徐竹蔚；刘莹；户义；朱参胜；张圆；宋朝君；许晓光；金伯泉
目的: 研究胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠关节中局部浸润的T细胞TCR Vβ克隆型.方法:用II型胶原(CII)诱导Lewis大鼠发生关节炎后,经流式细胞术分析大鼠外周血CD4+和CD8+细胞的变化.提取CIA大鼠关节组织的总RNA,通过RT-PCR/SSCP方法分析大鼠两后肢足关节中TCR Vβ克隆型的一致率.将CIA大鼠脾淋巴细胞转移至同系正常大鼠,观察发病情况.结果:从注射CII的第30天起,大鼠后爪出现红、肿等症状.流式细胞术分析显示,与正常大鼠相比较,CIA大鼠外周血CD8+T细胞的降低有显著性意义(P<0.01),CD4+ T/CD8+ T的比值大于2(P<0.01),提示CIA大鼠体内存在T淋巴细胞亚群的比例失调.CIA大鼠两后肢足关节中聚集的TCR Vβ克隆型的一致率,以TCR Vβ5.2和8.2高,分别为78.89%和72.23%.脾淋巴细胞转移试验显示,受者发病的大鼠关节中,出现与供者CIA大鼠一致的TCR Vβ克隆型条带,表明关节局部聚集的TCR Vβ克隆型与关节炎(RA)的发病有关.结论: CIA大鼠关节局部存在以TCR VVβ5.2和8.2为主的致病性的T细胞TCR Vβ克隆型,可将其作为治疗CIA的靶物质,进行实验动物RA治疗的研究.
作者：张新梅；赵文明；李蕴；刘振龙 刊期： 2005年第05期
目的: 研究LAIR-1(CD305)及LAIR-2(CD306)推定配体在多种细胞系上的分布,为鉴定LAIR-1/LAIR-2推定配体提供了实验依据.方法:建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系.以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色,用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达,并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点.结果:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达,在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达.LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合,可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体(mAb)FMU-LAIR-2.2和FMU-LAIR-2.1阻断.结论:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致,主要表达于WISH、 C32、293T和ECV304细胞系.LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体.
作者：许晓光；王春燕；谢鑫；薛江楠；欧阳为明；菅金龙；金伯泉 刊期： 2005年第05期
目的: 克隆细胞因子midkine(MK)基因,表达其融合蛋白,制备抗MK单克隆抗体(mAb)并检测MK在肿瘤细胞中的表达.方法:利用MK基因的特异性引物,通过RT-PCR从人肾癌组织mRNA中扩增人MK cDNA分子.将其定向克隆于原核表达载体中,在大肠杆菌中表达MS2-MK融合蛋白.以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用传统的杂交瘤技术,进行细胞融合、筛选、克隆化并制备mAb腹水.用ELISA法分析其Ig亚类,用免疫细胞化学染色法检测MK在肿瘤细胞中的表达.结果:成功地克隆出MK基因并表达了MS2-MK融合蛋白.通过免疫和筛选,获得2株分泌小鼠抗人MK mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb的Ig亚类分别为IgG1和IgG2a.免疫细胞化学染色显示,2株mAb与人胃癌细胞株MGC803和胃癌组织呈强阳性反应.结论:在原核细胞中获得MS2-MK融合蛋白的表达,并制备出抗MK的mAb,为研究MK的生物学活性提供了条件.
作者：张青云；杨敏；王雅明；徐建军 刊期： 2005年第05期
目的: 分析重组人源抗HBsAgFab的糖基化.方法: 应用PAS糖染色法和经酶切糖苷酶H去糖基后,用MALDI-TOF-MS质谱仪对重组人源抗HBsAgFab的糖基化进行分析.结果: PAS染色法的结果显示,毕赤酵母(Pichia pastoris)表达的重组人源抗HBsAgFab呈淡红色.用质谱仪测定P. pastoris表达的经内切糖苷酶H去糖基后的重组人源抗HBsAg Fab的相对分子质量(Mr),从50678.49降低到49 245,相差1 433.49(约相当于少了8个甘露糖基).结论: P. pastoris表达的重组人源抗HBsAgFab,为一种具有生物活性的低糖基化的蛋白,为深入研究其性质及功能奠定了基础.
作者：邓宁；向军俭；唐勇；王宏；粟宽源 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨三取代型钛钨硅酸盐(WT)体内抑瘤效应的免疫机制.方法: 建立荷H22肝癌小鼠模型,WT连续灌胃10 d,取出肿瘤称重测定抑瘤率.用MTT比色法测定荷H22肝癌小鼠淋巴细胞转化的活性及NK细胞的杀伤活性.通过形态学观察和流式细胞仪检测WT诱导BEL-7402细胞的凋亡.结果:WT可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长(P<0.05),提高荷瘤小鼠淋巴细胞转化的活性及NK细胞的杀伤活性(P<0.05),并诱导肿瘤细胞发生凋亡.结论: WT的抑瘤作用与机体免疫功能的增强有关.
作者：张松龄；梅少林；常雅萍 刊期： 2005年第05期
目的: 研究 125I标记的抗p185抗体(鼠mAb A21、人鼠嵌合抗体A21 scFv-Fc及单链抗体A21scFv)在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布,为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据.方法:通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV3特异结合.采用氯胺T法进行碘标记抗体,用细胞放射免疫分析实验,检测抗体在SKOV3细胞中的代谢.建立荷SKOV3裸鼠模型,以观察抗体的体内生物学分布.结果: 体外细胞代谢实验表明,抗体在与细胞膜表面结合后,进而被内吞入细胞,在细胞内降解和脱碘,后被分泌出细胞外.体内药物代谢实验表明,抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚,而无关抗体未出现放射性浓聚,呈全身分布.结论: mAb A21,A21 scFv-Fc和A21scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力,可望用作高表达p185肿瘤的诊断和治疗.
作者：汪海洋；刘海波；董艳秋；杨建虹；程联胜；刘兢 刊期： 2005年第05期
目的: 表达并纯化小鼠白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(mLAIR-1)胞膜外区与人IgG Fc段的融合蛋白,制备兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体.方法: 构建真核表达载体,表达并纯化mLAIR-1-Fc融合蛋白.以mLAIR-1-Fc融合蛋白免疫家兔,用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体.用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性.结果:表达并纯化了mLAIR-1-hIg Fc融合蛋白.以其免疫家兔,用亲和层析的方法纯化得到兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体,能与转染细胞和细胞表面天然mLAIR-1分子结合.结论: 成功地构建了mLAIR-1胞膜外区基因的真核表达载体,表达并纯化了mLAIR-1-Fc融合蛋白.用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化的兔抗mLAIR-1胞外区抗体,具有高特异性和高效价,为进一步研究mLAIR-1分子的结构和功能提供了新的手段.
作者：张圆；庄然；金伯泉；欧阳为明 刊期： 2005年第05期
目的:比较磺基罗丹明B(SRB)法与二苯基溴化四氮盐(MTT)比色法细胞计数的灵敏性和稳定性.方法: 取4种不同类型对数生长期的细胞,调整细胞的密度为1×106/L,并按比例稀释为0.039×105～10×105个细胞的梯度.(1)用SRB法与MTT比色法测定各细胞梯度相应A值,分别分析两种方法测到的A值与相应细胞梯度细胞数的相关性.(2)SRB法与MTT比色法各随机取100个A值,测量其在2、 16、 24 h及7d后的A值,比较这两种方法的稳定性.结果:SRB法和MTT比色法测定的A值与不同细胞系的细胞数目均有极好的相关性.SRB法测定的结果几乎不随时间而变化;而MTT法测定的结果受时间影响较大.结论: SRB法与MTT比色法相比较更适于进行大规模的细胞计数.
作者：周思朗；屈艳妮；张健；汪森明；张积仁 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨HBsAg脉冲的树突状细胞(DC),对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的增殖和杀伤作用的影响.方法:选择慢性乙肝患者23例,用常规方法分离外周血单个核细胞(PBMC),经HBsAg脉冲后培养为特异性的DC,用3H-TdR掺入法检测该细胞对CIK细胞增殖的刺激作用,用乳酸脱氢酶释放法检测特异性CIK细胞对HepG2215细胞的特异性杀伤作用.结果:HBsAg脉冲的DC对CIK细胞的增殖具有刺激作用.由HBsAg脉冲的DC所诱导的特异性CIK细胞对HepG2215细胞的特异性杀伤作用增强.结论: HBsAg脉冲的DC可增强CIK细胞的杀伤活性.
作者：刘树人；张雁；谢庆；李灼亮；余宙耀；孔祥平 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨MHC-Ⅱ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱtransactivator)CⅡTA基因对树突状细胞(Dendritic cell,DC)表面MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子及共刺激分子CD80、CD86的上调作用,为肝癌生物治疗提供新的思路.方法: 从小鼠骨髓中大量扩增DC,并用脂质体转染法将小鼠CⅡTA(mCⅡTA)基因转入DC中,用流式细胞术观察转染前、后DC表面MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子及CD80、 CD86的表达.建立小鼠肝癌模型,将荷肝癌小鼠分为4组,第1组:分别于肝癌组织块周围注入PBS; 第2组: 未转入mCⅡTA基因的DC; 第3组: 转入mCⅡTA基因的DC; 第4组:转入mCⅡTA基因并经H22肿瘤抗原刺激的DC.每周1次,连续接种3 wk,连续7 wk动态测量肝癌的大小,观察转染mCⅡTA基因对荷肝癌小鼠抗瘤效应的影响.结果:转染mCⅡTA基因使DC上MHC-Ⅰ/Ⅱ分子的表达率由74.2%/66.7%明显上调为93.6%/91.4%;CD80/CD86的表达率由52.3%/60.5%明显上调为89.7%/91.5%(P<0.05).免疫接种后,第4组荷肝癌小鼠肝癌组织块的平均面积明显小于第1、 2、 3组(在第3、 4、 5、 6、 7周时,与第1、 2组相比较,P<0.05;在第5、 6、 7周时与第3组相比较,P＜0.05). 结论: 转入mCⅡTA后,DC表面MHC-Ⅰ/Ⅱ分子及CD80/CD86的表达率明显上调,DC的抗瘤效应增强.本研究为将DC应用于肿瘤的生物治疗提供了新的途径.
作者：欧启水；林琪；兰斌；郭仁 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨甘肃汉族人群中白血病的易感性与HLA基因多态性之间的关联.方法: 采用序列特异性寡核苷酸探针杂交技术(PCR-SSO),对57例白血病患者和45例健康对照组进行HLA-A、 -B及-DRB1基因分型.结果: 在等位基因HLA-A、 -B及-DRB1中,白血病患者的HLA-A01、 -B38及-DR15基因的基因频率高于正常对照组(P<0.05),而HLA-A11及-DR03基因的基因频率明显下降(P<0.05).结论: 甘肃省汉族人群基因HLA-A01、-B38及-DR15对白血病具有遗传易感作用; 而基因HLA-A11和-DR03对白血病具有遗传拮抗作用.
作者：周兰霞；赵丽 刊期： 2005年第05期
目的:构建病毒白细胞介素IL-10(vIL-10)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达.方法: 以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒BCRF1基因.PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切后,克隆至原核表达载体pET-28a中,以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下表达目的蛋白.结果: 以终浓度为100 靘ol/L的IPTG于30℃诱导6h后,重组菌可高效表达相对分子质量(Mr)约为24 000的His-vIL-10融合蛋白.结论:成功地克隆vIL-10的编码基因并在大肠杆菌中高效表达,为制备抗vIL-10单克隆抗体(mAb)、分析vIL-10结构与功能的关系提供了条件.
作者：连云宗；李极品；吴玉水；程烽；朱忠勇 刊期： 2005年第05期
目的: 研究在异基因骨髓细胞移植中葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受强度和细胞学特征.方法: 选用C57BL/J小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体.所有受体小鼠在接受6×107骨髓细胞前均接受6.0Gy 60Coγ射线的照射,随机分成3组: 组1为只接受6.0Gy 60Coγ射线照射的对照组(照射对照组,RI);组2为照射后注射生理盐水(移植对照组,Tran.); 组3为照射后注射60 μg SEB(SEB组).180 d后由组2和组3实验鼠获得两组C57BL/L-BALB/c嵌合体小鼠.用流式细胞术分析移植后30～180d受体小鼠体内CD4+ T、 CD8+ T、 CD3+/NK1.1+ NKT淋巴细胞亚群的数量和MHC H-2Kb、 H-2Kd抗原表达的百分率,用MLR方法测定嵌合体小鼠淋巴细胞对ConA和异源性抗原的反应性.结果: (1)接受大剂量骨髓细胞移植后,注射SEB和注射生理盐水的两组小鼠均可存活180 d以上,SEB组小鼠呈现出BALB/c供体小鼠的颜色特征(白色);Tran.组小鼠呈现出其灰白色.(2)SEB组嵌合体小鼠对ConA的反应性明显低于RI组和Tran.组;对异源性抗原的应答高于Tran.组.(3)SEB组小鼠外周血中CD4+ T细胞的数量在移植后30～60 d明显下降,随后增加; CD8+T细胞的数量不变.CD3+/NK1.1+ NKT细胞的数量,从接受移植后30 d开始增加,随着时间的延长而递增,到180d达到5.71%.存活180 d的嵌合体小鼠,体内供体小鼠特有的MHC H-2Kd抗原的表达率高达80.95%,自体MHC H-2Kb抗原表达的百分率只占1.45%.(4)与SEB组相反,Tran.组小鼠CD8+ T细胞的数量持续下降; CD3+/NK1.1+NKT细胞的数量的增加只在移植后180 d上升达到5.07%.结论: 在异基因骨髓细胞移植中,SEB诱导的耐受性比单纯骨髓移植诱导的耐受性强.SEB诱导的耐受性与移植早期特异性CD4+ T细胞数量的减少和NKT细胞数的持续增加有关.反应性的降低表现为T细胞对ConA反应性的下降.
作者：陈钰；潘志强；彭虹；徐亮 刊期： 2005年第05期
目的: 研究外源质粒DNA经胃肠道途径对小鼠免疫基因表达的调控作用.方法: 给BALB/c小鼠灌胃质粒pcDNA3 200 μg,分别在灌胃后4 h和18 h分离脾脏,提取脾脏总RNA.利用Affymetrix基因表达谱芯片对灌胃质粒pcDNA3后的BALB/c小鼠脾脏进行基因表达谱研究.采用Genmmapp和MAPPFinder软件进行功能聚类分析.结果:灌胃质粒pcDNA3后,大量与免疫应答相关的基因发生上调,这些基因包括转录因子、细胞因子和细胞因子受体、主要组织相容性基因、蛋白酶体基因、补体分子基因和细胞凋亡相关基因;下调的基因主要是免疫球蛋白基因.MAPPFinder分析结果显示大量免疫应答过程发生上调.结论:外源质粒DNA通过胃肠道途径可调控大量免疫基因的表达,对相关基因及免疫应答过程的研究有助于在分子水平上深入了解外源质粒DNA的胃肠道作用机制.
作者：刘建文；乐国伟；施用晖 刊期： 2005年第05期
为了探讨血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和抗结核杆菌抗体(TB-Ab)在结核病病情转归中的意义,我们对60例痰菌阳性的初治肺结核患者和30例健康人血清中的TNF-α和TB-Ab分别进行了定量及定性检测,并对检测的结果做了评价.
作者：闫伯强；胡天勇；杨宜平 刊期： 2005年第05期
目的: 建立成人睾丸支持细胞的体外培养方法并探讨其免疫豁免机制.方法: 依次用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶及脱氧核糖核酸酶消化制备成人睾丸支持细胞,以SABC染色法检测支持细胞上Fas-L和TGF-β1的表达.将其与成人脾细胞共同培养,用MTT比色法检测其对脾细胞增殖的抑制作用.结果: 成人睾丸支持细胞占培养细胞总数的80%以上,活性可达90%.睾丸支持细胞上可表达Fas-L和TGF-β1,外可抑制共培养的脾细胞增殖.结论:建立了培养成人睾丸支持细胞的方法,其免疫豁免机制可能与Fas-L和TGF-β1的表达有关.
作者：滕琰；薛武军；冯新顺；田普训；李钊伦 刊期： 2005年第05期
目的:探讨血小板对妊高征患者血清刺激下的ECV304细胞(ECV304)表达人血小板/T细胞活化抗原1(PTA1)和释放血小板衍生生长因子(PDGF)的影响.方法:①用间接免疫荧光染色结合流式细胞仪分析观察血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育前后PTA1的表达.②用ELISA方法检测血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育前后PDGF的量.结果:①血小板与妊高征患者血清刺激(24 h、 48 h)的ECV304细胞孵育后PTA1表达的百分率(6.32%、4.13%)明显低于对照组(15.51%、 5.64%)(P<0.05).②妊高征患者血清刺激ECV304细胞8 h、 24 h、 48h释放PDGF的量(1 593、 2 625、 2 175 ng/L)明显高于正常孕妇组(235、 405、 133.5ng/L)差异显著(P<0.01).③血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育后,24 h、 48h细胞培养上清液中PDGF-B的量又进一步增加(3 266、 2 360 ng/L),与对照组比差异显著(P<0.05).结论:ECV304细胞与血小板之间的黏附可能是通过PTA1分子发挥作用的,同时导致了PDGF的进一步释放.
作者：李常玲；许瑞环；张洪德；尹学念 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨P38MAPK和MCP-1的关系及其在糖尿病动脉粥样硬化中的作用以及硒的作用机制.方法: 分别以高葡萄糖、糖基化终末产物(AGE)、胰岛素或过氧化氢体外孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并以Westernblot法或RT-PCR法检测P38MAPK和MCP-1在HUVEC的表达.检测并比较有无P38MAPK特异抑制剂SB203580或硒预处理,以上4种因素对P38MAPK和MCP-1在HUVEC表达的影响.结果: 高葡萄糖、 AGE、胰岛素或过氧化氢均可独立激活P38MAPK,并增加MCP-1在HUVEC的表达.SB203580显著抑制MCP-1的表达.硒抑制P38MAPK的活化并减少MCP-1的表达.结论:P38MAPK是MCP-1的上游信号分子,表明P38MAPK可能是糖尿病动脉粥样硬化发生的始动信号之一.硒可能通过抑制P38MAPK磷酸化而抑制MCP-1表达,有预防动脉粥样硬化作用.
作者：李艳波；李为民；韩君勇 刊期： 2005年第05期
目的: 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测重组可诱导共刺激分子(ICOS)-mIg融合蛋白的分泌型表达,并对其灵敏度、特异性及线性检测范围进行评价.方法: 用分子生物学技术制备重组ICOS-mIg融合蛋白.以羊抗小鼠IgG 为包被抗体,HRP标记的马抗小鼠IgG为检测抗体,通过配对试验、方阵滴定试验及绘制mIgG浓度与A450值的标准曲线,建立定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白的双抗体夹心ELISA法.结果: 建立了双抗体夹心ELISA法,检测的线性范围为7.8～500 μg/L,标准曲线的回归方程为: y=-0.7864+1.1635 log(x),R2=0.9911,P<0.0001.应用该方法可快速检测哺乳动物细胞表达的重组ICOS-mIg融合蛋白的分泌量.结论:建立了一种可快速定量检测重组ICOS-mIg融合蛋白分泌表达的双抗体夹心ELISA法.该法灵敏、准确、快速、实用性好,对优化ICOS-mIg融合蛋白表达细胞的筛选和大规模制备具有重要价值.
作者：王健；沈茜 刊期： 2005年第05期
目的: 构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达.方法: 根据人SLC和IL-2 cDNA的序列分别设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的SLC和IL-2基因的真核表达质粒pSLC-IRES-IL-2,用电穿孔法以共表达质粒转染COS-7细胞.用Western blot检测SLC和IL-2的表达.结果: Western blot检测表明,以重组共表达质粒pSLC-IRES-IL-2转染的COS-7细胞能表达SLC和IL-2,表达产物的Mr同预期的结果相一致.结论:成功地构建SLC和IL-2基因的共表达质粒,以其转染COS-7细胞后,能分泌性表达SLC和IL-2,为肿瘤基因治疗的研究提供一定途径.
作者：侯丽；赵跃然；王来城；焦玉莲；张捷；马春燕；崔彬 刊期： 2005年第05期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
