学术投稿

大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定

白志勋;陆静;杨亦彬

关键词:NRK-52E, 整合素连接激酶, 慢病毒载体
摘要:目的 构建大鼠整合素连接激酶-RNAi(ILK-RNAi)慢病毒表达载体,为下一步干预研究细胞转分化及其信号通路奠定基础.方法 针对大鼠ILK基因RNAi有效靶序列,合成4条干扰(KD)序列.与pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-RNAi慢病毒载体.将连接产物转入制备完毕的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性克隆,测序验证.包装慢病毒,以绿色荧光蛋白(GFP)表达水平验证病毒滴度.慢病毒载体感染大鼠NRK-52E细胞后,RT-PCR、WB检测及荧光显微镜观察ILK在其细胞中的表达.结果 测序验证成功构建3条大鼠ILK-RNAi慢病毒载体,滴度分别为5×108,2.5×108,3.5×108 pfu/mL.分别以不同感染复数(MOI)感染NRK-52E细胞进行内源筛靶,荧光观察80%细胞的绿色荧光蛋白,RT-PCR、WB检测ILK的表达明显下降.相对于阴性对照序列,KD2,KD3在高MOI组中对ILK表达的敲减达到65%以上(P<0.05),为有效靶点.其中KD2及KD3的ILK 2-△△ct值分别为0.337,0.217.KD2序列为对ILK的表达抑制显著.结论 成功构建大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体.
贵州医药杂志相关文献
  • 内外侧解剖型接骨板固定治疗对累及肱骨下段髁间骨折患者临床疗效观察

    目的 观察内外侧解剖型接骨板固定与重建钢板固定治疗累及肱骨下段髁间骨折的临床疗效.方法 将68例肱骨髁间骨折患者随机分为观察组和对照组,观察组患者给予内外侧解剖型接骨板固定治疗,对照组患者给予双侧重建钢板固定治疗,比较两组患者手术治疗、材料费用、Mayo肘关节评分、临床疗效和并发症发生情况.结果 与对照组比较,观察组患者外固定时间、术中出血量和手术时间明显减少,优良率和Mayo肘关节评分显著升高(P<0.05),但材料费用相对增加.两组患者术后并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 内外侧解剖型接骨板固定治疗累及肱骨下段髁间骨折,手术过程简便,固定稳定可靠,临床疗效显著,术后功能恢复较好.

    作者:张欣;李冬月;杨朔 刊期: 2016年第07期

  • 急性左旋多巴冲击试验对帕金森病患者运动症状的改善特点

    目的 分析急性左旋多巴冲击试验(ALCT)对帕金森病(PD)患者运动症状改善的特点.方法 收集南京市脑科医院PD中心已行脑深部刺激(DBS)手术治疗的患者ALCT的相关资料,以统一帕金森病评分量表(UP-DRSⅢ)运动部分评分为指标,分析左旋多巴冲击试验运动症状、中轴症状改善情况,观察不同运动症状改善率有无显著差异.结果 患者的运动症状UPDRSⅢ平均改善率为57.7%,PD的运动症状中震颤、强直、运动迟缓、步态或姿势异常分别改善了75.1%、51.4%、58.9%、57.5%,组间比较有统计学差异;患者的轴性损害症状UPDRSⅢ平均改善率为54.3%,言语、步态和姿势的平均改善率分别为48.4%,64.6%,40.0%,组间比较有统计学差异.结论 急性左旋多巴冲击试验对PD患者运动症状全面改善,作为DBS术前筛选具有重要的临床意义,可作为DBS治疗估计预后的指标.

    作者:王艳;刘卫国;章文斌;于翠玉;祝雅静;闫磊;王晓 刊期: 2016年第07期

  • 益气活血方对乳腺癌患者术后免疫功能、炎症因子及VEGF水平的影响

    目的 探讨益气活血方对乳腺癌患者术后免疫功能、炎症因子及血管内皮细胞因子(VEGF)水平的影响.方法 将84例乳腺癌患者随机分为对照组及观察组各42例,对照组术前行EC(表柔比星+环磷酰胺)化疗方案,观察组在对照基础上术前给予益气活血方+AC化疗方案,对比分析两组患者治疗效果、术后免疫功能、炎症因子及血管内皮细胞因子(VEGF)水平的变化.结果 观察组近期总有效率24例(57.14%)高于对照组20例(47.62%),组间比较差异无统计学意义(x2 =0.225,P>0.05).观察组治疗后CD4、CD4/CD8细胞比率低于对照组(P<0.05).观察组患者术后白细胞介素-1,白细胞介素-6(IL-1,IL-6)、肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)及VEGF水平显著低于对照组(P<0.05).结论 益气活血方益气活血方能有效改善乳腺癌乳腺癌患者免疫功能,降低患者炎症反应,提高患者治疗效果.

    作者:王黎;付晓敏;杨勇豪;巩金培;胡成旗 刊期: 2016年第07期

  • 改良法与传统法子宫输卵管造影的对比分析

    本课题拟研究一种规避医务人员辐射损害且操作简单、不增加患者费用、易普及推广的改良法子宫输卵管造影(HSG).结合我院病例探讨改良法子宫输卵管造影在不孕症患者中的临床应用价值,报告如下.1 资料与方法1.1 临床资料 收集我院2012年1月至2015年12月临床诊断为不孕并行子宫输卵管造影的625例患者,其中改良法558例,年龄17~48岁,平均年龄28.8岁;传统法67例,年龄19~39岁,平均26.8岁.原发性不孕159例,继发性不孕384例,未注明原发或继发105例,有宫外孕史62例.部分病例随访2~12个月,观察输卵管通畅度.纳入标准:月经干净后3~7 d、未同房,近1周内血常规与白带检查结果正常.排除标准:宫颈内口狭窄者,急性、亚急性生殖性炎症者.

    作者:陈明江;焦俊;罗开毅;龙德辉;李梅 刊期: 2016年第07期

  • 胃黏膜组织中肿瘤坏死因子α及iNOS表达水平与胃炎发病的关系研究

    目的 研究胃炎发病与肿瘤坏死因子α(TNF-α)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平的相关性研究.方法 选取114例慢性胃炎患者为研究对象,根据胃镜与组织学检查结果进行分析,包括Hp阳性54例,Hp阴性60例,以放射免疫法检测TNF-α,免疫组织化学法检测iNOS表达水平,以分析上述两项指标与胃炎发病的相关性,并研究胃黏膜炎症程度在两组中的分布.结果 Hp阳性组TNF-α为(1.41±0.33)ng/mg VS(0.64±0.22)ng/mg,显著高于对照组(P<0.05);观察组iNOS(69.34±6.10)% VS(21.94±3.87)%显著高于对照组(P<0.05).Hp阳性组轻、中、重度占66.67%,显著高于Hp阴性组的11.67% (P<0.05).结论 胃黏膜组织TNF-α及iNOS水平上升与胃炎发生发展有关.

    作者:鲍文漪 刊期: 2016年第07期

  • 胆囊切除术后兔血清CCK8的变化及意义

    Oddi括约肌(SO)生理运动在维持正常胆道动力学中起着重要作用,其主要受神经、体液因素调节.CCK作为胃肠肽类激素之一对SO的调节具有重要作用[1].在CCK家族中,缩胆囊素八肽(CCK8)生理作用大.CCK可直接作用SO内的缩胆囊素A受体(CCKAR)发挥作用.胆囊切除术后综合症(PCS)概念的提出使得SO的病理生理受到高度重视,部分病因为SO功能障碍(SOD)[2],本实验通过观察胆囊切除术后兔血清CCK8浓度的变化,探讨CCK8与SO生理活动的关系.

    作者:刘振华;王宁;张帅民;徐贤刚;黎涛;石承先 刊期: 2016年第07期

  • 二丁酰环磷腺苷钙辅助治疗肺心病右心衰竭的价值

    目的 观察二丁酰环磷腺苷钙治疗慢性肺源性心脏病右心衰竭患者的临床疗效.方法 将56例患者随机分为治疗组30例和对照组26例,在常规治疗基础上,治疗组应用二丁酰环磷腺苷钙40 mg+5%葡萄糖注射液250 mL静脉滴注7d,观察治疗前及1周后两组症状体征、6分钟步行距离、NT-proBNP变化、肺动脉收缩压.结果 两组患者症状体征均有改善;6 min步行距离增加;NT-proBNP下降;肺动脉压收缩压下降,两组间比较且治疗组显著优于对照组(P均<0.05).结论 常规治疗基础上加用二丁酰环磷腺苷钙可以降低肺动脉压,增加心肌收缩力,改善患者心功能,疗效明显,未见明显不良反应.

    作者:钟美蓉;邵春燕;陈爱华;吴珊珊;李志栋 刊期: 2016年第07期

  • 奥美拉唑预防应激性黏膜病变160例效果观察

    目的 观察奥美拉唑预防应激性黏膜病变的效果.方法 采用随机分配法将320例应激性黏膜病变的患者分为对照组和观察组各160例,对照组采用西咪替丁针剂进行治疗,观察组采用注射用奥美拉唑钠预防治疗.对比两组患者的应激性溃疡的发生率和不良反应发生率.结果 观察组的应激性溃疡的发生率为8.13%,低于对照组的29.37%;观察组不良反应总发生率为3.75%,优于对照组的13.125%,差异有统计学差异(P<0.05),两组均未出现因应激性黏膜病变而造成死亡的病例.结论 使用奥美拉唑在预防应激性黏膜病变上效果较好,不良反应发生率低,且安全可靠.

    作者:成睿珍;赵静;吴文静;王如华 刊期: 2016年第07期

  • 异丙托溴铵联合喘可治雾化吸入治疗哮喘急发作的疗效观察

    笔者选取2013年1月至2015年6月我院50例处于急性发作期的哮喘患者,给予异丙托溴铵+喘可治注射液联合雾化吸入治疗,效果显著,现报告如下.1 资料和方法1.1 临床资料 随机选取2013年1月至2015年6月我院收治的处于急性发作期的哮喘患者100例,所有患者均被确诊为哮喘,均出现咳嗽、喘息、哮鸣音、呼吸困难等症状.采取数字抽签法进行随机分为对照组和观察组,每组各50例.对照组:男28例,女22例,年龄25~61岁,平均年龄(44.67±10.35)岁.

    作者:曹珺 刊期: 2016年第07期

  • 冠心病患者血清IL-8表达量与血小板gPⅡb/Ⅲa活性白细胞血小板聚集率之间的关系

    目的 探讨冠心病患者血清白介素-8(IL-8)表达水平与血小板糖膜蛋白(gp)Ⅱb/Ⅲa活性、白细胞血小板聚集率之间的关系.方法 选取确诊的冠心痛患者129例,其中稳定性心绞痛患者72例(SAP组)、不稳定性心绞痛患者57例(UAP)组,选取同期健康人群60名作为健康组,分别对比三组的血清IL-8、gpⅡb/Ⅲa活性、白细胞血小板聚集率等指标,并分析其相关性.结果 SAP组、UAP组患者的血小板中性粒细胞聚集率、血小板单核细胞聚集率显著高于健康组(P<0.05);SAP组与UAP组差异无统计学意义(P>0.05);SAP组、UAP组患者的gpⅡb/Ⅲa、IL-8水平显著高于健康组(P<0.05);SAP组与UAP组差异无统计学意义(P>0.05);冠心痛患者的IL-8水平与gpⅡb/Ⅲa、血小板中性粒细胞聚集率、血小板单核细胞聚集率均呈显著的正相关关系(P<0.05).结论 冠心痛患者的IL-8水平与gpⅡb/Ⅲa活性及血小板白细胞聚集率呈显著的正相关关系,IL-8在冠心病病变过程中发挥重要作用.

    作者:白建蓉;闵兴明;黄远帅 刊期: 2016年第07期

  • 经腋窝乳晕入路腔镜下切除术治疗甲状腺腺瘤的疗效及美学效果观察

    目的 探讨经腋窝乳晕入路腔镜下切除术治疗甲状腺腺瘤的临床疗效并评价其美学效果.方法 选取经腋窝乳晕入路腔镜下切除术治疗甲状腺腺瘤患者31例作为观察组,同期行传统开放手术者31例作为对照组,比较两组的临床疗效与美学效果.结果 两组的手术时间、术后引流量差异无统计学意义(P>0.05);观察组的手术切口长度、术中出血量、术后24 h VAS及术后住院时间显著少于对照组(P<0.05);观察组的美容满意度为96.77%,显著高于对照组(P<0.05);观察组的并发症发生率为9.68%,显著低于对照组(P<0.05).结论 经腋窝乳晕入路腔镜下切除术治疗甲状腺腺瘤具有疗效确切、安全性好及美学效果好等优点,值得推广应用.

    作者:顾朱彤 刊期: 2016年第07期

  • 基于ARIMA模型的贵阳市云岩区手足口病预测分析

    手足口病(HFMD)是婴幼儿常见的急性传染性疾病,多发生于5岁以下的儿童,主要症状为手足口等多个部位出现疱疹,少数患者可发生严重的神经系统并发症如无菌性脑膜炎、脊髓炎等,甚至会导致患儿死亡[1].该病主要由多种肠道病毒(EV)引起,国内常见的病原体是肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16).根据2008-2014年贵阳市云岩区手足口病的发病率,创建未来6年的发病预测数学模型,为制定手足口病的防控措施提供科学依据.

    作者:李曦;温建;潘春柳;张江萍 刊期: 2016年第07期

  • 完善绿色通道及溶栓流程对提高急性缺血性脑卒中静脉溶栓率的临床观察

    急性脑梗死是脑血管病中常见的类型,静脉溶栓是急性缺血性脑卒中(AIS)重要且有效的治疗手段,脑血管病多项防治指南均推荐发病4.5h内应用阿替普酶即重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)来治疗AIS[1].与国外溶栓治疗效率相比,我国存在AIS患者溶栓意识差,就诊时间延误、入院后诊查时间长,溶栓率低的特点[2].美国心脏协会/美国卒中协会的AIS早期管理指南[3]要求患者到院至rt-PA溶栓治疗时间(DNT)应控制在60 min以内,但我国只有少数患者能在此时间窗内接受静脉溶栓治疗[4].

    作者:胡晓;李玫;瞿浩;陈岚;李世容;刘蕊;王建怡 刊期: 2016年第07期

  • 灵芝三萜类化合物对AD大鼠脑海马神经细胞Aβ1-40的影响

    目的 研究灵芝三萜类化合物(GLT)对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑海马神经细胞Aβ1-40表达的影响.方法 将自然衰老模型大鼠60只随机均分为六组:模型组,GLT低、中、高剂量组,溶媒对照组(食用油)及阳性对照组(健脑胶囊),5个月龄大鼠10只为正常对照组.连续灌胃给药60 d后,免疫组化法检测海马Aβ1-40表达.结果 模型组海马神经细胞Aβ1-40表达增多,GLT组Aβ1-40表达减少.结论 GLT有防治AD的作用,其作用机制可能与减轻Aβ的神经毒性以及减少脑内Aβ沉积有关.

    作者:张玥;罗俊;黄能慧;张小毅 刊期: 2016年第07期

  • 非甾体类抗炎药相关性胃病的临床分析

    目的 分析非甾体类抗炎药(NSAIDs)相关性胃病的临床特点及影响因素,提高对疾病的认识.方法 NSAIDs相关性胃病159例,分析其临床特点及致消化道出血的影响因素,并对其用药和防治情况进行分析.结果 有消化不良症状的非出血患者108例(67.9%),消化道出血51例(32.1%)其中以出血为首发症状38例.年龄>65岁、长期服药、患有慢性疾病者发病率高.消化道出血与年龄、联合用药、合并慢性疾病及幽门螺杆菌感染(Hp)有关(P<0.05).NSAIDs用药以低剂量阿司匹林(LDA)为主(51.6%),中、高危患者预防用药仅43.4%.结论 应关注NSAIDs相关性胃病的危险因素,并重视对中、高危患者的预防性用药.

    作者:黄萍 刊期: 2016年第07期

  • RFA与手术切除治疗59例小肝癌的临床效果与预后观察

    目的 观察射频消融(RFA)与传统手术方法治疗小肝癌患者的临床效果及预后.方法 选取105例经病理学确诊的小肝癌(大径≤3 cm)患者进行回顾性分析,根据手术方法将患者分为RFA治疗组(RFA组)59例及传统手术组(传统组)46例,对比两组围手术期指标及术后3年的生存率差异.结果 RFA组的住院时间(6.7±2.8)d低于传统组的(11.4±3.0)d(P<0.05);术前两组的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)及总胆红素(TB)值差异均无统计学意义(P>0.05),术后RFA组患者的ALT、AST、TB值低于传统组(P<0.05),RFA组患者的ALB值高于传统组(P<0.05);RFA组与传统组术后1,2,3年的生存率差异均无统计学意义(P>0.05),RFA组患者与传统组的中位生存时间差异无有统计学意义(P>0.05);RFA组的手术并发症率6.78%低于传统组的26.09% (P<0.05).结论 RFA与传统手术方法治疗小肝癌患者的效果相当,但是对患者肝功能损害更小,手术并发症更少.

    作者:杜也牧;周玲 刊期: 2016年第07期

  • MicroRNA-203对胶质母细胞瘤干细胞生物学特性的作用研究

    目的 观察胶质母细胞瘤干细胞表达miR-203后对其生物学特性的影响.方法 采用免疫磁珠分选出CD133+肿瘤干细胞,对其转染并表达miR-203,免疫荧光染色检测CD133等,实时定量RT-PCR检测巢蛋白(nes-tin)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和微管相关蛋白2(MAP2)表达以鉴定其多向分化能力,成球实验评价其自我更新能力;后采用CCK-8和流式凋亡分别检测miR-203对胶质母细胞瘤干细胞增殖和凋亡的影响.结果 培养并分选出的CD133+胶质母细胞瘤干细胞表达CD133和nestin标记物,且分化后表达星形胶质细胞标记物GFAP和神经元标志物MAP2,且CD133+细胞miR-203表达明显低于CD133-细胞(P<0.05);miR-203转染两个7d后CD133+肿瘤干细胞的一、二次成球数目均显著低于对照组细胞的成球数(P<0.05);进一步实时定量RT-PCR检测示miR-203转染4d后细胞CD133和nestin的mRNA和蛋白表达均明显降低,而GFAP和MAP2的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);miR-203转染24,48,72,96和120 h后细胞存活率均明显低于对照组细胞(P<0.05);、进一步流式检测示miR-203细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05).结论 miR-203可能成为胶质母细胞瘤干细胞的分子治疗靶点.

    作者:秦忠宗;邓一帆;祝刚;晏广 刊期: 2016年第07期

  • 大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定

    目的 构建大鼠整合素连接激酶-RNAi(ILK-RNAi)慢病毒表达载体,为下一步干预研究细胞转分化及其信号通路奠定基础.方法 针对大鼠ILK基因RNAi有效靶序列,合成4条干扰(KD)序列.与pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-RNAi慢病毒载体.将连接产物转入制备完毕的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性克隆,测序验证.包装慢病毒,以绿色荧光蛋白(GFP)表达水平验证病毒滴度.慢病毒载体感染大鼠NRK-52E细胞后,RT-PCR、WB检测及荧光显微镜观察ILK在其细胞中的表达.结果 测序验证成功构建3条大鼠ILK-RNAi慢病毒载体,滴度分别为5×108,2.5×108,3.5×108 pfu/mL.分别以不同感染复数(MOI)感染NRK-52E细胞进行内源筛靶,荧光观察80%细胞的绿色荧光蛋白,RT-PCR、WB检测ILK的表达明显下降.相对于阴性对照序列,KD2,KD3在高MOI组中对ILK表达的敲减达到65%以上(P<0.05),为有效靶点.其中KD2及KD3的ILK 2-△△ct值分别为0.337,0.217.KD2序列为对ILK的表达抑制显著.结论 成功构建大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体.

    作者:白志勋;陆静;杨亦彬 刊期: 2016年第07期

  • 绝经后老年人群股骨近端骨质疏松性骨折与骨密度的相关性分析

    目的 对绝经后老年人群股骨近端骨密度值进行调查,分析比较骨密度值与骨质疏松性骨折发病风险之间的关系.方法 选取体检的431例老年女性进行股骨近端骨密度的测定,根据有无骨折史,分为骨折组与非骨折组,对两组对象骨质疏松患病率、骨密度值、骨密度丢失率进行对比分析.结果 两组患者骨质疏松患病率呈上升趋势,同一年龄组相比,骨折组患者骨质疏松患病率高于非骨折组患者(P<0.05);两组患者股骨近端股骨颈、大转子、粗隆间、全髋骨密度值呈降低趋势,骨密度值:粗隆间>全髋>股骨颈>大转子,各年龄组骨折组患者骨密度值低于非骨折组患者(P<0.05);两组患者股骨近端骨密度丢失率呈上升趋势,以50~60岁之间骨量丢失明显,可能与患者绝经早期有关.多因素Logistic回归分析发现,绝经后老年女性骨折发病危险性与股骨近端骨密度值呈负相关,骨密度值越低,骨折危险性越大.结论 绝经后老年女性股骨近端骨密度值对于骨折风险有较好的预测价值,且与骨质疏松性骨折的发病风险呈明显的负相关.

    作者:王建波;贾绍环;魏小娟;张锐 刊期: 2016年第07期

  • 伴过敏性鼻炎的鼾症病患儿手术联合舌下含服免疫治疗疗效观察

    目的 探讨伴过敏性鼻炎的鼾症儿童采用手术联合舌下含服脱敏治疗(SLIT)与单纯手术治疗的临床疗效.方法 伴过敏性鼻炎(AR)的鼾症儿童60例,随机分为手术联合SLIT组(实验组)与手术组(对照组)各30例,所有患儿粉尘螨皮肤点刺实试验结果均为“+++”及以上,手术方式为双侧扁桃体和腺样体切除术,实验组患儿手术后第1个月脱敏治疗,第6,12,18个月分别对两组患儿睡眠打鼾症状采用OSA-18量表评分及鼻部症状采用TNSS评分,比较评分结果.结果 手术治疗前两组患儿睡眠打鼾症状评分及鼻部症状评分差异均无统计学意义;各组患儿打鼾症状及鼻部症状评分,手术后第1月较手术前相比,差异均有统计学意义;实验组患儿脱敏治疗后第6,12个月打鼾及鼻部症状评分均明显下降;对照组患儿,术后第7,13,19个月的打鼾症状评分与术后第1个月相较明显增高,鼻部症状与术后第1个月相较未见明显差异.结论 手术联合SLIT治疗可明显改善儿童打鼾及过敏性鼻炎相关症状,增加手术疗效,减少术后复发.

    作者:陈燕燕;陈玉赞 刊期: 2016年第07期

贵州医药杂志

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主管:贵州省医药卫生学会办公室

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