）、(1，6核心岩藻糖转移酶（α1-6 FucT）和β-肌动蛋白（β-actin）四种扩增基因引物由Primer3引物设计程序设计。以β-actin 为内标，采用RT-PCR法检测以上三种基因mRNA的表达情况。PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳后用ImageMaster VDS图像分析系统处理并计算基因表达值。基因表达值（%）＝［各基因条带面积×（条带辉度-背景辉度）］÷［β-actin基因条带面积×（条带辉度-背景辉度）］×100。
作者：陈国千；关明；苏兵；吕元 刊期： 2001年第02期
对慢性肝炎肝纤维化及早期肝硬化之中医治疗多以活血化瘀为主，兼以益气补虚、养血柔肝或滋补肝肾。国内研究发现抗肝纤维化有效的单味中药有丹参、黄芪、柴胡、桃仁、当归、冬虫夏草、齐墩果酸、葫芦素Ｂ等；而各家根据中医理论、临床经验或动物实验研究结果所拟定的中药复方，亦取较好的效果，并运用现代细胞及分子生物学手段对其抗纤维化机理进行了较为深的研究。比较有代表性抗肝纤维化中药复方有861合剂、319方、鳖甲软肝片等。
作者：贾继东；王宝恩 刊期： 2001年第02期
肝纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的修复反应，其形成与发展是肝病慢性化的重要成因。肝纤维化的治疗包括病因防治、抗肝纤维化及对症治疗三方面，但不少病例祛除原发病因后，主动性肝纤维化仍继续发展，故抗肝纤维化治疗成为控制慢性肝病进展不可缺少的环节。
作者：曾民德 刊期： 2001年第02期
中华肝脏病杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
