沈军;马亮;钟明华;韩呈武;曹永跃;湛玉良;曹永彤
目的 研究高浓度的胰岛素是否影响阿司匹林抑制的血小板聚集率.方法 将制备的4组等体积的富含血小板血浆(PRP)分别加入0,30,100和300μU/ml的胰岛素,37℃的环境下孵育3 min,再将上述每一组的PRP分成等体积的4个组,分别加入0,75,150和300 μmol/L的阿司匹林,于37℃的环境下继续孵育30 min.用血小板聚集仪检测各组的血小板大聚集率.结果 不同浓度胰岛素组之间有显著差异(F=4.056,P=0.008).300 μU/ml胰岛素浓度的富含血小板血浆,在不同浓度阿司匹林0,75,150和300 μmol/L的孵育下,血小板大聚集率分别为(87.62士6.23)%,(60.85±16.24)%,(55.28±16.48)%和(49.36士16.77)%,均高于相应对照组的血小板大聚集率(83.82±8.35)%,(48.80士21.35)%,(45.04±21.44)%,(38.90±21.70)%和30 μU/ml胰岛素组的血小板大聚集率(84.64±8.09)%,(48.13±19.27)%,(44.30士20.50)%和(35.30±16.81)%,其差异有统计学意义(P<0.05);而其他浓度的胰岛素组间比较,差异则无统计学显著性意义.结论 血小板暴露于高浓度的胰岛素(300 μU/ml)环境中,将会减弱阿司匹林对血小板的抗聚集效应.
作者:高玉龙;杨升华;薛临先;高德禄 刊期: 2014年第02期
目的 研究癌性贫血患者中骨形成发生蛋白(BMP6)和BMP4的表达水平,以及与铁调素调节蛋白(s-HJV和Hepcidin之间的关系.方法 应用双抗夹心生物素亲和素-酶联免疫吸附试验方法检测53例癌性贫血患者和52例无贫血癌症患者的血清BMP6,BMP4,s-HJV和Hepcidin水平,并分析它们之间的相互关系.结果 ①贫血组BMP6和Hepcidin分别为434.53±212.11 ng/ml和5.68±3.89 μg/L,均高于无贫血组癌症患者(334.37±171.32 ng/ml和4.60±2.28 μg/L)(分别为P<0.01或P<0.05);s-HJV则为0.69±0.28 ng/ml,明显低于无贫血组癌症患者1.07±1.00 ng/ml(P<0.01).而癌症贫血患者的BMP4表达水平与癌症无贫血患者比较,差异无统计学意义.②BMP6与s-HJV,Hb均呈负相关(r=-0.253 6,-0.294 9;P均<0.01),但与Hepcidin不相关.而BMP4则与Hb,s-HJV和Hepcidin三者均无相关关系.结论 癌性贫血患者高表达BMP6和Hepcidin,低表达s-HJV.BMP6和s-HJV呈负相关关系,BMP6,s-HJV和Hepcidin在贫血的发生发展中起重要的作用.
作者:史玉娟;潘湘涛 刊期: 2014年第02期
目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血调节性B细胞(Breg)的含量,了解Breg在SLE疾病中的作用.方法 选择2013年1月~4月在南京大学医学院附属鼓楼医院住院的SLE患者34例、健康对照30例,以CD19+ CD5+CD1d+作为Breg标记,分别采用流式细胞术检测外周血Breg占B淋巴细胞的比率.结果 SLE患者组Breg的比率(7.86±4.10)%显著低于健康对照组(22.71±9.17)%(Z=2.16,P<0.01).结论 SLE患者外周血中Breg的比率显著降低,提示可能与SLE的发病相关.
作者:黄中伟;陈军浩;张立平 刊期: 2014年第02期
目的 建立一种快速检测Toll样受体9(toll-like receptor 9,TLR9)基因rs187084和rs352140单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的方法,以及应用该方法检测湖北地区汉族人群各基因型的分布情况.方法 根据TLR9基因rs187084和rs352140 SNP中碱基变异频率分别设计野生型、突变型以及内参引物,建立等位基因特异性聚合酶链反应(allele specific PCR,AS PCR)检测135例体检人群外周血基因组DNA,以DNA测序法检测结果作为参照标准,并统计分析不同基因型在人群中的分布.结果 135例样本SNP位点均出现相应的野生型、突变型或者杂合子个体,AS-PCR的检测结果与DNA测序符合率为100%.湖北地区体检人群TILR9基因rs187084位点基因型为:CC型占8.14%(11/135),TT型占41.48%(56/135),CT型占50.37%(68/135).CC型所占比例小(x2=82.21,P<0.05),CT型比例略高于TT型,差异无统计学意义(x2=2.15,P>0.05).TLR9基因rs352140位点基因型为:CC型占41.48%(56/135),TT型占11.11%(15/135),CT型占47.41%(64/135). TT基因型所占比例小(x2=46.07,P<0.05),CT型略高于CC型,差异无统计学意义(x2 =0.96,P>0.05).结论 AS-PCR是一种简单、快速、可靠以及低成本检测TLR9基因SNP的方法.
作者:舒颖;魏新素;童永清;张平安 刊期: 2014年第02期
目的 分析伴t(8;21)易位急性髓细胞初诊白血病患者FAB分型、血常规、骨髓细胞形态学、细胞遗传学及临床预后特点.方法 20例患者为中日友好医院2004年~2011年按WHO标准确诊的急性髓细胞白血病(AML)患者,血常规采用XE-2100全自动分析仪分析;骨髓细胞形态学检测对骨髓涂片进行瑞氏-姬姆萨染色,显微镜计数细胞;细胞遗传学检测为常规培养骨髓细胞,采用G显带技术对染色体核型进行分析.结果 伴t(8;21)易位AML患者中55%(11/20)患者外周血白细胞升高,20%(4/20)患者白细胞减低,所有患者均伴血小板减低.85%(17/20)患者骨髓涂片中可见奥氏小体.根据FAB分型,20例患者中15%(3/20)诊断为MDS-RAEB,20%(4/20)为MDS-RAEBt,55%(11/20)为AML-M2,10%(2/10)为AML-M4.55%(11/20)患者为单纯t(8;21)易位,45%(9/20)患者为t(8;21)易位同时伴有其它异常,其中伴性染色体丢失占所有患者35%(7/20),伴有9q-占所有患者的10%(2/20).82.4%(14/17)患者能达到完全缓解.结论 伴t(8;21)易位AML患者可见于FAB分型的不同亚型,主要见于AML-M2.t(8;21)患者常伴有附加异常,以性染色体丢失常见.t(8;21)易位患者疗效较好.
作者:沈军;马亮;钟明华;韩呈武;曹永跃;湛玉良;曹永彤 刊期: 2014年第02期
目的 定量检测生物被膜在生物材料表面的形成过程,评价生物被膜形成的定量技术.方法 将表皮葡萄球菌RP62A接种于不锈钢垫圈上分别培养0~8,24和48 h.采用生物被膜覆盖率实验(BCR),活细胞计数(VCC)以及ATP-生物发光(ATP)定量检测不同时期生物被膜的量,并提取总RNA检测ica基因的转录水平,对各组实验结果进行比较分析.结果 BCR显示生物被膜的量随着培养时间的增长而逐渐增多,在8h时达到(92.79±8.13)%,24 h或者48 h增长到近100%.VCC在24 h(12.33×106CFU)和48 h(16.30×106CFU)显著高于0~8 h(8 h:2.21×106CFU),差异有统计学意义(P<0.05).ATP结果从5h时开始增加,在24 h后趋于稳定(~15 000 RLU),48 h时增加至(44 545.20±22323.79)RLU,差异有统计学意义(P<0.01).6h后ica基因的RT-PCR检测结果与BCR结果相符.BCR与VCC和ATP结果在0~8 h内具有显著的相关性(r=0.73,P=0.007 1;r=0.78,P=0.008 5).结论 各检测方法的联合应用可以提高定量分析的准确度,定量分析显示细菌生物被膜的形成在细菌粘附于生物材料表面后6~8h内迅速完成,为感染早期治疗提供依据.
作者:许惠根;苏炳森;王军;黄婷;蔡旭清 刊期: 2014年第02期
目的 通过建立孕期染铅模型检测出生后SD仔鼠肾功能的改变及紧密连接蛋白Claudin-2的改变,阐明孕期铅暴露对SD仔鼠肾功能的影响.方法 SD孕鼠通过饮用50 mg/L,100 mg/L醋酸铅(PbC4H6O4·3H2O)的方法建立模型.仔鼠出生后6周检测血液中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和胱抑素C(CYS-C)水平的变化,肾组织形态及Claudin-2的改变,探讨孕期铅暴露对SD仔鼠肾功能的影响.结果 血铅结果显示,低剂量组仔鼠血铅水平(146.28±15.10 μg/L)与高剂量组仔鼠血铅水平(188.03±18.58μg/L)较对照组明显升高,差异有统计学意义(F=5.22,P<0.01),且低剂量组与高剂量组之间,差异有统计学意义(F=5.53,P<0.05),说明模型建立成功.染铅SD仔鼠血肌酐(9.31±1.98 μmol/L,F=5.89,P<0.01),尿素氮(89.73±14.45 mmol/L,F=5.01,P<0.01)和CYS-C(0.37士0.04mg/L,F=6.96,P<0.01)水平升高,病理结果显示:染铅组仔鼠肾小球轻度肿大,伴炎性细胞浸润;部分肾小管上皮细胞变形、坏死,部分管腔内有管型.免疫荧光结果显示,染铅组仔鼠Claudin-2表达下降,连续性被破坏.结论 孕期铅暴露能引起生长发育期大鼠的肾功能不全,并且铅暴露可以降低肾小管Claudin-2的表达.
作者:苏鹏;张建彬;徐焰;蔡同建;曹子鹏;王迪雅;康蓓佩;骆文静;陈景元 刊期: 2014年第02期
目的 应用基因测序技术检测分析武汉地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因型及其分布特点.方法 收集2013年2月~2014年1月武汉大学人民医院感染科254例HCV-RNA阳性慢性丙型肝炎患者血浆标本,通过Sanger测序法测定靶片段的基因序列,然后与NCBI genebank数据库中HCV基因型数据进行比对,分析患者HCV基因型.结果 研究检测的慢性丙型肝炎患者血浆中,共检测出11种HCV基因型,分别是1a,1b,2a,3a,3b,6a,6b,1b/2a混合型,1b/2k混合型,6a/1b混合型和6d/6k混合型.其中,HCV1a型为2例(0.79%),1b型189例(74.41%),2a型35例(13.78%),3a型4例(1.57%),3b型12例(4.72%),6a型6例(2.36%),6b型1例(0.39%),1b/2a混合型2例(0.79%),1b/2k型1例(0.39%),6a/1b混合型型1例(0.39%)和6d/6k混合型1例(0.39%).结论 武汉地区HCV-RNA基因型以1b型为主,其次为2a型,亦可见其他型别,提示武汉地区HCV流行的基因型呈多样性.
作者:吴泽刚;李艳;郑红云 刊期: 2014年第02期
目的 研究肾移植术后患者抗HLA抗体与移植肾长期存活的关系.方法 选择2008年前已行移植肾手术的652例肾移植患者,于2009年10月~2010年4月检测群体反应性抗体(PRA),而后每年连续观察肾功能.结果 652例肾移植患者中,抗HLA抗体阳性患者81例,占12.42%(81/652),移植肾功能下降或丧失患者71例,占87.65%(71/81).PRA阴性患者571例,占87.58%(571/652),移植肾功能下降患者44例,占7.71%(44/571).PRA阳性与阴性对肾移植患者移植肾功能的影响具有统计学差异(x2 =306.64,P<0.001).结论 抗HLA抗体可能是引起移植肾慢性失功的重要因素之一.
作者:贾保祥;武俊杰;徐秀红;尚东浩 刊期: 2014年第02期
目的 血浆(1,3)-β-D葡聚糖的检测为临床提供深部真菌感染的诊断价值.方法 使用MB-80真菌快速检测仪,检测2011年1~12月泸州医学院附属医院486例不同年龄阶段疑似深部真菌感染患者的552份血浆标本中(1,3)-β-D葡聚糖的含量,将其进行卡方检验和ROC曲线分析及探讨.结果 552份标本中(1,3)-β-D葡聚糖对深部真菌感染检测的阳性率为15.94%(88/552),培养与镜检对深部真菌感染的阳性率为12.14%(67/552),两组差异有统计学意义(x2=26.80,P<0.05);深部真菌感染组患者血浆(1,3)-β-D葡聚糖水平为(153.18±183.04) pg/ml,无深部真菌感染组为(19.53±97.92)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.001);用于诊断深部真菌感染的ROC曲线下面积为0.96(P<0.05);以20 pg/ml水平为临界值的血浆(1,3)-β-D葡聚糖对深部真菌感染诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为89.55%,95.46%,73.17%,98.51%和94.75%.结论 血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测与传统方法诊断的一致性好(Kappa=0.93,P<0.05).该方法简便、快速且阳性率较高,可用于深部真菌感染的早期快速诊断.
作者:杨葵;丁银环;田刚;向成玉;林雁 刊期: 2014年第02期
目的 建立深圳龙华新区健康成年女性人群血清CA125和CA153含量水平的参考区间.方法 采用罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪对2 745例健康成年女性人群的新鲜血清进行CA125及CA153含量测定,检测结果按CLSIC28-A3(临床实验室参考范围的定义和确认,第3版)进行统计处理,确定健康成年女性人群CA125及CA153含量水平正常参考区间,并分析成年女性人群之间CA125及CA153含量水平变化情况.结果 CA125及CA153检测结果呈偏态分布,龙华新区健康成年女性CA125总体参考区间为0.93~33.12U/ml及CA153总体参考区间为0.67~26.09U/ml;与CA125及CA153推荐参考区间(35±0.7 U/ml)和(28士0.6 U/ml)比较差异无统计学显著性意义(x2=0.762,P=0.378,P>0.05),成年女性人群CA125及CA153含量随年龄增加而呈逐渐下降趋势;月经期及孕期血清中CA125及CA153含量明显高于其他人群;更年期低于除50岁以上外其他人群.结论 龙华新区健康成年女性人群CA125及CA153含量水平的参考区间稍低于推荐参考区间,两者比较差异无统计学显著性意义.依据实验允许误差范围,本区CA125及CA153的含量水平参考区间可以采用相应的推荐参考区间.
作者:施俊柱;刘爱胜;陈荣贵;文艳 刊期: 2014年第02期
目的 探讨血清肿瘤标志物人附睾分泌蛋白4(HE4),CA125和ROMA指数在卵巢癌预测和诊断中的应用价值.方法 用化学发光法检测手术前卵巢癌患者96例和卵巢良性肿瘤患者60例及健康体检者75例的血清中HE4,CA125水平,并计算出卵巢癌风险预测模型(ROMA)值,联合绝经状态预测患卵巢癌的风险性.结果 卵巢癌组HE4,CA125和ROMA值三项指标的中位水平分别为222.2 pmol/L,153.9 U/ml和73.0%,与卵巢良性肿瘤组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).将HE4和CA125的cut-off值定在140 pmol/L和35 U/ml,绝经前、后妇女ROMA指数cut-off值定为11.4%和29.9%,则HE4,CA125和ROMA指数预测和诊断卵巢癌的灵敏度分别为72.9%,89.6%和87.5%;特异度分别为98.3%,55.0%和90.0%;准确度分别为87.1%,81.9%和90.5%;联合检测HE4,CA125与ROMA指数预测和诊断卵巢癌的灵敏度、特异度分别为97.0%和92.8%.结论 联合检测血清HE4和CA125并计算出ROMA指数有助于预测腹盆腔肿块患者患卵巢癌的风险性,鉴别卵巢肿瘤的良恶性,提高卵巢癌的早期诊断率.
作者:朱自力;戴伟萍;肖春红;顾建美;张金业 刊期: 2014年第02期
目的 了解铜陵地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布,分析该地区HBV不同基因型别与肝功能损害、病毒复制水平及血清标志物的关系,探讨不同基因型的临床意义.方法 采用聚合酶链式反应-反向点杂交法(polymerase chain reaction-reverse dot blot,PCR-RDB)对铜陵地区228例ABV阳性感染者的血清分别进行HBV基因型的分型、HBV-DNA载量以及HBV血清标志物和肝功能等的检测,并结合其指标进行相关性分析.结果 在228份患者的血清样本中,226份样本成功分型,其中B型54.4%(124/228),C型37.3%(85/228),B/C混合型7.5%(17/228),2例未检出占0.88%(2/228).在各临床分型的慢性HBV感染者中,B基因型在慢性乙型肝炎组(CHB)、肝硬化组(LC)和原发性肝细胞癌组(HCC)中的构成比依次为61.8%,36.4%和60%,C基因型依次为25.7%,63.6%和40%,B型在CHB组占优势(x2=19.253,P=0.001);C型在LC组占优势,差异有统计学显著性意义(x2=9.818,P<0.001).C基因型HBV-DNA载量明显高于B型及B/C混合型,差异具有统计学非常显著性意义(P<0.01).在不同基因型HBV患者中,除了性别,男性高于女性外,患者的生化指标经方差分析各组差异均无统计学显著性意义(P>0.05).结论 铜陵地区HBV基因型主要以B型为主,对HBV基因分型有助于了解患者的病情,对HBV感染患者的临床诊治具有重要指导意义.
作者:唐吉斌;翁伟;张盛;宋有良;焦瑞宝;章文 刊期: 2014年第02期
目的 对四种不同样本保存方法用于强直性脊椎炎(AS)患者流式细胞术测定B27表达情况的临床效果进行评估;从而探讨一种更好的流式细胞术B27样本保存方式的可能性.方法 收集武汉大学人民医院2009年10月~2012年11月间门诊及住院AS 155例患者外周血标本作为研究对象,将上述样本分别按照不同的保存方式分为室温保存全血细胞(RTWB)、冻存单个核细胞(FMNC)、冻存去红细胞的白细胞(FWBC)、冻存血小板(FPLT)、新鲜全血样本(IWB)和新鲜血小板(IPLT);采用流式细胞术(FCM)对上述几种方法保存的样本HLA-B27表达情况进行测定;分别计算出上述不同样本保存方法用于AS诊断的诊断效能指标(灵敏度、特异度、误诊率、漏诊率、阳性预告值、阴性预告值),以评估不同样本保存方法对AS临床诊断价值的影响.结果 FMNC,FWBC,FPLT与IWB和IPLT用于AS病诊断的灵敏度、特异度、误诊率、漏诊率、阳性预告值和阴性预告值分别均为87.1%,88.5%,11.5%,12.9%,86%和89.4%,诊断效能指标完全一致;而RTWB敏感度和特异度分别为77.4%和80.8%,明显低于新鲜标本(x2=11.23,8.11,P<0.05),误诊率和漏诊率分别为19.2%和22.6%,高于新鲜标本(x2=10.53,7.85,P<0.05).结论 该研究表明采用一定方式冻存的外周血样在流式细胞术HLA-B27测定用于AS病的诊断中能够达到与新鲜样本一样的诊断效能,FPLT样本进行FCM B27测定结果可靠且操作简单、高效,更适合临床诊断.
作者:洪俊;饶永彩 刊期: 2014年第02期
DC+ CIK免疫治疗由于它的毒副作用小,能减少肿瘤患者术后复发、转移的概率,能提高患者对化放疗的敏感性及耐受性、还能明显的改善患者的生活质量,现已开始逐步应用于临床中,大多数的实验室都建立了标准化实验室及制定了严格的标准化操作规程(SOP),力求培养DC+ CIK的培养和回输安全.该文重点讨论了DC+ CIK培养中的常见污染和预防要点,希望能给广大的细胞培养工作者提供参考.
作者:陈娅;邱育淼;欧阳学农 刊期: 2014年第02期
目的 构建抗衰老Klotho分泌表达载体,鉴定表达产物.方法 采用高保真PCR扩增Klotho基因,将其克隆到穿梭载体pMG36e中,经鉴定后电击转化乳酸菌.通过RT-PCR和Western blot检测目的基因表达情况.结果 特异PCR、酶切和测序鉴定均证实Klotho基因克隆入表达载体pMG36e;将其转化至乳酸菌后,该乳酸菌能有效分泌表达Klotho.结论 成功构建能有效分泌表达Klotho的基因工程菌,为进一步口服重组乳酸菌进行抗衰老研究奠定了基础.
作者:谢宁;郭斌;熊元;黄义山;廖涛;唐中 刊期: 2014年第02期
microRNA(miRNA)是长21 nt~25 nt内源性非编码小分子RNA.miRNA通过调节基因的表达,广泛参与心血管系统细胞的增殖、迁移、分化、凋亡等病理生理过程,在心血管系统疾病的发生发展过程中起着重要的调控作用.近研究发现,miRNA参与了心肌肥厚、心肌梗死、心肌纤维化、心律失常和血管病变等的生理病理过程.该文就miRNA在心血管系统生理病理过程中的作用予以综述.
作者:李勤;王玉明;段勇 刊期: 2014年第02期
目的 构建4个人醛缩酶A (aldolaseA,ALDOA)公共序列的干扰RNA真核表达载体,转染人脑神经胶质细胞U251细胞,为醛缩酶A成为人脑肿瘤标志物提供实验基础和有价值的资料.方法 ①构建4个新靶点醛缩酶A干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定;②用脂质体法瞬时转染上述4个载体到U251细胞株.结果 ①成功构建了4个新靶点的醛缩酶A干扰RNA真核表达载体即pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-1,pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-2,pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-3和pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-4;②在U251细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论 成功构建并筛选出效果好的新靶点MBP干扰RNA真核表达载体.
作者:董莉;呼格吉乐;易青;萨日娜;王悦喜 刊期: 2014年第02期
目的 了解目前我国干化学测定胆红素的检测现状,以改进和提高胆红素检测质量.方法 对2012年自愿参加干化学胆红素检测室间质量调查的148家实验室发放两个批号的冻干粉质控品(批号为A1565和B1567),要求回报总胆红素(TBIL)、结合胆红素(CB)、未结合胆红素(UB)和Delta胆红素(DELB),并对回报结果进行统计分析,以评价实验室检测水平.结果 调查回报率为81.8%(121/148),分别有118,113,113和91家实验室回报了TBIL,CB,UB和DELB的检测结果,这四个检测项目在Vitros系列仪器上检测所得的稳健变异系数(RCV)差异较大.四个项目的实验室间CV的算术平均数分别为5.68%,19.41%,12.37%和53.98%;TBIL和CB的统计结果与2012年干化学第一次EQA比较,实验室间变异相差不大.根据目前干化学室间质量评价的评价标准,TBIL两个批号合格率较高,均为98.3%;CB为78.8%和92.9%;UB为85.8%和93.8%;Delta胆红素合格率较低,分别为46.2%和34.4%.结论 该次调查数据显示出目前我国干化学胆红素检测水平还需进一步提高,实验室应严格按照操作程序进行检测,并采取有效的室内质量控制,参加室间质量评价计划,以减小胆红素检测结果的误差并提高结果间的可比性.
作者:王薇;钟堃;何法霖;康凤凤;王治国 刊期: 2014年第02期
目的 探讨糖化血红蛋白(HbA1c)在脑血管疾病中的临床应用.方法 收集2012年1月1日~5月31日住院病人的HbA1c资料358例,剔除已明确诊断为糖尿病患者的资料,将不同脑血管疾病的HbA1c水平与HbA1c 5.7%水平进行统计分析,评估脑血管疾病发生糖尿病的风险.结果 该研究中不同脑血管疾病的HbA1c水平与HbA1c 5.7%水平的单样本t检验分析,脑动脉供血不足、短暂性脑缺血发作、脑出血、眩晕综合征、椎-基底动脉供血不足和脑梗塞(t=2.98~6.92,P值均<0.01),差异有统计学意义.结论 脑血管疾病的HbA1c水平升高,灵活掌握HbA1c的应用,对医师在临床诊治上采取全面、有效的治疗措施具有实际的指导意义.
作者:李友建;顾桂兰;王志勇;汪峰;张超 刊期: 2014年第02期