学术投稿

全自动核酸提取仪与手动提取组织DNA的效率比较

林丹义;张科平;许洁;颜黎栩;骆新兰;刘艳辉

关键词:DNA提取, 全自动核酸提取仪, 手动提取
摘要:近年,随着众多与疾病诊断、预后及治疗相关的分子标志物的出现,以石蜡组织DNA为材料进行分子水平的基因检测及筛查已成为临床诊断及相关研究的常规手段.对于各种基因分析而言,重要的是能够获得足够纯度和数量的DNA[1].DNA提取是分子生物学研究的一项基础技术,其提取的质量好坏及数量的多少直接影响到分子生物学实验的开展[2].目前病理科所使用的DNA大部分为人工提取,使用全自动核酸提取仪提取DNA者占极少数.因此,本实验由两名分子实验室技术员独立完成对全自动核酸提取仪与手动提取核酸进行提取DNA效率的验证比较.
临床与实验病理学杂志相关文献
  • 膀胱巢状变异型尿路上皮癌1例

    患者男性,58岁,因近2个月尿末尿道酸胀,有尿不尽感,夜尿2~3次人院.无肉眼血尿,无恶心呕吐,无恶寒发热,无体重下降.患者8年前在外院行经尿道膀胱肿瘤电切术,术后病理报告为低级别尿路上皮癌.此后病情一直稳定,在2016年复查时行泌尿系B超检查提示膀胱壁有稍高回声区,遂行膀胱镜检查,发现右侧输尿管开口处新生物,大小约1 cm,活检病理报告提示黏膜慢性炎.又行CT检查,报告为膀胱右侧壁异常增厚.为求进一步治疗患者再次行膀胱镜检可见左侧输尿管蠕动较好,开口正常,喷清尿,而膀胱右侧壁黏膜有异常区,面积5 cm×4 cm,大部分呈滤泡样,部分呈类菜花样改变.取病变黏膜送病理检查.

    作者:司海鹏;李惠;高丽丽;章宜芬 刊期: 2017年第12期

  • 肱骨奇异性骨旁骨软骨瘤样增生及相关病变临床、病理、影像特点对比分析

    目的 探讨肱骨奇异性骨旁骨软骨瘤样增生(bizarre parosteal osteochondromatous proliferation,BPOP)、骨软骨瘤及软骨肉瘤临床、病理、影像特点差异.方法 对右肱骨BPOP、右肱骨软骨肉瘤及左肱骨骨软骨瘤各1例进行临床、病理、影像学表现,进行对比分析并随访.结果 BPOP、骨软骨瘤患者无明显疼痛,软骨肉瘤患者伴剧烈疼痛,镜下BPOP由编织骨、钙化性软骨和纤维组织3种成分无规则排列而成,常出现奇异性软骨细胞及特征性“蓝骨”,影像学示BPOP病灶位于骨表面,病灶与附着骨之间一般无髓腔相通,可与骨软骨瘤及软骨肉瘤鉴别.结论 BPOP是一种罕见的、良性的骨软骨瘤样病变,与软骨肉瘤、骨软骨瘤易混淆,结合影像学与组织学可以明确诊断.

    作者:杨直;吴婺松;张洪生;刘碧英;黄培生 刊期: 2017年第12期

  • 早期胃癌中Runx-3及β-catenin蛋白的表达及临床意义

    目的 探讨Runx-3及β-catenin蛋白在早期胃癌组织中的表达及两者表达与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化EnVision两步法分别检测Runx-3和β-catenin蛋白在30例正常胃黏膜和49例早期胃癌组织中的表达.结果 Runx-3蛋白在正常胃黏膜中的阳性率(86.67%)明显高于早期胃癌组织(34.69%) (P <0.05);β-catenin蛋白在正常胃黏膜细胞膜中的阳性率(100%)显著高于早期胃癌组织(57.14%)(P<0.05),但其异位表达率(0)显著低于早期胃癌组织(75.51%)(P<0.05).早期胃癌组织中Runx-3及β-catenin蛋白表达与患者性别、年龄、肿块大小等均无关(P>0.05),但有脉管侵犯的早期胃癌组织中Runx-3蛋白细胞核阳性率显著高于无脉管侵犯者(P<0.05);有脉管侵犯的早期胃癌组织中β-catenin蛋白细胞膜表达缺失率显著高于无脉管侵犯者(P<0.05).结论 Runx-3蛋白在早期胃癌组织中的表达明显减少,提示其可能作为胃癌早期诊断的参考指标;β-catenin蛋白在早期胃癌组织中膜表达缺失而存在核/质异位表达,在脉管侵犯的早期胃癌组织中β-catenin蛋白膜表达缺失,而Runx-3蛋白细胞核阳性表达增加,提示两者与早期胃癌的脉管侵犯相关;联合检测Runx-3蛋白及β-catenin蛋白有助于早期胃癌的诊断.

    作者:张聪;曹立宇;李玉洁 刊期: 2017年第12期

  • 血管球瘤中FLi-1、h-caldesmon及collagen Ⅳ的表达及临床病理分析

    目的 探讨FLi-1、h-caldesmon及collagenⅣ在血管球瘤中的表达及不同组织学类型与临床病理指标的关系.方法 采用免疫组化EnVision法检测35例血管球瘤中FLi-1、h-caldesmon及collagenⅣ的表达.分析35例血管球瘤不同组织学分型与临床病理参数间的关系.结果 镜下见肿瘤细胞圆形或多边形,呈片状分布在血管之间或呈环状围绕在血管周围,瘤细胞边界清晰,外形规则,有时可见瘤细胞与梭形平滑肌细胞移行过渡.免疫表型:血管球瘤可表达FLi-1、h-caldesmon及collagen Ⅳ,阳性率分别为58.6%、97.1%和100%.血管球瘤的不同类型与患者性别和肿瘤体积无关,与患者年龄相关(P=0.01).35例血管球瘤中vimentin和SMA均呈(+),2例CD34呈局灶(+),1例desmin呈(+),EMA、S-100、CgA、CD68及CD99均呈(-).结论 h-caldesmon和collagenⅣ可作为血管球瘤诊断的标志物,FLi-1可作为一种辅助参考标志物,有助于血管球瘤的诊断.

    作者:杨勇;王瑞琳;徐瑾;尹海波 刊期: 2017年第12期

  • 全自动核酸提取仪与手动提取组织DNA的效率比较

    近年,随着众多与疾病诊断、预后及治疗相关的分子标志物的出现,以石蜡组织DNA为材料进行分子水平的基因检测及筛查已成为临床诊断及相关研究的常规手段.对于各种基因分析而言,重要的是能够获得足够纯度和数量的DNA[1].DNA提取是分子生物学研究的一项基础技术,其提取的质量好坏及数量的多少直接影响到分子生物学实验的开展[2].目前病理科所使用的DNA大部分为人工提取,使用全自动核酸提取仪提取DNA者占极少数.因此,本实验由两名分子实验室技术员独立完成对全自动核酸提取仪与手动提取核酸进行提取DNA效率的验证比较.

    作者:林丹义;张科平;许洁;颜黎栩;骆新兰;刘艳辉 刊期: 2017年第12期

  • 早期结直肠癌的界定

    肿瘤分早、中、晚期或者分早期和进展期,对临床正确制订治疗方案有帮助.因此,临床上比较关注患者的分期.在国内的传统教科书中早期结直肠癌的表述大多为“肿瘤局限于黏膜下层,不论是否有淋巴结转移”,以至于有的临床诊疗规范也是这样表述,引起混乱.该概念是不准确的,给非专科病理医师和临床医师造成误导.黏膜下癌如果有淋巴结转移,属于Ⅲ期(图1).Ⅲ期病变当然不属于早期结直肠癌.早期结直肠癌该如何定义呢?

    作者:来茂德 刊期: 2017年第12期

  • 胰腺实性假乳头状瘤临床病理学与术后复发/转移的相关性分析

    目的 探讨胰腺实性假乳头状瘤(solid-pseudopapillary neoplasms,SPN)的临床病理学特征与术后复发/转移的相关性.方法 收集具有完整临床及预后资料的73例手术切除的SPN标本,分析其临床病理学特征与复发/转移的相关性.结果 73例SPN,女性57例,男性16例,发病年龄7~ 68岁,平均28岁,中位年龄27岁.肿瘤平均直径6.47 cm(0.13~ 14 cm).30例SPN位于胰头、9例位于胰体、33例位于胰尾,1例为多发病灶,分别位于胰头及胰尾.所有患者平均随访34.8个月(12~99个月).坏死、钙化、胆固醇结晶、泡沫细胞、细胞核异型性、浸润性生长、神经侵犯在非复发/转移组与复发/转移组间差异无统计学意义,而胰外侵犯、脉管瘤栓形成及增殖指数Ki-67在两组之间差异有统计学意义.结论 SPN胰外侵犯、脉管瘤栓形成和Ki-67增殖指数≥4%,对于预测SPN复发/转移具有一定的参考意义.

    作者:高汉青;庞霞;赵香田;王青杰;马怡晖 刊期: 2017年第12期

  • 全自动染色机在制备涂胶载玻片中的改良应用

    在日常免疫组化染色中防止组织切片在染色过程中脱落,是免疫组化的重要环节[1].因此,操作前必须将载玻片用3-氨丙基三乙氧基硅烷(3-Aminopropyitriethoxyssicane,APES)进行预处理.本科室利用全自动染色机制作涂胶载玻片,效果良好,现介绍如下.1材料与方法1.1材料(1)载玻片规格:25.4 mm×76.2 mm× (1~1.2) mm;(2)APES试剂:10 mL(工作浓度1:50);(3)隔水式电热恒温培养箱;(4)全自动HE染色机(Leica St5020型,德国Leica公司);(5)丙酮;(6)蒸馏水(自配);(7)重铬酸钾清洗液.(8)实验对照组的组织标本类型:选用质地较硬,易掉片的子宫颈锥切组织、子宫平滑肌瘤组织、带血块的子宫内膜组织.

    作者:鲁波;钱洁芳;任丽芳;张鹏;沈寅;李美平;戈文舜;包磊 刊期: 2017年第12期

  • 睾丸弥漫大B细胞淋巴瘤中MyD88及CD79B基因突变及意义

    目的 探讨睾丸原发性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中MyD88及CD79B基因突变及意义.方法 回顾性分析15例睾丸原发性DLBCL的临床病理学特点,采用免疫组化及Sanger测序法检测原发性DLBCL中MyD88及CD79B基因突变,分析MyD88及CD79B基因突变与肿瘤临床病理学特点、NF-KB蛋白在细胞核表达之间的关系.结果 免疫组化显示15例DLBCL均为非生发中心B(non germinal center B,non-GCB)细胞型,4例存在CD79B基因Y196位点突变(26.7%),7例存在MyD88基因L265位点突变(46.7%),3例同时存在CD79B及MyD88基因突变(20%).8例患者获得随访,未发现CD79B及MyD88基因突变与预后的相关性.结论 中国人睾丸原发性DLBCL中存在较高的CD79B基因Y196位点和(或)MyD88基因L265位点突变,为针对这些突变基因的分子靶向治疗提供依据.

    作者:马世荣;刘杨;刘芳;王映梅;王哲;郭双平 刊期: 2017年第12期

  • IgA肾病患者系膜区C3沉积强度与临床病理特征的相关性分析

    目的 探讨IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者系膜区补体C3沉积强度与临床病理特征的相关性.方法 收集北京大学深圳医院的IgAN患者临床病理资料,根据免疫荧光下系膜区补体C3沉积强度的不同,将423例患者分为阴性组、阳性组和强阳性组3组,分析不同强度补体C3沉积患者的临床病理学特征.结果 不同强度补体C3沉积的原发性IgAN患者性别、发病年龄、血压、24h尿蛋白定量、镜下血尿、白细胞、血胆固醇、血白蛋白、血IgA、血C3、血糖水平,差异无统计学意义(P均>0.05);随着补体C3在系膜区沉积加重,血肌酐、血尿酸及血甘油三酯水平明显升高(P<0.05);肾小球滤过率(eGFR)显著降低(P<0.05);补体C3沉积强度较重者,其前驱感染率增加(P<0.05),且补体C3沉积较重组,其肾小球积分、肾小管积分、肾间质积分及总积分均显著增加(P<0.05).结论 IgAN患者系膜区补体C3沉积加重组患者临床表现严重,肾小管、间质损害亦加重,提示局部补体系统活化参与致病过程.

    作者:郑爱萍;侯霜;罗明华;熊祖应;罗琼 刊期: 2017年第12期

  • LKB1基因对前列腺癌细胞增殖的影响

    目的 探讨LKB1/STK11 (liver kinase B1/serine-threonine kinase 11)基因过表达对前列腺癌细胞增殖的影响及其可能机制.方法 构建LKB1重组过表达稳转细胞株和阴性对照组稳转细胞株,同时加入空白对照组,通过qPCR法检测各组细胞中LKB1 mRNA的转录水平,Western blot法检测各组细胞中LKB1蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组细胞系的增殖能力.结果 Westem blot和qPCR法检测空白对照组、阴性对照组、LKB1组PC-3细胞中LKB1蛋白及mRNA的表达,结果显示LKB1组PC-3细胞中LKB1表达显著升高.CCK-8法检测空白对照组、阴性对照组、LKB1组PC-3细胞0、24、48、72 h各时间点的细胞活力,发现LKB1组PC-3细胞的生长活力于铺细胞24 h后开始,明显低于空白对照组及阴性对照组PC-3细胞,LKB1组PC-3细胞与空白对照组PC-3细胞相比,生长速度受到明显抑制.结论 LKB1基因过表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖,LKB1是抑制前列腺癌细胞增殖分子机制的潜在靶点.

    作者:刘治;潘大庆;徐从云;陶陶;吴奎;肖峻 刊期: 2017年第12期

  • 溃疡性结肠炎中Gal-3与BCL-2表达的意义

    目的 观察半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3)与B淋巴细胞瘤-2基因(B cell leukemia/lymphoma-2,BCL-2)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)中表达的意义.方法 选取2014年8月~2015年12月海南省海口市人民医院消化科确诊为UC的患者64例,设为观察组,另选取健康志愿者50例,设为对照组.采用免疫组化法检测两组结直肠黏膜组织中BCL-2和Gal-3的表达,探讨两者表达与UC分级的相关性.结果 对照组Gal-3阳性率为100%,高于观察组的37.5%(x2=48.142,P<0.001);对照组BCL-2的阳性率为20%,低于观察组的90.62%(X2=58.171,P<0.001);UC Ⅰ级Gal-3阳性率高于UCⅡ级(x2 =3.600,P=0.058)和UCⅢ级(X2=4.532,P=0.033);UCⅢ级Gal-3阳性率低于Ⅱ级(X2 =0.183,P=0.669);UC Ⅰ级BCL-2阳性率低于UCⅡ级(x2=5.539,P=0.019)和UCⅢ级(x2=6.098,P=0.014);UCⅢ级BCL-2阳性率高于Ⅱ级(X2=0.511,P=0.475);BCL-2和Gal-3表达与患者性别、年龄及病程均无相关性(P>0.05);BCL-2和Gal-3表达不具备关联性.结论 BCL-2在UC结直肠黏膜的表达水平高于正常结直肠黏膜,Gal-3表达水平低于正常结直肠黏膜,两者表达与UC分级有关,与患者性别、年龄及病程无关,可作为UC的预测标准.

    作者:钟文洲;林松挺;陈正义;黄晓曦 刊期: 2017年第12期

  • 儿童梭形细胞横纹肌肉瘤10例临床病理分析

    目的 探讨儿童梭形细胞横纹肌肉瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断.方法 回顾性分析10例儿童梭形细胞横纹肌肉瘤的临床病理学特征并复习相关文献.结果 镜下主要表现为长梭形的肿瘤细胞,部分区域可见典型的胚胎性横纹肌肉瘤区或分化较好的横纹肌母细胞区,肿瘤细胞表达肌源性标记desmin、Myogenin和MyoD1,Ki-67核增殖指数为15%~ 60%.结论 儿童梭形细胞横纹肌肉瘤少见,易漏诊或误诊,需与儿童常见的其他梭形细胞肿瘤相鉴别.

    作者:马阳阳;陈莲;冯佳燕;肖现民 刊期: 2017年第12期

  • 弹力纤维染色Gomori醛品红法的改良及应用体会

    近几年,弹力纤维染色被广泛应用于病理诊断中,如肿瘤静脉浸润、浆膜浸润的判断,肿瘤早期浸润的确定、皮肤弹力纤维增生症等常常用到弹力纤维染色.皮肤组织HE染色中,弹力纤维与胶原纤维相似,均着染深浅不一的红色,两者较难区分,只有通过弹力纤维特殊染色才将两者显示出来.显示弹力纤维的方法很多,常用的有Gomori醛品红法、Weigert间苯二酚碱性品红法、维多利亚蓝法、Uana地衣红法等[1],后三种方法染色时间均长,有些甚至要过夜.在常规病理检查工作中常用Gomori醛品红法,作者通过工作实践和摸索,对Gomori醛品红法进行了改良,效果良好,现介绍如下.

    作者:熊红梅;郭荣年;邱晓明 刊期: 2017年第12期

  • 环状小管性索肿瘤1例

    患者女性,15岁,因闭经1年后阴道流血1个月,B超提示盆腔包块人院.体检:皮肤、口腔黏膜无色素沉着.复查盆腔B超示右侧附件区可见一低回声团,大小96 mm×87mm,边界清.腹部泌尿系B超未见异常,肿瘤标志物均阴性.行剖腹探查术,术中见子宫正常大小,表面光滑,活动度好,右侧卵巢增大,大小11 cm×10cm×7 cm,实性,质地偏软,包膜完整,左侧卵巢偏小,表面光滑,双侧输卵管外观正常,盆腹腔腹膜光滑.行右侧附件切除术.

    作者:万珍玲;肖晓岚;吴文川;何艾桦 刊期: 2017年第12期

  • 甲状腺低分化癌3例临床病理分析

    目的 探讨甲状腺低分化癌(poorly differentiated thyroid carcinoma,PDTC)的临床病理学特征.方法 回顾性分析3例PDTC的临床病理学特征、免疫表型并复习相关文献.结果 女性1例,男性2例,年龄61 ~ 62岁,中位年龄61岁.3例均表现为颈部甲状腺肿块并在近期逐渐增大.瘤组织呈小梁状、实性片状或岛状生长,瘤细胞形态小而一致,核质比高,核圆形或卵圆形,边缘光滑,核仁不明显.呈现3种形态学特征:肿瘤性坏死、核分裂象≥3/10 HPF、迂曲核.免疫表型:甲状腺滤泡标志物及上皮表型阳性(TTF-1、Tg、CK、vimentin、Galectin 3、CK19、CD56),降钙素及部分神经标志物阴性(Syn、BCL-2、MC、Calcitonin、CgA),Ki-67增殖指数为10%~50%,中位数为10%.2例均随访1年以上,未出现复发和远处转移,1例失访.结论 PDTC是甲状腺恶性肿瘤中少见的独立亚型,依据形态学特征及免疫表型可明确诊断.

    作者:许婷婷;李楠;谢峰梅;宋雪雪;杨茹雪;冯振中 刊期: 2017年第12期

  • 解读WHO(2017)头颈部肿瘤分类——口咽肿瘤

    WHO(2017)头颈部肿瘤分类[1](简称新版)与WHO(2005)头颈部肿瘤病理学和遗传学分类[2](简称旧版)相比,将口咽从传统口腔中独立出来,集中描述,体现了12年来该领域研究的新进展[3-5],强调了FISH和(或)PCR技术直接检测HPV的重要性,但允许使用免疫组化标记p16,作为间接测试HPV状态可靠的替代品,使分子分型变得简单易行.基于HPV测试状态,新版将口咽鳞状细胞癌(oropharyngeal squamous cell carcinomas,OPSCC)分为HPV阳性及HPV阴性,而非传统分类的角化型与非角化型.如同子宫颈癌,已经明确HPV阳性的OPSCC同样由高危型HPV感染引起,但实践中不再推荐对其进行组织学分级.精准分类有助于肿瘤界定、解释流行病学趋势及预测临床预后,使诊断的可重复性与临床一致性更强.本文将重点介绍新增病种及其相关背景的知识.

    作者:方三高;魏建国;周晓军 刊期: 2017年第12期

  • 联合免疫荧光和荧光原位杂交法检测TNFAIP3基因在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的异常及意义

    目的 观察TNFAIP3基因在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的异常,并评估其预后价值.方法 利用联合免疫荧光和荧光原位杂交(fluorescence immunophenotyping and interphase cytogenetics as a tool for the investigation of neoplasm,FICTION)法检测109例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中TNFAIP3基因的表达.结果 在检测成功的78例结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中发现32.1% (25/78)病例存在TNFAIP3基因缺失.TNFAIP3基因缺失与患者性别、年龄、B症状、肿瘤分期、乳酸脱氢酶水平无明显相关性(P均>0.05),与国际预后指数(international prognostic index,IPI)有关(P=0.019).结论 结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中存在的高比例TNFAIP3缺失,且与IPI关联,提示TNFAIP3缺失具有重要的预后价值.

    作者:刘芳;王映梅;李明阳;赵丹晖;李侠;刘一雄;王哲;闫庆国 刊期: 2017年第12期

  • 结肠腺癌中Orai1与STIM1的表达及临床意义

    目的 探讨Orai1和STIM1蛋白在结肠腺癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测80例结肠腺癌及50例正常结肠黏膜中Orai1和STIM1蛋白的表达.分析两者表达与结肠腺癌临床病理特征及预后的关系.结果 结肠腺癌组织中Orai1和STIM1表达水平均显著高于正常结肠黏膜(P均<0.05);Orai1和STIM1表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者性别、年龄、分化程度无关(P>0.05).结肠腺癌中Orai1与STIM1蛋白表达呈正相关(P =0.001,rs=0.349).单因素生存分析显示,Orai1蛋白、STIM1蛋白、TNM分期及淋巴结转移与结肠腺癌患者预后相关(P<0.05).结论 Orai1和STIM1可能具有协同作用,共同促进结肠癌的发展,有望成为结肠癌诊断、治疗以及判断预后的生物学指标.

    作者:李艳东;朱琳;周永莉;周伊;郑建云 刊期: 2017年第12期

  • 甲状腺乳头状癌中DOG-1和C-erbB-2的表达及临床意义

    目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中DOG-1和C-erbB-2的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测48例PTC和30例甲状腺良性病变(结节性甲状腺肿15例、桥本甲状腺炎15例)中DOG-1和C-erbB-2蛋白的表达.结果 PTC中DOG-1的阳性率(27.08%,13/48)明显高于甲状腺良性病变(0,0/30),两者差异有显著性(P<0.05).C-erbB-2的阳性率(39.58%,19/48)也明显高于甲状腺良性病变(3.33%,1/30),两者差异有显著性(P<0.05).DOG-1、C-erbB-2的表达均与患者临床分期、淋巴结转移明显相关;在多灶且有淋巴结转移病例中DOG-1与C-erbB-2的表达呈显著正相关(r =0.503,P=0.024).结论 DOG-1及C-erbB-2的表达与PTC的转化、进展密切相关,联合检测可以作为判断PTC的生物学行为、评估其复发风险的重要指标,并为靶向治疗提供可能性.

    作者:贺亚敏;高丽丽;李惠;钱晓萍 刊期: 2017年第12期

临床与实验病理学杂志

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主办:安徽医科大学;中华医学会安徽分会