学术投稿

K652重组表达IL-6基因对NK细胞表型和功能的影响

李登瑞;杨永辉;李辉;郭素敏;朱桂云;李秀武;耿书军;赵荣娣;任雪飞;高莉;辛欣

关键词:重组K562, IL-6, 自然杀伤细胞, 扩增, 51Cr释放实验
摘要:目的::为了研究表达IL-6的重组K562细胞对自然杀伤细胞( NK)细胞的扩增数量、表型和功能的影响。方法:根据人类IL-6 cDNA的5′端序列,设计PCR引物以K562细胞cDNA文库的DNA为模板进行扩增,表达,转染,在K562细胞上表达IL-6基因,构建重组的K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞( PBMC)为扩增培养对象,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。流式细胞仪分析NK细胞表型。将NK细胞作用到K562细胞,对其杀伤性进行功能分析,51 Cr释放实验检测NK细胞对K562细胞杀伤水平的影响。结果:成功构建了表达IL-6的重组K562细胞,和PBMC共同孵育后,培养体系经过21 d的刺激后,IL-6重组K562细胞诱导PBMC扩增,CD56+CD16+CD3-细胞数量比诱导前扩增了(760±18)倍,CD56+CD16+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的6%±0.4%,扩增后第3组结果比未扩增的多了91%±2%。细胞毒实验表明,在NK效应细胞∶K562靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了92%±2%。结论:本方法以重组K562为刺激细胞,能够实现NK细胞体外的大规模制备,建立了优化的NK细胞体外扩增方法,且扩增的细胞杀伤K562细胞的活性较好。对于NK的大量扩增和应用于临床具有重要的指导意义。
中国免疫学杂志相关文献
  • 《医学免疫学》教学方法的探索与运用

    医学免疫学是生物医学中一门重要的前沿学科,具有深度上的多层次、广度上的多交叉、发展上的高速度等特点,成为沟通基础医学和临床医学无可替代的桥梁学科。相对医学院中其他专业基础学科而言,医学免疫学作为一门年轻的前沿学科,内容抽象,新概念多,内在关联紧密,逻辑推理性强;学生普遍反映医学免疫学较枯燥、理解难、记忆难。如何适应当代医学免疫学发展的要求,针对免疫学知识体系的特点,有效地提高医学免疫学教学质量,成为教学的关键。在以往的教学实践中,我们借鉴各种先进的教学理念,探索运用了多种教学方法、手段,改进和提高教学质量,取得了一定的教学效果;现将一些体会总结如下,与同行分享。

    作者:官妍;汪长中;吴大强;邵菁 刊期: 2015年第08期

  • 探索静水高压在研制黑色素瘤疫苗方面的应用

    目的::探索静水高压在研制黑色素瘤疫苗方面的应用。方法:使用静水高压、液氮反复冻融两种方式破碎鼠源性B16黑色素瘤细胞。将破碎后的细胞悬液与弗氏佐剂混合后制成疫苗用于免疫小鼠,免疫完成后,行尾静脉注射与皮下注射接种肿瘤。通过比较每组小鼠生存时间、皮下肿瘤体积大小、DTH实验、小鼠体内肿瘤荧光成像来比较每种疫苗的免疫效果。结果:相比于液氮冻融及对照组,静水高压组小鼠生存时间长,皮下肿瘤体积小,DTH实验与肿瘤荧光成像均有明显差别。结论:静水高压破碎细胞相比于液氮反复冻融破碎在研制肿瘤疫苗方面有优势。

    作者:刘凯;刘泽强;庄敏丽;潘月海;马占川;刘彬 刊期: 2015年第08期

  • 膜突蛋白免疫大鼠制造肺动脉高压模型的研究

    目的::应用膜突蛋白免疫大鼠,诱导大鼠产生抗膜突蛋白抗体,并对大鼠进行肺动脉压力测定,探寻膜突蛋白制造肺动脉高压( Pulmonary arterial hypertension,PAH)动物模型的可行性。方法:将35只雄性SD大鼠分为5个实验组,分别为阳性对照组(5只),空白对照组(5只),佐剂对照组(5只),低剂量膜突蛋白(250μg/次)免疫组(10只)和高剂量膜突蛋白(500μg/次)免疫组(10只)。到达试验终点时,测定大鼠的平均肺动脉压,比较大鼠肺组织病理改变。结果:所有经膜突蛋白免疫的大鼠均产生抗膜突蛋白抗体。实验终点时低剂量组和高剂量组大鼠的平均肺动脉压力( mean pulmonary arterial pressure,mPAP)[(20.6±2.9)mmHg,(20.7±2.3)mmHg]显著高于空白对照组[(15.5±0.6)mmHg,P=0.002,0.001]和佐剂对照组[(17.2±1.6)mmHg,P=0.03,0.013]。高、低剂量组间无显著差异(P=0.93)。佐剂对照组和空白对照组间无显著差异(P=0.065)。低剂量和高剂量组大鼠的mPAP升高不及阳性对照组显著[(33.9±4.7)mmHg,P<0.001,P=0.001]。组织病理结果显示蛋白免疫组大鼠的肺组织出现了与阳性对照组类似的小动脉血管壁肌化、炎症细胞浸润以及平滑肌增生等改变。结论:膜突蛋白免疫大鼠可让大鼠出现肺动脉高压,可能提供一种更为接近CTD-PAH发病机制的动物模型建立方法。

    作者:王为;王迁;李梦涛;曾小峰 刊期: 2015年第08期

  • 鼠伤寒沙门菌SL1344株sipB和crp基因缺失对其侵袭力影响的比较

    目的::为探讨sipB和crp基因对侵袭能力的影响。方法:以鼠伤寒沙门菌SL1344株sipB和crp缺失株为研究对象,进行生物学特性以及体内外侵袭力的研究。结果:生物学特性结果表明,sipB缺失株生化特性和亲本菌株相比没有发生明显的变化,而crp缺失株失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,并且生长速度较亲本菌株相比发生了显著的降低。体内侵袭力结果表明两个实验组小鼠肝脏和脾脏分离到的细菌数目均低于对照组,体外感染HeLa细胞结果显示sipB缺失菌株组的黏附率和侵入率较crp组和对照组均发生了显著的降低。结论:以上结果表明sipB基因在细菌侵染机体过程中扮演着重要的角色。

    作者:陈松彪;张春杰;程相朝;李银聚;李静;何雷;郁川;张明亮;余祖华;贾艳艳;赵战勤 刊期: 2015年第08期

  • CCR3在哮喘小鼠气道组织Muc5 ac表达中的作用

    目的::探讨CCR3在哮喘小鼠气道黏蛋白5ac(Muc5ac)表达中的作用。方法:将50只清洁级BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松干预组、SB328437干预组及溶剂对照组二甲基亚砜组,各10只。测定BALF中细胞总数、分类,ELISA检测IL-4、TNF-α,肺组织HE染色,免疫组化和RT-PCR检测Muc5ac、CCR3的表达。结果:在BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、IL-4, TNF-α水平、AB-PAS 阳染面积、黏蛋白 Muc5ac、CCR3蛋白 IOD 及 Muc5ac mRNA、CCR3 mRNA表达方面,哮喘组与地塞米松干预组、SB328437干预组,具有统计学差异( P<0.01或P<0.05)。结论:SB328437可抑制肺组织CCR3表达,进而抑制Muc5ac的表达和分泌,从而控制气道炎症。

    作者:王涛;张建勇;王秀丹;郑飞彦;杨红霞 刊期: 2015年第08期

  • 《中国免疫学杂志》关于彩图处理的有关说明

    《中国免疫学杂志》的来稿均一经采用,来稿所附图片根据具体需要,酌情制作彩图,彩图制作费包含在该稿件的版面费中,一并开具发票,望周知!

    作者:《中国免疫学杂志》编辑部 刊期: 2015年第08期

  • Toll样受体的内源性激活在糖尿病及糖尿病肾病中的作用--TLRs表达、激活促进DM和DN的发生、发展

    近年来,随着人们生活水平的提高,饮食习惯的改变,平均寿命的延长,糖尿病( Diabetes mellitus, DM)的发病率明显增高。糖尿病肾病( Diabetic ne-phropathy,DN)是在糖尿病病程中出现的以蛋白尿、肾功能不全等肾脏病变为特征的疾病,是糖尿病常见的并发症之一。越来越多的人认识到糖尿病肾病是由新陈代谢紊乱、蛋白质过载和血流动力学异常激活了炎症因素而导致的。 Toll 样受体( Toll-like receptors,TLRs)是一种新的病原体相关分子模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs),识别高度保守的微生物组分-病原相关分子模式( Pathogen-associated molecular patterns, PAMPS ),同时也是一种损害相关的分子模式家族识别受体。迄今为止,在人类基因组中已发现11个 TLR成员。关于TLR新的认识有:(1) TLRs被非微生物来源的内源性配体激活,即损伤相关分子模式( DAMPs ),其参与了非感染性炎症的发生[1];(2) TLR在肾脏固有细胞和白细胞中的表达促进各种急慢性肾脏疾病(CKD)的发生[2];(3)单核细胞TLR2和TLR4的过表达与T1DM和T2DM患者血红蛋白HbA1C的水平和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)呈正相关[3-5]。鉴于此,我们综述TLR信号激活与DM和DN的关系及对其的作用和影响。

    作者:袁婷;关晓菲;卢文冉(综述);尹晓琳;魏琳(审校) 刊期: 2015年第08期

  • CXCL12及其受体在非小细胞肺癌脑转移中的研究进展

    NSCLC是全球致死率高的肿瘤之一[1],尽管目前手术、放化疗技术已有很大发展,但死亡率仍居高不下,五年生存率只有15%[2],患者多死于局部浸润和远处扩散,其中三分之一的患者合并脑转移。局部晚期非小细胞肺癌( locally advanced NSCLC, LAD-NSCLC)中,约17%~38%的患者在诊断两年内发生了脑转移[3]。 NSCLC在生长和播散中,表达了一些趋化因子及其受体,如CCR7、CXCR3、CCL21等。随着分子病理学的发展,已发现趋化因子CXCL12(又称为 SDF-1,stromal-derived factor-1)及其受体可调控NSCLC的增殖、侵袭、转移,并在脑转移中发挥重要作用。

    作者:董婕;李芳 刊期: 2015年第08期

  • 猪苓多糖诱导M2亚型巨噬细胞向M1巨噬细胞转化

    目的::研究猪苓多糖对IL-4诱导的M2亚型巨噬细胞膜表面分子的阳性表达率的影响和相关炎症因子的作用。方法:实验分为5组:空白对照组,模型组,猪苓多糖低、中、高剂量组(50、100、200μg/ml)。用20 ng/ml的IL4-诱导为M2亚型巨噬细胞,采用流式细胞术检测CD206、CD16/32阳性表达率,实时荧光定量PCR( qRT-PCR)检测相关因子mRNA表达量,造模成功后予猪苓多糖干预M2亚型巨噬细胞,检测猪苓多糖对巨噬细胞膜分子的影响和相关因子的mRNA的影响。结果:IL-4可以稳定建立M2亚型巨噬细胞模型,猪苓多糖可以明显提高CD16/32、CD40的阳性表达率,并显著增加相关炎症因子的表达率。结论:猪苓多糖可以逆转M2亚型巨噬细胞为M1巨噬细胞,提高巨噬细胞的免疫功能。

    作者:江泽波;赵晋;李思明;胡金萍;曾星 刊期: 2015年第08期

  • K652重组表达IL-6基因对NK细胞表型和功能的影响

    目的::为了研究表达IL-6的重组K562细胞对自然杀伤细胞( NK)细胞的扩增数量、表型和功能的影响。方法:根据人类IL-6 cDNA的5′端序列,设计PCR引物以K562细胞cDNA文库的DNA为模板进行扩增,表达,转染,在K562细胞上表达IL-6基因,构建重组的K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞( PBMC)为扩增培养对象,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。流式细胞仪分析NK细胞表型。将NK细胞作用到K562细胞,对其杀伤性进行功能分析,51 Cr释放实验检测NK细胞对K562细胞杀伤水平的影响。结果:成功构建了表达IL-6的重组K562细胞,和PBMC共同孵育后,培养体系经过21 d的刺激后,IL-6重组K562细胞诱导PBMC扩增,CD56+CD16+CD3-细胞数量比诱导前扩增了(760±18)倍,CD56+CD16+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的6%±0.4%,扩增后第3组结果比未扩增的多了91%±2%。细胞毒实验表明,在NK效应细胞∶K562靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了92%±2%。结论:本方法以重组K562为刺激细胞,能够实现NK细胞体外的大规模制备,建立了优化的NK细胞体外扩增方法,且扩增的细胞杀伤K562细胞的活性较好。对于NK的大量扩增和应用于临床具有重要的指导意义。

    作者:李登瑞;杨永辉;李辉;郭素敏;朱桂云;李秀武;耿书军;赵荣娣;任雪飞;高莉;辛欣 刊期: 2015年第08期

  • microRNA在调节变应性疾病Th1/Th2平衡中作用的研究进展

    目前认为, CD4+辅助性T淋巴细胞Th的两个亚群Th1/Th2细胞失衡对变应性炎症的发生起着关键作用[1]。正常机体的Th1/Th2细胞及细胞因子处于动态平衡,发生变应性疾病时,机体的Th1/Th2细胞失衡,Th0细胞向Th2细胞的优势分化,表现为Th2>Th1免疫反应,从而引起变应性炎症[2]。实验证明未受抗原刺激的成熟Th0细胞经变应原刺激后向Th1或Th2细胞分化的极性受到细胞因子及转录因子等的调控[3]。但整个体系非常复杂,具体机制还不完全清楚。 microRNA可在转录后水平调节多基因表达,直接或间接调节Th1/Th2的平衡。

    作者:赵振安(综述);曹忠胜(审校) 刊期: 2015年第08期

  • 第八届全国中医药免疫学术研讨会通知

    由中国免疫学会中医药免疫分会、《中国免疫学杂志》和河南免疫学会中医药免疫专业委员会联合主办,河南中医学院第一附属医院承办的“第八届全国中医药免疫学术研讨会”拟于2015年9月在河南省郑州市召开。会议采取专家讲座和学术交流相结合的形式。

    作者: 刊期: 2015年第08期

  • 肝脏炎症反应与肝再生关系的研究进展

    肝脏作为大的消化腺,一方面容易受到各种各样由代谢物、毒性物质、微生物等引起的损伤,导致肝细胞死亡并诱导炎性细胞的募集,诱发炎症反应。另一方面,肝脏具有强大的再生能力。肝切除手术或毒物造成肝损伤后,残肝细胞能迅速由静止状态进入细胞周期,通过DNA合成和有丝分裂补偿丢失的肝组织,恢复肝脏功能[1]。在多种肝脏炎性疾病,如暴发性肝炎和肝硬化中,肝再生是肝组织的急、慢性炎症反应引起细胞损伤后的结果。因此肝实质炎症反应和再生经常在不同的临床情况下并存,且肝再生能力的强弱对于肝脏疾病的发展、转归和术后生存率有着重要的临床意义。然而,发生在各种肝脏疾病中能引发组织损伤的肝炎症反应与肝再生的关系目前尚不明了,如肝炎症反应是否同时参与肝再生过程的启动和调控。本文将综述炎症反应中的主体细胞及炎症介质对肝再生的调控作用,报道肝炎症反应与再生关系的研究进展。

    作者:王改平;李晓芳;陈莎莎;靳伟;徐存拴 刊期: 2015年第08期

  • CD11 c分子及其在抗肿瘤免疫中作用的研究进展

    树突状细胞( Dendritic cells,DCs)是目前所知体内功能强大的专职抗原提呈细胞,是连接天然免疫应答和适应性免疫应答的桥梁,也是体内唯一能够激活初始 T 细胞的 APC ( Antigen presenting cell )。 CD11 c 被称为补体受体4( Complement receptor,CR4),是黏附分子CD11/CD18家族中的一员,属于Ⅰ型跨膜糖蛋白,高表达于髓系 DCs 表面[1]。 CD11 c作为一正性调控因子,参与DCs的黏附、迁移,抗原的识别和呈递,并激活CD4+、CD8+T细胞,调控免疫应答发生,在感染和抗肿瘤免疫中发挥重要作用。

    作者:张洁 刊期: 2015年第08期

  • 外周血滤泡辅助性T细胞与B细胞在酒精性股骨头坏死患者中的作用

    目的::探讨酒精相关性股骨头坏死患者外周血滤泡辅助性T细胞、B细胞、白细胞介素( IL)-21的表达水平与疾病临床相关指标的相关性及其在酒精性股骨头坏死发病机制中的作用。方法:流式细胞仪测定酒精性股骨头坏死患者和健康对照组外周血中Tfh和B细胞的水平;ELISA法检测患者和健康对照血清中IL-21的表达水平。结果:酒精性股骨头坏死患者外周血CD19+B细胞、CD86+CD19+B细胞、CD95+CD19+B细胞Tfh细胞、PD-1+Tfh细胞和IL-21+Tfh细胞百分率高于对照组;外周血Tfh细胞百分率与CD19+B细胞百分率呈正相关,外周血IL-21+Tfh细胞百分率与CD86+CD19+B细胞百分率呈正相关,CD27+CD19+B细胞较对照组明显减少,CD86+CD19+B细胞百分率与股骨头坏死评分呈正相关。结论:酒精性股骨头坏死患者外周血Tfh细胞及B细胞水平显著增高,CD86+B细胞与疾病进展具有相关性,且Tfh细胞与B细胞的变化在疾病中具有显著的相关性,提示Tfh-B细胞相互作用在酒精性股骨头坏死的发病过程中发挥着重要作用。

    作者:丁福鹏;戚长林;高辉;刘易军;王井;单玉兴 刊期: 2015年第08期

  • 巨细胞病毒感染后新生鼠RORγt、IL-17的表达及意义

    目的::通过比较巨细胞病毒感染新生鼠与正常新生鼠脾脏组织维甲酸相关孤儿核受体γt ( RORγt )与IL-17的表达水平,为巨细胞病毒感染的发病机制提供实验依据。方法:24只新生BALB/c小鼠出生3 d时腹腔注射MCMV病毒悬液制备MCMV播散性感染模型(即病毒组),分别于造模后第3、7、14天处死8只小鼠,取脾脏组织备用;对照组(24只)腹腔注射等量的无菌生理盐水,同病毒组分为3个时点亚组。应用半定量RT-PCR及Western blot 检测各组脾脏MCMV DNA、RORγt mRNA、IL-17 mRNA及RORγt蛋白的表达情况。结果:病毒组脾脏组织中可见MCMV DNA表达,而对照组没有,病毒组RORγt mRNA、IL-17 mRNA及RORγt蛋白表达随着感染时间的延长,表达逐渐增加,且同时间点表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。结论:IL-17与RORγt可诱导巨细胞病毒的炎症反应,参与MCMV的发病机制。

    作者:冯晶晶;李慧慧;孙婷婷;于乔;王瑞妍;王军 刊期: 2015年第08期

  • 丹参酮增强化疗药物拮抗黑色素瘤效果的研究

    目的::研究中药制剂丹参酮( TA)和抗肿瘤药物的卡铂( CA)联合应用对黑色素细胞瘤的抑制作用。方法:建立肿瘤模型后,分为模型组、丹参酮组、卡铂组、丹参酮+卡铂组,同时设立正常鼠为空白组。不同组别的小鼠分别给予腹腔注射PBS、丹参酮、卡铂、丹参酮和卡铂,空白组小鼠不做任何处理。结果:丹参酮+卡铂组小鼠的肿瘤体积和肿瘤质量显著小于丹参酮组、卡铂组和模型组( P<0.05);卡铂组小鼠的肿瘤体积和肿瘤质量显著小于丹参组和模型组( P<0.05);丹参酮+卡铂组小鼠体重增加显著好于丹参酮组和卡铂组( P<0.05)。结论:丹参酮和卡铂联合用药可以产生更好地抑制B16黑色素瘤增殖的效果。

    作者:于泳;张林林;秦治刚;武月婷;谢凤洋;杨煜 刊期: 2015年第08期

  • 肠道微环境与肝脏疾病

    肝脏在行使其消化代谢功能的同时还有一系列的免疫调控机制,以保持免疫耐受,阻止来自肠道的有害刺激进入全身的血液循环。肠道中富含微生物抗原和代谢产物的回流血会通过门静脉进入肝脏,正常生理条件下,肝脏会清除回流血中潜在的危险信号,维持免疫耐受,保持稳态。一旦既有的平衡状态被打破,肠道微生物环境改变,经回流血进入肝脏的肠道的微生物抗原便会引发肝脏中的炎症反应,持续的炎症刺激使肝脏发生病理损伤并导致更为严重的肝脏疾病。本文论及三种不同种类的肝脏疾病以及肝脏疾病演化的三个不同阶段,总结了近几年关于肠道微环境在肝脏疾病发生发展的过程中所发挥作用的新研究成果,以为更加全面的认识肝脏疾病的发病机制,从而制定更加完善的诊断治疗方案提供理论线索。

    作者:马洪第;廉哲雄 刊期: 2015年第08期

  • 戊二醛固定的异种血管的先天性免疫机制研究

    目的::系统进行戊二醛固定的异种血管的免疫学研究及其动物在体排斥反应强度。方法:实验分两组:新鲜未处理组和戊二醛固定组。每一组分术后第4天、12天、30天和60天四个时间点。分别通过对20例新鲜猪肺动脉、20例戊二醛固定的异种血管进行大鼠皮下包埋,在术后第4天、12天、30天和60天进行观察,利用病理学和免疫组织化学等技术,全面系统比较了两组病理学、巨噬细胞CD68、补体C3、先天性抗体IgG形态性变化及其IOD值变化。结果:HE染色结果显示新鲜组在术后第12天、30天染色较强,戊二醛组以上指标术后第12天、30天染色比新鲜组较弱。 CD68、C3、IgG值变化结果相似;免疫组织化学累积光密度( Integral optical density ,IOD)定量检测结果显示:IOD值术后第4天开始升高,到第12天、30天达到峰值,第60天维持或下降。结论:先天性免疫在探索异种免疫排斥机理有重要作用;戊二醛固定的异种血管免疫原性下降,但是仍然具有免疫原性,需要探索更好的方法来削弱排斥反应。

    作者:张颖;龚达;辛毅;崔巍;刘洁琳;万居易;刘飒;李殿坤;杜兰平;辛志飞;许秀芳;LI Wen-Bin 刊期: 2015年第08期

  • ADRB2基因rs1042713位点多态性与中国人群哮喘易感性关系的荟萃分析

    目的::应用meta分析的方法综合评价ADRB2(β-2肾上腺素能受体)基因的SNP位点[ Arg16Gly ( A46G, rs1042713)]多态性与中国人群哮喘易感性的关系。方法:检索Pubmed、Embase、Web of Knowledge、中国知网、万方、维普等数据库,收集研究ADRB2基因多态性与中国汉族人群哮喘易感性的相关文献。采用Stata12.0软件对符合纳入标准的研究做meta分析。结果:共纳入12篇文献,累计哮喘病例2193例,对照组2033例,所有入选文献均满足Hardy-Weinberg遗传平衡定律。 Meta分析结果显示,中国人群ADRB2基因rs1042713位点突变基因G携带者( GG +GA)的哮喘发病风险较野生型纯合子(AA)比较,总体并未显著增加(OR=1.08,95%CI=0.82~1.44),但亚组分析显示,G携带者儿童哮喘的发病风险相对增高(OR=1.69,95%CI 0.99~2.87),而成人哮喘的发病风险则相对降低(OR=0.88,95% CI 0.68~1.15)。结论:ADRB2基因rs1042713位点基因多态性与中国儿童哮喘易感性存在一定的相关性,携带G突变基因者可相对增加儿童哮喘的患病风险。

    作者:陈敬林;黄湘;谭家余;万志丹;吴学威;李冬秀 刊期: 2015年第08期

中国免疫学杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中国免疫学会,吉林省医学期刊社