学术投稿

变性高效液相色谱技术在线粒体基因突变检测中的应用

张炳峰;牛琦;陈晓婷

关键词:变性高效液相色谱, 线粒体基因, 突变
摘要:目的 以变性高效液相色谱(DHPLC)技术分析检测线粒体肌病患者线粒体基因突变,以明确诊断.方法 收集4例临床诊断为线粒体肌病的患者,以50例健康体检者作为对照,提取患者肌肉组织及对照组外周血细胞DNA,用聚合酶链反应(polymerase chin reaction,PCR)扩增线粒体22个tRNA基因,利用变性高效液相色谱分析技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)对PCR产物进行突变筛选,出现异常峰型的tRNA基因进行核苷酸序列测定,明确突变位点.结果 4例线粒体肌病患者均检测出线粒体基因突变,突变分别为:例1tRNA-Val基因发生A1625G纯合突变,例2 tRNA-Val基因发生A1625G/A杂合突变,例3 RNA-Arg基因发生A10411C/A杂合突变,例4 RNA-Trp基因发生T5553C纯合突变.结论 DHPLC能有效地用于线粒体基因突变的检测,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段.
现代检验医学杂志相关文献
  • CD 94/NKG2家族及其配体研究进展

    NK细胞是重要的天然免疫细胞,具有广泛的生物学功能,其特征是表型为CD3-,CD16+(FcγR Ⅲ A),CD56+(N-CAM),不需要预先刺激即可直接杀伤肿瘤和被病毒感染的靶细胞[1],也可分泌细胞因子调节其他免疫细胞的功能,在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用.NK细胞表面的受体目前已发现数十种,按功能可分为活化性受体和抑制性受体两大类.以NK细胞受体基因定位可分为KIR家族、ILT/LIR家族、CD94/NKG2家族、NCR家族、Ly49家族和NKP-P1家族等[2].

    作者:沈亚娟;李春悦;宋晓斐;张建 刊期: 2006年第04期

  • 连续监测尿电导率对老年心力衰竭利尿治疗前后的临床意义

    尿电导率代表溶液质点电荷与溶液中所含电解质的浓度和电解质数量成正比关系.老年性心力衰竭病人多发生钠水潴留,造成水肿,心脏负荷加重;利尿剂治疗能促进排钠、排水而快速减轻水肿,缓解症状.但在临床实际工作中,由于缺乏一些有效、简便的监测手段,临床医生往往凭主观经验,这样就会影响到利尿治疗的决策和疗效.本研究将经济、简便无创性尿电导率与渗透压、Na+进行相关分析,旨在为老年慢性心衰患者利尿治疗中提供临床依据.

    作者:沈大江 刊期: 2006年第04期

  • 红细胞分析质控分析软件的设计与系统维护

    1现行红细胞分析质控分析软件设计的基本理念和存在缺陷 现行质控分析软件是按照某检测系统对某质控物的某一测定项目进行多次测定,其测定值的误差大小呈正态分布的理论而设计的.质控物的各个测定值质控之间以及测定值质控与其换算值质控之间各自独立成章,互不影响.软件系统只对某一单个指标做表面的在控与否统计评价分析,并未进行有关指标之间质控关系的进一步探讨,这样的质控软件系统运行一段时间后,有可能造成红细胞测定值与红细胞换算值之间质控关系不协调、不明确的局面出现.

    作者:袁应选;王飙 刊期: 2006年第04期

  • LC-10AD高效液相色谱仪保养与常见故障排除

    色谱法已成为世界许多科学领域中普及的分离分析手段,色谱仪也呈多样化、高精化、自动化、联用技术化等方向发展.高效液相色谱仪具有柱效高、分析速度快、流动相和被测组分的体积流量小等特点,广泛应用于临床工作.日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪主要包括LC-10AD输液泵、TOC-10A柱箱、检测器、C-R6A积分仪几部分,其中检测器分SPD-10A紫外检测器、FLD-6A荧光检测器及L-ECD-6A电化学检测器,现将我们在使用过程中的保养体会及常见故障排除方法介绍如下,以供同行参考.

    作者:张润香 刊期: 2006年第04期

  • 2型糖尿病患者不对称二甲精氨酸浓度变化及临床意义

    目的 观察2型糖尿病(non-insulin dependent diabetes mellitus,NIDDM)患者血浆中不对称二甲精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)浓度变化以及对一氧化氮(nitric oxide,NO)和内皮素(endothelin,ET)的影响,并探讨其临床意义.方法 采用高效液相色谱法(highperforance liquid chromatography,HPLC)、硝酸盐还原酶比色法及放射免疫法,分别对98例NIDDM患者(其中并发血管病变者54例)血浆中ADMA、NO、ET浓度进行测定,并与30例健康人进行对比分析.结果 NIDDM患者与健康人相比,患者血浆中ADMA、ET浓度明显增高,NO浓度明显降低,差异均有显著性意义(P<0.05),并发血管病变者较无并发症者这种变化更显著(P<0.01).结论 ADMA是内皮功能障碍的一个新的危险因子.血浆ADMA浓度变化在NIDDM血管并发症的发生发展过程中起重要作用.

    作者:张润香;李菊香;熊建球 刊期: 2006年第04期

  • 哮喘患者血清ECP与相关细胞因子浓度变化的临床意义

    目的 了解嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)及有关细胞因子在哮喘患者发作期和缓解期的浓度变化,以探讨其与哮喘发病的作用.方法 观察哮喘发作期患者55名,缓解期患者70名,测定血清中ECP,白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子a(TNFa)浓度,并与40名健康者比较.结果 哮喘发作期和缓解期患者血清中3项指标均明显升高,而缓解期患者的ECP浓度与健康组无明显差异,其它2项仍升高.结论 哮喘患者的发病与ECP,IL-4,TNFa有明显相关,ECP可作为急性发作、疗效判定及预后指标,而IL-4和TNFα可能与复发有关.

    作者:靳宝英 刊期: 2006年第04期

  • Beckman-coulter SYNCHRON LX-20全自动生化分析仪七种常见故障原因分析及处理

    Beckman-coulter SYNCHRON LX-20全自动生化分析仪是由美国贝克曼库尔特公司生产的新型的生化检验仪器,该仪器使用界面、操作流程简单,测量结果准确、稳定、快速、精密度高,测试项目包括急诊生化、常规生化、特殊生化及药物检测等,是一种较理想的生化仪器.该仪器模块化的设计思路在应用和维护方面极大的方便了我们日常的工作.笔者现将该仪器使用中七种常见故障原因分析及其处理方法总结如下,供同行们参考.

    作者:涂学亮;薛燕平;李玲 刊期: 2006年第04期

  • F-820血细胞分析仪废液收集瓶的改制

    日本希森美康株式会社生产的F-820血细胞分析仪因该仪器具有的技术优势--如15项检测参数和3个细胞分布直方图,高稀释倍率,碳精浮球绝对定量加时间的双重定量技术,自动浮动界标功能;且为我国卫生部临床检验中心进行室间质评定标仪器;再加之仪器的价格性能比,优质的售后服务,使其在国内占较大的市场分额.我科于1999年购置该仪器,因该仪器所带的废液收集瓶容量小,加之我们工作量较大;每天要开启废液瓶1~2次,给工作带来较多不便,因经常开启,瓶口磨损,密封不紧,在2001年底仪器不能进行标本检测处理;购置新废液瓶需花费一定的资金且要等6~8 d时间,为了不影响日常标本的检测工作,我们与医院设备科维修室同志一道,用20 L龙口瓶代替仪器所带废液瓶,恢复仪器工作可以达到每周倒一次废液的效果,经过3年多的实际应用,现报道如下,供同道参考.

    作者:张薇;杨兴江;李竣玲;曾玉琼;许强 刊期: 2006年第04期

  • 外周血细胞染色体分析在闭经患者诊断中的意义

    目的 探讨原发性或继发性闭经患者外周血细胞染色体异常及其临床意义.方法 按常规外周血淋巴细胞培养方法制备染色体,G显带,显微镜下核型分析.结果 在46例闭经患者中共检出染色体异常21例,总异常率占45.6%,其中31例原发性闭经患者染色体异常18例[46,XY 6例、46,XXinv9 3例、45,XO 2例、45,XO/46,XX 3例、45,XO/45,XO+mar 2例、46,XX t(3;X)(q 21;q 22)和47,XXX各1例],异常率占58.1%;15例继发性闭经患者中染色体异常3例(45,XO、45,XO/46,XX和46,XO del X q22各1例),异常率占20.0%,包括染色体数目异常、缺失、倒位及嵌合.结论 染色体异常是导致原发性或继发性闭经的主要原因,对闭经患者外周血细胞中进行染色体核型检查分析,特别是对13岁以上第二性征不发育、体矮、智力发育较差的女性应早期诊断.对研究闭经的病因、治疗和估计患者预后具有十分重要的意义.

    作者:周萍;王翔;陈葳;杨玉琮;程小丽 刊期: 2006年第04期

  • 流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群培养方案的研究

    目的 改进流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群的刺激培养方案.方法 外周全血经RPMI1640培养液和终浓度为25μg/L的PMA、1 mg/L的Ionomycin、20μg/的Monensin培养2 h后,用流式细胞仪分别检测CD4、CD69阳性细胞及CD3阳性细胞表达IFN-γ和IL-4的比例.同时检测培养前CD4阳性细胞及培养4 h后CD3阳性细胞表达IFN-γ和IL-4的比例.结果 淋巴细胞门中CD4+细胞与CD4-细胞能明显区分,培养前与培养2 h后CD4+细胞比例差异无显著性(P>0.05);T淋巴细胞中90%以上表达CD69;刺激培养2 h和4 h后CD3+细胞表达IFN-γ和IL-4的比例差异无显著性(P>0.05).结论 该实验确定的培养方案能满足流式细胞术CD4、IFN-γ、IL-4三色法检测Th细胞亚群的培养要求.

    作者:叶卫东;张循善;翟志敏 刊期: 2006年第04期

  • 不同生化检测系统测定同种项目的结果比对与临床可接受性评价

    目的 通过对同一检验科不同生化检测系统进行方法比对和偏差评估,探讨不同检测系统间对同种检测项目的测定结果是否具有可比性,以及结果是否能被临床所接受.方法 参考NCCLS的EP9-A文件,以雅培ARCHITECTci8200生化分析仪、雅培原装试剂、c.f.a.s校准品和Roche质控品组成的检测系统为比较方法,其它不同检测系统为实验方法,检测病人新鲜血清中GLU、AST、BUN、Cr、CK、CK-MB,用配对t检验和回归统计法分析实验方法(Y)和比较方法(X)测定结果均值处的相对偏差或医学决定水平处的系统误差,以美国临床实验室修正法规(CLIA'88)规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统的临床可接受性.结果 除检测系统2的Cr结果,检测系统1、2的GLU结果与比较方法的系统误差或均值处的相对偏差不能被接受外,其余项目测定结果的偏差临床均可以接受.结论 当同一实验室同一检验项目存在2个以上的检测系统时,应进行方法比对和偏差评估,判断其临床可接受性,以保证检验结果的可比性.

    作者:张东玲;朱广博;高越 刊期: 2006年第04期

  • KX-21血细胞分析仪空白错误的故障排除

    KX-21三分类血细胞分析仪具有简便、快速、准确性高等特点,我科于2000年使用以来,工作性能良好,各项指标正常.由于时间的延长,出现故障在所难免,现将近期发生的空白错误故障的排除作一介绍,供同行们商榷.

    作者:高传祥 刊期: 2006年第04期

  • 全自动干式生化分析仪测定胆碱酯酶的实验研究

    目的 通过胆碱酯酶在全自动干式生化分析仪上测定的实验观察,从而建立一种临床上可靠的简单易行的胆碱酯酶测定方法.方法 利用全自动干式生化分析仪来测定胆碱酯酶并进行方法学评价.结果 高值与低值的批内批间的变异系数(CV)分别为3.8%,3.9%,3.2%,3.3%,与全自动生化分析仪测定结果相比,相关性好(r=0.962).一定范围的胆红素、血红蛋白、抗坏血酸干扰小,但要避免溶血,试剂稳定,通过临床病例观察实验,在有机磷中毒的诊断中,其阳性结果预示值(PV+)和诊断灵敏度以及诊断特异性都达到94%,阳性似然比(PLR)为15.7,阴性似然比(NLR)为0.063.结论 独特的测定原理和试剂片独立的包装,使该实验方法更可靠,有更好的临床实用价值,加上该实验方法操作简单、测定快速,更适于临床有机磷中毒急救中推广应用.

    作者:陈丽峰;马增煌;吴琴 刊期: 2006年第04期

  • 2型糖尿病患者血Fbg、HCRP及脂类水平的测定与意义

    糖尿病是由多种原因引起的代谢紊乱综合征.90%以上的糖尿病患者有并发动脉粥样硬化的危险,从而引起心脑血管病变,是导致糖尿病患者致死、致残的主要因素.有报道认为2型糖尿病(non-insulin dependent diabetes mellitus,NIDDM)是一种免疫性疾病,炎症反应是动脉粥样硬化的应答反应,炎症在糖尿病的发病机制起媒介作用[1].本试验通过对NIDDM患者血Fbg、HCRP及脂类进行检测,旨在探讨这些指标在NIDDM并发动脉粥样硬化过程中的临床价值.

    作者:张小平;崔曦沁 刊期: 2006年第04期

  • 生化自动分析仪的参数设置与质量保证

    实验室开展的每项化验项目都有其操作规程,有的简写成操作卡放在实验台上,便于随时查看.操作规程和操作卡的建立则体现在实现全自动生化分析的实验室根据试剂盒说明书和仪器的性能原理而设置的实验参数中.全自动生化分析仪的实验参数大多可分为三个方面:①通用参数,又称鉴别参数,包括项目编号、实验名称、计算实验、双项同测实验选择、实验项目组合等.②具体的实验参数,有的称为化学参数,包括的项目有:样品体积分数、波长的选择、方法的类型、反应方向、反应温度、信号的拾取时间、试剂空白核对、样品空白、反应线核对等.③其它一些参数,包括校正参数、质控参数、参考值范围设置、比色杯使用参数等.只有对每一参数的含义、用途和影响因素有全面清晰的了解,并结合对试剂盒和仪器说明书的全面深入的掌握,才能正确设置实验参数.下面就几方面具体的实验参数设置讨论如下.

    作者:尹秀华;李立和 刊期: 2006年第04期

  • SDS-琼脂糖凝胶电泳分析蛋白尿来源的临床意义

    目的 分析尿蛋白成分来鉴别蛋白尿来源.方法 应用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶进行非浓缩尿蛋白电泳分析49例蛋白尿患者的尿蛋白成分.结果 在肾后性蛋白尿中往往可以检测到巨球蛋白等一类大分子蛋白,而在肾性则往往缺乏.并且以巨球蛋白作为鉴别蛋白尿的标准,其敏感性和特异性均达到95.8%.结论 该方法客观性强,诊断符合率高,重复性好,简便快速,值得临床应用.

    作者:周铁成;秦庆;杨小云;徐焰;程晓东;肖鹏涛;张路;郝晓柯 刊期: 2006年第04期

  • 艾滋病检测中的实验室管理

    艾滋病于1981年发现以来,广泛流行于世界各地.我国于1985年发现首例经输血制品传染的病例,从流行率上看我国已经存在HIV感染发生和流行的条件.艾滋病病毒的检测有一定的严格要求,需要有独立的实验室和专用设备和器械,污染区、清洁区分开.实验人员必须接受专门培养并经考核获合格证书,且要熟悉生物安全操作知识和消毒技术,防止职业感染.搞好质量控制,健全各种登记,阳性标本即时送确认实验室确认.

    作者:王清泉;张莹杰 刊期: 2006年第04期

  • Beckman LX20全自动生化分析仪急诊部分日常保养及常见故障排除

    美国Beckman Coulter公司生产的LX-20全自动生化分析仪,自动化程度高,结果准确稳定可靠,操作简便.我院自2001年购进使用至今,对于日常工作中的仪器保养维护和常见的故障排除基本都能自己解决,也积累了一定的经验,现介绍如下:

    作者:卢德国;朱爱菊;杨爱;诸葛宝忠 刊期: 2006年第04期

  • 两次土源性线虫基线调查检验结果比较

    旬阳县位于陕西省东南部,地理环境适宜于土源性线虫的感染,属肠道寄生虫的高发区.为了全面掌握肠道寄生虫在人群中的传染分布情况,国家将我县作为调查地区分别于1991年和2002年进行了两次基线调查.首次调查采用两特征分层整群随机抽样的方法,确定调查采样点,共整群抽样了3个乡的3个村.2002年第二次全国人体寄生虫调查,同样的乡和村为调查采样点.采样对象是调查点的所有自然人群.

    作者:刘启祥;王万成 刊期: 2006年第04期

  • 我国不同肝炎患者及献血员中SENV-D/H感染流行病学调查

    目的 了解SEN病毒(SENV)D亚型和H亚型在我国不同肝炎患者和献血员中的感染情况.方法 采用巢式聚合酶链反应对收集的270例健康献血者和484例各型肝炎患者(包括甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者)进行SENV-D亚型和H亚型DNA检测.结果 无偿献血者中SENV-D的感染率为25.9%,SENV-H为24.4%;急性甲肝患者中SENV-D的感染率为14.5%,SENV-H为32.7%;慢性乙肝患者中SENV-D的感染率为46%,SENV-H为45.2%;在丙肝患者中SENV-D和SENV-H感染率均为65%;在非甲-非戊型肝炎患者中SENV-D的感染率为51.2%,SENV-H为43.9%.结论 SENV可能与HCV和HBV具有一样的传播方式,但并不是肝病发生的原因.

    作者:穆士杰;陈蕤;李丁;张献清 刊期: 2006年第04期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院