学术投稿

使用Taqman PCR技术建立人类血小板抗原-1~5、15分型体系

沈彤;赵玉林;刘熔增;刘达庄

关键词:Hpa, TaqMan PCR, 基因频率, 多态性
摘要:目的 了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1~5、15多态性分布,分析评估新的分型技术.方法 利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1~5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对.结果 HPA各等位基因频率分别为HPA-1a:0.999,HPA-1b:0.001,HPA-2a:0.953,HPA-2b:0.047,HPA-3a:0.582,HPA-3b:0.418,HPA-4a:0.999,HPA-4b:0.001,HPA-5a:0.988,HPA-5b:0.012,HPA-15a:0.524,HPA-15b:0.476;有1份标本HPA-5等位基因与SSP检测结果产生差异.结论 上海地区HPA各等位基因频率与国内各地区人群分布无明显差异,与中国汉族人群HPA分布情况基本吻合,实验数据经验证符合Hardy-Weinberg平衡定律,实验结果准确可靠;HPA-5差异经测序验证判断可能由PCR-SSP非特异扩增所致;TaqMan技术在HPA抗原系统分型应用中特异性高,反应时间短,具有良好的应用前景,是现有技术方法的一种重要补充.
中国输血杂志相关文献
  • 孕妇血浆中胎儿游离DNA在胎儿ABO血型鉴定中的应用

    目的 探索1种新的胎儿ABO血型的检测方法,为预防ABO血型系统新生儿溶血病提供可靠依据.方法 收集医院2009年1~12月送检的O型孕妇34名,提取孕妇外周血血浆中胎儿游离DNA,利用聚合酶链反应——限制性片段长度多态性分型(PCR-RFLP)检测胎儿ABO血型.结果 在34例标本中,32例实验成功,且与胎儿出生后的ABO血型一致,其中A型11例、B型15例、O型6例,2份标本扩增失败.结论 利用孕妇外周血中胎儿游离DNA来检测胎儿ABO血型的方法,准确性高,安全性好,值得临床推广.

    作者:杨波;贠中桥;吕运来;马红丽;刘广超;兰炯采 刊期: 2011年第11期

  • 辽宁汉族人群MICA、TNF基因微卫星多态性研究

    目的 探讨中国北方辽宁汉族人群HLA区域的MICA和TNF基因微卫星多态性分布.方法 采用PCR-毛细管电泳方法检测197名正常无关个体的MICA基因第5外显子和TNF基因复合体TNFa微卫星的基因型.应用Arlequin和SPSS软件进行统计分析.结果 辽宁汉族人群MICA基因第5外显子存在5种等位基因,其中以A5.1为常见(34.01%);TNFa位点存在13种等位基因,其中以a6为常见(33.76%).辽宁地区和南方部分地区汉族人群MICA基因第5外显子和TNFa位点的等位基因频率分布均具有统计学差异(P<0.01).MICA基因第5外显子和TNFa位点间存在一定的连锁不平衡,如单体型A5-a6和A5.1-a7(P <0.05).结论 MICA基因第5外显子和TNFa位点微卫星多态性分布在中国汉族人群中均存在地区差异.

    作者:范亚欣;于卫建;段莹;梁晓华 刊期: 2011年第11期

  • 冷沉淀凝血因子制备方法的比较

    输血是现代医学的重要支持手段,不断提高输血疗效是近代医学关注的焦点之一.冷沉淀凝血因子作为一种血液制品,在临床应用越来越广泛,尤其在治疗甲型血友病、纤维蛋白原缺乏症、产妇大出血、弥漫性血管内凝血等方面获得明显疗效[1].本站于2010年采用Pool方法和虹吸法2种方法制备冷沉淀凝血因子,发现虹吸法较Pool方法,制备时间短,纤维蛋白原和FⅧ因子回收率高,现报道如下.

    作者:柏则蓉;梁启忠;贾红志 刊期: 2011年第11期

  • Am亚型患者的血型检测与家系调查及输血治疗

    目的 为Am亚型患者的输血治疗选择适当的血液.方法 对1名ABO血型正反定型不符患者进行血型血清学检测,并做家系调查,并为患者的输血治疗选择方案.结果 患者ABO血型为罕见的Am亚型,其家族中共有4个人ABO血型为Am亚型.结论 对Am亚型患者的输血治疗,为避免输入患者缺乏的血型抗原导致患者输血反应和抗体的产生建议选择O型的洗涤红细胞/红细胞悬液,AB型的新鲜冰冻血浆和O型/A型机采血小板.

    作者:陈剑;朱凯;凤婧;林小能;钟永林 刊期: 2011年第11期

  • 遵义市2006~2010年无偿献血者血液检测结果分析

    《中华人民共和国献血法》自1998年实施以来,本市无偿献血人数逐年增加.特别是2006~ 2010年,随着临床医疗用血量的不断增加,本市无偿献血人数增加率平均>20%.为了解本市无偿献血人群血液检测指标情况,有针对性地制定献血宣传招募策略,保障安全有效的血液供应,降低血液的报废率,我们对2006~2010年的血液检测情况进行了统计和分析,现报道如下.

    作者:周世乔;杨春晖;刘建;海军 刊期: 2011年第11期

  • 机采过程中出现血小板体外聚集1例

    血小板在一定的诱导条件下,通过行使粘附、聚集和释放等功能形成白色血栓参与初期止血.机采血小板的原理是利用血液成分不同的密度梯度,通过离心的办法来分离和收集血小板.其中1个关键的环节就是阻止采集过程中血小板体外被激活,我们在工作中发现1例机采过程中血小板被意外激活,现报道如下.

    作者:陈义柱;黄晓华;周建华 刊期: 2011年第11期

  • 无偿献血不良反应及处理措施

    目的 为了更好地开展献血工作,我站对献血不良反应进行分类并统计发生次数总结采血经验.方法 统计献血总人次和各型不良反应人次,并就出现献血不良反应的诱因进行有针对性的问卷调查与统计分析.结果 不良反应之中,各类比率均逐年下降,但仍以轻度不良反应为主(1.17%),中度(0.52%)和重度(0.08%)不良反应并存,精神紧张和空腹饥饿是献血不良反应的主要诱因,分别占总人次的68%和12.7%.结论 献血不良反应与心理、生理和环境因素密切相关.因为不良反应的产生与多种因素相关,医务人员应具备识别特征表现并积极应对处理的能力,同时血站应该加强献血知识宣教,从而避免不良反应的发生.

    作者:冯春 刊期: 2011年第11期

  • 全血室温过夜制备浓缩血小板制剂的质量分析

    目的 探讨全血室温过夜后所制备的浓缩血小板制剂(PC)的质量.方法 对12份400ml新鲜全血采用无菌接驳机平均分为2份,采用白膜法制备PC,1份当天制备(对照组),1份室温过夜后制备(实验组),分析该2组所制PC剂的数量和功能.结果 对PC质量体外评估发现,2组Plt无统计学意义,血小板数均符合国家标准(≥2.0×1010个/U),对照组为(2.78±1.49)×1010个/U,实验组为(3.49±1.19)×1010个/U,实验组血小板数明显高出对照组20.3%.实验组CD62表达、乳酸产生、pH、PCO2和K+含量明显高于对照组.实验组PO2含量则低于对照组,其他检测指标在2组间无明显变化.结论 全血置室温过夜有望成为手工制备PC优选模式.

    作者:刁荣华;王泽蓉;黄朴;夏代全;王世春;王甜甜;林放;黎儒青;郭辉;赵树铭 刊期: 2011年第11期

  • 单采血小板献血者发生不良反应个体影响因素分析

    目的 探讨影响单采血小板献血者发生不良反应个体相关因素,以便采取相应措施减少不良反应发生,保证献血者的健康.方法 对2008年4~12月本站采集的516名单采血小板献血者的资料进行回顾性调查,用Logistic回归分析的方法分析单采献血者发生不良献血反应个体相关影响因素及影响效果.结果 516名单采血小板献血者中,发生献血反应44例,总反应率8.5%,其中轻度10(1.9%),中度3例(0.6%),重度未见;枸盐酸盐中毒占31例(6.0%),不同个体因素的献血者出现不良反应的情况不同.用Logistic回归分析影响献血反应的主要因素有:性别、体重、血液体外循环量.结论 性别、体重、血液体外循环量可能是献血不良反应发生的主要影响因素,各因素造成的低血容量是献血者发生不良反应的主要原因,低体重、初次献血、年龄偏小的女性更容易发生献血反应.

    作者:杜红梅 刊期: 2011年第11期

  • IgM与IgG型抗-D引起新生儿溶血病1例

    1病例简介患儿,男,2d,在某医院出生后当日皮肤出现黄染.患儿母亲无输血史,第1、2胎分别孕4月、2月自愿流产,第3胎产后发生不明原因黄疸而死亡,该患儿为第4胎.医院怀疑该患儿系母子血型不合引起的新生儿溶血病,遂将母子标本送本血站血型室相关检测,经检测产妇血清中含有效价较高的IgG与IgM抗-D.临床经对症治疗,输注ABO同型的Rh(D)阴性红细胞后,症状明显好转,14 d后出院.

    作者:夏伟;耿微 刊期: 2011年第11期

  • 2004~2010年深圳市无偿献血情况分析

    目的 对2004年以来,本中心在采血量、献血者队伍的构成、献血者流失的原因等资料进行回顾性调查.分析深圳市血液中心献血者招募和保留的现状,探讨未来的发展方向.结果 自2004年以来,采血人次和采血量在逐年攀升;多次献血者(资料库数据显示有2次或以上献血记录的献血者)的比例以2004年高,而在2005年大幅回落,随后逐年有所增加,与2009年相比,2010年的多次献血者比例有明显减少,但是,多次献血者的总人次仍比2009年有所增加;献血者以20 ~45岁的青壮年为主;12%以上的献血者因为献血前筛查不合格而被淘汰.结论 本中心在献血者招募和保留方面的工作卓有成效,改革和创新是应对未来发展的需要.

    作者:肖忠;钟福玲 刊期: 2011年第11期

  • 暂时屏蔽的5项血清学指标不合格献血者追踪检测结果分析

    目的 对HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP和ALT检测不合格献血者进行追踪检测,确定暂时屏蔽的献血者解除屏蔽的时间,为建立高质量的固定献血者队伍提供实验依据.方法 对献血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP其中1项或1项以上单试剂阳性、或ALT单、双试剂不合格者,6个月后抽血用2个不同厂家试剂进行追踪检测,对仍为单试剂阳性的献血者1年后再检测.结果 6个月后追踪检测各个项目的合格率分别为:HBsAg为37.0%、抗-HCV为43.8%、抗-HIV为47.8%、抗-TP为15.0%,ALT为71.1%,总的合格率为45.4%.追踪检测前、后单试剂阳性标本中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV的进口试剂所占比率比国产试剂明显升高(P<0.01).1年后第2次追踪检测各个项目的合格率分别为:HBsAg为37.5%、抗-HCV为47.4%、抗-HIV为40.0%、抗-TP为29.6%,ALT为66.7%,总的合格率为41.6%.结论 通过对暂时屏蔽的不合格献血者的追踪检测,可以减少假阳性筛查结果对献血者流失的影响.

    作者:李玉笑;汪传喜;肖韶英;黄伯泉;李仲平;梁浩坚;田也 刊期: 2011年第11期

  • 上海地区高危人群献血屏蔽机制初步研究

    随着经济发展,上海的开放程度不断提升,流动人口不断增加.随之而来的输血传染病传播风险也不断提高.现有的血液管理信息系统通过黑名单的方式对高危人群献血进行筛选[1,2].随着信息化的发展,上海公共卫生体系不断完善,如何融入基于公共卫生信息系统的平台成为未来发展方向的1个选择.在具体实施和建设中会面临筛选数据来源,统一交换标准,选择交换平台,建立信息安全策略,包括机制建立后维护等一系列问题.

    作者:张喆;高瑜 刊期: 2011年第11期

  • 非抗-D所致新生儿Rh溶血病的实验室诊断与输血治疗的血液选择

    目的 探讨非抗-D致新生儿Rh溶血病(RhHDN)的实验室诊断和输血治疗的血液选择.方法 对6名非抗-D Rh HDN患儿采取相应检测和治疗:1)Rh HDN血清学检测,包括直接抗球蛋白试验、红细胞抗体放散试验、血清游离抗体试验、Rh血型、ABO血型、IgG抗体及抗体效价鉴定;2)对其中2名严重贫血患儿做输血治疗,对其中3名严重黄疸患儿给予换血治疗.结果 6例病例中确诊为RhE HDN4例,Rhe HDN 1例,Rhc HDN 1例.1名未选择Rh血型与母亲相同的血液换血治疗的患儿连续2次换血,其余4名需用血的重症患儿在实验室明确诊断的基础上,选择用Rh血型与母亲相同,ABO血型与患儿相同的血液输注,2名患儿各换血1次(RBC 800ml/次),2名患儿7次输血(RBC 40ml ×4和80ml×3)均取得良好疗效.结论 完备的RhHDN确诊检测能避免发生因Rh血型不合引起的新生儿输血后溶血,减少换血次数,降低RhDHN的死亡率和致残率.

    作者:王丹;蔡紫珍 刊期: 2011年第11期

  • 使用Taqman PCR技术建立人类血小板抗原-1~5、15分型体系

    目的 了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1~5、15多态性分布,分析评估新的分型技术.方法 利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1~5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对.结果 HPA各等位基因频率分别为HPA-1a:0.999,HPA-1b:0.001,HPA-2a:0.953,HPA-2b:0.047,HPA-3a:0.582,HPA-3b:0.418,HPA-4a:0.999,HPA-4b:0.001,HPA-5a:0.988,HPA-5b:0.012,HPA-15a:0.524,HPA-15b:0.476;有1份标本HPA-5等位基因与SSP检测结果产生差异.结论 上海地区HPA各等位基因频率与国内各地区人群分布无明显差异,与中国汉族人群HPA分布情况基本吻合,实验数据经验证符合Hardy-Weinberg平衡定律,实验结果准确可靠;HPA-5差异经测序验证判断可能由PCR-SSP非特异扩增所致;TaqMan技术在HPA抗原系统分型应用中特异性高,反应时间短,具有良好的应用前景,是现有技术方法的一种重要补充.

    作者:沈彤;赵玉林;刘熔增;刘达庄 刊期: 2011年第11期

  • 血浆与红细胞悬液上清液中抗体效价及血浆蛋白的含量分析

    目的 了解血浆与红细胞悬液上清液中血型抗体效价和血浆蛋白含量.方法 选取无偿献血者162名(A型53例,B型52例,O型57例)制备的血浆和红细胞悬液,对后者混匀后离心取上清液,抗-A、抗-B效价和血浆蛋白的含量检测并进行比较.结果 血浆与红细胞悬液上清液中血型抗体效价比较,A型血浆抗-B效价(30.76±23.28),A型红细胞悬液抗体效价(5.00±3.37);B型血浆抗-A效价(20.08±20.62),B型红细胞悬液抗体效价(2.75 ±2.15);O型血浆抗-A效价(33.54±21.03),红细胞悬液抗体效价(5.33±3.09),血浆抗-B效价(31.37±20.75),细胞胞悬液抗体效价(4.98±2.97).血浆各类蛋白与红细胞悬液上清液中A型比较均有统计学意义(P<0.01).血浆抗体效价均数约为红细胞悬液上清液的6倍;血浆各类蛋白约为红细胞悬液上清液的7~8倍.结论 悬浮红细胞中抗体效价低且蛋白含量少,可以在交叉配血时只做主侧配血即可.

    作者:肖瑞卿;隆晓秋;王泽蓉;王世春;刁荣华;易中梅;赵树铭 刊期: 2011年第11期

  • 血细胞诱导iPSC的研究进展及在输血医学上的应用

    自2007年日本[1]和美国[2]科学家分别宣布用4个转录因子将人成纤维细胞诱导成具有和胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)类似功能的诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)后,关于它的研究迅猛发展,研究成果层出不穷.用于重新编程的转录因子从4个(Oct 4/Sox 2/Klf 4/c-Myc或Oct 4/Sox 2/Nanog/Lin 28)逐渐减少为2个(Oct4/Sox2)[3]甚至1个(Oct4)[4].将转录因子导入受体细胞的载体也由整合型的病毒载体逐渐向安全性高的非整合型载体发展.用于诱导人iPSC的细胞来源也越来越广泛,如神经干/祖细胞[4]、精原干细胞[5]、头发角质细胞[6]和血细胞[7,8 ]等.在众多细胞来源中,血细胞因资源丰富且采集方便、所需前培养时间短、iPSC诱导效率高而越来越受关注.我们就血细胞向iPSC诱导的研究进展及iPSC在输血医学上的应用前景做一综述.

    作者:林凤秋;李剑平 刊期: 2011年第11期

  • 31766名患者红细胞血型不规则抗体分析

    目的 检测患者血清中不规则抗体,评估不规则抗体在患者的性别、输血史/妊娠史上的发生频率,并探讨不规则抗体筛查在临床输血及孕妇产前检查中的意义.方法 采用盐水法及微柱凝胶免疫检测法对解放军总医院2009年10月~2010年10月31 766名患者进行不规则抗体筛查,并对不规则抗体筛查阳性的病例进行抗体特异性鉴定.结果 在被检标本中共发现217例不规则抗体筛查阳性,阳性率为0.68%,其中男84例,占被调查男性的0.51%,女133例,占被调查女性的0.86%,女性高于男性(x2=14.34,P<0.01).其中有204例曾经有输血史或妊娠史,显著高于无输血史或妊娠史的患者(x2=230.29,P<0.01).在不规则抗体筛查阳性的患者中自身抗体17例,有抗体特异性未能确认者66例,确认抗体特异性134例,其中Rh系统抗体79例(36.40%),MNS系统29例(13.36%),Lewis系统17例(7.83%),其他系统:抗-K 2例、抗-Kpa1例、抗-Fya1例、抗-Jka 2例、抗-P1 2例、抗-e联合抗-P1 1例.免疫球蛋白类别IgG抗体152例(70.04%);IgM抗体26例(11.98%);IgM+ IgG抗体39例(17.97%).结论 患者在输血前及孕妇在产前进行抗体筛查,并对出现的不规则抗体特异性进行鉴定是非常重要的,特别是对有输血史/妊娠史的患者意义重大.

    作者:王谦;燕备战;于洋 刊期: 2011年第11期

  • 血站成分制备人员职业暴露的防护

    血站职业暴露一般是指血站工作人员在血液采集、运输、制备、检验等工作中因操作意外接触到感染性病原体.成分制备人员在工作中与血液密切接触,这些血液大部分是未经检验的待检血,少部分为检验合格的成品血,其职业暴露有着自身的特点,针对这些特点做好重点防护可以有效降低职业暴露的危险性,现结合本站实际工作情况谈谈成分制备人员防护职业暴露的一点体会.

    作者:宋毅;张永征;丛培芳 刊期: 2011年第11期

  • Rh(D)阴性孕妇妊娠晚期预存自体输血效果观察

    目的 观察贮存式自体输血在Rh(D)阴性孕妇中的效果.方法 选择Rh(D)阴性孕妇42名进行贮存式自体输血,比较贮存式自体输血组孕妇采血前后及分娩前后3 dRBC、Hb、Hct、Plt数量,并观察妊娠结局及母婴预后.结果 42名妊娠晚期Rh(D)阴性孕妇采血前后及分娩前后3d血常规主要指标RBC、Hb、Hct、Plt比较不具统计学意义(P>0.05);随访产(术)后母婴情况良好,新生儿结局无不良反应,Apgar评分为9~10分;自体血液回输时无任何输血不良反应,也未输异体血.结论 妊娠晚期贮存式自体输血对Rh(D)阴性孕妇的血液主要指标RBC、Hb、Hct、Plt数量不会产生明显的影响,且母婴预后良好,认为是可行且有效的.

    作者:裘晓乐;戴佩佩;林甲进 刊期: 2011年第11期

中国输血杂志

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主管:中华人民共和国卫生部

主办:中国输血协会 中国医学科学院输血研究所