学术投稿

结核分枝杆菌Ag85A在大肠埃希菌中的表达与纯化

蒋天舒;娄加陶;周晔;陈燕;陈波;谷明莉;仲人前;邓安梅

关键词:结核分枝杆菌, Ag85A抗原, 表达纯化
摘要:目的 在大肠埃希菌中表达、纯化结核分枝杆菌Ag85A蛋白,探讨Ag85A蛋白作为候选疫苗用于结核免疫预防和治疗的可行性.方法 扩增人结核分枝杆菌Ag85A基因序列,将结核分枝杆菌Ag85A的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Ag85A重组质粒.将重组质粒转入大肠埃希菌BL21并以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定大肠埃希菌表达的重组蛋白.结果 成功克隆了结核分枝杆菌Ag85A,获得了pGEX4T-Ag85A重组子,Ag85A在大肠埃希菌中实现了稳定表达,表达的蛋白条带大小约32 kD,与预期结果 相符.结论 成功地对结核分枝杆菌免疫保护性抗原Ag85A进行了基因克隆与表达,为进一步研究其在结核病新型疫苗研制中的应用奠定了基础.
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    酶法测血清三酰甘油(TG)有诸多的优点,故被中华医学会检验分会血脂专题委员会推荐为实验室的常规检测方法[1].

    作者:汪旭强;宋保利;李丽萍 刊期: 2008年第01期

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    目的 了解免疫固定电泳(IFE)技术快速检测法在荥细胞疾病患者血清和尿液中免疫率蛋白检测与分型中的应用以及策细胞疾病的血清免疫学特征.方法 对49例浆细胞疾病患者血清以快速法进行免疫固定电泳分型,同时利用琼脂糖凝胶电泳以及免疫球蛋白的定量检测加以分析,并对其中35例浆细胞病患者的浓缩尿液进行轻链检测并分型.结果 46例浆细胞疾病患者血清蛋白电泳中出现M带,占总例教的93.8%,其中81.6%的M蛋白出现在7区间;在免疫固定图谱上各型别即IgG,IgA,IgM和单纯轻链型所占比例分别为59.2%,20.4%,12.2%,2.0%,轻链分型中K :λ为1.9:1;免疫定量检测显示所属型别的免疫球蛋白显著增高,其它免疫球蛋白则相对下降.结论 免疫固定电泳技术快速检测法联合血清蛋白电泳和免疫球蛋白的定量检测可为临床对浆细胞疾病的诊断与分型提供有力的诊断依据.

    作者:卢振华 刊期: 2008年第01期

  • 结核生物蛋白芯片技术在临床诊断中的意义

    目的 利用芯片技术,建立结核LAM,16-kDa,38-kDa蛋白芯片检测结核分技杆菌的方法,以期为结核与肺外结核的早期诊断提供参考.方法 采用CCD原理结合视频采集方法,应用结棱蛋白膜芯片进行1 623例检测.结果 LAM,16-kDa,38-kDa蛋白芯片联合检测住院病人阳性率53.2%(396/744);门诊病人30.0%(264/879).结论 结核多种抗原的蛋白芯片检测系统联合运用三种抗原联合检测对结核病的诊治有积极的意义.

    作者:李洪敏;王巍;安慧茹;张志辉;夏湘宣;王台虎;陈武雄;刘京 刊期: 2008年第01期

  • 原发性胆汁性肝硬化患者出现胰岛素下降现象的分析

    原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种女性多发的自身免疫性疾病,常伴有其它自身免疫病的发生.作者在工作中发现,PBC患者中有胰岛素下降的现象发生,机制尚不清楚.发现该现象可以在治疗PBC患者的同时,密切注意其胰岛素水平的变化情况,以避免忽视由胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)的发生而产生的损害及并发症的发生,同时,应积极探讨该现象的发生机制.

    作者:李畅;杨再兴;梁燕;仲人前 刊期: 2008年第01期

  • 流式细胞仪测定血小板聚集及其临床应用

    目的 评价流式细胞仪测定血小板聚集及其临床意义.方法 体外以ADP活化全血或富血小板血浆(PRP),血小板聚集再以荧光抗体CD61PerCP标记活化血小板进行流式细胞仪分析,计数单个血小板数量,以单个血小板数量的减少反映血小板聚集率大小.结果 流式细胞仪测定全血或血小板聚集具有较高的重复性和敏感性.结论 流式细胞仪测定血小板聚集是一项准确、敏感的检测方法.

    作者:陈冬;张国权 刊期: 2008年第01期

  • HIV-1感染鼠巨噬细胞功能的检测

    目的 探讨HIV-1感染鼠单核/巨噬细胞杀伤功能.方法 建立HIV-1感染小鼠模型,分离各组小鼠巨噬细胞,检测巨噬细胞杀伤功能,用ELISA检测巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子a(TNFa)水平.结果 HIV-1感染鼠巨噬细胞杀伤功能明显低于对照组(P<0.01),巨噬细胞分泌TNFa水平明显高于对照组.结论 检测AIDS小鼠巨噬细胞杀伤功能,在探讨AIDS患者的非特异性免疫功能及继发感染的原因、疾病预后和控制有非常重要的意义.

    作者:李好蓉 刊期: 2008年第01期

  • 外周血单个核细胞IRF-7 mRNA水平与乙肝病毒慢性感染关系的研究

    目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)IRF-7 mRNA水平与乙肝病毒(HBV)慢性感染的关系.方法 应用实时荧光相对定量RT-PCR法分别检测45例慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者(轻度组、中度组以及重度组各15例)和30例正常对照的PBMC IRF-7 mRNA水平.结果 CHB患者PBMC IRF-7 mRNA表达水平较正常对照组明显下降(P<0.01);IRF-7 mRNA水平由高到低依次为CHB轻度组、中度组、重度组(P<0.01).结论 CHB患者PBMC IRF-7 mRNA水平明显下降,且与疾病严重程度呈正相关,提示可能与乙型肝炎病毒慢性感染有关.

    作者:张婷;王香玲;纪玉强 刊期: 2008年第01期

  • 自建生化检测系统的分析性能比对评价

    目的 评价自建生化检测系统的分析性能,证实自建检测系统的试验结果 的可靠性.方法 用自建系统对不同水平质控品及新鲜人血清标本进行精密度和线性可测量范围的测定;用新鲜血清标本比较自建与比对系统的精密度并进行回归与相关分析.结果 自建系统ALT,Urea,Crea,TC,ApoAl,ApoB,HDL-C等项目检测不精密度CV值满足美国CLIA'88能力比对检验的质量分析要求、线性测量范围特别是线性高值满足临床要求,与Roche可溯源参考检测系统试验结果相关系数>0.975,LDL-C存在方法 学的差异,相关系数<0.975.结论 方法学比对试验LDL-C相关系数<0.975,按SE%>1/2CLIA'88标准,UDL-C和HDL-C低值标本结果不被接受(另有文章报道),反应曲线满足Y=bX+a时,可利用回归方程对HDL-C试验结果 的偏倚进行纠偏;其余项目相关系数>0.975,相关性满足统计学要求.

    作者:王丽;牛璐璐;权翠侠;潘胜男 刊期: 2008年第01期

  • HIV抗体外部对照质控血清的制备及评估

    目的 制备HIV抗体弱阳性外部对照质控血清并进行评估.方法 利用HIV抗体试剂盒中的阳性对照与正常人血清按一定比例混合,制备质控血清.ELISA法进行质控效果和稳定性检验.结果 ①在室内质控方面:自制质控血清与万泰公司质控血清有相似的效果.②稳定性检验:质控血清在4℃保存至少稳定2 mo,室温保存稳定1 mo,-20℃冻存至少稳定1 y.③反复冻融和加入硫柳汞对检测结果没有影响.结论 质控血清制备方法简便,易于保存,从质控效果和稳定性两方面评估符合国家质控物要求,可用于HIV抗体检测的室内质控.

    作者:张桂芳 刊期: 2008年第01期

  • COBAS Taqman HBV DNA的方法学验证

    目的 评估COBAS Taqman HBV DNA分析系统的性能及临床应用.方法 依据美国国家临床实验室标准化委更会(NCCLS)制订的临床化学方法评价方案(evaluation protocols),通过精密度、携带率、线性评价、仪器同比对、参考范围确认等试验,对COBAS Taqman HBVDNA分析系统的性能参数进行了评估.结果 COBAS Taqman分析系统批内变异6.9%~8.6%,批间变异10.5%~18.7%,总变异10.8%~20.2%,线性范围6.0~101 IU/ml,回收率98.7%~104.5%.仪器间比对相关性较好(r2=0.998).结论 COBAS Taqman HBV DNA分析系统性能指标符合要求,操作简便、快捷,动力学范围广,是目前理想的HBV DNA检测方法.通过此次验证,建立了一套简便的核酸检测方法学评价方案,有利于临床实验室标准化操作的实施.

    作者:秦绪珍;孙江燕;韩建华;李永哲;崔巍;倪安平 刊期: 2008年第01期

  • 644Na+/K+/Cl-分析仪K+电极简单复活一法

    644Na+/K+/Cl-分析仪是美国康仁公司生产的离心分析仪,具有简便快速的优点,其常见故障为管路故障,但是随着使用时间的延长,电极会老化,则需要更换电极,如何延长电极的使用寿命,经过探讨,现总结一法如下,仅供参考:

    作者:刘丹 刊期: 2008年第01期

  • 不育男性弓形虫感染与附属性腺功能测定

    目的 探讨弓形虫(toxoplasmosis)感染对男性附属性腺功能的影响.方法 应用化学法分别检测38例正常生育男性(正常对照组)和42例弓形虫感染不育男性(弓形虫感染组)的精浆中酸性磷酸酶(ACP)、果糖(Fru)和α-葡糖苷酶(α-Glu)含量.结果 弓形虫感染组中精浆ACP和α-Glu含量明显低于对照组,两组之间存在显著性差异(P<0.05),而Fru两组之问无显著性差异(P>0.05).结论 弓形虫感染对前列腺和附睾功能具有干扰作用,测定精浆中ACP,FrU和α-Glu含量可帮助判断弓形虫感染所致男性不育者的状态,指导临床对其进行有效的治疗.

    作者:万长春;汪泓;郝宝金 刊期: 2008年第01期

  • 微生态检测在细菌性阴道病诊断中的评价

    目的 评价微生态检测对细菌性阴道病诊断的临床价值.方法 应用细菌性阴道病联合测定法和Amsel法检测妇科门诊病人阴道分泌物.结果 细菌性阴道病联合测定法与Amsel法诊断细菌性阴道病结果无显著性差异(P>0.05).结论 利用细菌性阴道病联合测定法检测阴道分泌物,了解阴道微生态,能快速、简单、客观而有效地对细菌性阴道病进行辅助诊断.

    作者:熊海燕;张克霞;王朔;宋卫华;陈相 刊期: 2008年第01期

  • 一步法RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因

    目的 建立一步法RT-PCR检测急性平幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者PML-RARα融合基因的实验方法并作相关性能评价.方法 设计两对特异性引物,用一步法RT-PCR法检测APL患者PML-RARα融合基因的三种异构体,并用NB4阳性细胞株做稀释试验,得出该方法 的低检测限;同时对2006年以来华西医院确诊APL患者的PML-RARα融合基因检测和骨硅细胞形态学检查结果进行比较.结果 一步法RT-PCR法检测PML-RARa 融合基因的灵敏度可迭10-4水平;使用两对引物同时扩增,可检出PML-RARα融合基因全部三种异构体;62例经临床和骨髓形态学确诊为APL的患者,其PML-RARα融合基因阳性率为100%.结论 一步法RT-PCR检测APL患者PML-RARα融合基因有很好的灵敏度,临床符合度较高且操作简便快速,样本交叉污染可能性小,临床实用性较高.

    作者:陆小军;张磊;范红 刊期: 2008年第01期

  • 西安地区儿童肺炎支原体感染率分析

    目的 研究西安地区儿童肺炎支原体(MP)感染状况.方法 利用酶联免疫法(ELA)微滴板技术对该院门诊6 672例上呼吸道感染患儿进行MP-IgM进行检测.结果 肺炎支原体引起的呼吸道感染达25.3%.在各年龄组中,学龄期儿童阳性率高(43.2%).一年中,冬季发病率高(32.3%),秋季次之(31.9%).结论 学龄期儿童相比其它阶段儿童更易感染肺炎支原体.秋冬季是肺炎支原体感染的高发季节.

    作者:杨维娜;荣保平;梁宝侠;陈金娴 刊期: 2008年第01期

  • 一氧化氮在急诊医学的进展及应用

    一氧化氮(nitric oxide,NO)又称内皮细胞衍生舒张因子(endothelium-derived relaxing factor,EDRF),广泛分布于生物体各组织中,是一种新型生物信使分子及神经递质,日益受到各领域研究者的广泛重视和探索.

    作者:刘庚勋;李正贤 刊期: 2008年第01期

  • 核转录因子EBF3 mRNA在肝癌和食管癌组织中表达水平的研究

    目的 研究核转录因子EBF3 mRNA在肝癌和食管癌组织中表达水平及其在肿瘤发生中的意义.方法 肝及食管组织分别以β2微球蛋白(β2M)和18S rRNA为内参,实时荧光定量RT-PCR方法 检测肝癌及食管癌及其远端组织中EBF3 mRNA的含量.结果 18例肝癌和配对远端肝组织中EBF3 mRNA与岛β2 mRNA的对数比值分别为0.52士0.17和0.28士0.23,差异有统计学意义(t=3.56,P=0.001 1).12例食管癌和配对远端食管组织中EBF3 mRNA与18S rRNA的对数比值分别为0.58士0.054和0.22士0.24,差异有统计学意义(t=5.07,P=0.000 0).结论 EBF3mRNA在肝癌和食管癌组织中表达显著增高.核转录因子EBF3可能与肝和食管肿瘤的发生有关.

    作者:毛丽萍;景容容;金小云;王惠民 刊期: 2008年第01期

  • 头孢噻肟/舒巴坦复方新药对产酶革兰阴性杆菌体外抑菌效应研究

    目的 评价头孢噻肟钠舒巴坦钠复方新药对产不同类型β-内酰胺酶的革兰阴性菌的体外抑菌效应.方法 用琼脂平板二倍稀释法测定药物低抑菌浓度(MIC);PCR及产物测序方法鉴定10种ESBLs的基因.结果 头孢噻肟/舒巴坦(CTX/SBT)的MIC50值明显低于头孢噻肟(CTX)或舒巴坦(SBT),而与头孢哌酮/舒巴坦(CPZ/SBT)相当.共检测到四种酶基因,即tem,ctx-m,per-1和oxa-I,经部分测序和同源性分析证实为tom-1,ctx-m-1,per-1和oxa-10亚型.但CTX/SBT复方新药在产不同类型β-内酰胺酶(主要是tem和ctx-m)的菌株之间并无明显差异.结论 CTX/SBT复方新药对产酶的革兰阴性菌有更好的抗菌活性,对tem和ctx-m型β-内酰胺酶无明显差异.

    作者:冯群岭;李西帆;顾宜;张建芳 刊期: 2008年第01期

  • 肝细胞生长因子测定在膀胱癌诊疗中的临床应用

    目的 该实验旨在探讨肝细胞生长因子(HGF)在膀胱癌患者中的分布水平,为进一步对膀胱癌的临床治疗提供理论依据.方法 用ELISA法测定膀胱癌术前患者血清HGF水平,同时选取正常对照同步测定.结果 高、中、低分化组和对照组血清HGF水平分别为(4.32士0.58)×10-6,(5.67士0.63)×10-6,(6.81士0.42)×10-6,(1.96士0.23)×10-6mol/L.结论 该实验表明,血清HGF水平的测定,可以作为判断膀胱癌分化程度及预后的重要指标.

    作者:马增煌;陈丽峰;胡芳;潘卫斌;顾磊 刊期: 2008年第01期

  • 试剂针携带干扰的全面探索及解决办法

    目的 探索试剂针携带干扰,提高结果准确性.方法 ①将稀释试剂加入质控品中筛查出疑似干扰试剂和疑似被干扰项目.②在干扰与非干扰条件下测定病人血清,用配对资料t检验验证其间的差异性,从中找出干扰试剂和被干扰项目.结果 在26种疑似干扰试剂中,有12种被确定为干扰试剂,共对7个项目产生干扰.结论 不少试剂间存在不同程度的试剂针携带干扰,可将被干扰项目设置于干扰项目之前,或在干扰与被干扰项目间设置两个或两个以上无干扰的项目消除之.

    作者:冉崇明 刊期: 2008年第01期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

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