学术投稿

人血栓调节蛋白基因编码片段的克隆及在真核细胞中的表达

戴毅;陈开;邹琳;张雪梅;乔正荣;时德

关键词:血栓调节蛋白, 真核细胞, 重组质粒
摘要:目的构建人血栓调节蛋白(hTM)基因真核表达质粒,并导入两种真核细胞[非洲绿猴肾母细胞(COS-7细胞)和脐静脉内皮细胞(HUVECs)]中表达,为临床血栓病的基因治疗提供实验依据和物质基础.方法采用PCR法扩增hTM基因的表达片段,HindⅢ+EcoRⅠ酶切后与pcDNA3.1(+)/neo质粒连接成pcDNA3.1/hTM.经鉴定确认后,由阳离子脂质体包裹转染COS-7细胞及HUVECs,RT-PCR和免疫组化法分别检测转染后细胞hTM的mRNA及蛋白的表达.结果双酶切及测序鉴定均证实hTM基因表达片段被成功克隆,pcDNA3.1/hTM经脂质体介导能有效地转染COS-7细胞和HUVECVs.结论成功构建pcDNA3.1/hTM重组质粒,并且能在两种真核细胞中高效表达,为进一步的基因治疗和对TM抗凝机理研究提供了物质基础.
中国普外基础与临床杂志相关文献
  • 99锝m-tetrofosmin乳腺扫描鉴别乳腺包块性质的临床研究

    目的探讨99锝m-tetrofosmin乳腺扫描在鉴别可扪及的乳腺包块良恶性质方面的价值.方法 2000年6月至2002年1月在我院临床发现乳腺包块的104例患者接受了99锝m-tetrofosmin乳腺扫描.检查时先经病变对侧肘静脉注射740 MBq显像剂,注射后5、10及20 min 分别采集前位和侧位图像.距阵256×256,每帧记数1~1.5 M,将99锝m-tetrofosmin在乳房局部浓聚视为亲肿瘤显像阳性.全部病例以术后病理结果为金标准,以四格表进行评价分析.结果 99锝m-tetrofosmin在对可扪及的乳腺包块性质进行鉴别诊断时,特异性为84%,敏感性为87%,准确性为86%,阳性预测值为85%,阴性预测值为86%.结论 99锝m-tetrofosmin在对可扪及的乳腺包块进行良恶性质的鉴别时,不失为一种较为准确的方法.

    作者:周蕾蕾;宋文忠;陈明曦;刘锦平;黄劲;谢红军;王晓东;罗静 刊期: 2005年第06期

  • 我国胆道外科的现状及未来

    微创外科学的发展改变着传统外科疾病的诊断及治疗格局,长期以来,较小的手术切口、较少的痛苦及较快的术后恢复一直是外科医师的向往.腹腔镜胆囊切除术(LC)的巨大成就使这种梦想正在成为现实,伴随着微创外科技术的发展,我国胆道外科迎来了一个崭新的时代.

    作者:巴明臣;黄祥成 刊期: 2005年第06期

  • 我国腹腔镜直肠癌根治术的现状和展望

    微创外科学的发展改变着传统外科疾病的诊断及治疗格局,随着医学对人体生理及病理、病理生理认识的深化,给予患者心理和生理上大限度的康复已成为外科治疗的终极目标.微创外科因创伤小、患者痛苦少、术后恢复快而广为接受,因直肠特殊的解剖位置,腹腔镜直肠癌根治术成为继腹腔镜胆囊切除术后开展为成功的微创外科手术[1,2].

    作者:卿三华;巴明臣 刊期: 2005年第06期

  • 大动脉外科疾病的腔内治疗

    发生于大动脉的外科疾病主要是真性动脉瘤、夹层动脉瘤和假性动脉瘤等动脉扩张病.早在1684年,Moore将一段金属丝导入腹主动脉瘤腔内,希望促发瘤内血栓形成.这是人类的首次大动脉腔内治疗尝试,而其真正的发展仅仅是近20年的事.上世纪80年代中后期开始了动脉瘤腔内隔绝系统的实验研究,到1990年,Parodi成功地施行了世界上第一例腹主动脉瘤腔内隔绝术,在国内,笔者于1997年率先开展了该手术[1],并在此后迅速推广应用于胸主动脉瘤、夹层动脉瘤、假性动脉瘤和动静脉瘘等疾病的治疗.

    作者:景在平;冯翔;冯睿 刊期: 2005年第06期

  • 肝脏31P-MR波谱成像的临床应用

    目的总结磁共振31磷波谱成像(31phosphorus MR spectroscopy, 31P-MRS)的原理及在肝脏疾病诊断中的临床应用. 方法回顾分析国内、外应用31P-MRS诊断肝脏疾病的文献. 结果在肝炎、肝硬变、肝脏肿瘤、肝移植术后及梗阻性黄疸等各种肝脏疾病患者中,31P-MR波谱出现异常,评价31P-MR波谱对疾病的诊治有重要临床意义. 结论 31P-MRS作为一种研究活体肝脏细胞水平的能量代谢和生化指标变化的非侵入检查方法,正得到越来越广泛的临床应用.

    作者:吴苾;宋彬;杨洋 刊期: 2005年第06期

  • CO2气腹对肝硬变大鼠肠黏膜通透性影响的实验研究

    目的探讨CO2气腹对肝硬变大鼠肠道黏膜通透性的影响.方法建立肝硬变大鼠模型.50只大鼠随机分为对照组(n=5),肝硬变组(n=5)及肝硬变气腹组(n=40), 肝硬变气腹组根据不同气腹压又分为8 mm Hg和13 mm Hg 2个亚组,每组20只.各组大鼠(肝硬变气腹组分别在气腹结束后0.5、2、6及 12 h)取门静脉血检测血清内毒素及D-乳酸含量.结果肝硬变组血清内毒素及D-乳酸含量均明显高于对照组(P<0.05); 而肝硬变气腹组不同气腹压及持续不同时间后的血清D-乳酸及内毒素含量则均明显高于肝硬变组(P<0.05),其中血清内毒素含量随气腹压增高而增高(13 mm Hg vs 8 mm Hg, F=5.466, P<0.05),但血清D-乳酸含量不同气腹压间的差异无统计学意义(F=0.415, P>0.05).结论肝硬变大鼠肠黏膜通透性增加,在此基础上建立CO2气腹若增加到一定压力并持续一定时间后,可增加肠黏膜的通透性,且此变化随气腹压力增高而加大,但解除气腹后可逐渐恢复.

    作者:闫宏宪;罗丁;陈训如;查勇 刊期: 2005年第06期

  • 低强度微波辐射对兔髂外动脉损伤后再狭窄的影响

    目的探讨低强度微波(LIM)辐射对血管再狭窄病理过程的影响,以评价LIM辐射防治再狭窄的可能性.方法健康雄性新西兰大白兔48只,随机分为2组.应用Fogarty导管损伤兔髂外动脉(EIA)内膜,建立再狭窄动物模型.辐射组采用2 450 MHz微波,功率分别为2、5和10 mW/cm2,局部辐射EIA(1 h/d).分别于术后3、7、14及28 d 取材.采用HE和EF染色,观察EIA形态学改变及内膜面积、中膜面积及管腔狭窄率; TUNEL标记法检测细胞凋亡; TEM观察血管平滑肌细胞(VSMC)表型及超微结构.结果 LIM微波辐射后,再狭窄早期炎症反应受到抑制,附壁血栓减少,各时间点VSMC的增殖、迁移被抑制,内膜面积和管腔狭窄率显著低于对照组(P<0.01). 细胞凋亡率在术后3 d各组间差异无统计学意义(P>0.05),其余时间点,辐射组显著高于对照组(P<0.01),其中5 mW/cm2者细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01).TEM观察到对照组大量合成型VSMC术后14 d达(93.50+3.45)%,辐射组VSMC以收缩型为主,大量成纤维细胞和VSMC呈凋亡的形态学改变.结论 LIM辐射能显著抑制再狭窄病理过程中的早期炎症反应和VSMC的增殖、迁移,促进细胞凋亡,有效抑制再狭窄的发生、发展.LIM辐射存在量效关系和功率窗效应,功率强度为5 mW/cm2时对再狭窄的效应强.

    作者:王志刚;雷泽华;时德;乔正荣 刊期: 2005年第06期

  • 尼美舒利对结肠腺癌细胞MMP-2表达的影响

    目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂--尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞的生长及对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法实验分为尼美舒利组、二甲亚砜(DMSO)对照组及不接种细胞的空白对照组,采用MTT法检测不同浓度的尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29(COX-2高表达)及HCT-116(COX-2低表达)增殖的抑制效应; 采用改良明胶酶谱分析法检测MMP-2的表达.结果尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29和HCT-116生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性,且对HT-29细胞的抑制作用强于HCT-116细胞;尼美舒利抑制了HT-29细胞的MMP-2表达,而对HCT-116细胞MMP-2的表达的抑制作用不明显.结论尼美舒利可明显抑制COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29的增殖和生长,提示尼美舒利可能通过抑制COX-2活性而降低细胞MMP-2的表达.

    作者:刘伟;安杰;张超 刊期: 2005年第06期

  • 暴发性急性胰腺炎的诊治体会(附17例报告)

    目的探讨暴发性急性胰腺炎(FAP)的诊治方法.方法回顾性分析1999年3月至2004年5月我院收治的79例重症急性胰腺炎(SAP)患者的临床资料.结果 79例SAP患者中, FAP患者17例,其中3 d内手术的4例均治愈 ,延期手术4例与非手术治疗的9例均死亡. 结论主要根据SAP患者的临床表现、动态B超检查或APACHE Ⅱ评分短期大幅增高即可诊断FAP. 一旦确诊,应当机立断,力争手术治疗. 血液滤过或使用大剂量激素可能为呼吸、循环不稳定的患者创造手术时机 .手术方式宜尽量简单有效,开腹手术和经腹腔镜辅助下的腹腔灌洗术引流效果较好,局麻下下腹切口减压引流效果差.手术前后应加强器官功能的监护和支持.

    作者:罗静;姚欣敏 刊期: 2005年第06期

  • 细胞外基质中纤维连接蛋白改变与胃癌微血管形成相关性研究

    目的探讨胃癌细胞外基质中纤维连接蛋白(fibronectin, FN)的改变及其与胃癌组织微血管生成的相关性.方法应用免疫组织化学EnVisonTM 法,对80例胃癌组织和20例正常胃腺体组织中FN的表达、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达及肿瘤微血管密度(microvessel density, MVD)进行检测.结果 FN免疫复合物呈棕黄色分布于胃腺体基底膜及周围的结缔组织间质中.正常组织基底膜中FN染色呈完整线性结构,结缔组织间质中FN染色呈规则的条纹状.胃癌组织基底膜FN的完整线性染色结构被不同程度破坏,结缔组织间质中FN染色加深,形状不规则.胃癌组织中VEGF表达和MVD较正常组织均升高(P<0.01, P<0.05).胃癌结缔组织间质中FN表达与VEGF表达和MVD均存在正相关性(P<0.01, P<0.05); 而胃癌组织基底膜FN线性染色缺损程度与VEGF表达和MVD均无相关性(P>0.05, P>0.05).结论胃癌结缔组织间质中FN表达的增高可能与其微血管形成和发展过程关系密切,FN与VEGF在胃癌微血管的形成和发展的过程中可能存在相互协同和促进关系.

    作者:焦作义;刘博;李晋;王振侠;徐明清;杨家印;王文涛;严律南 刊期: 2005年第06期

  • 178例甲状腺癌诊治体会

    目的探讨甲状腺癌的诊断及治疗方法.方法回顾性分析我院1999~2003年期间收治的178例行手术治疗的甲状腺癌患者的临床资料.结果本组患者术前B超检查均发现甲状腺内实性或囊实性结节,其中结节内伴微钙化灶者50例(28.1%),B超检查对于颈部淋巴结转移的阳性预告值为78.1%.行术中冰冻切片检查162例,诊断甲状腺癌144例,阳性率为88.9%.术后病理检查证实有淋巴结转移者为34.3%(61/178),甲状腺癌局部或患侧叶切除术后行二次以上手术者30例,残癌率为43.3%(13/30).结论声音嘶哑及B超检查提示甲状腺结节内微钙化灶对甲状腺癌的术前诊断有重要提示意义,亦可作为是否行颈淋巴结清扫的指征之一.术中冰冻切片检查是确诊甲状腺癌的佳方法.患叶+峡部+对侧大部切除是甲状腺癌的主要手术方式.

    作者:张立阳;廖泉;赵玉沛 刊期: 2005年第06期

  • 自发性大肠穿孔4例报告

    我院1998年12月至2003年12月共收治4例自发性大肠穿孔患者,均为男性,年龄40~78岁,平均57岁.发病至就诊时间10~72 h,平均29 h.均有慢性便秘史,均突发脐周和左中下腹痛,并逐渐蔓延至全腹,伴腹胀,有腹膜刺激征和中毒性休克.腹部X片示: 膈下游离气体.术前诊断为空腔脏器穿孔,行剖腹探查,术中见乙状结肠破裂3例,腹膜返折上直肠破裂1例.4例穿孔处组织病检均为炎性改变.4例均行剖腹探查,明确为大肠自发性穿孔后,彻底清除腹腔内肠内容物和脓液,用生理盐水、甲硝唑反复冲洗干净.2例行穿孔修补和Hartmann's术,2例行穿孔结肠切除和Hartmann's术.就诊时间晚,呈重度休克,未切除穿孔结肠的1例死亡; 另3例恢复良好.

    作者:赵雄齐 刊期: 2005年第06期

  • 腹膜转移瘤的CT征象

    目的以卵巢恶性肿瘤为例,探讨腹膜转移瘤的CT表现特征及卵巢恶性肿瘤腹膜转移的特点.方法回顾性分析33例手术切除并经病理证实为原发性卵巢恶性肿瘤,手术后复查有腹膜转移的CT表现特征,着重观察和分析病变的部位、数量、密度和大小. 结果 33例中发现腹膜转移病灶186个,复发病灶10个.常见的转移部位是右肝上间隙、右肝下间隙、小肠系膜、胃结肠韧带、大网膜等.转移病灶密度以实性为主,病灶直径在0.5~13 cm之间.结论腹膜种植转移是卵巢恶性肿瘤常见的转移方式,常见于右上腹部,尤其是右膈下间隙,腹腔局限性积液也是常见的征象.卵巢恶性肿瘤的术后CT检查应包括由膈顶到盆底的全部区域.

    作者:姚晋;闵鹏秋;黄娟 刊期: 2005年第06期

  • RNAi 在大肠癌基因治疗中的应用策略和展望

    目的探讨RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术在大肠癌基因治疗研究中的应用.方法复习近几年的相关文献并进行综述. 结果 RNAi能够高效特异地沉默同源基因表达,可在大肠癌发生、发展多个环节发挥重要作用.结论 RNAi技术为大肠癌基因治疗研究开辟了新的途径.

    作者:吕伟;张超 刊期: 2005年第06期

  • CO2气腹对动脉粥样硬化兔颈动脉血流量的影响

    目的探讨CO2气腹对动脉粥样硬化兔颈动脉血流量的影响及其机理.方法将50只日本大耳白兔按随机数字表法分为正常对照组(n=13)和动脉粥样硬化组(n=37), 后者根据气腹压的不同[0、10及15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)]分为3个亚组,n分别为12、12及13.通过高脂饮食制作兔动脉粥样硬化模型.采用电磁流量计检测实验兔颈动脉血流量变化,生化分析仪行血气分析.结果建立气腹后(10及15 mm Hg)各时点兔颈动脉血流量均明显高于0 mm Hg组及正常对照组(P<0.05),且随气腹持续时间延长而增加,均明显高于气腹前(P<0.05),解除气腹后30 min虽有下降,但仍高于气腹前(P<0.05); 其中15 mm Hg组颈动脉血流量明显高于10 mm Hg组(P<0.05); 0 mm Hg组与正常对照组颈动脉血流量差异无统计学意义(P>0.05).建立气腹后(10及15 mm Hg)各时点,动脉血PaCO2逐渐升高,pH值逐渐下降,均明显高于或低于气腹前、0 mm Hg组及正常对照组(P<0.05); 各时点0 mm Hg组及正常对照组 pH值及PaCO2差异无统计学意义(P>0.05); 各组间及各时点间血HCO3-含量差异无统计学意义(P>0.05).结论动脉粥样硬化状态下,CO2气腹可引起颈动脉血流量增加,其机理可能与腹内压增高、CO2通过腹膜吸收导致PaCO2升高、pH降低、造成高碳酸血症等原因有关.

    作者:查勇;陈训如;罗丁 刊期: 2005年第06期

  • 腹腔镜胆囊切除术非创伤性并发症的预防

    目的探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)非创伤性并发症的预治措施.方法回顾分析1991年9月至2004年8月13 000例LC的临床资料.结果 13 000例LC共发生非手术创伤性的并发症56例,其中遗漏腹腔内恶性肿瘤9例,胆总管残留结石47例.9例遗漏病变中,包括肝癌、胃癌各1例,胰腺癌、胆囊癌各2例,右半结肠癌3例.除3例右半结肠癌行根治性切除外,另6例已不能行根治性手术.47例胆管残留结石均治愈,其中31例经ERCP取石,16例行开腹胆道探查.结论术前注意鉴别患者的症状,术中注意观察胆囊的病理改变及腹腔内有无异常情况,必要时借助腹腔镜超声(LUS)等检查是避免LC后遗漏腹腔内恶性肿瘤及残留胆管结石等非手术创伤性并发症发生的有效方法.

    作者:张吉祥;陈训如;罗丁;毛静熙;周正东;余少明;李胜宏;刘成;韩江;李临海;王宏光;晋云;卿德科;陈刚 刊期: 2005年第06期

  • 372例亚急性甲状腺炎临床分析

    目的探讨亚急性甲状腺炎的诊断和治疗. 方法回顾性分析吉林大学中日联谊医院1962年1月至2000年1月期间收治的372例亚急性甲状腺炎患者的临床资料.结果 372例亚急性甲状腺炎中129例误诊为其他甲状腺疾病,6例合并甲状腺乳头状癌.183例在发病前有上呼吸道感染病史,235例颈前区疼痛,348例发现颈前区包块,45例合并乙型肝炎病毒感染. 行彩色多普勒检查、甲状腺核素扫描检查、甲状腺吸131Ⅰ率测定及细针穿刺细胞学检查,其阳性率分别为95.62%、89.66%、69.70%及89.41%,T3、T4及TSH指标也有不同程度改变.107例患者行激素加甲状腺素治疗,133例行口服肠溶阿斯匹林连续2个月以上治疗,部分患者加服优甲乐100 μg/d.135例行手术治疗. 结论无上呼吸道感染病史和无颈前区疼痛的亚急性甲状腺炎病例易误诊为其他甲状腺疾病.彩色多普勒、细针穿刺细胞学检查诊断率高,特异性强,是首选的检查手段; 甲状腺核素扫描可以准确地反映甲状腺功能状态; 检测血清中T3、T4及TSH水平可以协助诊断本病,判断疾病所处阶段.口服肠溶阿斯匹林加用优甲乐治疗本病效果良好.

    作者:盖宝东;胡玉荣;郑泽霖;张德恒 刊期: 2005年第06期

  • 腹腔镜技术在小肠疾病诊治中的应用

    目的探讨腹腔镜技术在小肠疾病诊治中的应用.方法总结分析2000年5月至2004年2月解放军总医院收治的33例小肠疾病患者行腹腔镜探查和手术治疗的效果. 结果 33例患者手术均顺利完成,平均手术时间65 min,术中出血量平均30 ml.术后疼痛轻微,排便、排气时间平均32 h,平均住院时间7 d.术后病理检查诊断为小肠间质瘤24例(其中6例为低度恶性间质瘤),美克尔憩室5例,小肠恶性淋巴瘤4例.所有患者均痊愈出院,随访10~36个月未见复发.结论腹腔镜技术在小肠疾病诊治中具有良好效果,腹腔镜小肠手术是一种安全、有效的微创手术方法,值得临床推广应用.

    作者:田文;夏绍友;肖西平;刘洪一;曲强;杜晓辉;李荣 刊期: 2005年第06期

  • 心功能Ⅱ级患者行低气腹压腹腔镜胆囊切除术18例临床分析

    目的探讨心功能Ⅱ级患者在低气腹压下行腹腔镜胆囊切除术的可能性.方法总结我院2003年7月至2004年7月间收治的18例心功能Ⅱ级患者行低气腹压腹腔镜胆囊切除术的临床资料.结果 18例心功能Ⅱ级患者中17例完成腹腔镜胆囊切除,1例中转开腹.结论心功能Ⅱ级患者行低气腹压腹腔镜胆囊切除术是可行的.

    作者:赵国良;张英豪;薄涛 刊期: 2005年第06期

  • 腹腔镜辅助下小肠部分切除术的临床应用(附10例报告)

    目的探讨腹腔镜辅助下小肠切除术的治疗价值.方法回顾性分析我院2001年7月至2004年9月期间实施腹腔镜辅助下小肠切除术10例患者的临床资料.结果除1例中转开腹外,余 9例均实施腹腔镜辅助下小肠切除.平均手术时间(70.2±18.3) min (60~120 min),术中平均出血量(30.3±12.6) ml (15~50 ml),平均住院时间(6.5±1.6) d (5~8 d).所有患者均在术后24 h开始下床活动,48 h内恢复胃肠功能.术后无一例使用止痛剂.全组手术无病灶遗漏,无并发症和手术死亡发生.结论腹腔镜辅助下小肠切除术安全、经济并具有良好的治疗效果.

    作者:胡海军;潘凯;谢友龙;夏利刚;陈小春 刊期: 2005年第06期

中国普外基础与临床杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:四川大学华西医院