学术投稿

HIV-1整合酶真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达和定位

谷万港;张丽;张旋

关键词:HIV-1, 整合酶, 细胞核, FITC
摘要:目的:构建重组基因表达载体pcDNA6/V5-HisA-IN并观察其在Hela细胞中的表达.对HIV-1整合酶表达以后在细胞里的定位情况进行研究.方法通过 PCR扩增和定向克隆技术构建重组真核表达载体pcDNA6/V5-HisA-IN.以Lipofectamine2000介导转染Hela细胞.细胞用4%的多聚甲醛固定以后,经过PI对细胞核染色,整合酶抗体跟整合酶反应以后,用FITC标记的二抗进行孵育,用共聚焦显微镜观测整合酶在细胞中的表达情况.结果经过定向克隆和测序鉴定证实,重组真核表达载体pcDNA6/V5-HisA-IN构建成功.免疫荧光实验显示,Lipofectamine2000介导质粒转染Hela表达成功,整合酶主要定位在细胞核.结论 HIV-1整合酶真核表达载体构建成功,转染以后,整合酶表达并且主要定位在细胞核.
昆明医科大学学报杂志相关文献
  • 大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血核心区NCCa-ATP通道的表达变化

    目的:了解局灶性脑缺血再灌注后磺酰脲类受体1(SUR1)调控的非选择性阳离子通道(nonselective cation channel,NCCa-ATP通道)表达的变化与脑缺血损伤的关系,探索脑缺血的治疗时间窗.方法以颈内动脉线栓法建立大鼠大脑左侧中动脉梗塞模型,缺血2h后恢复再灌注.取实验性脑缺血再灌注损伤后3 h、6 h、8 h、12 h、24 h等不同时间缺血核心区的脑组织,采用RT-PCR及Western-blot技术,测定SUR1的mRNA及蛋白表达水平.采用免疫荧光双标法技术,观察SUR1在缺血后脑微血管内皮细胞的表达情况.结果缺血再灌注核心区组织在缺血再灌注后3 h、6 h、8 h、12 h及24 h各时间点SUR1 mRNA和SUR1蛋白的表达量均上调,再灌注后8 h达高峰(<0.05),缺血再灌注后12 h,SUR1在脑微血管内皮细胞的表达非常明显.结论局灶性脑缺血再灌注过程中SUR1调节的NCCa-ATP通道参与了脑缺血损伤,在脑缺血再灌注后其mRNA和蛋白的表达量均上调.推测应用SUR1受体的特异性抑制剂佳时机在缺血再灌注后8~12 h.

    作者:李华;马明义 刊期: 2013年第09期

  • 凉山州中医医院医务人员艾滋病知识认知与防护行为调查分析

    目的:了解凉山州中医医院医务人员对艾滋病知识认知及职业防护行为的现状,分析其影响因素,为艾滋病相关知识和职业防护培训及艾滋病防控工作提供依据.方法自制问卷,采用整群抽样的方法,对凉山州7所中医医院276名医务人员进行问卷调查.结果艾滋病知识总得分(34.14±6.92)分,得分高水平者占16.73%、中水平者占56.13%、低水平者占27.14%;艾滋病职业防护行为总得分(35.20±9.48)分,得分高水平者占12.64%、中水平者占30.86%、低水平者占56.51%.学历、专业、工作年限、既往是否接受艾滋病培训等是影响凉山州中医医院医务人员艾滋病知识认知的因素(<0.05);医院等级、专业、既往是否接受艾滋病培训等与职业防护水平有关(<0.05).年龄、职称、工作年限对其职业防护水平差异无统计学意义(>0.05).结论凉山州中医医院医务人员艾滋病相关知识和防护行为总体水平不高,应加强艾滋病相关知识和职业防护培训,采取多样化培训方式,为医务人员提供必要的防护用品.

    作者:赵光昱;朱建军;刘梅瑶;陈娟;陈育存 刊期: 2013年第09期

  • 负压封闭引流基础上行背阔肌桥式游离皮瓣修复难治性创面的临床护理

    目的:探讨负压封闭引流基础上行背阔肌桥式游离皮瓣修复难治性创面的护理效果.方法选择2009年1月至2012年1月期间陕西省汉中市中心医院烧伤科就诊的难治性创面患者37例为观察组,对照组选自2006年1月至2008年12月采用传统创面护理方式的难治性创面患例者26例.对照组采取常规方法进行创面护理后行创面2期背阔肌桥式游离皮瓣修复,观察组采用VSD辅料行创面负压封闭引流后行创面2期背阔肌桥式游离皮瓣修复.治疗后密切观察2组患者换药时间、间隔及换药次数、住院天数并比较皮瓣修复后8 d、16 d护理疗效.结果观察组治疗后换药时间、住院天数显著少于对照组(<0.05),换药次数较对照组缩短(<0.01),换药间隔较对照组有显著性差异(<0.01).对照组2例患者皮瓣修复后效果较差,观察组未出现显著的坏死,比较2组良好率,观察组患者良好率显著高于对照组(<0.01).对照组治疗后1例改善患者转为良好,1例疗效差者转为改善,观察组治疗的良好率显著优于对照组(<0.01).结论采用负压封闭引流基础上行背阔肌桥式游离皮瓣修复有助于难治性创面恢复,效果显著.

    作者:袁晓燕;于泓;任爱红 刊期: 2013年第09期

  • HIFU联合超声微泡增效剂SonoVue治疗盆腔手术史子宫肌瘤患者研究

    目的:探讨实时超声监控下HIFU联合超声微泡增效剂(SonoVue)治疗子宫肌瘤伴盆腔手术史患者的安全性与有效性.方法分析2010年10月至2012年12月宁市中心医院50例子宫肌瘤伴盆腔手术史患者行HIFU联合SonoVue治疗情况,与同期50例无盆腔手术史子宫肌瘤患者进行比较,观察患者治疗中肌瘤非灌注区体积、体积消融率、消融强度、消融剂量、在室时间、治疗时间及治疗后即刻不良反应与远期并发症等.结果手术史组非灌注区体积、体积消融率、消融剂量与非手术史组比较,差异无统计学意义(>0.05);手术史组消融强度明显低于非手术史组(<0.05);手术史组在室时间、治疗时间明显长于非手术史组(<0.05);手术史组治疗中重度及以上疼痛率为46%,明显高于非手术史组20%(<0.05),2组均无因难以忍受疼痛而终止治疗者.手术史组治疗后下腹部疼痛、皮肤烫伤、骶尾部疼痛明显高于非手术史组(<0.05),后期随访两组患者均无严重不良反应.结论盆腔手术史增加了HIFU治疗子宫肌瘤操作难度;初步研究提示严格掌握适应症与禁忌症,HIFU联合SonoVue治疗盆腔手术史子宫肌瘤患者也可得到安全有效的治疗.

    作者:蒋红;罗爽;何敏;张炼;黎克全;何佳 刊期: 2013年第09期

  • 天麻素对老年痴呆树鼩海马BDNF表达的影响

    目的:探讨天麻素对老年痴呆树鼩脑内海马BDNF表达的影响.方法用β-淀粉样蛋白(Aβ)侧脑室注射建立树鼩老年痴呆模型.从模型制作后第8天开始,治疗组树鼩连续30 d灌胃给予天麻素.通过RT-PCR检测海马脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA的表达.结果海马BDNF mRNA在天马素治疗组的表达高于模型组(<0.05).结论天麻素能在一定程度上上调树鼩海马BDNF的表达.

    作者:何保丽;角建林;李波;李进涛;王丽梅 刊期: 2013年第09期

  • NCPAP联和固尔苏治疗新生儿呼吸衰竭的护理及临床疗效

    目的:探讨单纯持续鼻塞正压通气(NCPAP)联合固尔苏治疗新生儿呼吸衰竭的疗效及其护理要点.方法对照组,患儿给予单纯NCPAP治疗;治疗组,患儿在对照组的基础上联用固尔苏治疗.结果治疗组患儿经治疗48 h后,配合细致全面的护理,总有效率明显优于对照组(88.89%vs 77.78%,<0.05);治疗组患儿各项血气指标较对照组明显改善(<0.05).结论 NCPAP联用固尔苏配合细致全面的护理可明显提高治疗新生儿呼吸衰竭疗效.

    作者:杨晓玲;廖永生;邓寿建;刘慧 刊期: 2013年第09期

  • 征稿启事

    作者:昆明医科大学学报编辑部 刊期: 2013年第09期

  • 老年直肠癌患者轻度低温下IL-2、IL-10变化与术后早期认知功能相关性的研究

    目的:比较老年直肠癌患者术中轻度低温及正常体温下细胞因子IL-2、IL-10的变化与术后早期认知功能的变化是否具有相关性.方法 ASAⅠ-Ⅱ级拟行直肠癌手术老年患者40例,年龄65~83岁,随机均分为常温组(Ⅰ组)和轻度低温组(Ⅱ组).分别于麻醉前1 h (T1)、手术结束时(T2)及术后24 h (T3)用流式细胞仪检测细胞因子IL-2、IL-10;另于术前1 d (N1)、术后第1天(N2)及术后第3天(N3)用MMSE量表对患者进行神经精神功能测试并记录得分情况.结果与T1时比较, II组IL-2血浆浓度在T2、T3时明显降低(<0.01);与T1、T2时比较,II组T3时IL-10浓度明显增高(<0.01).与N1时比较,2组患者MMSE评分N2时下降(<0.05),尤以Ⅱ组降低明显,组间比较有差异(<0.05).N3时评分又逐渐升高,与N2比较有差异(<0.05).T2、T3时II组IL-2与N2时的MMSE评分存在明显的正相关性(=0.459,<0.01)(=0.550,

    作者:赵敏;张毅;赵力;王忠彗 刊期: 2013年第09期

  • 联合检测外周血CK19和SCCAg mRNA对早期宫颈癌患者微转移的诊断价值

    目的:采用qRT-PCR技术检测早期宫颈癌患者根治术术前外周血中CK19和SCCAg mRNA表达水平的变化,研究联合检测外周血CK19和SCCAg mRNA对早期宫颈癌患者微转移的诊断价值.方法昆明医科大学第三附属医院妇瘤科30例早期(ⅠA2~ⅡA)宫颈癌患者为实验组,15例子宫肌瘤患者和15例健康志愿者为为阴性对照组,15例晚期(ⅡB~ⅢB)宫颈癌患者为阳性对照组.收集外周血样本,qRT-PCR技术检测外周血CK19和SCCAg mRNA表达水平的变化.结果实验组外周血中CK19和SCCAg mRNA表达水平与阴性对照组、阳性对照组比较,差异有明显统计学意义(<0.01);30例宫颈癌患者手术前外周血CK19和SCCAg mRNA阳性检出率分别为30%(9/30)和20%(6/30),手术前联合检测二者的表达可使阳性检出率提高至43.3%,联合检测2种标志物的阳性检出率高于检测单一标志物,差异有统计学意义(<0.05).结论外周血CK19和SCCAg mRNA表达水平均可能作为诊断早期宫颈癌微转移的标志物.qRT-PCR技术联合检测两项指标,可提高诊断微转移的敏感度和特异性.

    作者:魏向群;陈艳;李瑞敏;张磊 刊期: 2013年第09期

  • 急性下壁心肌梗死合并高度AVB时临时起搏治疗手术方法探讨

    目的:分析、总结急性下壁心肌梗死合并高度房室传导阻滞的患者经静脉心脏临时起搏治疗的手术方法。方法选择112例因为急性下壁心肌梗死合并高度房室传导阻滞需要进行经静脉心脏临时起搏治疗的患者,观察研究经静脉心脏临时起搏治疗不同手术方法的安全性、有效性及与并发症的关系。结果全组60例使用普通临时起搏电极导管的病例中出现3例心脏压塞,52例使用漂浮临时起搏电极导管的病例中未出现严重并发症。结论在急性下壁心肌梗死的患者出现高度房室传导阻滞时进行经静脉心脏临时起搏治疗时,选择漂浮临时起搏电极导管安全、有效并且可以减少心肌穿孔等严重并发症的发生。

    作者:赖碁;光雪峰;景舒南;李汝红;左明鲜;盖起明 刊期: 2013年第09期

  • 椎管内恶性黑色素细胞瘤1例报道

    原发性黑色素细胞肿瘤是一种起源于软脑脊膜的良、恶性肿瘤,临床少见。而原发于椎管内的黑色素细胞瘤则更为罕见,笔者于2012年8月在临床实践中碰到椎管内恶性黑色素细胞瘤1例,现将诊治情况报告如下。

    作者:张振光;李仲夏;田伟;李宗芳 刊期: 2013年第09期

  • 昆明医科大学临床医学毕业生职业胜任力现状调查报告

    目的:了解近5a来昆明医科大学临床医学毕业生岗位胜任力现状,为医学院校的医学生培养提供重要参考。方法采用模糊综合评价法对云南省级、市级及地州的26家医院的相关管理部门负责人问卷结果进行系统分析。结果近5a来昆明医科大学临床医学专业毕业生职业胜任力为“良好”。其中,毕业生核心胜任力分数低,岗位胜任力分数高。结论应从加强医学生医患沟通能力的培养、加强临床实习的质量评价等方面加强学生核心胜任力的培养。

    作者:刘英;马英 刊期: 2013年第09期

  • 彩色超声多普勒诊断小儿细小冠状动脉肺动脉瘘

    目的:探讨彩色超声多普勒对小儿细小冠状动脉-肺动脉瘘(small coronary-to-pulmonary fistula, SCPF)的诊断价值。方法回顾性分析昆明市儿童医院2011年1月至2012年1月超声诊断CPF的患儿的临床资料。结果17例CPF患儿,1例死亡病例经尸解证实。其余8例患儿血管造影证实。结论熟练掌握观察肺动脉舒张期出现“射血征”血流图像,结合彩色多普勒出现冠状动脉血流信号丰富,可以对细小冠状动脉-肺动脉瘘检出率明显提升,超声对小儿细小CPF的诊断具有重要的临床价值。

    作者:闵杰青;马越明;高虹;王华平 刊期: 2013年第09期

  • HIV-1整合酶真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达和定位

    目的:构建重组基因表达载体pcDNA6/V5-HisA-IN并观察其在Hela细胞中的表达.对HIV-1整合酶表达以后在细胞里的定位情况进行研究.方法通过 PCR扩增和定向克隆技术构建重组真核表达载体pcDNA6/V5-HisA-IN.以Lipofectamine2000介导转染Hela细胞.细胞用4%的多聚甲醛固定以后,经过PI对细胞核染色,整合酶抗体跟整合酶反应以后,用FITC标记的二抗进行孵育,用共聚焦显微镜观测整合酶在细胞中的表达情况.结果经过定向克隆和测序鉴定证实,重组真核表达载体pcDNA6/V5-HisA-IN构建成功.免疫荧光实验显示,Lipofectamine2000介导质粒转染Hela表达成功,整合酶主要定位在细胞核.结论 HIV-1整合酶真核表达载体构建成功,转染以后,整合酶表达并且主要定位在细胞核.

    作者:谷万港;张丽;张旋 刊期: 2013年第09期

  • 合并亚临床甲减的2型糖尿病患者临床及生化特征分析

    目的:探讨亚临床甲状腺功能减退症(SCH)对2型糖尿病(T2DM)患者血糖控制及代谢指标的影响.方法纳入住院的T2DM患者973例,测量身高、体重、血压,计算BMI;完善HbA1c、TC、TG、HDL-C、LDL-C、尿酸及甲状腺功能(TSH、TT4、TT3、FT4、FT3)检查.纳入的T2DM患者中筛查出合并SCH者148例(SCH组),在甲状腺功能正常的T2DM患者中选取性别、年龄及糖尿病病程相匹配的152例作为对照组(NSCH组).结果(1) T2DM合并SCH的患病率为15.3%;(2)与NSCH组相比,SCH组超重/肥胖者比例(54.1%vs 35.5%,<0.01)及高血压者比例(64.9%vs 52%,<0.05)显著增高.两组间在HbA1c达标、高TC血症、高TG血症、低HDL血症、高LDL血症及高尿酸血症者比例无显著差异.结论 SCH对T2DM患者的血压、体重指数等代谢指标可能存在不良影响.

    作者:李全玉;任秀莲;苏恒;牛奔;张云;薛元明 刊期: 2013年第09期

  • 糖尿病皮肤缺损愈合进程中单核细胞趋化蛋白-1表达的研究

    目的:研究单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)在兔糖尿病皮肤缺损模型愈合进程中的表达水平,探讨其在糖尿病皮肤愈合中的作用.方法制作兔糖尿病模型,通过免疫组化和ELISA的方法研究MCP-1在兔糖尿病皮肤缺损模型愈合进程中的局部表达及血清中水平.结果免疫组化染色提示MCP-1在糖尿病组中各时间点位表达均高于空白对照组.外周血中造模后3 d和1周时MCP-1含量糖尿病组与空白组比较有统计学意义(<0.05),2周和4周时无统计学意义(>0.05).结论 MCP-1可能在糖尿病皮肤缺损修复愈合紊乱的炎性反应中发挥作用,终干扰愈合.

    作者:王少云;马翔;张丽;肖砚斌;张祥 刊期: 2013年第09期

  • 灯盏花乙素药理作用研究进展

    灯盏花乙素(Scutellarin)是从灯盏花中提取的主要成分,可用于治疗心脑血管的损伤。灯盏花乙素对血管生成和肿瘤细胞及其内皮细胞的有一定的作用,对氧化应激诱导的细胞凋亡都有显著的影响,通过抑制PKC的亚型易位来治疗糖尿病相关疾病。

    作者:石美娜(综述);杨为民;刘璇(审校) 刊期: 2013年第09期

  • 妊娠高血压综合征的护理体会

    妊娠高血压综合征(妊高征)是妊娠期特有的全身性疾病,是妇产科常见、多发病.病因尚未十分明确,但从发病率来看,与年龄有关.在我国,小于20岁,发病率为3.11%,20~29岁为3.91%,30~39岁为4.95%,40岁以后明显上升.多数发生在妊娠20周以后和产后2周[1].其基本病变是全身小动脉痉挛,各组织脏器灌流减少.

    作者:唐金玲;李琳;孙华 刊期: 2013年第09期

  • 案例教学法在临床肿瘤内科教学中的效果研究

    目的:在临床肿瘤内科学教学过程中应用《临床肿瘤内科学案例集》为补充教材,采取案例教学法进行教学,探讨案例教学法教学效果.方法选取昆明医科大学临床医学专业肿瘤方向学生,教学前后均进行问卷调查,了解案例教学法的教学效果,同时统计《临床肿瘤内科学》授课学期期末考成绩和实习后临床肿瘤内科出科考试成绩.结果(1)通过运用案例教学法,学生的临床思维能力、信息获得和利用能力、表达能力、观察能力及自学能力均有提高,授课前后比较差异有统计学意义(<0.05);(2)两次期末考试中,试验组同学成绩较对照组同学成绩高,差异有统计学意义(<0.05).结论(1)案例教学法有助于学生对临床知识重点难点的理解,深入理解知识,知识系统构建更加牢固,自学能力提高,有益于学生学习习惯的养成,具有教学优势;(2)案例教学法在《临床肿瘤内科学》中的应用,提高了教学效果,这在肿瘤学相关的课程中可以推广,但需要不断的完善评价系统的建设.

    作者:谢琳;沈丽达;杨继岚;李科;龙庭凤 刊期: 2013年第09期

  • 结核感染T细胞斑点试验在结核性胸膜炎中的诊断价值

    结核性胸膜炎是结核菌由近胸膜的原发病灶直接侵入胸膜,或经淋巴管血行播散至胸膜而引起的渗出性炎症.结核性胸膜炎是内科常见的疾病,其诊断可根据临床表现、胸水常规生化、胸水腺苷脱氨酶(ADA)、胸水抗酸杆菌涂片或胸水结核菌培养、胸水TB-DNA及T-SPOT.TB检测.笔者对患者采用T-SPOT.TB检测、胸水TB-DNA、结核抗体(TB-DOT/TB-CK)、结核菌素试验(PPD),对结核性胸膜炎的诊断的特异性、敏感性进行研究,现将结果报道如下.

    作者:万荣;李明武;赖明红;朱惠琼 刊期: 2013年第09期

昆明医科大学学报杂志

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主管:云南省教委

主办:昆明医学院