钟冬梅；黄晓群
目的 对密度梯度离心法分离脐血单个核细胞的方法进行优化,以提高该方法分离脐血单个核细胞的收率.方法 脐血40份,每份40 ml,分为常规组和优化组,每组20份.常规组脐血与NS1∶1混合稀释后,直接通过Ficoll分离液分离单个核细胞；优化组通过先将脐血洗涤一次,加入等量NS充分吹打混匀,200目筛网过滤,保持细胞悬液和Ficoll分离液1:1的体积比进行分离操作.对每份分离得到的脐血单个核细胞通过白细胞稀释液稀释后计数.结果 常规组分离后的白膜层有11份界面不清晰,同时均混有少量的红细胞.优化组分离后的白膜层有1份界面不清晰,仅有极少的红细胞混入.两种方法收集的脐血单个核细胞数比较,优化组多于常规组(P＜0.01).结论 通过对密度梯度离心法的步骤进行优化,可提高脐血单个核细胞的分离效果.
作者：任思坡；吴秀娟；罗小虎；李全双；韩光宇；谭昆；拾莉；耿跃春 刊期： 2012年第01期
目的 以熔解曲线法测定4株肺癌细胞株和肺癌病人APC基因启动子区的甲基化模式.方法 以脐血淋巴细胞DNA及其转甲基后的DNA经化学修饰、克隆测序的质粒,作为完全非甲基化和完全甲基化标准品.设计通用引物,采用加入荧光染料SYBR Green I的荧光定量PCR法扩增包含21个CpG位点的APC基因启动子区的目的序列,以熔解曲线法通过与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值比较,确定四株肺癌细胞株(NCI-H446,NCI-H460,SPCA1,NCI-H520)在该区段的甲基化模式,并通过克隆测序验证.同时测定两例肺癌患者癌组织中APC基因启动子区甲基化模式.结果 四株肺癌细胞株中,NCI-H446,SPCA1和NCI-H520的Tm值与完全非甲基化标准品的Tm值相同,而NCI-H460的Tm值有两个,分别与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值吻合,并经克隆测序验证.两例肺癌患者癌组织的Tm值位于完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值之间.结论 小细胞肺癌细胞株NCI-H446,肺腺癌细胞株SPCA1和肺鳞癌细胞株NCI-H520的APC基因启动子区为完全未甲基化型,而大细胞肺癌细胞株NCI-H460APC基因启动子区甲基化模式为等位基因杂合型.两例肺癌患者癌组织中的APC基因启动子均为部分甲基化型.熔解曲线法是简单、经济和实用的甲基化模式检测方法.
作者：高丽；潘世扬；陈丹；张丽霞；谢而付；徐建；黄佩珺 刊期： 2012年第01期
目的 研制稳定的D-二聚体质控品,用于实验室内部D-二聚体检测的质量控制.方法 ①选择合适的原料制备D-二聚体质控品.分别用肝素、枸橼酸钠和EDTA-K2抗凝的三种不同抗凝血为原料,都使用尿激酶为裂解酶,分别制备得到D-二聚体,比较其效价水平.②选择合适的纤维蛋白裂解酶来制备D-二聚体质控品.将EDTA-K2抗凝血作为原料,分别使用三种不同的纤维蛋白裂解酶-链激酶、尿激酶和纤维蛋白溶解酶,比较其裂解效果.③选择稳定的D-二聚体质控品介质组分.三种候选介质组分别在4℃和37℃保存条件下连续检测5天,以确定其稳定性.④对研制的D-二聚体质控品进行37℃,4℃和-35℃保存条件下的稳定性测试.⑤用研制的D-二聚体质控品对不同批号及不同检测系统D-二聚体试剂盒进行检测,以建立实验室内部D-二聚体检测的质量控制方法.结果 ①相同条件下,肝素、枸橼酸钠和EDTAK2三种不同抗凝血制备D-二聚体质控品的水平分别是24 mg/L,75 mg/L和100 mg/L.因此选择效价高的EDTA-K2抗凝血浆作为制备D-二聚体质控品的原料.②用链激酶、尿激酶和纤维蛋白溶解酶裂解纤维蛋白,分别得D-二聚体60mg/L,110 mg/L和50 mg/L.因此选择尿激酶作为制备D-二聚体质控品的裂解酶.③由25 mmol/L pH7.4磷酸缓冲液(PBS),60 g/L蔗糖,20 g/L聚乙二醇2万衍生物,10 g/L小牛血清清蛋白(BSA),0.5 g/L叠氮钠(NaN3)组成的D-二聚体质控品的介质组分稳定.④7.0mg/L浓度质控品,在37℃下,至少稳定5天,4℃可以保存4个月,-35℃冷冻保存到目前试验阶段已10个月.⑤用不同批号试剂盒检测系列浓度质控品,实际测定值与预期值的相关系数r≥0.95.不同检测系统对D-二聚体质控品的测定差异较大,因此,实验室内部研制的D-二聚体质控品不适用于室间质控.结论 实验室内部的D-二聚体质控品可用健康人EDTA-K2抗凝血浆为原料,用尿激酶降解后,由25 mmol/LpH7.4磷酸缓冲液(PBS),60 g/L蔗糖,20 g/L聚乙二醇2万衍生物,10 g/L小牛血清清蛋白(BSA),0.5 g/L叠氮钠(NaN3)作为介质组分,定标制备.该质控品具有良好的稳定性,可作为实验室内部D-二聚体检测的质量控制,以弥补因缺乏D-二聚体国际和国家标准品带来的测试结果缺少可靠性控制的问题.
作者：顾敏晔 刊期： 2012年第01期
目的 研究紫外线照射对骨髓间充质干细胞中survivin表达的影响及其意义.方法 分离并培养正常成人骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测其特异性表面标志.利用普通紫外线距离细胞20 cm分别照射2 min,5 min后,RT-PCR法检测其中survivin mRNA的表达情况,利用gel-pro analyzer软件比较未经照射、照射2 min、照射5 min后正常成人骨髓间充质干细胞中survivin的表达量,应用SPSS13.0软件,配对t检验方法分析结果.结果 经紫外线照射2 min组与未经照射组比较t值为2.013,P＞0.05,差异无统计学意义,而经紫外线照射5 min组与未经照射组比较t值为7.225,P＜0.01,差异有统计学意义,经紫外线照射5 min后正常成人骨髓间充质干细胞中survivin的表达量明显增高.结论 紫外线照射可以提高正常成人骨髓间充质干细胞中survivinmRNA的表达量,提示紫外线照射可能通过提高抗凋亡基因survivin的表达而延长间充质干细胞的寿命.
作者：周雅丽；白海；马丽；马得炳；张红 刊期： 2012年第01期
胸腺素β4(Tβ4)由43个氨基酸组成,广泛存在于脊椎动物和无脊椎动物中.Tβ4自发现以来,由于其存在于大多数组织和细胞中而被科学研究人员广泛关注,经大量实验证实Tβ4具有抗炎症、促伤口愈合、促进器官修复、促进毛发生长等多种生物学功能.
作者：何娟娟；马列婷 刊期： 2012年第01期
目的 探讨MCV及HbA2在珠蛋白生成障碍性贫血(thalassemia)筛查中的诊断价值.方法 收集已作GapPCR技术及反向斑点杂交基因诊断,确诊为α单纯轻型缺失型患者96例,β单纯突变型患者74例,对照组103例,进行MCV及HbA2检测,确定两者分别在α型及β型筛查中的佳临界值(CT),并对其诊断价值作相关的统计学分析.结果 MCV在α型及β型的佳临界值分别为:≤71.9fl和≤71.55fl,HbA2的佳临界值则分别为:≤3.85％和≥5.25％;MCV在α型筛查中的诊断价值显著高于HbA2(x2=53.38,P＜0.05),在β型中与HbA2相比差异无统计学意义(x2=5.663,P＞0.05)；MCV在两组的诊断价值差异无统计学意义(x2=0.053,P＞0.05),HbA2在α型的诊断价值显著低于β型(x2=82.559,P＜0.05).结论 MCV在α,β珠蛋白生成障碍性贫血筛查中诊断价值均较高；HbA2在a珠蛋白生成障碍性贫血中的诊断价值较低,在β珠蛋白生成障碍性贫血中的诊断价值较高.
作者：刘志伟；高慧；罗韬 刊期： 2012年第01期
ALT不合格是血站实验室检测结果中非特异性并且导致血液报废率高的指标.献血者初次ALT单项不合格的血液予以报废,连续两次ALT单项不合格的则予以淘汰,为减少献血者因饮酒、肥胖、疲劳、运动、服药、高脂饮食造成非病理性淘汰,有效地保留献血者并为进行特殊人群采血前ALT快速检测收集数据,笔者对本站ALT单项不合格献血者进行调查.
作者：何玲 刊期： 2012年第01期
目的 探讨基于生物学变异的质量规范在临床生化质控方案设计中的应用.方法 按照Westgard等[7]的报道方法对18个临床生化项目基于生物学变异不同水平质量目标对应的sigma值进行了计算.不精密度(CV％)的数据采用近6个月(2011年5月～10月)室内质控数据.偏倚(Bias)的数据采用该室参加Bio-Rad实验室间质控比对计划(Inter laboratoryQCProgram)中与对等组比较的近(2011年10月)的偏倚数据.根据sigma值及质控方案性能选择合适的质量目标及质控方案.结果 18个生化项目中,分别有7个、2个和6个项目选择了佳、期望和低水平的生物学变异的质量规范.Ca,Cl和Na目前的性能不能满足低水平生物学变异质量规范的要求,分别选择了CLIA' 88和德国Rilibak质控指南的标准.结论 应用基于生物学变异不同水平的质量规范,可以让临床清楚了解检测过程给实验结果带来的误差大有多少,更有利于检测结果的临床应用.
作者：尹利民；胡大春 刊期： 2012年第01期
目的 应用一种自主研发的新型结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)快速药敏系统(MB FS-1型)检测MTB对利福平(RIF)和异烟肼(INH)的耐药性,并对该系统的临床应用效果进行评价.方法 采用新型药敏系统对115株MTB临床分离株进行药敏试验,异烟肼以及利福平分别设置三个浓度梯度,与BECTEC MGIT 960法对比分析药敏结果,评估该系统检测多药耐药结核( Multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)的应用性价值.结果 以BECTEC MGIT 960法为参考标准,MB-FS-1型快速药敏系统检测INH的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.43％,94.88％,97.26％和88.10％,检测RIF分别为96.50％,94.83％,94.83％和96.50％.异烟肼浓度为0.2μg/ml或0.1 μg/ml,利福平浓度为1.0 μg/ml时两种药敏方法等效性高,符合率分别为93.97％和95.69％.Kappa值分别为0.867和0.913,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 该新型MTB快速药敏系统检测MTB对异烟肼和利福平的耐药性与BACTEC MGIT 960符合率高,具有快速、价廉、操作简便的优点,可作为临床检测MDR-TB的快速检测方法之一.
作者：胡香南；吴晓渊；吕小华；郭建；邓桂林；吴文娟 刊期： 2012年第01期
目的 探讨补肾清透方对慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBV DNA载量、乙肝病毒标志物(HBV-M)和肝功能的关系.方法 60例慢性乙型肝炎患者被随机分成治疗组和对照组,每组30例,治疗组接受补肾清透方治疗,疗程48周,对照组不接受药物治疗.两组分别在开始和第48周时抽血检查HBV DNA,HBV-M和肝功能.结果 治疗组治疗后病毒标志物HBV DNA,HBsAg和HBeAg阴转率分别为23.3％(7/30),16.7％(5/30)和36.7％(11/30),HBeAb阳转率为16.7％(5/30),与治疗前比较,差异有统计学意义(P＜0.01或0.05)；肝功能指标ALT,AST和GGT下降,A/G升高,差异有统计学显著性意义(P＜0.01或0.05).对照组检测上述指标,结果差异均无统计学显著性意义(P＞0.05).结论 补肾清透方能降低乙型肝炎病毒栽量,提高乙肝病毒标志物转化率,改善肝功能.
作者：刘心亮；熊益群；周大桥；童光东；贺劲松；徐绍钢；穆桂萍；刘文赫 刊期： 2012年第01期
目的 研究血吸虫病患者是否有肝自身免疫性抗体存在.方法 收集来自荆州市第一人民医院住院的100例血吸虫病患者的血清,运用免疫印迹法检测肝抗原IgG谱,同时运用全自动生化分析仪检测其肝功能,并综合分析其结果.结果 100例血吸虫病患者肝抗原IgG谱显示,LKM-1,LC-1及SLA/LP均为阴性,但有21例血吸虫病患者AMA-M2阳性；对AMA-M2阳性和阴性患者血清肝功能进行比较发现,血清ALT,AST,ALP及γ-GT差异有统计学意义(P＜0.05),其t值分别为7.115,6.685,7.219和8.398.结论 血吸虫病患者可以出现肝自身免疫性抗体,且AMA-M2阳性患者往往伴随肝功能损伤.
作者：张家均；王娴默；雷鸿斌；黄娥；雷选斌；郭辉；董虹 刊期： 2012年第01期
目的 了解湖南省株洲市第一医院患者梅毒感染情况及其分布,为梅毒的全面预防工作提供科学依据.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对株洲市第一医院2010年1月～2011年3月门诊普通患者及术前拟输血患者共29 328例进行梅毒抗体检测,阳性标本用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)法确证.结果 29 328例标本中,男性阳性结果为426例,女性阳性结果为310例,总阳性率为2.51％.在各年龄组均发现有梅毒感染.其中20～40岁组阳性率高,占55.43％.在感染科室当中,外科患者阳性感染率高,其次是妇产科.结论 患者血清梅毒抗体在临床科室占一定比例的阳性率,因此对患者,尤其是术前患者进行梅毒抗体检测,可以及时阻断梅毒的传播,有效预防院内感染,并有利于医护人员的自我保护.
作者：唐满玲；顾敏；彭俊；李见红 刊期： 2012年第01期
目的 探讨不同浓度CoCl2诱导乏氧对体外培养的人肺腺癌细胞株A549增殖、缺氧诱导因子-1α mRNA (HIF-1αmRNA)表达变化及诱导凋亡作用.方法 对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟乏氧培养,采用MTT法检测乏氧对A549细胞增殖的影响.实时荧光定量PCR法测定不同浓度CoCl2诱导乏氧HIF-1α mRNA表达水平的变化.Annexin V-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测不同浓度CoCl2诱导乏氧时A549细胞凋亡情况.结果 CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间和剂量依赖性抑制作用.常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α mRNA的表达,随着CoCl2浓度的增加,HIF-1α mRNA水平呈上升趋势,经单因素方差分析统计,各组差异有统计学意义(F=195.414,P=0.000).流式细胞仪检测结果显示,正常对照组,50,100,200,400 μmol/L CoCl2不同浓度组A549细胞凋亡率分别为1.97％±0.40％,3.97％±0.15％,6.93％±0.29％,12.97％±0.45％和15.80％±1.37％,经单因素方差分析统计,各组差异有统计学意义(F=220.209,P=0.000).结论 CoCl2对肿瘤细胞的增殖凋亡的影响呈浓度依赖性,进行化学模拟低氧时,要考虑CoCl2的作用浓度.
作者：陶绍能；周建国；程光华；张新路；葛俊亮 刊期： 2012年第01期
目的 探讨自制肿瘤标志物质控品在临床实验室中的应用可行性.方法 收集肿瘤患者检测血清样本,与健康人群血清按比例混合,配制成肿瘤标志物多项目(AFP,CEA,CA125,CA15-3,CA19-9,CA21-1,NSE,CA72-4和TPSA)复合血清,液态分装,-20℃保存,作为自制质控品每工作日检测一次,连续检测3个月,观察其稳定性；统计3个月内自制质控品各项目月均值、累积均值、月CV％、累积CV％和失控次数,探讨其在室内质量控制活动中的应用价值.结果 ①-20℃分装保存3个月的自制肿瘤标志物复合项目质控品冻溶后外观清澈透明,无浑浊及沉淀；该自制质控品-20℃分装保存第1,7,15,30,50,70,90天各项肿瘤标志物量值未见明显变化；对第21～30,51～60,81～90天各项目测定结果进行方差分析,差异无统计学意义(P＞0.05).②自制复合质控品用于室内质控活动,对各项目第1,2,3个月结果进行方差分析,差异无统计学意义(P＞0.05),各项目月均值及三个月累积均值之间比较,月均值及累积均值未出现均值漂移或趋势变化；各项目月CV％和累积CV％,均在不精密度(cVA％)控制允许范围内(CVA％ ＜0.5倍个体内生物学变异)；3个月室内质控活动中,失控报警:13s6次,22s3次,R1s1次.结论 自制肿瘤标志物复合项目冰冻血清作为室内质控品,具有良好的稳定性,可替代其进口产品；其应用于室内质控活动,能及时发现检测系统的不稳定性因素,并加以纠正处理,确保肿瘤标志物检测结果的可靠性.
作者：杨悦林；胡大春；钱净；杨丽琼；张水丽 刊期： 2012年第01期
目的 旨在建立一种快速及高通量的CYP2C19药物代谢酶相关基因多态性的检测方法,为个体化治疗提供用药参考.方法 抽取96例人外周血DNA,应用带有生物素标记的扩增引物,经PCR扩增并制备焦磷酸测序单链模板,于PyroMark ID焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序,且以Sanger测序法测序结果为对照,观察分析准确性.结果 运用焦磷酸测序可以成功检测CYP2C19相关基因型；单个SNP位点检测经与Sanger测序方法比较,符合率为100％.同时,通过设计焦磷酸测序引物,两个PCR产物可合并于一管中进行焦磷酸测序,与单管检测一个位点的焦磷酸测序方法相比,能有效降低检测成本,节省检测时间.结论 该方法可准确、高通量、快速检测药物代谢酶相关基因多态性,该方法在个性化医疗上有较大的推广应用价值,也可以将该平台运用于其他疾病相关基因多态性检测.
作者：施宏；虞闰六；马金飞；任绪义 刊期： 2012年第01期
目的 调查分析盐城市盐都区儿童部分疫苗接种后的免疫效果.方法 采用微量血间接ELISA法对盐都区9乡镇6 648名1～16周岁具有相关疫苗接种史的儿童做麻疹、乙型脑炎及A群脑膜炎、脊髓灰质炎或白喉、破伤风IgG抗体的检测,并对结果进行分析.结果 受检儿童麻疹、乙型脑炎、A群脑膜炎、脊髓灰质炎、白喉、破伤风IgG抗体阳性率分别为74.31％,89.58％,64.67％,75.53％,93.01％和86.42％;不同性别儿童之间抗体阳性率差异无统计学意义(x2=0.261～2.599,P＞0.05)；各年龄段白喉和乙型脑炎抗体均处于较高水平,多个年龄组麻疹、脊髓灰质炎和A群脑膜炎抗体阳性率相对较低,破伤风抗体水平7岁以后、A群脑膜炎8岁以后有随年龄增长而下降的趋势.结论 盐都区健康儿童A群脑膜炎、麻疹、脊髓灰质炎抗体阳性率相对较低,需提高疫苗冷链管理和接种质量,并正常开展免疫监测,对未检出保护性抗体的儿童进行相关疫苗的加强接种.
作者：胥加耕；王荣堂；梅志锋 刊期： 2012年第01期
目的 探讨醌氧化还原酶1[ (NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]C609T基因多态性在精神分裂症迟发性运动障碍( tardive dyskinesia,TD)发病中的作用.方法 采用病例-对照研究,运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测了233例精神分裂症患者(TD组55例和非TD组178例)NQOIC609T基因多态性.结果 TD组中NQO1 C609T位点CC,CT和TT基因型频率分别为45.5％,40.0％和14.5％；C和T等位基因频率分别为65.5％和34.5％.非TD组中CC,CT和TT基因型频率分别为36.0％,47.2％和16.8％;C和T等位基因频率分别为59.6％和40.4％.NQO1 C609T基因型频率和等位基因频率在TD组与非TD组之间差异无统计学意义(x2=1.61,P=0.448;x2=1.23,P=0.267).结论 NQO1基因C609T位点在中国云南汉族人群中存在多态性,其基因多态性与中国云南汉族精神分裂症的迟发性运动障碍不存在关联,该基因多态性在迟发性运动障碍发病中的作用机制还有待进一步研究.
作者：赵若莲；杨保春；龚毅；王玉明 刊期： 2012年第01期
目的 探讨电化学发光免疫法检测N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)的检测限值和功能灵敏度.方法 参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP-17A文件制备空白样品及系列低浓度样品.空白样品采用配套的稀释液,系列低浓度样品采用倍比稀释的方法获得.样品制备后用Roche Cobas E601电化学发光免疫系统检测NT-proBNP浓度,以确定该方法的空白限、检出限和功能灵敏度.结果 NT-proBNP的空白限为2.53 pg/ml,检出限为7.75 pg/ml,10％ CV时的功能灵敏度为8.82 pg/ml.结论 建立了Roche Cobas E601电化学发光免疫系统检测NT-proBNP的空白限、检出限和功能灵敏度,为临床诊断和治疗提供了更有价值的信息.
作者：索明环；张秀明；温冬梅；王伟佳；李飞；欧阳能良；阚丽娟；严海忠 刊期： 2012年第01期
红细胞是血液的主要有形成分,其携带氧气至全身各组织,并协同维持酸碱平衡.红细胞的代谢速度取决于保存温度,由于血液在0℃以下时红细胞周围有冰晶形成,易刺破红细胞膜或损伤红细胞内部结构而引起溶血,因此目前通常在4℃条件下保存红细胞[1].固定温度条件下随着保存时间延长红细胞过氧化反应增强,保存损伤作用增加,衰老红细胞使血流不畅,细胞破裂后释放毒性物质,临床输注后易导致输血相关急性肺损伤(TRALI)、血栓疾病、多器官功能衰竭以及使外伤病人的死亡率增加等[2].血液过氧化作用是造成血液损坏的主要原因.
作者：廖红；陈海珊；张献清 刊期： 2012年第01期
目的 了解耐碳青霉烯抗生素鲍曼不动杆菌的抗生素耐药情况,指导临床合理用药.方法 选取中国中医研究院望京医院2008～2010年期间临床和门诊患者样本的耐碳青霉烯抗生素的鲍曼不动杆菌分离株,通过药敏实验分析这些菌株对15种常见抗生素的耐药性.结果 从标本类型分布看,主要的是痰液标本,共110株(88％),其次是分泌物共9株(7.2％)和2株自导管(1.6％).从科室统计分析发现,ICU分离到的鲍曼不动杆菌数多,68株；其次是针灸科,分离的菌株是15株；神经外科、CCU、普通外科、心内科、内分泌科、呼吸科、创伤一科,分别分离到14,11,7,4,3,2和1株.选取的125株鲍曼不动杆菌对哌拉西林、美罗培南、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林/三唑巴坦、环丙沙星、亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星、妥布霉素、头孢曲松和头孢他啶耐药率高达90％以上,依次为100％,99.2％,99.2％,98.4％,96.8％,96％,96％,94.4％,93.6％,92％和91.2％.其次是氨曲南、左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴克坦,耐药率依次是72.8％,64％和30.4％,对多黏菌素B的耐药率低,仅为0.8％.结论 该院耐碳青霉烯抗生素的鲍曼不动杆菌对大多数种类的抗生素均有较高的耐药性,仅对少数几种抗生素表现为敏感,临床上应严格按照科学的用药方案进行抗生素使用,防治耐药性的进一步产生和院内传播.
作者：郭洁；徐杰；王丽丽；王玉飞；苑锡铜；袁静；宋宏彬；黄留玉；张宁；陈泽良；陈永德；刘世巍 刊期： 2012年第01期
现代检验医学杂志
主管:陕西省卫生厅
主办：陕西省临床检验中心,陕西省人民医院
