一种新的肿瘤相关蛋白-OVA12和抗体制备及其初步应用

尤强；程琳玲；王颖；王树军；张惠珍；沈天伟；葛海良

关键词：OVA12蛋白, 原核表达, 多克隆抗体, ELISA

摘要：目的制备原核表达的OVA12纯化蛋白,研究正常人与肿瘤患者血清中抗OVA12抗体水平的差异.方法克隆OVA12的cDNA至pGEMT载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pET32a(+)中,并转化至E.coli表达菌BL21(DE3)中,诱导6×His融合蛋白表达,经Ni2+亲和层析及胶回收技术纯化蛋白,并将蛋白免疫动物制备兔抗OVA12蛋白抗体;采用ELISA、Dot blot、Western blot法比较正常人及肿瘤患者血清中抗体水平的差异.结果获得纯化OVA12蛋白及高滴度的兔抗血清;ELISA法测定显示,正常人组OD均值为0.17±0.07,肿瘤患者组OD均值为0.32±0.15,两组之间有显著性差异(P＜0.0001),并选择其中样本经Western blot、Dot blot加以进-步证实.结论成功克隆OVA12基因,并获得纯OVA12蛋白和高滴度的兔抗血清;ELISA等方法测定肿瘤患者与正常人血清中OVA12抗体水平有明显差异,为临床检测的应用奠定基础.

中国实验诊断学杂志相关文献

血清胆汁酸测定在黄疸鉴别中的应用

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定血清中胆汁酸亚组份的方法及探讨几种黄疸患者的胆汁酸各组份水平的变化.方法建立HPLC法测定胆汁酸亚组份的方法,对所建立的方法进行精密度、准确度、灵敏度及线性范围的评价.用所建立的HPLC法分离、测定几种黄疸患者血清中的6种胆汁酸并进行比较.结果HPLC法测定胆汁酸各组份的低检测限为3.125μmol/L;在浓度为3.5～100μmol/L内,其日内变异小于10%,日间变异小于15%(除TLCA外),各胆汁酸的回收率在93.3%～106.1%之间(除TLCA外).几种黄疸患者的胆汁酸均高于正常对照组.结论所建立的HPLC法适用于临床血清胆汁酸的分析.胆汁酸亚型分析有助于黄疸的鉴别诊断.

作者：李贵星；李萍刊期： 2004年第02期
胶体金免疫层析法与酶联免疫吸附法结合使用在乙型肝炎检测中的应用

胶体金免疫层析法与酶联免疫吸附法(ELISA)单独用于乙型肝炎的检测,已广泛应用于临床.由于二者标记物、灵敏度、特异性等方面的不同,在检测方面体现出不同的优缺点,二者结合使用,在乙型肝炎检测中,尤其在乙型肝炎特殊模式出现时,给临床检验带来了很大的方便.

作者：庄严；李绪黎刊期： 2004年第02期
P53家族成员P73研究进展

由于p53基因在近半数的人类肿瘤细胞中频繁缺失和突变而倍受重视.大量研究表明,野生型p53基因活性缺失与肿瘤发生密切相关.因此,p53基因被视为经典的抑癌基因.近年来,随着对p53基因广泛深入的研究,p53家族的其他成员不断被发现,其中p73基因是p53基因家族中被发现的第一个成员.由于p73蛋白与p73蛋白在序列上的同源性和功能上的相似性,p73基因作为p53基因家族的一个新成员,一面世即被作为候选抑癌基因,受到各国研究者的广泛重视.

作者：李雨静；高善玲刊期： 2004年第02期
HPV16感染对食管癌及P16、P53基因表达的影响

目的通过研究食管癌的HPV16感染阳性率及抑癌基因P16、P53表达的影响,探讨HPV16感染在食管癌病因学的作用.方法取食管癌手术切除标本30例及内镜下取慢性食管炎并非典型增生标本和正常食管黏膜标本各30例,应用PCR方法检测各标本HPV16的感染阳性率,并用免疫组织化学方法分别检测各组中的P53和P16基因突变率.结果食管癌组HPV16感染阳性率46.67%显著高于癌前病变组23.33%和正常组3.33%(P＜0.05),癌前病变组与正常组的HPV16感染率比较差异有显著性(P＜0.05).食管癌组中HPV16阳性的P53、P16突变率85.71%、78.57%显著高于HPV16阴性的P53、P16突变率50.0%、37.5%(P＜0.05),在癌前病变组HPV16阳性组与阴性组的比较差异无显著性,在正常对照组中未发现有突变.结论HPV16感染在粤西食管癌的发病中具有明显的相关性,它可能通过引起P53、P16突变而发挥作用.

作者：陈捷；周宇；李杰；吴平刊期： 2004年第02期
胶原纤维与软骨细胞体外培养的实验研究

目的研究应用胶原纤维作为组织工程技术中细胞培养支架的可行性.方法未经预湿和经预湿处理的胶原纤维支架与人胚关节软骨细胞体外培养,采用光镜和电镜观察其亲水性及对细胞吸附力和细胞功能的影响.结果软骨细胞均匀地分布于胶原纤维支架内,经预湿处理后的支架细胞分布更为迅速均匀;软骨细胞吸附于支架纤维表面,细胞生长代谢旺盛,合成分泌细胞外基质.结论胶原纤维支架具有良好的亲水性,有利于软骨细胞的吸附和生长,可以作为组织工程技术中细胞培养的支架材料.

作者：陈昕；赵雷；闫晓明；周余来；颜炜群刊期： 2004年第02期
外周血B淋巴细胞免疫表型分析及临床应用

目的了解中国健康成人外周血B淋巴细胞各种免疫表型标志的参考范围,为临床正确诊断B淋巴细胞增殖性疾病提供基础信息.方法采用全血溶解法和SSC/CD19设门技术以三色流式细胞术对来自41位健康成人EDTA-K2抗凝静脉血进行免疫表型分析.结果正常人外周血B淋巴细胞几乎全部表达CD22、CD20、CD62L、CD40、CD24、CD79b、CD79a、和FMC-7分子,而CD11a、CD80、CD103、CD10、CD40L、CD54、CD95L、CD86、和CD95几乎不表达(平均阳性率＜10%=),CD18、CD44、CD23、CD5、CD11c、和CD43的表达较低,78%的B细胞为IgD阳性,κ/λ比例为1.26.结论中国人和西方人群之间在某些B细胞标志方面存在的差异,在临床工作中不宜直接套用国外的标准.对B淋巴细胞增殖性疾病的免疫分型及MRD检测,必须考虑国内人群正常B细胞群体中各种标志的表达情况.

作者：徐瑞龙；郑昭璟刊期： 2004年第02期
ALL自身外用血干细胞移植术后由MDS转为AML

患者,女,15岁,于1997年7月11日头晕乏力,颈部淋巴结肿大,肝、脾未及.血常规:WBC13.2×109/L,Hb67 g/L,PLT89×109/L,原始,幼稚淋巴细胞占65%,成熟淋巴细胞占17%;骨髓象:骨髓增生极度活跃,原始、幼稚细胞占0.97,POX阳性率0%,PAS阳性率55%,为粗颗粒型,ANAE阳性率88%(胸腺样).形态多为圆形,大小不一,多数偏大;核圆形、椭圆形,可见凹陷、折叠,核染色质较粗,致密或疏松,核仁0～3个,较清晰;浆量中等,染淡兰色,确诊为ALL-L2.予VDLP方案化疗1疗程达完全缓解,此后巩固化疗6个疗程,一直未复发,处于完全缓解状态.

作者：于茂莲；刘源刊期： 2004年第02期
P波离散度与阵发性心房纤颤的关系

P波离散度(Pd)是心房内存在部位依从性非均质电活动的标志,是引起房颤的重要的电生理学基础.大P波时限延长是房内或房间传导延缓的标志,而P波离散度是近年发现和提出的预测房性心律紊乱、阵发性心房纤颤的体表心电图一个新指标[1].对预测心房纤颤的发生有较高的敏感性和特异性[3].本研究观察了阵发性心房纤颤患者的大P波时限(Pmax)和Pd,并与非心房纤颤的患者比较,旨在探讨它们在预测阵发性心房纤颤方面的意义.

作者：王旭渤；于水刊期： 2004年第02期
两种不同AFP启动子控制下表达HIV vpr基因的重组非复制型腺病毒获得及鉴定

目的构建及包装由全长5.1kbAFP启动子和低氧反应元件(HRE)与0.3kbAFP启动子两者组合的杂合0.3kbAFP启动子控制下表达HIV vpr基因的两种重组非复制型腺病毒.方法采用细菌内同源重组腺病毒载体制备方法和PacI酶切、PCR、Southern Blot鉴定方法.结果构建及包装出由这两种AFP启动子控制下表达HIV vpr基因的重组非复制型腺病毒,经PacI酶切、PCR和Southern Blot基因整合分析证明构建成功.结论我们成功构建了的全长5.1kbAFP启动子和HRE与0.3kbAFP启动子两者组合的杂合0.3kbAFP启动子控制下表达HIV vpr基因的重组非复制型腺病毒,为使HIV vpr基因更好的用于肝癌特异性基因治疗提供了可能和基础.

作者：魏强；李凡；王健伟；郭丽；洪涛刊期： 2004年第02期
受试者工作特性曲线(ROC)评价空腹血糖对糖尿病的诊断价值

1997年由美国糖尿病学会(ADA)提出并随后被WHO接受的糖尿病诊断新标准中,将空腹血糖(FBG)的医学决定水平由原标准的≥7.8 mmol/L降低为≥7.0 mmol/L,不再推荐口服葡萄糖耐量试验(OGTT)作为实验室诊断标准,但仍保留2 h OGTT或餐后2 h(PG2h)血糖≥11.1 mmol/L为诊断标准[1].中华医学会糖尿病学会(2000年)有保留地接受了这一新的诊断标准,因认为OGTT有较好的灵敏度所以仍保留OGTT作为诊断标准[2].为验证FBG≥7.0 mmol/L对糖尿病的诊断灵敏度和特异性,我们根据1999年1月至2001年7月在本院诊治的916例糖尿病患者的实验室资料,以受试者工作特性曲线(ROC)作了分析和评价.

作者：汪一萍刊期： 2004年第02期
肾病综合征患者的血小板糖蛋白检测意义

目的通过测定肾病综合征(NS)患者血小板糖蛋白及血清脂质、凝血指标,旨在为临床治疗NS提供有用的参考指标.方法利用流式细胞仪检测了45例NS患者(其中伴静脉血栓者9例,无静脉血栓者36例)的血小板糖蛋白(CD62p、CD63),同时仪器法测定了Plt、TC、HDL、LDL、TG、PT、APTT、TT、Fib.结果NS患者CD62p、CD63、Plt、TC、LDL、TG、Fib显著高于正常对照组,且CD62p、CD63、Plt、TC、LDL、TG、Fib等伴静脉血栓者显著高于无静脉血栓组;但NS患者HDL、APTT明显低于正常对照组,PT、TT变化并不明显.血小板CD62P与Plt、PT、APTT、Fib成正相关,CD63与Plt、APTT、Fib成正相关,且血小板CD62P与CD63之间呈正相关性.结论NS患者学习包办糖蛋白测定,对NS病情分析和预防静脉血栓有重要的临床参考价值.

作者：邱莲女；周永列；林慧君刊期： 2004年第02期
细胞角蛋白片段19和其他生化指标的检测在肺癌诊断中的应用

目的探讨胸水和血清细胞角蛋白片段19(cytokeratin 19 fragment,CK-19)和其它生化指标的检测在肺癌特异性实验室诊断中的临床意义.方法采用ELISA法检测45例临床确诊的各种肺癌患者、50例非肿瘤性肺及支气管疾病患者血清和胸水中CK-19水平,30例健康体检者血清CK-19水平,同时采用本室常规方法测定了以上患者血清及胸水和健康对照组血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及其同功酶(LD-1)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)、C反应蛋白(C-response protein,CRP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)和白蛋白(albumin,ALB)水平,并进行相关性分析.结果肺癌患者血清和胸水中CK-19、CEA、LDH和LD-1水平均明显高手非癌性肺疾病患者和正常健康对照组(P＜0.05),而ADA水平均低于非癌性肺疾病患者和健康对照组(P＜0.05).非癌性肺疾病患者血清和胸水CRP水平明显高于肺癌组和健康对照组(P＜0.05).相关性分析显示,胸水中CK-19水平与血清CK-19水平高度相关(r=0.868,肺癌组;r=0.5462,非癌性肺疾病组).胸水和血清CK-19对肺癌的诊断敏感性、特异性和准确性分别为93.3%和71.1%、91.7%和87.5%、92%和81.6%.结论胸水和血清CK-19检测对肺癌的诊断是一个较好的指标,联合检测其它相关生化指标有助于临床诊断.

作者：陈涛；钟淑卿；林勇平；刘忠民；陈柏铭刊期： 2004年第02期
正常成人骨髓巨核细胞和其他有核细胞分类计数报告

目的进一步探讨正常成人骨髓巨核细胞和其他有核细胞分类计数的参考值.方法骨髓液用EDTA-K2液抗凝,吸取5μl制成约2×3.5或2.5×3 cm(7 cm2)的厚薄涂片,用光镜分类计数全片巨核细胞换算成涂片单位面积,其他有核细胞计数500只换算成百分比.结果巨核细胞在一个单位面积(1.5×3 cm,4.5 cm2)中为17～102(51.00±26.25)只,习惯涂片多数面积(7 cm2)为26～166(79.12±40.83)只和每1μl为5～33只.粒系细胞总数为45.8～60.2(54.08±4.50)%,有核红细胞为17.0～33.2(25.46±4.64)%,粒红比值为1.4～3.4:1(2.19±0.57:1).结论积累正常人骨髓巨核细胞和其他有核细胞参考值有助于提高细胞形态学的正确分析和诊断.

作者：郭云武；卢兴国；李早荣；朱蕾；赵小英；徐根波；许晓华刊期： 2004年第02期
IL-12及IL-12P40对NK抗肿瘤功能的免疫调节

目的通过对正常人及肿瘤患者血清中IL-12以及IL-12P40含量的检测,观察其分子对NK细胞抗肿瘤细胞细胞毒效应的影响,探讨IL-12、IL-12P40分子在NK细胞抗肿瘤功能上的免疫调节作用.方法ELISA酶联免疫法检测IL-12、IL-12P40分泌水平以及MTT释放法检测NK细胞毒活性.结果①肿瘤患者外周血PBMC中CD3+、CD56+细胞阳性率低于对照组(P＜0.05).②肿瘤患者NK细胞对NK敏感细胞K562以及NK不敏感细胞Raji和Ddaudi的杀伤活性均低于正常对照组(P＜0.05).③正常人外周血NK细胞经含肿瘤患者血清培养后,NK细胞杀伤活性明显下降(P＜0.05).④在肿瘤患者血清中,IL-12分泌水平为143.31±0.93pg/ml,高于对照组84.97±3.7pg/ml(P＜0.05);IL-12P40含量为224.90±0.7pg/ml,高于对照组32.56±0.7pg/ml(P＜0.05).⑤正常人NK细胞经不同浓度(1μg/ml、5μg/ml以及10μg/ml)IL-12诱导后,在5μg/ml、10μ/ml浓度NK细胞杀伤率均高于对照组;在肿瘤患者中,仅高剂量(10g/ml)IL-12组的杀伤率高于对照组.⑥这种诱导增高的NK细胞杀伤率可被外源性IL-12P40的加入而下调.结论肿瘤患者血清中IL-12P40含量的增高可能与肿瘤密切相关的NK细胞功能下降有关.

作者：张继英；马安伦；聂红；柏峻；余奇文；张冬青刊期： 2004年第02期
反应性噬血细胞综合征19例的临床及实验分析

反应性噬血细胞综合征(reaction hemophagocytic sydrome,RHS)是由T细胞介导的组织细胞增生异常的综合征.其临床特点为发热、肝脾和(或)淋巴结肿大、全血细胞减少、肝功能异常和凝血机制障碍.我们对近年来所诊断的19例噬血细胞综合征的临床及实验室检测结果进行回顾总结,现将结果报告如下.

作者：凌励；周道银；惠小阳；林紫云；孙艳刊期： 2004年第02期
短暂脑缺血发作患者血小板膜糖蛋白CD61、CD62P表达及阿斯匹林干预的临床研究

目的观察短暂脑缺血发作(TIA)患者外周血血小板膜糖蛋白CD61、CD62P的表达及其临床意义,并探讨阿司匹林对血小板表面膜糖蛋白的作用.方法应用流式细胞术,用单克隆抗体作分子探针测定20例TIA患者的CD61、CD62P的分子表达,包括进展及未进展为脑梗塞的病人,并依其是否常规口服阿司匹林将其分两组,患者组内及患者与18例健康成年人所测结果进行比较.结果(1)TIA组血小板CD62P阳性表达率与健康对照组比较P＜0.01;(2)进展为脑血栓形成的患者与未进展为脑血栓形成的患者比较P＜0.01;(3)TIA组常规口服阿司匹林患者与未常规口服阿司匹林的患者相比P＜0.01;(4)TIA组男性与女性血小板CD62P阳性表达率相比P＞0.05.结论血小板活化是短暂脑缺血发生的重要因素,且活化程度越高,越容易形成血栓,而CD61、CD62P能较好反映血小板活化,故可较早预测TIA并估计其演变趋势;同时,阿司匹林对CD61、CD62P表达有较为明显的抑制作用.

作者：陈加俊；孙景春；韩雪梅刊期： 2004年第02期
筛查非综合征性耳聋患者的内耳特异表达蛋白otospiralin基因突变

目的Otospiralin基因是表达于内耳支持细胞,该基因表达下调可导致耳聋.本文旨在调查otospiralin这种特异表达于耳蜗组织的基因突变是否会导致人类非综合征性耳聋.方法采用PCR-SSCP的方法,对151例先天性耳聋的病例和1个感音神经性耳聋家系进行otospiralin编码区序列的基因突变位点的筛选.结果150例患者和50例正常人样本有正常PCR扩增产物,但SSCP分析没有一例有异常迁移带.结论表达于耳蜗间质的成纤维细胞的otospiralin基因没有与耳聋连锁的突变位点.推测这个基因在内耳的表达缺乏可能是毛细胞丢失的主要原因.

作者：王苹；周余来；杜波；杜宝东刊期： 2004年第02期
乳腺癌端粒酶活性原位检测与雌、孕激素受体的相关性研究

乳腺癌为一常见病,多发病,近年来其发病率和死亡率均呈上升趋势.但其与乳腺纤维腺瘤,纤维腺病的诊断和鉴别诊断还存在一些棘手问题,给临床治疗和预后评估造成困难.同时,据文献报道端粒酶活性,雌激素与乳腺癌组织发生关系密切[1,2],故我们采用端粒酶活性原位标记技术(ISLT)对乳腺癌进行临床病理研究,探索其在病理诊断上的意义及其与雌激素受体(ER),孕激素受体(PR)之间的关系.

作者：曹修淮；冯德云；姚岐；何小乔；李璇刊期： 2004年第02期
急性淋巴细胞性白血病DNA含量与细胞增殖活性的临床意义

目的探讨DNA检测对急性淋巴细胞性白血病(ALL)诊断和治疗的临床意义.方法应用流式细胞术检测了35例急性淋巴细胞性白血病患者骨髓细胞DNA含量(DI)、倍体和细胞增殖活性(PI).结果ALL异倍体检出率为51.4%(18/35),其中亚二倍体8例,超二倍体10例;ALL组骨髓细胞G0/G1%高于对照组(P＜0.05),而S%、PI值明显低于对照组(P＜0.05).结论DNA含量检测和倍体分析对急性淋巴细胞性白血病的诊断、治疗是很有价值的临床生物学指标,有助于白血病的准确、客观诊断和判断预后.

作者：段秀梅；刘力华；谭岩；方艳秋；许淑芬刊期： 2004年第02期
聚合酶链反应-探针杂交-酶显色用于结核分支杆菌的检测

目的评价聚合酶链反应-探针杂交-酶显色方法,检测结核分支杆菌.方法收集131例活动性肺结核患者和30例非结核呼吸系疾病患者的痰标本以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查,结核菌培养、PCR-探针杂交-酶显色法、PCR-琼脂糖凝胶电泳技术检查对比.结果涂片法、培养法、PCR-探针杂交-酶显色法的敏感性分别为26.72%、41.22%、70.23%,PCR-探针杂交-酶显色法的敏感性显著高于培养法和涂片法(P＜0.01).PCr-探针杂交-酶显色法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为70.23%、70.99%,特异性分别为96.67%、86.67%,前者特异性比后者高,且PCR-探针杂交-酶显色法只检出结核分支杆菌和牛型分支杆菌.结论PCR-探针杂交-酶显色技术检测结核分支杆菌灵敏度高,特异性好,简便快速,同时能筛检非结核分支杆菌.因此,该技术具有很强的临床应用价值.

作者：熊国亮；雷建平；张慧慧；刘珍琼；周萍珍刊期： 2004年第02期