学术投稿

人源M2二联体靶抗原BP-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定

周晔;姚定康;陈燕;蒋天舒;蒋廷旺;吴传勇;陈波;仲人前;邓安梅

关键词:原发性胆汁性肝硬化, 自身抗原, 重组融合蛋白
摘要:目的 克隆表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原侧链2-氧酸脱氢酶复合体E2(BCOADC-E2)、丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)及其连接形成的二联体BP-E2融合蛋白,用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期临床诊断.方法 根据BCOADC-E2,PDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的琳巴细胞中提取RNA,通过RT-PCR方法 扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达栽体pET28a(+),构建重组表达裁体pET28a(+)-BCOADC-E2,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-BP-E2,转化大肠杆茵BL21(DE3)后诱导表达蛋白质.表达蛋白经SDS-PAGE,Western-blot等鉴定.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒.IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白.经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性.结论 重组表达的BP-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的实验室诊断.
现代检验医学杂志相关文献
  • 血清胰岛素样生长因子1与S-100B蛋白检测在新生儿窒息和缺氧缺血性脑病患者中的研究

    目的 探讨血清胰岛素样生长因子1(IGF-1)、血清S-100B蛋白检测在新生儿窒息和缺氧缺血性脑病(HIE)患者中的临床意义.方法 将40例窒息患儿、37例缺氧缺血患儿(HIE)和正常对照组30例采用放射免疫法、酶联免疫法分别检测IGF-1,S-100B蛋白.结果 ①IGF-1水平在窒息组、HIE组较对照组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);②S-100B蛋白水平在窒息组、HIE组较对照组均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 IGF-1浓度水平与窒息患儿和HIE患者呈负相关,S-100B蛋白水平与窒息患儿和HIE患者呈正相关,两者的检测在对窒息患儿、HIE患儿的综合诊疗中起重要作用.

    作者:赵顺锋 刊期: 2008年第01期

  • 血浆同型半胱氨酸水平与冠心病发病的关系研究

    目的 探讨血浆同型半胱氨酸(HCY)水平与冠心病(CHD)的关系.方法 采用循环酶法分别测定CHD患者(117例)度对照组(50例)血浆中HCY水平.结果 CHD组血浆HCY水平明显高于对照组(P<0.01);不同临床类型患者,HCY水平AMI>UAP>SAP>对照组,其中sAP组与对照组比较差异显著(P<0.05),UAP,AMI组与对照组比较均有非常显著性差异(P<0.01),SAP与UAP,AMI组比较也存在显著性差异,分别为P<0.05和P<0.01;0,1,2,3支血管病变者血浆HCY浓度呈逐级增高趋势,0支病变组与其它各病变组间比较相差显著(P<0.01),1支与3支病变组或2支与3支病变组问有非常显著性差异(P<0.01),1支与2支病变组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 CHD患者血浆HCY水平明显增高,冠状动脉病变支数越多,血浆HCY水平越高,提示HCY水平变化与CHD的发生、发展密切相关,是CHD的一个危险因素.

    作者:王延伟;高明;舒凯;李民 刊期: 2008年第01期

  • IRISiQ200全自动尿沉渣分析仪修饰功能的临床应用

    目的 探讨IRISiQ200全自动尿沉渣分析仪修饰功能的应用价值.方法 随机留取门诊和住院病人新鲜尿液标本116例,首先用IQ-200系统进行测定,然后对可疑的成分图象进行人工修饰,以不离心标本镜检定量方法 作为参考标准进行修饰前后对比分析.结果 IQ-200系统检测结果:修饰前尿红细胞与不离心标本镜检定量方法符合率86.2%,白细胞为87.1%,上皮细胞为84%;人工修饰后结果:尿红细胞符合率92.2%,白细胞为92.0%,上皮细胞为96%.结论 人工修饰功能提高了与不离心标本镜检定量方法 的符合率,降低了显微镜复查率,因此IQ-200系统修饰功能具有较好的应用价值.

    作者:王丹玲;张延京;赵亚静;赵明 刊期: 2008年第01期

  • 人源M2二联体靶抗原BP-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定

    目的 克隆表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原侧链2-氧酸脱氢酶复合体E2(BCOADC-E2)、丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)及其连接形成的二联体BP-E2融合蛋白,用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期临床诊断.方法 根据BCOADC-E2,PDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的琳巴细胞中提取RNA,通过RT-PCR方法 扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达栽体pET28a(+),构建重组表达裁体pET28a(+)-BCOADC-E2,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-BP-E2,转化大肠杆茵BL21(DE3)后诱导表达蛋白质.表达蛋白经SDS-PAGE,Western-blot等鉴定.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒.IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白.经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性.结论 重组表达的BP-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的实验室诊断.

    作者:周晔;姚定康;陈燕;蒋天舒;蒋廷旺;吴传勇;陈波;仲人前;邓安梅 刊期: 2008年第01期

  • 一氧化氮在急诊医学的进展及应用

    一氧化氮(nitric oxide,NO)又称内皮细胞衍生舒张因子(endothelium-derived relaxing factor,EDRF),广泛分布于生物体各组织中,是一种新型生物信使分子及神经递质,日益受到各领域研究者的广泛重视和探索.

    作者:刘庚勋;李正贤 刊期: 2008年第01期

  • 急性脑血管病患者心肌酶谱监测及临床意义研究

    目的 探讨急性脑血管病患者心肌酶谱的变化及其临床意义.方法 选择2005年1月-2007年1月期间住院就诊的80例急性脑血管病患者为病例组,同期健康体检人群80例为对照组.病例组于入院1,7,14 d,对照组于体检当日抽血检测各项心肌酶.结果 ①脑出血组与脑梗死组各指标均高于对照组,但脑出血与脑梗死组各指标差异无统计学意义(P>0.05);有意识障碍组各指标均高于无意识障碍组(P<0.05);②好转组各指标均低于恶化组(P<0.05);③好转组第1,7,14 d各指标的水平呈逐渐下降趋势(P<0.05).结论 急性脑血管病存在心肌酶谱水平的升高,并且心肌酶谱的监测对于病情、预后、治疗情况判断均具有重要的意义.

    作者:朱蕾;董梅;吴纯;王琰;丁修东 刊期: 2008年第01期

  • 流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者血小板微粒

    目的 建立CD61与Annexin V双染法检测外周血中循环血小板微粒的方法,探讨血小板微粒在特发性血小板减少性紫癜患者中的临床意义.方法 使用流式细胞术检测了12例特发性血小板减少性紫癜患者和15例健康对照者外周血中血小板微粒的含量.采用CD61与Annexin V双染法,CD61弱阳性并且Annexin V强阳性者定义为血小板微粒,分析血小板微粒的百分含量.结果 CD61与Annexin V双染法能够清楚地区分出富血小板血浆中血小板微粒.特发性血小板减少性紫癜患者血小板微粒为12.3%士5.4%,健康对照组为1.1%士0.3%,P<0.05,差异显著.结论 CD61与AnnexinV双染法能够准确检出外周血中循环的血小板微粒.血小板微粒检测在特发性血小板减少性紫癜患者中有一定的临床意义.

    作者:何敖林;陈军浩;方莹 刊期: 2008年第01期

  • 患者总蛋白和清蛋白结果均值控制法在室内质控的应用

    目的 探讨患者结果均值控制法在室内质控的应用.方法 用怡捷公司实验室信息系统(LIS)统计2006年1~5月的临床标本总蛋白(TP)和清蛋白(ALB)结果 平均值、标准差,分别编制质控图,将2006年6~8月每天TP,ALB结果平均值绘在质控图上,与商品质控图作比较,验证均值控制法的作用.结果均值控制法质控图和商品质控图比较,二者的变化趋势没有一致性,呈现出随机性.均值控制法和商品质控的CV稳定性都较好.结论 均值控制法与商品质控相互补充提高检验质量,但不可替代商品质控.

    作者:郭龙华;杨晓亮;林莉;潘婉仪;黄宪章;庄俊华 刊期: 2008年第01期

  • 外周血单个核细胞IRF-7 mRNA水平与乙肝病毒慢性感染关系的研究

    目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)IRF-7 mRNA水平与乙肝病毒(HBV)慢性感染的关系.方法 应用实时荧光相对定量RT-PCR法分别检测45例慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者(轻度组、中度组以及重度组各15例)和30例正常对照的PBMC IRF-7 mRNA水平.结果 CHB患者PBMC IRF-7 mRNA表达水平较正常对照组明显下降(P<0.01);IRF-7 mRNA水平由高到低依次为CHB轻度组、中度组、重度组(P<0.01).结论 CHB患者PBMC IRF-7 mRNA水平明显下降,且与疾病严重程度呈正相关,提示可能与乙型肝炎病毒慢性感染有关.

    作者:张婷;王香玲;纪玉强 刊期: 2008年第01期

  • 肝细胞生长因子测定在膀胱癌诊疗中的临床应用

    目的 该实验旨在探讨肝细胞生长因子(HGF)在膀胱癌患者中的分布水平,为进一步对膀胱癌的临床治疗提供理论依据.方法 用ELISA法测定膀胱癌术前患者血清HGF水平,同时选取正常对照同步测定.结果 高、中、低分化组和对照组血清HGF水平分别为(4.32士0.58)×10-6,(5.67士0.63)×10-6,(6.81士0.42)×10-6,(1.96士0.23)×10-6mol/L.结论 该实验表明,血清HGF水平的测定,可以作为判断膀胱癌分化程度及预后的重要指标.

    作者:马增煌;陈丽峰;胡芳;潘卫斌;顾磊 刊期: 2008年第01期

  • 流式细胞仪测定血小板聚集及其临床应用

    目的 评价流式细胞仪测定血小板聚集及其临床意义.方法 体外以ADP活化全血或富血小板血浆(PRP),血小板聚集再以荧光抗体CD61PerCP标记活化血小板进行流式细胞仪分析,计数单个血小板数量,以单个血小板数量的减少反映血小板聚集率大小.结果 流式细胞仪测定全血或血小板聚集具有较高的重复性和敏感性.结论 流式细胞仪测定血小板聚集是一项准确、敏感的检测方法.

    作者:陈冬;张国权 刊期: 2008年第01期

  • 乌鲁木齐地区过敏性鼻炎患者吸入性过敏原检测结果分析

    目的 检测乌鲁木齐地区过敏性鼻炎患者血清中特异性IgE抗体,筛选相关过敏原,为临床诊治提供依据.方法 采用北京海澳公司提供的过敏原检测试剂盒,以酶免疫分析法对该地区60例过敏性鼻炎患者血清中总IgE和过敏原特异性IgE进行检测.结果 60例过敏性鼻炎患者血清总IgE均为阳性.吸入性过敏原以蒿属植物、艾蒿(占30.0%),屋尘(占25.0%),普通豚草、巨大豚草(占18.3%)和尘螨、粉螨(占13.3%)为主,以两种或两种以上过敏原同时致敏占绝大多数.发病年龄以少年、中青年居多,近80%.两性发病率无明显差异(男29例,女31饲,P>0.05).以春秋季为发病高峰占73.3%,常年性发病占26.7%.结论 该地区气候干燥,具有它的气候特殊性,选择具有代表性的过敏原检测试剂盒进行检测,可提高检出率,一方面可为临床诊断和脱敏治疗提供可靠依据,另一方面也可为患者在日常生活中避免接触相关过敏原提供依据.

    作者:周郁;王瑞;邹红云 刊期: 2008年第01期

  • 乳腺癌组织中HPV16E6和E7的检测

    目的 检测乳腺癌组织中人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E6和E7基因.方法 采用聚合酶链反应法(PCR)检测40例乳腺癌和20例正常乳腺组织中HPV16E6和E7.结果 40例乳腺癌中HPV16 E6和E7基因的检出率分别为60%(24/40)和55%(22/40),20例正常乳腺组织中HPV16 E6和E7检出率分剐为5 %(1/20)和5%(1/20),两者均存在显著性差异(P<0.05).乳腺癌中HPV16E6和E7基因的检出率在患者不同年龄、肿块大小、雌孕激素受体水平和淋巴结转移中均无显著性差异(P>0.05).结论 E6和E7基因共存于HPV16感染的乳腺癌中,HPV16可能是乳腺癌发病的病因学因素之一.

    作者:何谦;张淑群;楚雍烈;赵丽华;王香玲 刊期: 2008年第01期

  • 糖化血红蛋白与妊娠期糖尿病的筛查

    目的 探讨糖化血红蛋白(HbAlc)在妊娠期糖尿病(GDM)筛查中的作用和意义.方法 对395例围产期门诊病人和60例无糖尿病未妊娠妇女(正常对照组)分别进行空腹血糖(FPG)测定、HbAlc潮定和口服糖负荷试验(OGCT)三项检查,根据临床诊断将围产期妇女分为GDM组和非GDM组.结果 GDM组29例,非GDM组有366例;非GDM组与正常对照组比较,FPG,OGCT和HbAlc水平均无显著性差异(P>0.05);GDM组FPG,OGCT,HbAlc水平与非GDM组比较均明显升高,差异有极显著性(P<0.01),GDM组FPG,OGCT,HbAlc阳性率分别为37.9%,79.3%,93.1%;HbAlc在GDM筛查中敏感性、特异性、可靠性、阳性预示值分别为93.1%,98.4%,98.0%,81.8%,均明显高于FPG和OGCT.结论 HbAlc水平测定具有快速、简便、准确、取血量少的特点,并且不易受其它因素的影响,可作为临床GDM诊断筛查的指标.

    作者:石胜;熊燕 刊期: 2008年第01期

  • 浅谈IS09001与血站质量管理

    随着社会对血液质量的要求不断提高,法规对采供血机构的约束力度日益增大,公众对血站管理的期望值进一步提升,通过一整套质量标准的引入,对血站所有工作环节进行全面质量管理就成为了保证血液质量,保障献血者权益,推进安全输血事业发展的必然趋势.

    作者:刁丽波 刊期: 2008年第01期

  • BECKMAN CX5△全自动生化仪测试项目交叉污染的处理体会

    该文总结了BECKMAN CX5△全自动生化仪测试项目交叉污染的各种处理方法,包括冲洗样品针和试剂针内部;调整针的水平位置,清洗冲洗组件及冲洗站管道;更换胶擦;清洁针头冲洗液塑料瓶并更换过滤器;检查水质,更换滤芯;冲洗样品针及试剂针进气管道;用CCWA专用清洁液清洗管道等.

    作者:张延玮 刊期: 2008年第01期

  • 南京城区部分职业人员生化指标分析

    目的 了解南京城区职业人员空腹血糖、尿酸、血脂、转氨酶等五项生化指标水平,初步评估南京城区居民健康状态.方法 用全自动生化分析仪检测1 575例体检者空腹血糖、尿酸、血脂、转氨酶指标.结果 血糖随年龄增长其上升幅度女性约为每10 y 0.1~0.21 mmol/L,男性在-0.08~0.33 mmol/L间;胆固醇高峰在50~59 y组,≥60 y后下降,其中男性高峰在40~59 y,女性在50 y.三酰甘油从年轻组起阳性率就高达14%以上.谷丙转氨酶异常则主要集中于年轻组.男性各年龄组尿酸阳性率持续20%以上,女性60y后阳性率反超男性(30%).结论 南京城区职业人员血脂高峰较早,年轻人尤其男性自我保健意识差,三酰甘油、谷丙转氨酶争尿酸异常率高,应加强健康教育,预防疾病发生.

    作者:邵春阳;张春妮;刘小传;汪俊军;李克 刊期: 2008年第01期

  • TBA-40全自动生化分析仪交叉污染探析

    随着检验医学的不断发展,全自动生化分析仪及其配套试剂已被实验室广泛地运用,同时交叉污染也倍受人们的关注.笔者在用东芝TBA-40全自动生化分析仪测试中发现,CO2-CP测定对血糖测定有明显的正干扰.

    作者:王新平;段建林;池慧 刊期: 2008年第01期

  • COBAS Taqman HBV DNA的方法学验证

    目的 评估COBAS Taqman HBV DNA分析系统的性能及临床应用.方法 依据美国国家临床实验室标准化委更会(NCCLS)制订的临床化学方法评价方案(evaluation protocols),通过精密度、携带率、线性评价、仪器同比对、参考范围确认等试验,对COBAS Taqman HBVDNA分析系统的性能参数进行了评估.结果 COBAS Taqman分析系统批内变异6.9%~8.6%,批间变异10.5%~18.7%,总变异10.8%~20.2%,线性范围6.0~101 IU/ml,回收率98.7%~104.5%.仪器间比对相关性较好(r2=0.998).结论 COBAS Taqman HBV DNA分析系统性能指标符合要求,操作简便、快捷,动力学范围广,是目前理想的HBV DNA检测方法.通过此次验证,建立了一套简便的核酸检测方法学评价方案,有利于临床实验室标准化操作的实施.

    作者:秦绪珍;孙江燕;韩建华;李永哲;崔巍;倪安平 刊期: 2008年第01期

  • 一步法RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因

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    作者:陆小军;张磊;范红 刊期: 2008年第01期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院