学术投稿

细菌荧光酶的融合luxAB基因在肝癌细胞中的表达

茆灿泉;赵玫;范云霞;徐枫;杜菲;袁兴华;黄常志

关键词:报告基因, 细菌荧光酶, luxAB基因, 转染
摘要:目的探索细菌荧光酶的融合luxAB基因作为新的报告基因在肝癌细胞中表达的可行性.方法基于PCR的位点突变技术,构建了含有细菌荧光酶融合AB基因的哺乳动物表达载体pcDNA3-luxAB,通过脂质体转染,使其在肝癌细胞BEL7402中稳定表达.以序列测定和PCR分别确定融合luxAB基因构建的正确性和质粒转染的成功.以MTT和生物发光法分别测定细胞群体生长曲线和细菌荧光酶发光强度.结果构建的融合luxAB基因是单顺反子,与设计完全一致;pcDNA3-luxAB的转染对BEL7402肝癌细胞的群体生长无显著影响;表达载体在BEL7402细胞中可稳定表达,在细胞水平可检测到(8.71±1.21) mV/40 μg蛋白的细菌荧光酶发光强度.结论细菌荧光酶luxAB基因可作为一种新的灵敏和无伤害的报告基因在肝癌细胞的研究中应用.
中华肿瘤杂志相关文献
  • 胃癌淋巴结转移相关因素的多元分析

    目的探讨胃癌组织中CD44v6、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和结构型一氧化氮合酶(cNOS) mRNA的表达等因素与胃癌侵袭转移的关系以及在预测胃癌淋巴结转移中的价值.方法采用Logistic逐步回归的方法,对119例原发性胃癌10项与胃癌淋巴结转移有关的指标进行筛选.结果胃癌组织中CD44v6表达越强,发生淋巴结转移的机率越高;MMP-9阳性表达而TIMP-1阴性表达者,发生淋巴结转移的机率高;MMP-9阴性表达而TIMP-1阳性表达者,发生淋巴结转移的机率低;胃癌血管或淋巴管内皮细胞cNOS mRNA阳性表达者,发生淋巴结转移的机率较高.结论胃癌组织中CD44v6表达强度、MMP-9和TIMP-1表达失衡情况及胃癌血管或淋巴管内皮细胞cNOS mRNA的表达情况,可作为术前预测患者淋巴结转移的有效指标.

    作者:张声;林华;李莉;林建银 刊期: 2001年第05期

  • 以前列腺器官特异性抗原指标测定前列腺癌微转移

    我们应用RT-巢式PCR方法,以前列腺特异性抗原(prostate specific antigen, PSA)及前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen, PSM)为标志,对不同临床分期的前列腺癌患者外周血进行检测,并结合临床资料进行分析,以期对前列腺癌的分期诊断及治疗方案选择提供准确的指标。

    作者:赵洪;张琚;冯剑利;刘涛;吴明明;强万明;宋永周 刊期: 2001年第05期

  • 肝脏局灶性结节增生的螺旋CT平扫及三期增强扫描

    目的分析肝脏局灶性结节增生(FNH)的螺旋CT平扫及三期增强扫描表现,以提高对FNH的诊断准确率。方法 对21例21个经手术病理证实的FNH进行螺旋CT平扫及增强的动脉期、门脉期、延迟期扫描。其中2例行肝动脉血管造影。结果 21个FNH,平扫16个为低密度,5个为等密度,其中12个病灶中央有点状、条状、放射状低密度影。动脉期21个FNH除中央疤痕外,均明显均匀强化,9例见明显增粗的供血动脉;门脉期病灶密度下降,但均高于或略高于肝实质;延迟期病灶呈等密度或略低于肝实质,3例见包膜强化。血管造影可见粗大的供血动脉及引流静脉。结论 FNH在螺旋CT平扫及三期增强扫描中的特征性表现,对FNH的确诊及治疗方案的选择有重要价值。

    作者:徐爱民;程红岩;陈栋;贾雨辰;吴孟超 刊期: 2001年第05期

  • 反义热休克蛋白hsc70对突变型p53蛋白稳定性的影响

    目的探讨反义hsc70 RNA对突变型p53稳定性的影响.方法利用DNA重组技术构建反义hsc70真核表达质粒pXAhsc70.脂质体介导将重组质粒转染至MCF-7/Adr人乳腺癌细胞(突变型p53),经PCR确定转染细胞中外源DNA存在后,以Western blot检测hsc70蛋白的抑制程度.p53稳定性实验分析反义hsc70 RNA对突变型p53半衰期的改变.结果建立稳定表达反义hsc70 RNA的细胞株MAc70,hsc70蛋白表达下降42%,其胞内突变型p53含量下降,半衰期缩短,稳定性下降.结论反义hsc70 RNA能够明显地降低突变型p53稳定性.

    作者:范云霞;赵玫;黄常志;施一江;周纯;徐枫;杜菲;林梁 刊期: 2001年第05期

  • 食管癌术后舌转移一例

    患者男,61岁.进行性吞咽困难3个月,吞钡摄片提示食管中段癌,术前检查无远处转移.行食管中下段切除,胃食管主动脉弓上吻合,并行胸内淋巴结清扫.病理诊断:食管溃疡型中分化鳞癌,食管旁淋巴结转移(1/4).出院1月余发现左舌根部一小结节突起.再次住院,查左舌根部表面突起一0.5 cm×0.5 cm不规则小结节,结节表面有少许糜烂,不活动.结节穿刺细胞学检查为转移性鳞癌.其余检查未见异常.行手术切除左舌根部结节,病理检查为舌部转移性鳞癌.术后给予静脉化疗2个疗程及免疫、中药治疗,随访8个月,未见肿瘤复发及转移.

    作者:曾培元 刊期: 2001年第05期

  • MR和CT动态扫描对小肝癌强化特征的比较研究

    目的前瞻性比较研究小肝癌(SHCC)在动态MR和螺旋CT多期扫描中的强化特征,探讨MR优于螺旋CT的原因.方法 53例SHCC患者,均行螺旋CT和MR动态增强扫描.螺旋CT全肝平扫后分别行动脉期、门脉期和延迟期的增强扫描.MR行SE序列和FMPSPGR序列动态增强多期扫描.结果 53例患者共发现病灶76个,MR和CT动脉期扫描分别有69个病灶和49个病灶有明显强化. SHCC在MR和CT动脉期-门脉期-延迟期扫描中的典型表现为高-低-低信号(密度)和高-等-低信号(密度);不典型的表现为高-高-高信号(密度)、高-等-等信号(密度)和低-低-低信号(密度).结论动态MR和螺旋CT 多期增强扫描均可显示SHCC的强化特征.MR动脉期扫描更能充分反映SHCC富血供的特点;在定性诊断方面,结合SE序列上的一些信号特征,MR更优于螺旋CT.

    作者:严福华;周康荣;沈继章;曾蒙苏;杨军;吴东;龚静山;施卫斌 刊期: 2001年第05期

  • 乳腺、甲状腺、卵巢三重癌一例

    患者女,45岁.1987年发现右侧乳房外上象限有一肿块,3.0 cm×3.0 cm.4月行右乳区段切除术,术前分期T2N0M0Ⅱ期.术后病理诊断:右乳侵袭性癌,髓样癌,淋巴管中见有癌栓.同侧腋淋巴结转移0/7,ER(+),PR(+).术后行根治性放疗,右锁上下、右腋下及内乳区垂直照射Dm 50 Gy/25次,共35 d;右乳房切线照射DT 50 Gy/50 d;切口Dm 20 Gy/14 d.1987年6月~1988年8月服三苯氧胺治疗.1999年4月发现左侧甲状腺一肿物,约5.0 cm×1.0 cm,未治疗.2000年4月又发现右侧甲状腺一肿物,约5.0 cm×1.0 cm.5月行甲状腺肿物切除,病理诊断:左侧甲状腺乳头状腺癌,结节性甲状腺肿;右侧结节性甲状腺肿.未做颈淋巴结清扫.术后服甲状腺素片治疗.2000年10月因体表淋巴结肿大再次入院.左颈下部、左腋下各触及1枚肿大淋巴结,分别为1.0 cm×1.0 cm、1.5 cm×1.5 cm,质硬,不活动,无压痛.左颈下部淋巴结穿刺病理:甲状腺乳头状癌转移.左腋下淋巴结穿刺病理:右乳腺癌左腋淋巴结转移.乳腺癌8项免疫组化结果为:ER(+),PR(+),C-erbB-2(+),nm-23(+),p53(±),PCNA(+),MDR-1(+),bc1-2(++);甲状腺球蛋白染色阴性.行内分泌治疗,并行全子宫及双侧附件切除术.病理诊断:子宫内膜异位症;子宫平滑肌瘤;左侧卵巢颗粒细胞瘤;右侧卵巢、双侧输卵管未见异常.通过PCR-SSCP方法检测血液,BRCA1基因上5对引物扩增片段未见突变表现.

    作者:李红英;崔灵芝;宋三泰;刘晓晴 刊期: 2001年第05期

  • 细胞因子在实验性癌症恶病质中的作用

    目的探讨细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6与癌症恶病质的关系,观察消炎痛对癌症恶病质的治疗效果.方法用肺腺癌(LA795)接种T739小鼠建立癌症恶病质实验模型,测定荷瘤前后不同阶段小鼠血清IL-6、IL-1、TNF-α的水平及血糖、甘油三酯和总蛋白的变化及体重变化,并且观察消炎痛对癌症恶病质的治疗效果.结果癌症恶病质小鼠的体重、血糖、血甘油三酯、血总蛋白显著低于非荷瘤组,而血清IL-6、TNF-α和IL-1水平显著高于非荷瘤组.消炎痛治疗后,恶病质小鼠的体重、摄食量、血糖、血甘油三酯和血总蛋白水平较生理盐水对照组显著提高且生存时间延长,同时,IL-6、TNF-α、IL-1的血清水平显著低于生理盐水对照组.结论 IL-6、TNF-α、IL-1参与了本动物模型的癌症恶病质诱导.通过抑制IL-6、TNF-α、IL-1的升高,消炎痛具有改善癌症恶病质的作用.

    作者:牛旗;李同度;刘爱国;董慧明;宋德胜 刊期: 2001年第05期

  • DDT人体蓄积与乳腺癌

    近年来,DDT的致癌作用受到重视。DDT是一种有机氯化合物,化学名称:二氯二苯三氯乙烷。作为十分有效的农用杀虫剂和灭害剂,DDT曾在全世界范围内被大量推广和使用,造成了长期性的环境污染。为此,我们于1997年9月~1998年12月间对DDT蓄积与乳腺癌的病因学关系,进行了研究探讨。

    作者:张宏;王凯忠;刘国津 刊期: 2001年第05期

  • 血管内皮生长因子在肝细胞癌血清中的表达意义

    目的研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在肝细胞癌(HCC)患者周围血血清中的表达水平与肝癌临床病理特征及肝癌转移复发之间的关系.方法运用sandwich 酶联免疫吸附测定法定量检测115例HCC、40例肝脏良性疾病患者和30例健康人血清中VEGF的含量.结果 HCC组血清VEGF表达水平[(465.62±336.24) pg/ml]与肝脏良性疾病组[(159.54±120.58) pg/ml]、与健康人组[(123.53±51.84) pg/ml]比较,差异均有显著性(P值均=0.000 1);VEGF表达阳性率分别为77.4%、25.0%和3.3%.HCC转移组患者血清VEGF表达水平与未转移组相比,差异有显著性(P=0.001).血清VEGF表达水平还与HCC合并门静脉瘤栓、肿瘤大小和TNM分期密切相关,VEGF含量随TNM分期升高而逐步升高.结论疗前HCC患者的血清VEGF表达水平,是反映HCC侵袭生长及转移潜能的有效生物学指标.

    作者:赵建军;胡敬群;蔡建强;杨晓洁;杨治华 刊期: 2001年第05期

  • 双原发肺癌的诊断及外科治疗

    目的探讨双原发肺癌的合理诊断及有效的外科治疗方法.方法对34例双原发肺癌患者的临床资料进行回顾性分析.结果全组双原发肺癌共34例,占同期收治肺癌患者的1.2%.异时性22例,同时性12例.异时第二原发肺癌行肺叶切除10例,局部切除11例,探查1例,手术并发症发生率、手术死亡率及5年生存率分别为13.6%、4.6%和25.0%.同时双原发肺癌行肺叶及全肺切除各2例,其余均至少有1个肿瘤行局部切除,无手术并发症及手术死亡,5年生存率14.3%.结论双原发肺癌的诊断率较低,应加强术前检查、术后随诊及鉴别诊断.术式选择过于保守及淋巴结清扫不彻底,是患者预后不佳的主要原因,应引起重视.

    作者:王永岗;汪良骏;张德超;张汝刚;张大为 刊期: 2001年第05期

  • 桥小脑角脑膜瘤的手术治疗(附88例报告)

    ] 目的探讨桥小脑角区脑膜瘤的手术治疗方法.方法对近20年经手术治疗的88例桥小脑角脑膜瘤进行回顾性分析.结果肿瘤全部切除68例(全切率77.3%),大部切除20例;术后死亡6例(死亡率6.8%).60例随访6个月~11年,46例恢复良好,8例死亡,6例复发.结论手术治疗是桥小脑角脑膜瘤的首选治疗方法.合理选择手术入路,术中妥善处理和保护血管、神经、脑干等,以及术后正确处理并发症,配合其他辅助治疗,是提高手术疗效和患者术后生活质量的关键.

    作者:刘伟国;杨小锋;李谷 刊期: 2001年第05期

  • 细菌荧光酶的融合luxAB基因在肝癌细胞中的表达

    目的探索细菌荧光酶的融合luxAB基因作为新的报告基因在肝癌细胞中表达的可行性.方法基于PCR的位点突变技术,构建了含有细菌荧光酶融合AB基因的哺乳动物表达载体pcDNA3-luxAB,通过脂质体转染,使其在肝癌细胞BEL7402中稳定表达.以序列测定和PCR分别确定融合luxAB基因构建的正确性和质粒转染的成功.以MTT和生物发光法分别测定细胞群体生长曲线和细菌荧光酶发光强度.结果构建的融合luxAB基因是单顺反子,与设计完全一致;pcDNA3-luxAB的转染对BEL7402肝癌细胞的群体生长无显著影响;表达载体在BEL7402细胞中可稳定表达,在细胞水平可检测到(8.71±1.21) mV/40 μg蛋白的细菌荧光酶发光强度.结论细菌荧光酶luxAB基因可作为一种新的灵敏和无伤害的报告基因在肝癌细胞的研究中应用.

    作者:茆灿泉;赵玫;范云霞;徐枫;杜菲;袁兴华;黄常志 刊期: 2001年第05期

  • 原发性肺癌支气管动脉阿霉素灌注化疗的药代动力学研究

    目的通过监测阿霉素(ADM)的血药浓度,比较支气管动脉灌注与静脉全身化疗在药代动力学方面的差异.方法 (1)动物实验组:家兔24只,观察ADM单独用药或与DDP、MMC不同方式配伍时药代动力学参数的变化.(2)临床研究组:原发性中心型肺癌17例,采取联合用药(ADM+DDP+MMC)支气管动脉灌注化疗.分别取动、静脉血,以荧光分光光度法测定血浆中阿霉素浓度.结果线性范围在101~106 ng/ml内,r=0.998 3.日内标准误差(s)<2%,日间s<3%.动物实验组单用ADM者血药浓度-时间方程为Cμg/ml=129.44e-13.36t+0.25e-0.072t;三药配伍者为Cμg/ml=370.93 e-23.43t+0.04e-0.09t.临床研究组动脉血样为Cμg/ml=448.61e-66.62t+16.35e-8.13t;静脉血样为Cμg/ml=15.69e-21.66t+0.07e-0.038t.结论从药代动力学的角度衡量,ADM联合用药灌注化疗治疗支气管肺癌,是一种药效高、毒副作用低的治疗方法.

    作者:王田蔚;杨海山;王华;倪海静 刊期: 2001年第05期

  • 肿瘤细胞DNA倍体分析中易于误解的若干问题

    对肿瘤组织中肿瘤细胞DNA倍体作分析,可为肿瘤病理及其临床诊疗和患者预后提供较客观的信息.然而,肿瘤细胞DNA倍体分析中一些易于混淆和误解的问题,应引起注意.

    作者:夏潮涌 刊期: 2001年第05期

  • 钙结合蛋白S100A2对肝癌细胞生长增殖的抑制作用

    目的探讨钙结合蛋白S100A2对肝癌细胞生长增殖的抑制作用.方法构建绿色荧光蛋白-S100A2融合基因的重组表达载体,经脂质体介导转入QGY7701肝癌细胞中进行表达,应用荧光显微镜直接观察融合蛋白的表达和定位;通过肿瘤细胞集落形成实验,观察外源性S100A2表达对体外培养细胞增殖能力的影响;以流式细胞仪分析S100A2 对肿瘤细胞增殖周期的影响;通过裸鼠接种实验,观察S100A2对肿瘤细胞在体内增殖能力的影响.结果绿色荧光蛋白-S100A2融合蛋白表达、定位在胞浆和胞核,而单一的绿色荧光蛋白(载体对照)则只定位在胞浆中;细胞在液体和半固体培养基中培养的细胞集落形成率,实验组(QGY7701/A2)明显低于载体对照组(QGY7701/pc)和细胞对照组(QGY7701);细胞周期分析显示,实验组细胞有G1和G2期阻制,DNA合成量明显减少;实验组裸鼠体内移植瘤重量明显低于两个对照组.结论外源性S100A2可抑制QGY7701肝癌细胞在体外的集落形成和在裸鼠体内的增殖能力,并对细胞周期有阻滞作用.

    作者:王秀清;陈丽珍;曾益新 刊期: 2001年第05期

  • 人肝癌细胞系HCC-9903的建立及生物学特性初步观察

    我们以手术切除标本作原代培养,新建一株人肝癌细胞系,目前已维持培养18个月,传代120代,生长稳定,命名为HCC-9903(Hepatocellular Carcinoma 9903).现报告如下.

    作者:刘军;王占民;刘博;吴小鹏;刘春生;高英茂 刊期: 2001年第05期

  • 《中华神经外科疾病研究杂志》创刊

    作者: 刊期: 2001年第05期

  • bcl-2、p53蛋白表达在卵巢子宫内膜异位症癌变过程中的作用

    目的探讨p53、bcl-2蛋白表达在卵巢子宫内膜异位症(内异症)癌变过程中的作用.方法采用免疫组化法检测卵巢子宫内膜异位症组(内异症组,22例)、卵巢异位子宫内膜腺上皮不典型增生组(不典型增生组,14例)、卵巢子宫内膜异位症癌变组(癌变组,22例)的p53、bcl-2蛋白表达.结果癌变组bcl-2蛋白表达阳性率显著高于内异组(P<0.05),不典型增生组bcl-2蛋白表达阳性率显著高于内异组(P<0.01);癌变组p53蛋白表达阳性率显著高于不典型增生组(P<0.01)及内异组(P<0.01),癌变组癌变区p53蛋白表达阳性率显著高于内异区(P<0.05);癌变组内异区bcl-2蛋白表达阳性率显著高于内异组(P<0.05),不典型增生组内异区bcl-2蛋白表达阳性率显著高于内异组(P<0.01).bcl-2、p53蛋白表达与绝经与否、肿瘤期别、生存期无明显相关性(P>0.05);癌变组癌变区p53、bcl-2蛋白表达无明显相关性(P>0.05).结论 p53、bcl-2的过度表达可能参与了内异症癌变的过程,p53蛋白阳性或bcl-2蛋白阳性的内异症可能是癌前病变.

    作者:钱建华;石一复 刊期: 2001年第05期

  • E1B55kDa缺陷型腺病毒对人肝癌细胞的杀伤研究

    目的探讨E1B55kDa缺陷型腺病毒dl1520对肝癌细胞的体内外杀伤作用.方法用dl1520分别感染p53基因型不同的人肝癌细胞,感染后第4天用染色的方法检测存活细胞.用RT-PCR检测细胞内p53和p21Waf-1基因表达的改变,通过检测腺病毒衣壳蛋白hexon基因的表达证实腺病毒的感染.在SCID裸鼠瘤体内注射dl1520,观察dl1520对肝癌细胞的体内杀伤作用.结果 p53基因缺失的肝癌细胞Hep3B对dl1520诱导的细胞毒性作用敏感,超过60%的细胞被杀伤,而不足20%的PLC/PRF/5(p53基因突变型)和HepG2(p53基因野生型)肝癌细胞被杀伤.腺病毒感染后,HepG2细胞内p53和p21Waf-1基因表达水平均明显升高.瘤体内注射dl1520,可显著抑制Hep3B裸鼠移植瘤的生长,而对PLC/PRF/5和HepG2的裸鼠移植瘤则无明显的生长抑制作用.结论 E1B55kDa缺失的腺病毒可以选择性地杀伤p53基因缺失的肝癌细胞,是一种潜在的肿瘤治疗手段.

    作者:赵健;吕岩;郭亚军 刊期: 2001年第05期

中华肿瘤杂志

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