抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定

宋述梅；吴健；寿成超

关键词：血管内皮细胞生长因子受体☆, 杂交瘤, 抗体, 单克隆, 内皮生长因子/拮抗剂和抑制剂

摘要：目的:制备血管内皮细胞生长因子受体(kinase insert domain containing receptor, KDR)的单克隆抗体并鉴定其特异性.方法:在大肠杆菌中表达重组KDR融合蛋白.融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养.单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛和S-P免疫组化筛选并鉴定其亚类.结果:经ELISA双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人KDR单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为SSW2),其分泌抗体亚类为IgG1,产生的腹水效价可达1×10-6.结论:SSW2同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应.

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微囊藻毒素、佛波酯和苯巴比妥钠对细胞间隙通讯和细胞内Ca2+浓度的影响

目的:探讨细胞间隙通讯和细胞钙离子信号传导系统在非遗传毒性致癌物的遗传外致癌过程中的作用.方法:应用划痕染料示踪技术(SLDT)和fluo-3荧光标记法,测定微囊藻毒素、佛波酯(TPA)、苯巴比妥钠3种非遗传毒性致癌物对BALB/c 3T3细胞间隙通讯功能和细胞内游离Ca2+离子浓度的影响.结果:3种非遗传毒性致癌物均可不同程度抑制细胞间隙通讯功能,并呈良好的剂量效应关系.TPA和微囊藻毒素可明显诱导细胞内游离钙离子浓度升高,但在试验剂量下苯巴比妥钠未见引起细胞内Ca2+离子浓度的明显改变.结论:细胞间隙通讯系统可能是3种非遗传毒性致癌物的共同作用位点,对细胞Ca2+系统的影响以TPA类非遗传毒性致癌物为主.

作者：王红兵；刘世杰刊期： 1998年第06期
卵巢癌抗独特型单链抗体诱导特异性体液免疫应答的动物实验研究

目的:用卵巢癌抗独特型单链抗体6B11 scFv代替肿瘤抗原免疫动物,观察是否诱导动物产生特异性体液免疫反应.方法:将6B11 scFv交联钥孔虫戚虫血蓝素,辅以弗氏佐剂反复免疫BALB/c小鼠,制备抗血清.采用间接法ELISA,竞争抑制ELISA及免疫流式细胞法分析抗血清特性.结果:经ELISA检测显示,由6B11 scFv刺激产生的抗-抗独特型单链抗体(Ab3)能与6B11 scFv和卵巢癌组织抗原OC166-9特异性结合.竞争抑制ELISA表明,Ab3能有效抑制卵巢癌单抗COC166-9(Ab1)与OC166-9的特异性结合.免疫流式分析结果可见, Ab3能与表达卵巢癌抗原的人卵巢癌细胞系OV1细胞表面结合而不能与无卵巢癌抗原表达的人宫颈癌细胞系HeLa细胞表面结合.从以上结果可以证明Ab3与Ab1的抗原结合特性相同.结论:6B11 scFv能代替卵巢癌抗原诱导动物产生特异性体液免疫反应,具有模拟抗原的作用,为6B11 scFv作为卵巢癌抗独特型单链抗体疫苗的实际应用提供依据.

作者：刘玉英；钱和年；冯捷；付天云；叶雪；姚煜刊期： 1998年第06期
非创伤性修复治疗技术和两种玻璃离子水门汀充填恒磨牙浅龋的评估

目的:观察非创伤性修复治疗(ART)技术和两种玻璃离子水门汀充填恒磨牙浅龋的临床效果.方法:68例患者,152个恒磨牙Ⅰ类洞,9个Ⅱ类洞,用Fuji ⅨGP、Ketac-Molar两种玻璃离子水门汀和GK银汞合金充填龋洞,半年后对3种材料的固位、表面磨耗、边缘折裂、充填体颜色变化以及与自然牙颜色匹配等进行复查和对比评估.结果:两种玻璃离子水门汀充填龋洞后半年未见继发龋和边缘折裂现象;材料颜色变暗,与自然牙颜色匹配性趋向协调,但表面磨耗较银汞合金明显.结论:ART技术和两种玻璃离子水门汀充填恒磨牙浅龋具有较好的临床实用性,但尚需长期观察.

作者：洪伟；高炜；冯海兰刊期： 1998年第06期
β-内酰胺酶基因的克隆及其逆转录病毒重组体的构建

β-内酰胺酶是细菌中存在的,能水解具有β-内酰胺环的物质(如头孢菌素类)并使其失活的一类酶.以前的研究证明,一些抗癌剂(如阿霉素、丝裂霉素、卡铂、氮芥、紫杉醇等)与头孢菌素连接后,其毒性很小或无毒性,而且在β-内酰胺酶作用下可释放具有活性的抗癌剂,所以可作为前药应用.如果利用β-内酰胺酶基因的逆转录病毒载体进行肿瘤局部注射,使肿瘤内表达β-内酰胺酶,联合静脉注射无毒的前药C-DOX(阿霉素和头孢菌素的偶联物),在β-内酰胺酶作用下前药在肿瘤内释放出杀瘤药阿霉素,便可进行肿瘤的基因治疗.

作者：常桂民；林三仁；王立新；杨雪玲刊期： 1998年第06期
邻苯二甲酸酐哮喘大鼠模型制备及其肺组织中细胞间粘附分子-1 mRNA的表达

目的:制备邻苯二甲酸酐(phthalic anhydride, PA)大鼠哮喘模型,探讨细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)与PA哮喘气道炎症的关系.方法:用PA免疫大鼠制备哮喘模型,观察哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中炎性细胞的变化及支气管肺组织的病理改变;用Northern杂交方法检测哮喘大鼠肺组织ICAM-1 mRNA的表达.结果:哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中炎性细胞数较对照组显著增加,支气管肺组织炎性细胞浸润程度较对照组增加,支气管粘膜皱缩加重;哮喘大鼠肺组织ICAM-1 mRNA 比对照组表达增高,表达量与炎性细胞的改变呈显著正相关.结论:哮喘大鼠肺组织ICAM-1 mRNA表达量的增高不仅与哮喘气道炎症的发生有关,还与哮喘气道炎性细胞浸润的严重程度有密切关系.

作者：赵振东；刘镜愉；丁丽华；陈明刊期： 1998年第06期
酶免疫法量化分析乙型肝炎病毒核酸扩增产物

有关聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术应用研究的重点,是利用其能够短时间内在体外扩增出数百万个特异性靶DNA序列拷贝的特点,对感染者体内含量极低的病原体核酸模板(如乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV等)进行量化测定,从而为病毒、支原体、细菌等人类致病因子相关性疾病的诊断和治疗提供准确有力的实验室依据.本文建立了一种利用核酸固相杂交及酶免疫技术(EIA)量化测定HBV-DNA的PCR扩增产物的新方法,该方法具有灵敏、特异、准确、快速、简便,并可量化反映病毒模板量等优点,可广泛应用于HBV感染相关疾病的诊断和治疗监测,现报告如下.

作者：仝文斌；高巍；费然；冯百芳；陶其敏刊期： 1998年第06期
氧流量对异氟烷的消耗与摄取的影响

目的:探讨不同氧流量对异氟烷的消耗量和体内摄取的影响.方法:24例异氟烷全身麻醉的病人,按新鲜氧流量不同随机分为3组.氧流量分别为2.0、1.0和0.3 L*min-1.以微量泵向呼吸环路吸入远端输入异氟烷,调节输入速度使肺泡异氟烷浓度维持在低肺泡有效浓度的1.1倍.监测异氟烷吸入及呼出体积分数,以吸-呼体积分数差作为摄取指标,观察异氟烷的消耗量及体内摄取量的变化.结果:异氟烷的消耗量随氧流量的增大而明显增加;体内摄取量各组间差异无显著性.结论:在维持相同低肺泡有效浓度时,异氟烷的消耗量随着新鲜氧流量的增加而增加;体内对异氟烷的摄取量与新鲜氧流量的大小无关.

作者：戴旻；杨拔贤；许幸；杨天明刊期： 1998年第06期
乙酰胆碱受体γ亚基基因-204/-50片段与鸡发育阶段骨骼肌核因子的相互作用

目的:分析鸡乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors, AChR) γ亚基基因与不同发育阶段鸡骨骼肌核因子的相互作用.方法:以AChR γ基因-204/-50片段为探针,与孵化9～18 d的鸡胚和出生后1 d、2周雏鸡骨骼肌核抽提物进行凝胶阻滞和Southwestern印迹分析.结果:凝胶阻滞实验显示,9 d、13 d鸡胚骨骼肌核抽提物与γ基因-204/-50片段结合反应可形成明显的阻滞条带,18 d后阻滞条带明显减弱.Southwestern印迹分析显示,9～18 d肌核抽提物中有2种核因子可识别、结合γ基因-204/-50片段,相对分子质量分别为30 000和53 000.采用2种实验方法在出生后的核抽提物中未检出DNA结合活性.结论:AChR γ基因-204/-50片段可被30 000和53 000两种核因子识别,两因子在鸡胚发育的9～18 d表达,出生后消失.它们可能对鸡AChR γ基因的转录激活起作用.

作者：倪菊华；关宝祥；贾弘禔刊期： 1998年第06期
肺癌MDM2蛋白表达与p53基因突变的关系

目的:研究肺癌MDM2蛋白表达与p53突变之间的关系.方法:用免疫组化检测125例肺癌p53和MDM2蛋白表达,以聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法检测p53基因第5～8外显子的突变.结果:PCR-SSCP检测阳性的52例肺癌MDM2阳性率为19.2%;而阴性的73例肺癌MDM2蛋白阳性率为35.6%.统计学检验显示肺癌MDM2蛋白表达与p53突变之间呈负相关(χ2=3.98,P<0.05);MDM2蛋白阳性与肺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、临床分期和p53蛋白表达无显著相关性.结论:MDM2过度表达可能在p53基因没有突变肺癌的发生过程中起重要作用.

作者：张骏；郑杰；方伟岗；李红梅；由江峰；王洁良；吴秉铨刊期： 1998年第06期
直肠癌的局部切除治疗

1 资料与方法1985年至1996年在北京医科大学第一医院外科诊断为原发性直肠癌并接受局部切除治疗的患者共17例,随访16例,其中男5例,女11例.中位年龄59岁(35～69岁).随访中位时间61个月(12～138个月).

作者：罗斌；王文治刊期： 1998年第06期
粒单核细胞和粒细胞集落刺激因子在人胎盘滋养层细胞的定位

目的:确定脐血中高水平的造血因子的来源.方法:应用抗粒单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)和抗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的单克隆抗体对19例健康产妇足月分娩的胎盘组织的冰冻切片进行免疫组织化学染色.以耳鼻咽喉科摘取的鼻息肉组织做对照.结果:胎盘郎汉斯细胞及合体细胞呈现阳性反应,而阴性对照无反应.结论:胎盘滋养层细胞可能是产生脐血中GM-CSF和G-CSF的主要细胞.

作者：刘桂兰；于国青；虞有智；回允中刊期： 1998年第06期
腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素-6在真核细胞中的表达效率

目的:构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率.方法:利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素-6(IL-6)真核表达载体pAdCIIL-6和P335ciil-6.将它们瞬时转染COS-7细胞后,利用IL-6依赖株7TD1对上清中的IL-6进行检测.结果:两种新建载体分别能提高IL-6在真核细胞中的表达效率5.5和3.4倍.结论:腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡRNA(virus-associated Ⅰand ⅡRNA, VAⅠand VAⅡ)和腺伴随病毒(adeno associated virus, AAV) 的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)能提高细胞因子在真核细胞中的表达.

作者：刘红涛；袁勇；张颖妹；狄春辉；王应；马大龙刊期： 1998年第06期
大黄素对血管平滑肌细胞增生抑制作用的机制

目的:观察大黄素对动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期时相的影响,了解大黄素抑制离体培养的平滑肌细胞增殖的作用机制.方法:指数增长期的平滑肌细胞同步化于G0期后,加入20 mg*L-1大黄素于含胎牛血清10%(体积分数)的细胞培养液中,24 h后分别用流式细胞仪进行细胞周期时相测定和抗PCNA蛋白单克隆抗体染色.结果:与对照组比较,用了大黄素以后,G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,下降率为75.5%,平滑肌细胞抗PCNA单克隆抗体染色呈阴性.表明PCNA蛋白的表达受到抑制,细胞受阻于G0期.结论:抑制PCNA蛋白表达、阻滞细胞周期的移行是大黄素抑制平滑肌细胞增殖的重要机制之一.

作者：尹春琳；徐成斌刊期： 1998年第06期
内皮素-1基因在重度妊娠高血压综合征患者胎盘绒毛组织中的表达

目的:研究重度妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘绒毛组织中内皮素-1(ET-1)mRNA的表达,探讨ET-1与妊高征的关系.方法:用地高辛标记的内皮素-1 cDNA探针对重度妊高征患者及正常对照组产妇胎盘绒毛组织总RNA行斑点印迹杂交.利用Leica QWIN图像处理及分析系统测量每个杂交点的平均光密度值.结果:妊高征组患者胎盘绒毛组织ET-1 mRNA的表达较正常妊娠组明显增高.结论:重度妊高征患者胎盘绒毛组织ET-1表达增强可能引起全身血管痉挛,导致妊高征,同时也可能与妊高征易并发胎儿宫内发育迟缓有关.

作者：佟秀琴；李诗兰；赵扬玉；张小为；王蔼明刊期： 1998年第06期
掌叶大黄发根及愈伤组织、悬浮细胞中蒽醌类成分的比较研究

目的:比较Ri质粒转化的掌叶大黄发根与愈伤组织、悬浮细胞以及掌叶大黄生药中游离蒽醌成分的含量.方法:用发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes 9402 野生型菌株感染掌叶大黄外植体以诱导发根,建立发根离体培养系,用Southern blot鉴定发根;分别诱导掌叶大黄愈伤组织和悬浮细胞;用高效液相色谱法测定发根、愈伤组织、悬浮培养细胞以及掌叶大黄生药中芦荟大黄素等游离蒽醌化合物的质量含量.结果:从子叶柄上诱导出了发根,并建立了培养体系;Southern杂交结果证明Ri质粒T-DNA转移并整合到植物细胞基因组中;用叶片作外植体诱导出了愈伤组织;悬浮培养细胞用叶片、叶柄外植体诱导的愈伤经液体培养获得;掌叶大黄发根中各种游离蒽醌化合物含量普遍高于愈伤组织,但低于生药和悬浮培养细胞.结论:用掌叶大黄发根培养物生产蒽醌化合物是一条值得探索的新途径.

作者：常振战；沈昕；果德安；柳林；王沙生；郑俊华刊期： 1998年第06期
标本保存条件对尿微量白蛋白测定的影响

微量白蛋白尿筛查的可靠性受检测方法本身及标本保存条件的影响.

作者：王鸥；郭晓蕙；惠岩；高妍刊期： 1998年第06期
胎膜早破时粒细胞集落刺激因子测定的临床意义

目的:了解胎膜早破时测定粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF)的临床意义.方法:测定64例胎膜早破产妇在分娩时母血清及脐血清的G-CSF和C-反应蛋白(c-reacting protein, CRP)水平,同时以64例正常产妇做对照.结果:观察组母及脐血清G-CSF阳性分别为10和12例,较对照组4和5例增高,P＜0.05;血清G-CSF和CRP都异常或脐血清任何一项测定异常时,75%～100%新生儿发病;观察组与对照组分别有26与16例新生儿发病,P＜0.05.结论:胎膜早破时测定G-CSF对预测新生儿的发病有一定的临床价值.

作者：刘玉洁；郑新芝刊期： 1998年第06期
束缚应激免疫抑制蛋白单克隆抗体的研制

我室以前的研究发现,在束缚应激大鼠和小鼠血清中能产生1种抑制正常淋巴细胞转化的大分子蛋白质,相对分子质量为1.55×105和3.70×105,并且证明该蛋白的生成受中枢神经系统的调控[1].随后又发现应激大鼠外周淋巴组织(脾和淋巴结)匀浆提取物亦可抑制淋巴细胞转化,进一步的研究表明这种抑制物的生化特性和相对分子质量与血清中的应激免疫抑制蛋白相类似,并证明血中应激免疫抑制蛋白来源于外周淋巴组织[2].上述结果是我室首先发现并已在国内外报道.本文利用部分纯化的应激免疫抑制蛋白作抗原,制备出抗应激免疫抑制蛋白的单克隆抗体,并利用此单抗从另一侧面证实血清中应激免疫抑制蛋白与淋巴组织产生的抑制蛋白是同一物质.

作者：李乐群；邵黎；吴晓婷；黄庆军；邓玉兰；丁桂凤；范少光刊期： 1998年第06期
抗胃癌鼠单抗3H11 scFv的包含体表达及柱上在位复性

目的:在大肠杆菌高效表达抗胃癌单抗3H0011的scFv.方法:利用PCR技术将3H11 scFv基因从分泌型表达载体转移至高效表达载体,获得3H11 scFv包含体的表达,经超声裂解、洗涤、变性后,尝试透析复性和凝胶过滤色谱柱上在位复性,结果:透析复性未能得到有活性的3H11 scFv,而柱上在位复性效果良好,获得有功能性的3H11 scFv.结论:成功进行了3H11 scFv的柱上复性,不同scFv在表达和复性中显示出明显差异,在基因工程抗体研制中值得注意.

作者：李竞；王琰；王卓智；朱迎春；董志伟刊期： 1998年第06期
叔丁基羟基茴香醚对双香豆素加强阿霉素毒性的保护作用及其机制

目的:探讨叔丁基羟基茴香醚(BHA)对双香豆素加强阿霉素毒性的保护作用及其抗氧化机制.方法:小鼠随机分为以下各组:正常对照组,双香豆素组,阿霉素组,双香豆素+阿霉素组和BHA+双香豆素+阿霉素组,每组6只.血清醌还原酶(QR)、ALT、LDH和CK催化活性用酶动力学方法测定,肝丙二醛(MDA)含量按硫代巴比妥酸方法测定.结果:经双香豆素处理组血清QR催化活性显著降低.与单给阿霉素组比较,双香豆素能显著增强阿霉素所致的血清ALT、LDH、CK催化活性升高,肝MDA含量也增高 .BHA具有对抗双香豆素所引起的QR催化活性降低的作用,并具有显著降低双香豆素+阿霉素所导致的ALT、LDH、CK及肝MDA含量增高的作用.结论:双香豆素具有加强阿霉素对小鼠毒性的作用,而BHA对双香豆素加强阿霉素毒性则显示出明显保护作用,其机制与BHA增强QR催化活性及抗脂质过氧化作用有关.

作者：王立新；林三仁刊期： 1998年第06期