学术投稿

TDL复合物提高人脐静脉内皮细胞基因转染效率的体外实验

任建丽;王志刚;李兴升;苏琳;张勇;汪朝霞;杨春江;张群霞;许川山

关键词:TDL复合物, 人脐静脉内皮细胞, 基因转染
摘要:目的 研究HIV-1 Tat蛋白转导域/质粒DNA/Liposome(TDL)复合物介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, pEGFP)在体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)的转染效率.方法 将质粒DNA与Tat肽以不同的电荷比混匀,再加入2 μl Lipofectamine 2000制成TDL复合物.琼脂糖凝胶电泳分析质粒DNA与Tat肽的结合力;荧光显微镜和流式细胞仪观察TDL复合物与lipofectamine 2000介导基因在体外培养人脐静脉内皮细胞中的转染效果;MTT法检测TDL复合物对人脐静脉内皮细胞生长活性的影响.结果 TDL复合物组琼脂糖凝胶电泳未发现明显DNA条带.TDL复合物的转染率优于单用Lipofectamine 2000(P《0.05). Tat/DNA电荷比为8∶1时,TDL复合物的转染效率高.TDL复合物组对细胞活性均无明显影响.结论 TDL复合物可明显提高基因在体外培养人脐静脉内皮细胞的转染效率,该方法可作为提高基因转染效率的有效手段之一.
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    作者:孙胜;高文祥;廖卫公;高钰琪 刊期: 2007年第21期

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    作者:郭玉峰;刘鹏程;张新芳 刊期: 2007年第21期

  • 射频消融联合醋酸加氯化钠对消融体积影响

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    作者:陈敏;高峻;马宽生;刘念洲;王曙光 刊期: 2007年第21期

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    由全军医学科学技术委员会骨科专业委员会主办、第三军医大学西南医院承办的第十届全军骨科学术大会于2007年9月21日到23日在重庆召开.大会共收到来自101个单位的稿件1 438篇,参会代表千余名.

    作者:许建中 刊期: 2007年第21期

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    作者:余维涛;崔社怀;杨雪梅 刊期: 2007年第21期

  • 全乳大切片观察新辅助化疗后乳腺癌浸润性生长特征变化

    目的 探讨乳腺癌的浸润特征及新辅助化疗对乳腺癌浸润特点的改变.方法 采用全乳大切片技术对比研究病理分期为Ⅰ~Ⅲ期93例行术前化疗与31例未行术前化疗乳腺癌的浸润特征.结果 对照组皮肤皮下浸润阳性35.5%,发生大导管浸润者25.8%,对肿瘤周围血管浸润者38.7%,肿瘤微血管计数(MVD)17.2±9.5;新辅助化疗后皮肤皮下浸润阳性9.7%,大导管浸润阳性8.6%,肿瘤周围血管浸润阳性11.8%,MVD 8.0±4.4,各项指标均明显低于对照组(P《0.05).结论 新辅助化疗显著减轻乳腺癌对周围组织的浸润,可增加保乳机会.

    作者:张毅;周艳;郭美琴;郭德玉;封传悦;姜军 刊期: 2007年第21期

  • 辛伐他汀对K562细胞PI3K-AKT信号通路分子变化影响的体内外比较

    目的 通过检测辛伐他汀体外对K562细胞和裸鼠慢性粒细胞白血病组织(CML)K562细胞的影响,同时分别检测辛伐他汀处理后K562细胞PI3K-AKT信号通路中 mRNA水平的变化,比较辛伐他汀在体内外所引起PI3K-AKT信号通路的分子变化,以分析辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制.方法 体外培养CML 细胞株K562细胞,MTT噻唑蓝法检测细胞增殖抑制率.流式细胞术检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化.另外,12只BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下接种K562细胞,构建Balb/c-nu/nu裸小鼠的慢性粒细胞白血病动物模型,采用缺口末端标记技术TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化,用RT-PCR检测辛伐他汀在体内外K562细胞后N-ras分子和N-ras分子下游的PI3K-AKT信号通路的N-ras、PI3K、AKT1、IKK-β、NF-κB1 mRNA水平的变化.结果 辛伐他汀在体外能抑制K562细胞的增殖,使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,PI3K-AKT信号通路大多数基因出现差异表达.不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P=0.000 );不同剂量的辛伐他汀能够引起PI3K、AKT1、NF-κB、IKK-β mRNA的明显差异表达(P=0.000,P=0.003).但体外实验中的PI3K-AKT信号PI3K、AKT1 mRNA水平的变化与体外实验PI3K、AKT1 mRNA水平的变化呈现相反的差异表达.结论 辛伐他汀体外能够引起参与K562细胞凋亡的N-ras分子和N-ras分子下游的PI3K-AKT信号通路的基因 mRNA水平的变化,从一定角度说明辛伐他汀能依赖PI3K-AKT信号通路诱导K562细胞及其移植瘤细胞凋亡.但体内外实验存在不同的凋亡诱导机制.

    作者:周定安;黄文芳;张明川;赵慎;许毅 刊期: 2007年第21期

  • 深圳市人民医院352例尖锐湿疣患者生殖道人乳头状瘤病毒基因亚型的分布及意义

    目的 了解深圳地区人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)亚型的分布情况,并评价不同亚型的HPV在宫颈病变中的临床意义.方法 用导流反斑点杂交法对深圳市人民医院2003-2004年352例尖锐湿疣标本进行9~20种HPV亚型基因分型,结合临床病理检查结果分析HPV亚型分布情况及与不同宫颈病变的关系.结果 深圳地区尖锐湿疣患者中HPV亚型分布较广泛,主要亚型以低危型11和6型为主,多重HPV感染率接近总感染率的37%;在宫颈尖锐湿疣中主要的HPV亚型是高危型,尤其在子宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ+ 以上的宫颈病变中,感染率高的依次为以16、18、58、52和33型.结论 深圳地区尖锐湿疣以HPV11和6感染为主.HPV16、18等高危型HPV亚型可能是深圳地区导致宫颈恶性病变主要原因.

    作者:唐敏;戴勇;吕晓萍;李体远 刊期: 2007年第21期

  • 微阵列检测血样感染相关四项指标的实验研究

    目的 利用蛋白芯片技术检测血样感染相关四项指标,并与ELISA酶联免疫技术进行客观分析评价.方法 对230份国家参比品同时进行蛋白芯片与ELISA酶联免疫的检测,并观察蛋白芯片对诊断血样感染四项指标的敏感性和特异性.结果 用统计学的配对计数资料检验得出:χ2=0.5,P=0.125,说明两种方法检测结果无统计学差异.结论 蛋白微阵列检测结果无论是与参比品本身还是与ELISA试剂盒都有极高的符合率,是一种很有发展前途的检验技术.

    作者:黄敏;张敏丽;蒲晓允 刊期: 2007年第21期

  • 回肠代膀胱自发性破裂误诊为急性胆囊炎1例

    1 临床资料患者,男性,65岁,1999年在外院行膀胱镜检查提示膀胱癌,因肿瘤小,行膀胱部分切除.2000年因肿瘤复发在我院泌尿科行膀胱癌根治、回肠代膀胱术.2006年2月因右上腹持续性疼痛12 h来我科就诊.查体:急性痛苦面容,腹平,右上腹部明显压痛、反跳痛及肌紧张,Murphy征阳性,肠鸣音弱.腹部B超示急性胆囊炎,胆囊肿大,胆囊周围积液,胆囊穿孔?

    作者:孙刚;蒋小春;王梦炎 刊期: 2007年第21期

  • 基于MRI、CT图像HIFU治疗靶区自动勾画的研究

    目的 以MRI等图像为基础,进行HIFU治疗靶区的自动勾画研究,其勾画精确度希望达到1 mm以内,为以后的三维成像、HIFU治疗精确控制提供依据,为完整的HIFU治疗计划系统的基础. 方法以MRI等原始图像为基础,利用相关的计算机识别技术对靶区组织进行自动识别、勾画,采用点、面结合的组合图像处理技术方案,应用了包括图像分割阈值获取、多项分割技术的联合应用、组织结构提取等方法的原理与具体算法. 结果通过试验发现,此技术方案能够对边界相对不模糊的医学图像(MRI、CT等),比较快速、准确的勾画出目标靶区的效果. 结论此方案能够比较准确识别诸如MRI类图像中的指定组织结构,能够比较快速、准确的勾画其边界,在HIFU、放射等医学治疗中有助于精确定位,有助于减少并发症发生率及对重要组织结构的保护.

    作者:温海燕;陈文直;王智彪 刊期: 2007年第21期

  • 微创血肿清除术治疗脑出血的诊治体会

    高血压脑出血是一种常见病,其发病率、致残率、病死率均很高.高血压脑出血是神经内、外科治疗的重点和难点,内科保守治疗方法较为被动,需要依靠患者自身吸收血肿,病死率和致残率高,而开颅清除血肿手术创伤大,患者耐受性差,效果欠佳.微创血肿清除术利用血肿液化技术清除血肿取得了一定的进展,目前正被广泛应用于临床.

    作者:李志伟 刊期: 2007年第21期

  • PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究

    目的 探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用.方法 实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescence quantitative PCR ,FQ -PCR)分别检测未孕及孕1、3、4、5、7 d(分别记为d0、d1、d3、d4、d5、d7)小鼠子宫内膜PTEN基因mRNA的表达和子宫角注射反义寡核苷酸观察胚泡着床数.结果 FQ-PCR测得妊娠的子宫内膜组织PTEN的表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增加的趋势,到妊娠第5天达到高.子宫角注射PTEN反义寡核苷酸后胚泡着床数明显减少.结论 PTEN在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床.

    作者:陈晓玲;杨戎;贾咏存;刘孝云;魏莎莉 刊期: 2007年第21期

  • 胸外伤中胸腹脏器伤与胸廓骨折的关系

    CT能同时显示胸廓骨折及胸腹脏器损伤征象,且比平片更敏感,但关于胸部外伤中胸腹脏器损伤与胸廓骨折部位和类型间的关系尚缺乏深入研究.本研究对312例胸部外伤的CT检查资料进行回顾性分析,着重从CT角度探讨胸外伤中胸腹脏器损伤与胸廓骨折部位和类型间的关系及临床意义.

    作者:钱新初;唐肇普;刘三军 刊期: 2007年第21期

  • 两起肉毒杆菌食物中毒事件的分析

    肉毒杆菌分泌的肉毒素中毒是属于神经型食物中毒,常因进食被肉毒杆菌污染的腌肉、制作不良的罐头食品以及食用豆瓣酱、臭豆腐及不新鲜的鱼、猪肉、猪肝等而发病.在已报道的各类食物中毒中,肉毒中毒的报道相对不多见.

    作者:蓝弘 刊期: 2007年第21期

  • Muc3羧基端内SEA组件的蛋白酶切与N糖基化关系的研究

    目的 Muc3的羧基端在翻译后经历了蛋白酶切反应,探讨Muc3的羧基端蛋白酶切反应发生是否与其羧基端内的N型糖链有关.方法 截断了的Muc3的羧基端(含完整的SEA组件)(p20SEA)采用定点突变方法在所要求的位点插入终止密码子,所表达蛋白质的检测采用pulse/chase和免疫共沉淀方法或SDS/PAGE和Western印迹方法,所表达蛋白质的N型糖链合成抑制采用Tunicamycin处理转染的COS-1细胞.结果 p20表达产物(完整的Muc3羧基端产物)经历了翻译后蛋白酶切,产生30×103的氨基端酶切片段和49×103的羧基端酶切片段;Tunicamycin处理后主要的表达蛋白是60×103的全长的非糖基化产物,22×103的少量氨基端酶切片段和41×103的羧基端酶切片段;p20SEA表达产物(含完整的SEA组件但不含SEA组件后续氨基酸的截断Muc3羧基端)抑制N型糖链出现未酶切的36×103全长产物和22×103酶切的非N糖基化产物.结论 大鼠Muc3羧基端在抑制其N型糖链合成后出现Muc3的羧基端蛋白酶切的抑制.

    作者:李宜成;何勇虹;彭志红;汪荣泉 刊期: 2007年第21期

第三军医大学学报杂志

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主管:第三军医大学

主办:第三军医大学