林辉；黄颂敏；沙朝晖；唐万欣；柳飞
原位分子杂交是从组织细胞原位显示特定核酸序列存在的技术,它对一些异质性的细胞群体如血液,脑组织等,常不能准确阐明特定核酸序列表达于何种类型的细胞,或在某一细胞群体是否有特定基因的表达.
作者：李红丽；何家全；杨忠；蔡文琴 刊期： 2003年第03期
目的探讨IL-2和IL-15在免疫调控和应答中的协同作用.方法IL-2、IL-15和IL-2+IL-15组刺激CTLL细胞的增殖,3H-TdR掺入法测cpm值;IL-2、IL-15和IL-2+IL-15组诱导PBMC中NK和LAK细胞的发育,4 h51Cr释放实验检测对K562和LiBr细胞的杀伤活性.结果IL-2和IL-15都能诱导CTLL细胞的增殖和NK、LAK细胞的杀伤活性,IL-2和IL-15可明显协同上调CTLL的增殖和LAK细胞的杀伤活性.结论IL-2和IL-15在免疫调控和应答中有一定的协同作用,为细胞因子联合应用于临床治疗肿瘤等疾病提供了实验依据.
作者：党娜娜；范桂香；朱勇；刘雪松；贾卫；王薇；袁育康；金伯泉 刊期： 2003年第03期
目的研究二十碳五烯酸(EPA)是否协同视黄酸(RA)影响HL-60细胞的凋亡及相应分子机制.方法流式细胞仪(FCM)检测细胞周期相分布以测定细胞增殖和凋亡功能;Western blot法分析bcl-2和caspase-3表达.结果与单独应用相比,EPA和RA联合应用可增强HL-60细胞的调亡效应,以及下调节bcl-2和增强caspase-3基因表达.结论EPA和RA联合应用对HL-60细胞凋亡的增强效应,可能与它们增强caspase-3和降低bcl-2基因表达相关.
作者：罗红；糜漫天；张乾勇 刊期： 2003年第03期
目的探讨隐孢子虫病患者与机体细胞免疫功能的关系.方法采用生物素-链霉亲和素(Biotin-Streptavidin,BSA)法对卵囊阳性患者分别进行外周血T细胞亚群、膜白介素-2受体(mIL-2R)检测.结果隐孢子虫卵囊阳性者的CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+阳性百分率分别为(55.87±7.23)%、(39.26±6.43)%、(30.04±5.67)%和(1.36±0.41)%,诱导期mlL-2R表达水平为(33.45±2.31)%,两者分别与卵囊阴性者及静息期mIL-2R相比,差异有显著性(P＜0.05～0.01).结论隐孢子虫病引起细胞免疫功能的变化,T细胞亚群、mIL-2R在抗隐孢子虫感染中起重要作用.
作者：许礼发；王克霞；王健；李朝品 刊期： 2003年第03期
作者： 刊期： 2003年第03期
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)在糖尿病肾病(DN)发生机理中的作用.方法采用链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠模型,观察大鼠肾小球肥大、肾功能和24h尿蛋白改变以及用免疫组织化学和计算机图像分析技术定位、半定量检测VEGF和ICAM-1在DM大鼠肾小球的表达.结果VEGF和ICAM-1在糖尿病大鼠肾小球中均有不同程度表达,VEGF主要分布于肾小球脏层上皮细胞的胞浆之中,ICAM-1主要分布于肾小球内皮细胞和系膜细胞的胞浆中.VEGF、ICAM-1水平与蛋白尿和肾小球肥大呈正相关关系.结论DM大鼠肾小球VEGF和ICAM-1的升高可能参与了DN的疾病发展过程,估计是糖尿病肾病发生机理之一.
作者：林辉；黄颂敏；沙朝晖；唐万欣；柳飞 刊期： 2003年第03期
目的应用分子设计技术设计治疗性多肽,以探讨基于乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)核心抗原优势细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyts,CTL)表位的多肽设计与启动HLA-Ⅰ限制性HBV特异性CD8+T细胞应答的关系.方法合成含HBcAg免疫优势CTL表位、Pre-S2蛋白优势B细胞表位和破伤风类毒素通用TH表位的多肽,并进行HLA-A2+人PBMC体外和Balb/c小鼠体内免疫学功能研究.结果上述多肽可在体内外诱导CD8+CTL应答.以棕榈酸为分子内佐剂的Palm-p44可诱导较强的CD8+CTL应答,与单纯多肽比较不需另加佐剂.结论脂类分子内佐剂可显著提高多肽的免疫原性;Palm-p44可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗设计较有效的候选分子.
作者：石统东；吴玉章；边疆；贾正才；周伟；邹丽云 刊期： 2003年第03期
目的制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ(Kinase insert domain tontaining receptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体(McAb),探讨其抑制VEGF诱导的体外活性.方法在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白.融合蛋白经抗E-tag柱分离纯化后免疫Balb/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区McAb,采用ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性,并测定单克隆抗体对VEGF165刺激脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的中和活性.结果成功筛选出一株能稳定分泌抗KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1D3),其分泌抗体亚类为IgG1.该McAb可明显阻断VEGF165对脐静脉内皮细胞株ECV304的刺激增生作用.结论抗人血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外Ⅲ区McAb可通过封闭KDR而抑制VEGF活性,McAb 1D3具有潜在治疗肿瘤的活性.
作者：李容；熊冬生；邵晓枫；李长辉；许元富；刘嘉；杨纯正 刊期： 2003年第03期
目的研究食入过敏原后肝脏的变化.方法试验分为2组,实验组小鼠用卵蛋白(OVA)致敏,0VA(2g/L)经肠道攻击3 h后采血及肝脏,用酶素法测定血清中ALT(Alanine aminotransferase),并对肝样本进行H&E染色及免疫组织化学染色.结果实验小鼠血清ALT浓度与对照组比较增高,P值有显著差异(P＜0.01);实验组小鼠肝脏组织H&E染色可见大量炎性细胞浸润及巢状肝细胞坏死,免疫组织化学染色显示在0VA致小鼠的肝组织中,IL-4及IL-6阳性细胞数明显高于对照组.结论在食物过敏反应中,肝脏也是一个受损害的脏器.
作者：陈虹；陈奋华；纪经智；陈岩峰；王清文；饭仓洋治；上野幸三 刊期： 2003年第03期
目的建立用单克隆抗体技术检测细胞内IL-1ra的方法.方法制备异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人IL-1ra单克隆抗体,使其进入U937细胞内与icIL-1ra结合,然后用流式细胞仪(FACS)检测荧光强度,并比较U937细胞在刺激前后荧光强度的变化情况是否与icIL-1ra表达的变化情况相一致.结果在一定剂量范围内,经PMA分化和LPS刺激的U937细胞的icIL-1ra表达量增加,其检测荧光强度相应增加.结论用单克隆抗体检测细胞内icIL-1ra是一种快速、准确的方法,本实验方法能够满足实际研究工作中对icIL-1ra定量检测的要求.
作者：甘起霓；陈英玉；宋泉声；张颖妹；马大龙 刊期： 2003年第03期
作者： 刊期： 2003年第03期
目的研究人正常肠上皮细胞内毒素信号转导相关受体TLR4、TLR2、CD14和MD2mRNA的表达情况,以及内毒素刺激对其表达的影响.方法提取有、无内毒素刺激的培养人肠上皮细胞和阳性对照THP1细胞的总RNA,用RT-PCR方法检测TLR4、TLR2、CD14和MD2 mRNA的表达.结果和THP1细胞相比,人肠上皮细胞TLR4、TLR2、CD14和MD2mRNA的表达均较弱.内毒素刺激后,TLR4、CD14和MD2mRNA表达明显减弱,而TLR2的表达无显著变化.结论人正常肠上皮细胞组成性低表达TLR4、CD14和MD2 mRNA,且在受脂多糖(LPS)刺激后反应性下调其表达,这可能是肠上皮细胞(IEC)耐受LPS的关键机制之一,而TLR2在IEC耐受LPS的机制中可能不起主要作用.
作者：张道杰；蒋建新；陈永华；段朝霞；熊健琼 刊期： 2003年第03期
目的建立一种简易的抗体亲合力测定技术,对生物工程抗-HBsFab进行抗原特异亲合力测定.方法应用异种抗体竞争抑制法,在硝酸纤维素膜上进行不同抗原浓度、不同抗体抑制浓度的抗原、抗体反应.酶标记抗Fab抗体(Fabspecific)与相应底物显色,通过抑制效果估测靶抗体的亲合力.结果①抗-HBsFab组对不同浓度的抗原皆为阳性且能显示浓度差.②鼠腹水单克隆抗-HBs在10倍于人源抗-HBsFab范围内无抑制作用;多克隆羊抗-HBsAg在10倍于人源抗-HBsFab时显示抑制效应,而在同倍和1/10浓度时无抑制作用.结论本研究建立的是一种简易、实用的方法,能够达到直观、实际的抗体亲合力检测目的.
作者：韩焕兴；陆慧琦；安峰；叶伟民；范列英；朱烨；曾万杰；罗荣城 刊期： 2003年第03期
目的制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF fa-mily,BAFF)胞外区112～285氨基酸残基段(rhBAFF112-285),为BAFF的深入研究奠定基础.方法提取人HL-60细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人BAFF胞外区112～285氨基酸残基(BAFF112-285)的cDNA,行序列测定后,构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达rhBAFF112-285,Ni2+-NTA层析纯化,进而经3H-TdR掺入实验检测其免疫学活性.结果RT-PCR扩增得到了 525bp的DNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF112-285的cDNA序列一致,该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达,表达水平达细菌总蛋白的45.7%,经纯化后纯度可达98.4%,活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化.结论利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF112-285,所获纯化产物具有生物学活性,所获结果为进一步研究创造了条件.
作者：何凤田；郑英如；高会广；李蓉芬；郑汉其；吉青；江渝；陈敏；钟小林 刊期： 2003年第03期
目的探讨TH1类细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)对结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌MCP-1的影响.方法将12例结核患者和8例健康人PBMCs在LPS诱导前,用IL-2、IFN-γ进行预刺激1 h,采用ELISA法检测各组培养上清液中MCP-1的水平.结果与单纯用LPS组相比,加入IL-2、IFN-γ能明显上调结核患者及健康人PBMC的MCP-1分泌,且呈现浓度依赖性,两者联用具有协同效应.结论TH1类细胞因子IL-2、IFN-γ通过上调MCP-1,使单核细胞、淋巴细胞向炎症部位趋化,参与组织炎症及肉芽肿形成,从而发挥保护性的免疫效应.
作者：刘敏；邓兆群；刘君炎；卢水华；屈雪菊 刊期： 2003年第03期
目的观察生物分子间相互作用动力学、亲和力及特异性,研究C5a与其反义肽的相互作用规律.方法应用生物分子相互作用实时分析系统IAsys Plus,以反义肽R4为固定相,L2和rhC5a为流动相,采用FASTplot软件对选择结果优化的反应模式,计算各动力学参数值.结果反义肽R4与配体rhC5a相互结合的KD=6.62×10-6mol,直线在Y轴上的截距(解离常数)Kdiss为0.0225 s-1;与L2的KD=4.508×10-6mol.结论生物传感器技术可以用于正义-反义肽之间相互作用的研究中,且反义肽R4可与其正义肽、与rhC5a发生特异性相互作用.
作者：胡承香；曾焕芬；巫振洪；吕凤林 刊期： 2003年第03期
作者： 刊期： 2003年第03期
淋巴细胞的识别与激活是免疫应答的核心问题.自1960年代以来,已提出多种双信号理论,其共同点是认为除了抗原信号(信号1)外还需其它信号刺激(信号2)才能激活淋巴细胞,但所涉及的信号2不同,以致对淋巴细胞识别与激活机制迄今一知半解.未来的挑战是采用定量的研究方法,建立整合的信号理论,以彻底揭示这一奥秘.
作者：陈政良；朱锡华 刊期： 2003年第03期
目的构建乙型肝炎HBsAg和GM-CSF的融合表达质粒,借助GM-CSF的免疫佐剂作用,提高乙型肝炎DNA疫苗的免疫效果.方法用PCR方法及分子克隆技术构建融合表达质粒pcDNA3.1-S-GM-CSF和pcDNA3.1-GM-CSF-S,并以重组质粒转染真核细胞,研究重组质粒体外表达.结果经酶切鉴定及DNA序列证实重组质粒构建正确,细胞转染试验表明重组质粒能在COS-7及HepG-2内表达.结论乙型肝炎HBsAg和GM-CSF的融合表达质粒构建成功,重组质粒能在真核细胞内表达.
作者：卿玉玲；赵嘉将；任红 刊期： 2003年第03期
目的探讨CTLA-4对T细胞无能的诱导作用.方法通过使用超抗原SEA作为一种无能诱导剂,建立体外无能模型,检测了无能T细胞在受到SEA的再次刺激时其膜分子CD28和CTLA-4的表达.结果与活化T细胞相比,无能T细胞在免疫应答的后期阶段表面表达高水平的CTLA-4分子,而CD28的表达则只较活化组T细胞稍高一些.结论CTLA-4表面表达水平的升高很可能与T细胞无能状态的诱导有关.
作者：许桂莲；朱锡华；杨劲；黄云辉 刊期： 2003年第03期
免疫学杂志
主管:第三军医大学
主办：第三军医大学,中国免疫学会
