学术投稿

人牙髓细胞原代培养方法的研究

赵瑚;陈治清;白薇

关键词:牙髓, 细胞培养, 酶解
摘要:目的确定酶解消化法牙髓细胞原代培养的合适条件与时间.方法选取年轻患者因正畸拔除的完整和无龋坏牙齿,取出牙髓,分别采用胶原酶一步法消化牙髓组织30分钟及1、2、3小时,胶原酶分步消化法,组织块法和组织块酶解法进行原代培养.倒置显微镜台盼蓝染色观察细胞解离及存活状况,免疫组化法鉴定细胞来源.结果胰酶消化2小时后,组织块基本未解离.用0.1%胶原酶一步法消化1、2、3小时后组织块均彻底解离为单细胞,基本无残余. 0.1%胶原酶消化30分钟后组织块解离不完全.0.1%胶原酶分步法消化1小时后组织解离彻底.台盼蓝染色表明经胶原酶一步法消化获得的牙髓细胞被台盼蓝着色的比例随消化时间减短而下降.分步法消化细胞着色率低于一步法.组织块酶解法的组织块解离、贴附和细胞游出状况均优于组织块法.结论Ⅰ型胶原酶在37℃,持续振荡条件下消化1小时是彻底酶解消化人牙髓的短时间.分步酶解法能获得比一步酶解法更高的活细胞数量.而从效果、操作难易和耗时多少等多方面因素综合考虑,组织块酶解法是人牙髓组织原代培养的佳方法.
四川大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 冠心病胰岛素抵抗与AT1R基因A1166C分子变异的相关性研究

    目的探讨中国人冠心病患者胰岛素抵抗与血管紧张素Ⅱ1型受体 (AT1R)基因A1166C分子变异的关系.方法选择90例冠心病患者,用空腹血糖浓度与空腹胰岛素浓度乘积的倒数作为胰岛素抵抗指标,用聚合酶链反应技术及限制性片断长度多态性分析技术检测AT1R基因A1166C分子的变异,并以同期80例正常人作为对照.结果冠心病患者C1166等位基因频率明显高于正常人,但其AT1R A1166C AA型、AC型及CC型的胰岛素抵抗指标之间无统计学差异(P>0.05).结论中国人AT1R基因A1166C分子变异与冠心病胰岛素抵抗无明显相关性.

    作者:邓珏琳;陈茂;杨庆;于厚志;黄德嘉 刊期: 2002年第02期

  • 游离兔耳软骨移植修复广泛气管前壁缺损的研究

    目的探讨用游离兔耳廓软骨修复广泛气管前壁缺损的可行性,并观察自体移植与异体移植的差异.方法取新西兰大耳白兔20只,分为自体移植组(n=10)与异体移植组(n=10),取右耳游离耳廓软骨行自体或异体移植修复8~10环气管前壁缺损,术后1、2、4、8和12周每组分别处死1~2只行内窥镜检查、生物力学测试及组织学观察.结果 18只兔存活,内窥镜发现气管狭窄不明显,以瘢痕增生为主.生物力学测试发现,移植软骨单位大应力在0、4、8、12周分别为2.54±0.19、1.31±0.21、1.72±0.22和1.96±0.08kPa/mm.组织学观察发现移植软骨部分发生变性和坏死,但存活软骨、新生软骨在术后12周时分别占62.0%±3.45%、65.8%±9.48%(自体移植组),60.1%±3.98%、55.2%±7.57%(异体移植组).自体移植与异体移植的炎性反应差异不大,免疫排斥反应较轻.结论游离耳软骨可用来修复广泛的气管前壁缺损,也可用作同种移植.

    作者:张瑞林;梁传余;秦廷武;李秀群;刘军 刊期: 2002年第02期

  • 孕激素对早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子- Ⅰ受体基因表达的调控

    目的探讨孕激素对体外培养的人早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子- Ⅰ受体(IGF- ⅠR)基因表达的影响.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测不同浓度孕激素作用72小时后及0.1 μmol/L孕激素作用不同时间后人早孕蜕膜基质细胞中IGF- ⅠR mRNA的表达水平.结果体外培养的人早孕蜕膜基质细胞中IGF- ⅠR mRNA呈强阳性表达,孕激素降调IGF- ⅠR mRNA的表达,并与浓度呈显著负相关(r=-0.680,P<0.001).孕激素终浓度为0.1 μmol/L时, IGF- ⅠR mRNA的表达与作用时间无显著相关性(r=0.005,P>0.05).结论孕激素可能通过降调人早孕蜕膜基质细胞中IGF- ⅠR mRNA的表达,调节基质细胞的增殖和蜕膜化,对早期妊娠的维持起重要作用.

    作者:李尚为;李蕾;曹泽毅;彭芝兰;韩字研;杨业洲 刊期: 2002年第02期

  • 成功救治严重电烧伤合并多器官功能衰竭1例报告

    严重烧伤并发多器官功能衰竭(multiple organ failure, MOF)已成为当前烧伤致死的重要原因,它的防治也受到越来越多的重视,但关于严重电烧伤合并MOF的成功救治报道较少.为总结交流经验,现将我们成功救治的1例严重电烧伤合并MOF,包括急性肾功能衰竭(acute renal failure, ARF)和成人呼吸窘迫综合征(adult respiratory distress syndrome, ARDS)报道如下.

    作者:严小蓉;岑瑛;赵景华 刊期: 2002年第02期

  • 妊娠合并尖锐湿疣113例分析

    尖锐湿疣(Condyloma acuminata, 尖锐湿疣)是由人乳头瘤病毒(HPV)引起的常见的性传播疾病(STD).尖锐湿疣的发生、发展与患者机体免疫功能,尤其是细胞免疫功能关系密切.近年发病率不断增高,妊娠期合并尖锐湿疣亦随之增多.本文就我院7年间经激光治疗的妊娠合并尖锐湿疣113例患者的临床特征、治疗及效果进行回顾分析,并与同期治疗的非妊娠尖锐湿疣患者进行对照,以提高临床对妊娠合并尖锐湿疣的特征、处理和转归的认识.

    作者:彭秀琼;徐克惠 刊期: 2002年第02期

  • 氨力农及抑肽酶对瓣膜置换术患者围术期白细胞粘附分子表达的影响

    目的了解氨力农和抑肽酶对瓣膜置换手术患者围术期白细胞粘附分子表达的影响.方法将接受瓣膜置换手术的32例患者随机分为对照组、抑肽酶Ⅰ组、抑肽酶Ⅱ组和抑肽酶加氨力农组,每组8例.分别在术前、停机、停机后1小时及术后1天抽取患者外周血,用流式细胞仪测定白细胞粘附分子表达情况.结果术前4组患者血浆中CD11b+/CD18+水平无明显差异(P>0.05).术后血浆中CD11b+/CD18+水平均明显增高(P<0.01).停机后1小时的CD11b+/CD18+水平组间差异无统计学意义(P>0.05).结论尽管氨力农和抑肽酶均有抗炎症的效应,但仅预充液中加入抑肽酶或同时静脉滴注抑肽酶或在此基础上联合应用氨力农,均难以完全抑制瓣膜置换手术患者围手术期白细胞粘附分子CD11b/CD18的表达增加.

    作者:曹舸;罗朝志;萧锡俊;魏于全;殷得福;庄翔;陈亦祥;云恒 刊期: 2002年第02期

  • 结核杆菌检测基因芯片的制备研究

    目的建立结核杆菌检测基因芯片的制备技术.方法制备和标记靶基因,用点样仪将靶基因点于玻片介质上,并经点样后处理制成基因芯片,用扫描仪测定处理前后芯片上荧光强度的变化,计算DNA固定率,同时测定和比较两种不同玻片、不同点样液和三种不同点样后处理方法的DNA固定率.结果制备结核杆菌检测基因芯片,用醛基修饰玻片作为介质,用DMSO溶液作为点样液,点样后芯片处理以水合1小时再干燥30分钟为佳. 结论本研究所建立的结核杆菌检测基因芯片制备技术具有较高的效率和可靠的实用性能.

    作者:张万江;鲍朗;王晓樱;谢勇恩;陈玮;张会东;于向华 刊期: 2002年第02期

  • 年龄对人牙髓细胞原代培养的影响

    目的探讨从不同年龄人获得的牙髓组织与细胞游出之间的关系,以提高牙髓细胞原代培养的成功率.方法采用组织块酶解法对20个来自不同年龄志愿者的恒牙牙髓进行牙髓细胞的原代培养.结果牙髓年龄与其原代培养时细胞游出率之间有负相关关系(r=-0.78987),年轻恒牙牙髓细胞游出率高.结论在人牙髓细胞的原代培养时尽量采用年轻恒牙.

    作者:董伟;周学东;李继遥 刊期: 2002年第02期

  • 肝细胞膜钙泵与钠泵活性变化在胆红素钙结石形成中的作用

    目的探讨肝细胞膜钙泵和钠泵活性变化在胆红素钙结石形成中的作用.方法建立胆红素钙结石兔模型,对照组28只,胆道不全梗阻组(BO)36只,胆道不全梗阻加感染组(BOI)39只,各组再按术后处死时间(3、7、14和20天)分组,动态测定各组各时相肝细胞膜钙泵、钠泵活性及肝细胞钙含量.结果 BOI组及BO组肝细胞钙进行性增多,而肝细胞膜钙泵、钠泵活性呈进行性下降,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),BOI组上述变化较BO组明显(P<0.05).结论兔胆红素钙结石形成过程中存在肝细胞膜钙泵和钠泵活性渐进性下降.钙泵、钠泵活性下降引起肝细胞钙超负荷,从而促进成石.

    作者:庄文;肖路加;左凤琼;吴兆锋;吴忠舜 刊期: 2002年第02期

  • 双倍剂量雷公藤多甙治疗单纯性蛋白尿的临床研究

    目的观察双倍剂量的雷公藤多甙(TWH)治疗单纯性蛋白尿的疗效.方法 15例单纯蛋白尿患者[7例系膜增生性肾炎(MsPGN),4例IgA肾病(IgAGN),1例微小病变性肾炎(MCGN),3例无肾活检资料]均服用TWH 2mg/(kg*d)4周,观察蛋白尿变化及副反应. 结果 10例表现为选择性蛋白尿的患者完全缓解或好转,总有效率为66.7%,其中MsPGN完全缓解3例,好转3例;IgAGN完全缓解2例; MCGN完全缓解1例;无肾活检资料患者完全缓解1例,其TWH治疗的有效率分别为85.7%,50.0 %,100%和33.3%.5例表现为非选择性蛋白尿的患者无好转.所有患者均能耐受双倍剂量的TWH,消化道反应和肝脏损害的副作用轻微,无一例出现严重白细胞减少.结论双倍剂量的TWH对表现为选择性蛋白尿的、以肾小球系膜增生为特点的单纯蛋白尿患者具有良好的疗效.

    作者:付平;雷鸣;周莉;许志忠;苏白海;刘芳 刊期: 2002年第02期

  • 红毛五加多糖-Ⅰ诱导体外人胃癌细胞凋亡的研究

    目的探讨红毛五加多糖-Ⅰ的抑癌机制.方法采用DNA电泳和流式细胞术检测红毛五加多糖-Ⅰ对胃癌细胞的影响.结果该多糖作用36小时后,电泳可见胃癌细胞DNA的梯状图谱,流式图上出现凋亡峰.结论表明红毛五加多糖-Ⅰ可能通过诱导胃癌细胞凋亡而起到抑癌作用.

    作者:吕晓英;曾令福;蔡亚南;李由;刘新华 刊期: 2002年第02期

  • 正常早孕和过期流产者的彩色多普勒超声检测分析

    目的为应用彩色多普勒超声预测早孕结局提供数据.方法采用阴道彩色多普勒超声对妊娠6~12周的118例正常早孕与56例过期流产者在不同孕周时的卵黄囊直径和绒毛间隙血循环的血流动力学变化进行检测.结果正常孕6~12周各组比较,其卵黄囊的生长直径变化有明显差异(F=29.0,P<0.01),孕9周时卵黄囊直径达大值(5.26±0.56mm).有59.3%(73/118)的正常早孕显示出卵黄囊壁血流,其血流频谱特征为低血流速与舒张期血流缺损.过期流产者中,有12.5%(7/56)的卵黄囊壁血流被检出,有42.9%(24/56)的卵黄囊形态有改变,且无血流显示.结论正常妊娠至9周时其卵黄囊直径达到大值,此时卵黄囊壁血流显示率下降,提示卵黄囊的功能已经丧失.绒毛间隙彩色血流信号随孕周增加逐渐增强,与卵黄囊血流减少的渐进过程一致.因此,应用阴道彩色多普勒超声检测卵黄囊直径与血流动力学变化,有可能成为预测早孕结局的指标之一.

    作者:杨太珠;贺廷富;罗红;郭文琪;吴艳乔 刊期: 2002年第02期

  • B超检查对无症状胆囊结石预后的探讨

    目的用B型超声检查探讨无临床症状胆囊结石的预后.方法 217例健康体检中发现的无临床症状的胆囊结石患者,用B型超声对其追踪观察16年,并将胆石的声像图表现与其发生的临床并发症进行对照分析.结果Ⅰ型胆石症47例中仅2例(4.3%)出现需择期手术切除的临床并发症;Ⅱ型胆石症98例中36例(36.7%)出现各类临床并发症,其中19例(19.4%)出现了需急诊手术治疗的严重临床并发症;Ⅲ型结石症45例中25例(55.5%)出现各类临床并发症,但仅2例(4.4%)属于需急诊手术治疗的严重并发症;Ⅳ型结石症27例中仅6例(22.2%)因一般临床症状而择期手术切除治疗.结论 B型超声通过对无临床症状胆囊结石的大小、数量和胆结石在胆汁中的比重等分析,可初步推导这类胆石症的预后.

    作者:赵元全 刊期: 2002年第02期

  • 对氨基苯甲酸对粘性放线菌生长影响的研究

    目的探讨对氨基苯甲酸(PABA)对牙根面龋致病菌之一的粘性放线菌生长的影响.方法在加入不同浓度PABA的改良Carlsson培养基中采用厌氧培养技术(80%N2, 10%H2, 10%CO2)培养细菌48小时,通过UV-1601紫外可见分光光度仪测定细菌浓度OD值(λ=540nm);并用平板倾注法对细菌进行计数及琼脂平板培养观察细菌生长的情况.结果 10-10~10-4g/L浓度的PABA有促进粘性放线菌生长的能力,且当PABA浓度增加到10-6g/L时,促进生长的作用达强;当PABA浓度增加到10-3g/L时,对粘性放线菌的生长无明显的促进作用.结论 PABA可促进粘性放线菌的生长,在PABA浓度为10-6g/L时,促进生长的能力达强.

    作者:郭斌;周学东;肖晓蓉;李蕾;朱吵 刊期: 2002年第02期

  • 反义肽核酸对树突状细胞CD86表达的抑制作用

    目的探讨CD86 mRNA反义肽核酸(peptide nucleic acid, PNA)阻断树突状细胞CD86表达和第二信号传递的可能作用.方法采用激光共聚焦显微镜研究生物素化PNA 的细胞内化;利用流式细胞术、荧光细胞组织化学以及RT-PCR研究CD86反义PNA对CD86分子表达的抑制作用. 结果①激光共聚焦显微镜光学细胞切片证明,培养的人未成熟树突状细胞能够有效内化生物素化PNA.②流式细胞术和荧光细胞组织化学证实CD86反义PNA在蛋白质水平上对CD86分子表达有抑制作用.③RT-PCR证明反义PNA能够抑制DC CD86 mRNA水平.结论 CD86反义PNA能够抑制人树突状细胞CD86 mRNA的表达, 从而为进一步利用反义PNA阻断第二信号传递,诱导免疫耐受奠定了基础.

    作者:冯刚;李胜富;李幼平;步宏;杨宇如;卢一平 刊期: 2002年第02期

  • GI-Ⅱ型着色渗透玻璃渗透工艺与渗透深度关系的研究

    目的探讨不同的熔融渗透时间和温度下,玻璃在氧化铝中的渗透深度.方法制作Vita In-Ceram Alumina 和GI-Ⅱ氧化铝预烧体,分别用A2和IG2色玻璃进行渗透.按渗透时间不同分为30、60、90、120、150和180分钟组,渗透温度1100℃;按渗透温度不同分为1060、1080、1100、1120和1140℃温度组,渗透时间1小时.用带标尺体视镜(×10)分别测量各组的渗透深度.结果渗透深度和时间的平方根呈线性关系,Vita和GI-Ⅱ组相关系数分别为0.9886和0.9932,回归方程分别为d2=0.1122t-0.4955和d2=0.1638t+0.5873;随渗透温度的升高,Vita的渗透速率增加,高于1100℃后下降,GI-Ⅱ的趋势则相反.结论 GI-Ⅱ型玻璃具有较好的渗透性能,在1100℃的渗透温度下,推荐单冠和前牙桥体的渗透时间分别为1小时和3小时.

    作者:牟雁东;巢永烈;廖运茂;孟玉坤 刊期: 2002年第02期

  • 天然药物对粘性放线菌生长和产酸影响的体外研究

    目的研究不同天然药物对粘性放线菌生长及产酸的影响,为筛选能有效调理口腔菌群生态平衡的药物奠定基础.方法选用粘性放线菌标准株ATCC 19246作为实验菌株.测定川芎、血藤和五倍子等十一种天然药物的低抑菌浓度(MIC).再以低于MIC的4个浓度配制含药的TPY液体培养基,调定其初始pH为7.4,接种粘性放线菌,厌氧培养后测定其终末pH.结果当药物浓度低于或等于8.000mg/ml时,除三七外,其他药物对粘性放线菌的生长都有一定的抑制作用,且以槟榔和蜂房较强.茶多酚、三七、大黄、蜂房和血藤对粘性放线菌的产酸具有一定的抑制能力,而黄芩、槟榔、川芎、五倍子、白芷和儿茶没有明显的抑制作用.结论茶多酚、大黄、蜂房和血藤对粘性放线菌的生长和产酸都有一定的抑制作用.

    作者:肖悦;刘天佳;黄正蔚;周学东;李罡 刊期: 2002年第02期

  • 猪血清白蛋白检测方法探讨

    目的探讨猪血清白蛋白检测的常规分析方法.方法利用溴甲酚紫(BCP)法、蛋白电泳法和溴甲酚绿(BCG)方法同时测定猪和人血清标本中白蛋白含量并进行比较;用紫外可见分光光度计检测BCG法和BCP法测定猪和人血清白蛋白的吸收曲线.结果 BCG法、BCP法与电泳法对人血清白蛋白检测结果无显著差异;后二法对猪血清白蛋白测值与BCG法测结果间虽有正相关关系(r分别为0.9503和0.9533),但显著低于BCG法(P<0.05);吸收曲线显示,BCP法吸收峰明显低于BCG法吸收峰.结论在猪血清白蛋白绝对含量的测定中推荐使用BCG法.

    作者:张璘;蒋红梅;李萍;彭志英;赵清江;李幼平 刊期: 2002年第02期

  • 儿童社会适应行为影响因素的研究

    目的了解儿童社会适应行为的影响因素.方法采用美国儿童适应行为量表(AAMD-ABS修订版)对600名6~12岁儿童进行社会适应行为调查,对其中影响儿童社会适应能力的因素进行逐步回归多因素分析. 结果学龄前养育类型、父母关系、住家地区的社会风气、母亲年龄及健康状况对儿童社会适应行为都有显著的影响.结论良好的养育类型,和睦的父母关系,健康的社会环境,母亲健康的身体将有利于儿童社会适应能力的提高.

    作者:赵小菲;张秋水;单友荷;张惠开;郭兰婷 刊期: 2002年第02期

  • 葡萄球菌肠毒素A脂质体的制备及其体内分布试验

    目的制备葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)脂质体,研究其在体内的分布特性,为SEA脂质体治疗肝癌提供依据.方法用125I标记SEA,逆相蒸发法制备SEA脂质体,考察其包封率及粒径,观察125I-SEA及SEA脂质体静脉注射后不同时间小鼠体内的分布.结果 5批SEA脂质体样品平均粒径为505±34 nm,平均包封率为44.4%±4.8%.SEA脂质体主要分布于肝、脾,尤以肝脏中分布多,而在血中清除加快,在其他组织中分布显著减少,与游离SEA比较具有显著差异(P<0.05).结论逆相蒸发法制备SEA脂质体简单、重复性好,可获得较高的包封率和符合肝靶向要求的脂质体;SEA脂质体具有一定的肝靶向性,可为减轻SEA的毒副作用以及肝癌的治疗提供新途径.

    作者:李志宇;何生;薛华;苏敏;汪现 刊期: 2002年第02期

四川大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:四川大学