戴琨；张朝晖；曹芳；李玮；韦弢；范婧
目的 从链霉菌2754中提取分离和纯化小分子VEGF受体抑制剂,并进行结构鉴定.方法 以酪氨酸酶活性测定方法(EuSA法)为活性跟踪方法,利用大孔吸附树脂反相HPLC等方法进行分离纯化.利用光谱分析,进行结构解析.结果 分离纯化到两个七尾霉素类化合物nanaomycin αA和nanaomycin βA并具有相关活性.结论 Nanaomycin αA和nanaomycin βA为己知化合物,首次报道该化合物具VEGFR拮抗活性.
作者：刘祺；蒋忠科；郭连宏；张洋；吴剑波；姜蓉 刊期： 2011年第06期
目的 筛选以右旋磷霉素为唯一碳源转化产生左旋磷霉素的菌株并进行种属鉴定.方法 采用固体琼脂块法对微生物菌种资源库中的真菌进行初步筛选;再利用液体摇瓶法对初筛阳性菌株进行复筛.利用薄层生物自显影的方法和质谱分析法对转化产物进行鉴定.采用形态学分类法及ITS-5.8S rDNA序列分析法对阳性菌株进行菌种鉴定.结果 初筛了2856株真菌,获得138株阳性菌株;对其中转化能力比较强的15株阳性菌株进行液体摇瓶复筛,发现菌株2221的转化率高,当底物投料量为0.05%时,转化率达到36.8%.根据菌株2221的形态特征以及ITS-5.8S rDNA序列比对,菌株2221被鉴定为沙门柏干酪青霉.结论 沙门柏干酪青霉2221可手性转化右旋磷霉素为左旋磷霉素.
作者：孙杨；姜平；孙东阳；张怡轩 刊期： 2011年第06期
目的 构建土壤宏基因组文库并对格尔德霉素类I型聚酮合系(polyketide synthase,PKS)基因进行初步筛选研究.方法 直接提取土壤样品中宏基因组DNA,以Fosmid为载体,构建宏基因组文库.根据格尔德霉素的I型PKS基因的保守序列设计引物,使用菌落PCR方法直接筛选所获得的宏基因组文库.结果 成功构建了土壤宏基因组文库,获得约6800个克隆子,其平均插入片段在25kb以上,覆盖至少170Mb的基因组信息.通过PKS基因筛选,获得了新的PKS基因片段.结论 本文报道了土壤宏基因组文库的成功构建,并为利用宏基因组技术寻找新的聚酮类次级代谢产物的生物合成基因,以便于其异源表达或组合生物合成新的聚酮类次级代谢产物奠定基础.
作者：林灵；陈菲菲；王以光；赫卫清；王相晶 刊期： 2011年第06期
目的 研究鲍曼不动杆菌烧伤分离株对广谱抗生素的耐药性及所携带的广谱抗生素及消毒剂耐药基因.方法 测定20株分离自烧伤患者的鲍曼不动杆菌对四环素、米诺环素、氯霉素、利福平、复方磺胺甲噁唑5种广谱抗生素的敏感性,PCR检测catB、cmlA、arr-2/3、tetA、tetB、smr-2、emrE、dfrA1、dfrA5、dfrA7、dfrA12、dfrA17、dfrB5、qacE△l-sull和intI 共15种基因.结果 20株细菌对5种抗生素的敏感率分别为10%、100%、0、0和5%.tetB、qacE△l-sull和intl基因检出率均为95%(19/20),其余12种基因为阴性,且一株静脉导管分离株携带了上述3种基因.结论 本组鲍曼不动杆菌烧伤分离株对除米诺环素外的广谱抗生素耐药严重,并携带了四环素类和消毒剂耐药基因.应规范此类抗生素在养殖业中的使用,同时采取措施防止多重耐药菌株利用静脉导管在烧伤科传播.
作者：程华莉；潘宇红；黄璇；吕国忠；朱婕；糜祖煌；张烽 刊期： 2011年第06期
目的 从喜树组织中筛选产10-羟基喜树碱的内生真菌,并对其进行鉴定.方法 从喜树(Camptotheca acuminate Decne)树皮中分离、纯化得到6株内生真菌,经摇瓶发酵后,采用TLC法、HPLC和MS分析菌丝的提取物;用插片法进行形态学观察,采用分子生物学方法对XK002菌株rDNA的ITS基因(ITS-5.8S rDNA)进行PCR扩增、测序;利用BLAST软件与GenBank 数据库进行相似性分析,并用Clustal X1.81软件法构建系统发育树.结果 内生真菌XK002可产10-羟基喜树碱;菌株XK002在PDA培养基上生长迅速,白色绒毛状,4d能长满直径为9cm培养皿,10d后开始形成黑色的子座,产生大量的分生孢子;ITS序列与Valsa mali Miyabe et Yamada相应序列的相似性为100%,基因库接受号(AccessionNo.)为FJ418170.结论 根据形态学和分子生物学方法鉴定可知,XK002菌株为Valsa mali Miyabe et Yamada.
作者：汪学军；闵长莉；刘文博；薄翠英 刊期： 2011年第06期
目的 建立高效液相色谱法标定左氧氟沙星杂质A对照品的含量.方法 色谱柱采用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂,流动相为醋酸铵高氯酸钠溶液:乙睛(55:45),流速为1.0mL/min;检测波长238nm,柱温:40℃.结果 杂质A进样量为0.84～3.38μg时与峰面积呈良好线性关系(r=0.9996),低检出量为0.2μg,重复性试验的RSD(n=6)为0.58%.结论 该方法准确、灵敏、可靠,专属性强,可用于左氧氟沙星杂质A的含量测定.
作者：王维剑；李军；刘琦；谢元超 刊期： 2011年第06期
目的 研究可利霉素菌渣作为氮源的再利用,以减少其污染.方法 基于菌渣的元素分析结果,以可利霉素效价为目标,在摇瓶中初步研究可利霉素菌渣作为氮源在可利霉素发酵中的效果.结果 元素分析表明,干菌渣的N元素含量为6.23%,接近于黄豆粉.菌渣作为唯一氮源时,4%菌渣加量的可利霉素效价高,达到1379U/mL,为对照的77%.通过正交试验优化后的发酵培养基配比为淀粉6%、菌渣4%、NH4NO30.6%、CaCO3 0.5%、MgSO4 0.1%、NaCl 1%、KH2PO4 0.01%.优化培养基中N含量为4.59g/L,与对照培养基中的N含量基本相同.可利霉素效价提高到1776U/mL,达到对照的88%.液相色谱分析表明,菌渣作为氮源时,可利霉素组分中的总异戊酰螺旋霉素含量有一定提高,而异戊酰螺旋霉素Ⅲ含量几乎没变化.结论 可利霉素菌渣作为氮源能够再用于可利霉素发酵生产,对于环境保护和降低生产成本具有重要的意义.
作者：蔡翔；郝玉有；刘新星；陈双喜 刊期： 2011年第06期
目的 寻找新的喹诺酮类抗菌药.方法 设计合成7-位具有较强亲水性取代基的7个氟喹诺酮衍生物,测定其体外抗菌活性.结果 化合物10对金葡菌(包括MRSA)和表葡菌(包括MRSE)的活性(MIC:0.06～4μg/mL)与左氧氟沙星和吉米沙星基本相当.化合物11对肺炎链球菌08-2的活性(MIC:0.25μg/mL)分别是左氧氟沙星和吉米沙星的128倍和32倍,化合物12对肺炎克雷伯菌09-22和09-23的活性(MIC:1μg/mL)分别是左氧氟沙星和吉米沙星的16倍和4倍,但目标物对革兰阴性菌的活性普遍弱于对照药.结论 7-位取代基的水溶性并非决定喹诺酮抗菌活性的主要因素.
作者：郭强；冯连顺；刘明亮；郭慧元；李素杰 刊期： 2011年第06期
目的 了解心血管病医院2006-2009年小儿心脏术后下呼吸道感染病原菌菌群分布及常见致病菌的耐药情况.方法 病原菌采用Bio-Merieux VITEK32全自动微生物鉴定系统进行菌株鉴定及药敏试验.结果 共分离出706株病原菌,常见的革兰阴性杆菌是肺炎克雷伯菌(22.1%),铜绿假单胞菌(19.6%),其次是鲍曼不动杆菌(13.6%)、大肠埃希菌(12.2%)、阴沟肠杆菌(6.0%)及嗜麦芽寡养单胞菌(3.7%).主要革兰阴性杆菌均对头孢哌酮/舒巴坦,哌拉西林/三唑巴坦,阿米卡星敏感,且除嗜麦芽寡养单胞菌外对亚胺培南和美罗培南也均敏感.大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株分别为88.4%及73.7%.结论 小儿心脏术后下呼吸道感染的病原菌分布有其特殊性,了解其病原菌分布及耐药性,为临床感染治疗提供依据.
作者：王飞燕；程军 刊期： 2011年第06期
目的 建立基于Alamarblue法检测的巨噬细胞模型,应用于氯苯吩嗪衍生物细胞内抗结核活性的测定.方法 以不同菌量/细胞比例感染巨噬细胞不同时间,阳性药INH、RFP、EMB与感染细胞作用不同时间,CFU计数测定细胞内菌量,考察适感染复数、感染时间与药物作用时间.以比色法测定一些常用抗生素对感染细胞内菌量的影响,并与CFU计数结果比较,考察比色法的准确性、特异性,并应用比色法测定氯苯吩嗪衍生物的细胞内抗结核活性.结果 适感染复数为10:1,感染4h为宜,药物作用时间为3d.比色法与CFU计数测定药物细胞内抗菌活性的结果一致.所测的吩嗪类化合物显示出良好的细胞内抗菌活性.结论 建立了Alamar blue比色法巨噬细胞筛选模型,可对细胞内药物抗结核活性作出快速、客观的评价.
作者：郑梅琴；陆宇；王彬；付雷 刊期： 2011年第06期
目的 对分离自硇洲岛黄海葵(Anthopleura xanthogrammica)样品的126株细菌进行抗菌活性筛选和初步分类鉴定.方法 以8种微生物(3株革兰阳性菌、3株革兰阴性菌和2株真菌)作为指示菌,采用琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株,采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析和生物学特性研究对其中抗菌谱较广且抗菌活性稳定的菌株进行初步分类鉴定.结果 67株菌具有抗菌活性,阳性率为53.2%,抗菌谱较广且活性较强的9株,占受试菌株总数的7.1%.经过形态观察、生理生化特征及基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,9株具有较强抗菌活性的菌株分别属于芽孢杆菌属(Bacillus)、盐芽孢杆菌属(Halobacillus)、短杆菌属(Brachybacterium)、拟诺卡菌属(Nocardiopsis)、盐单胞菌属(Halomonas)、假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)和弧菌属(Vi6rio)菌株.结论 分离自中国南海的黄海葵相关微生物抗菌活性菌株具有丰富的类群多样性.
作者：刘祝祥；黄苛；肖怀东；陈奇辉；贺建武；陈义光 刊期： 2011年第06期
目的 建立测定KJY-01大鼠血浆中药物浓度的高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱(HPLC-ESI-MS)联用的分析方法,对其进行大鼠体内的药动学研究.方法 取大鼠血浆50μL,加入内标酮康唑,用甲醇提取后取上清液吹干,用80%甲醇100μL溶解,取2μL进行HPLC-MS测定.色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse plus C18(150mm×2.1mm,5μm),流动相为20mmol醋酸铵(甲酸调节PH为3.75):甲醇(含1‰的甲酸)=22:78,流速为0.25mL/min,采用选择离子检测(SIM)法检测SQ109(m/z=331.3),KJY-01(m/z=475.4),酮康唑(内标,m/z=531.2).结果 SQ109的血药浓度在10～5000ng/mL范围内线性关系良好,低检测限为10ng/mL,以质控样品计算,在各浓度水平下,此法的回收率均大于80%,日间和日内精密度小于20%,符合生物样品分析要求.结论 该方法操作简便、快速、灵敏、专属性强,可用于KJY-01的大鼠体内大批量样品定量分析及早期药动学研究.
作者：韦弢；张朝晖；曹芳；李纬；戴琨；范婧 刊期： 2011年第06期
目的 在庆大霉素发酵培养基优化过程中,探索庆大霉素含量的快速测定方法.方法 以紫外分光光度法作为庆大霉素含量测定手段,采用正交试验方法,对紫色小单孢菌产庆大霉素的发酵培养基及发酵条件进行优化.结果 通过统计学分析,确定发酵培养基优组合为:黄豆饼粉3.5%,CaCO,0.5%,淀粉5.5%,CoCl20.0006%.优化的发酵条件为:种龄60h,接种量12mL,装液量50mL/500mL摇瓶.在此优化条件下添加一定量的氨基酸培养6d,庆大霉素效价较优化前提高了85.5%.结论 本文用紫外分光光度法与微生物法测定庆大霉素发酵液效价产生的误差小于4%,该方法可以用于庆大霉素液体发酵培养基优化的快速筛选.
作者：范一文；吴晓英；王海兵；郭利峰 刊期： 2011年第06期
目的 构建熔解曲线分析法同时检测4种临床常见革兰阳性病原菌,为临床感染性疾病的诊疗提供快速、敏感的分子生物学检测信息.方法 选取临床常见的革兰阳性病原菌:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌做为本课题研究的检测菌种.根据检测菌种的不同,分别选取不同菌种的特异性靶序列,设计种特异性引物.对种特异性引物分别用标准菌株、临床分离目标菌株、临床分离非目标菌株、非细菌性病原体以及人源基因组DNA进行常规PCR扩增以及扩增产物测序,验证引物的特异性.对目标菌种引物进行荧光PCR预实验,筛选Tm值差异较大的多对引物,进行熔解曲线分析法实验,并对熔解曲线法的反应条件与反应体系进行优化.对优化后的熔解曲线法进行特异性验证.通过检测加入人血液中的不同细菌浓度对该方法进行敏感性分析.应用所构建的方法分别检测临床分离目标菌种各20株,分析每种菌种的熔解曲线图,熔点温度(Tm值)及其标准差(SD)的变化,评价所构建方法的稳定性.结果 ①对所设计的种特异性引物经常规PCR扩增产物电泳分析显示,目标菌株均有目的特异性扩增产物,非目标菌株、非细菌性病原体以及人源基因组DNA未出现特异性电泳条带.特异性扩增产物测序所得序列比对分析显示与目的菌种序列相符.②对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌的4对引物同时进行熔解曲线分析和mecA基因熔解曲线分析的条件优化结果:预变性温度94℃、120s,变性温度94℃、20s:退火温度53℃、12s;延伸温度68℃、13s;扩增循环数为40个循环,熔解曲线分析温度75℃～95℃.佳的引物浓度为300nmol/L.③所建立的方法经特异性分析显示,上述4种目标菌种均有特异性熔解曲线,Tm值依次为81.02℃;80.32℃;82.37℃:83.10℃,峰高(cm)/峰宽(cm)均大于2.6,以此为典型的熔解曲线判断标准,则非目标菌、非细菌性病原体以及人源基因组DNA分析未见典型的熔解曲线.④方法的敏感性分析显示,上述4种目标菌和mecA基因可检测到的血液细菌浓度依次为:550、520、470、500与203CFU/mL.⑤对上述4菌和MRSA的临床分离菌各20株进行检测,结果显示,其平均Tm值依次为(80.96±0.688)℃,(80.20±0.729)℃,(82.42±0.599)℃,(83.20±0.713)℃和(80.11±0.15)℃.结论 本研究所设计的针对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和mecA基因检测引物具有较好的菌种特异性,可用于相应病原菌熔解曲线分析法的建立;所构建的熔解曲线法具有较好的特异性、敏感性和稳定性;并具有快速、简便、成本低廉的特点,可用于临床样本的检测;但葡萄球菌属内和肠球菌属内的Tm值较接近,必要时,可进一步用单对引物检测分析以鉴定到种.
作者：陈弟；邵剑春；刘德华；周玲；秦海燕；胡大春 刊期： 2011年第06期
目的 噁唑烷酮类抗菌药是一类新型化学全合成抗菌药,具有抑制多重耐药革兰阳性菌的作用,本文建立高效液相色谱法测定新型噁唑烷酮类药物YC-12的含量及检查有关物质.方法 采用Diamonsil C1 8柱(250mm×4.6mm,5μm),磷酸盐缓冲溶液(1000mL水+2g磷酸二氢钾+3.5mL三乙胺+3mL磷酸)-乙腈-甲醇(42:30:28)为流动相;流速为1mL/min;检测波长254nm,柱温为25℃.结果 主峰能与相邻杂质峰达基线分离,YC-12的浓度在10～200μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9994,低检测限为0.5ng.结论 该法简便、准确,灵敏度高,专属性强,可以用于YC-12的含量及有关物质的测定.
作者：戴琨；张朝晖；曹芳；李玮；韦弢；范婧 刊期： 2011年第06期
目前耐药革兰阳性菌在医院感染中的比例不断上升,具有新型革兰阳性病原菌抑制机制的恩拉霉素和雷莫拉宁成为目前研究的热点.含有17个氨基酸的肽类抗生素,恩拉霉素和雷莫拉宁的生物合成基因簇已分别从链霉菌Streptomyces fungicidicus ATCC21013和游动放线菌Actinoplanes sp.ATCC33076中克隆到.本文综述了恩拉霉素与雷莫拉宁生物合成途径研究的新进展,为进一步利用基因工程手段对其进行结构改造提供依据.
作者：苏敏；李继安；邵雷；陈代杰 刊期： 2011年第06期
目的 评价P-糖蛋白抑制剂酮康唑对安妥沙星转运的影响.方法 利用人源结肠腺癌系Caco-2细胞单层模型对安妥沙星进行双向转运,采用高效液相色谱法对安妥沙星进行定量分析,计算其表观渗透系数(Papp).结果 加入酮康唑后,低浓度安妥沙星(100μmol/L)Papp(B-A)/Papp(A-B)由4.12降至1.23(P＜0.01),高浓度安妥沙星(500μmol/L)Papp(B-A)/Papp(A-B)由3.54降至1.22(P＜0.01).结论 安妥沙星在Caco-2细胞单层模型中的转运机制可能以主动转运为主,P-糖蛋白参与其从细胞基底侧向管腔面的分泌.
作者：邵克花；贾超；赵秀丽；魏敏吉 刊期： 2011年第06期
目的 与方法本文主要采用均匀设计方法对普那霉素培养基进行优化,分别对糊精,蔗糖,葡萄糖,可溶性淀粉和甘油等碳源进行考察,使用软件Uniform Design Version 4.00分析发酵结果并优化配方,对软件给出的优结果继续验证并优化.结果 与结论验证试验表明,含两种碳源即糊精3%葡萄糖3%的配方可使摇瓶培养的发酵单位提高48%,在两吨罐上验证该配方,连续3批进罐发酵单位提高30%.
作者：王立松；郄丽萍；田红；张永红；吴军营；张志华 刊期： 2011年第06期
中国抗生素杂志
主管:中国医药集团总公司
主办：中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所,中国医学科学院医药生物技术研究所
